HIV受体CD4V2—V2区段基因的PCR扩增,克隆及表达

设计“链扩增致表达框架法”改良聚合酶链扩增(PCR)技术以获得CD_4基因的V_1-V_2区段,使原不完整的真核基因区段强制性地修饰成有表达可能的完整基因,并保持原读码框架的正确性。该扩增片段经序列分析确证后,克隆入表达载体pLSD_(13)(含P_L强启动子)和pBV220(含P_RP_L融合启动子)中。Southern杂交证实了这种插入的正确性,SDS/PAGE检测诱导表达的结果,获得一个分子量为2.03×10~4的蛋白带,证实为CD_4 V_1-V_2区蛋白。     

艾滋病毒(HIV)感染者的诊断和治疗

未经治疗的HIV感染的自然历史可分为几个阶段：急性HIV感染综合征(经2～3周后复原，血清抗体转阳)一无症状慢性HIV感染(平均8年)症状性HIV感染／MDS(平均1．3年)→死亡。     

生长激素分泌过多患者外周血淋巴细胞CD_2 mRNA的表达(简报)

生长激素(GH)对免疫系统具有调节作用,但对T细胞功能的影响尚不清楚。CD_2为T淋巴细胞表面具有重要免疫功能的分子。本实验通过测定GH分泌过多患者外周血T细胞CD_2mRNA的表达,研究GH对T细胞功能的影响. 选择GH分泌过多患者(人GH口服葡萄糖抑制实验显示血清GH谷值>5.0μg/L)12例,其中男2例,女10例;年龄23～60岁(36.6±12.1,x±s,下同)。随机选择健康成人10名作为对照组,其中男5名,女5名;年龄21～26岁(24.4±2.2)。均于晨8时许空腹取外周血6ml.按Boyum氏聚蔗糖—     

CD_1(HIT_(6-1,6-2))、CD_(38)(HIT_(1、2、3))和一个新单克隆抗体HIT_4的基础和应用研究(简报)

我室获得了一套抗人白细胞分化抗原单克隆抗体:HIT_1、HIT_2、HIT_3、HIT_4、HIT6-1和HIT6-2。其中HIT6-1和HIT6-2属于国际CD_1类单克隆抗体,识别的CD_1抗原是人类T淋巴细胞在胸腺内分化过程中的一个重要标记,也是郎格罕氏细胞(Langerhans)的特征性标记。最近发现CD_1抗原与HLA系统有关,是HLA系统中非第6对染色体编码的唯一抗原。在研究T淋巴细胞恶性增生、某些皮肤病的发病机制以及CD_1抗原复合体结构、特征、功能和HLA系统复杂性及基因多态性方面有较大意义。     

胃癌高表达基因erk的PCR扩增,克隆和鉴定

对在胃癌高表达的EPH家族基因erk胞外的配体结合区基因扩增及克隆．方法：从胃癌患者手术切除标本中提取RNA，反转录为cDNA，以计算机辅助分析设计并合成引物进行RT－PCR，并将扩增片段克隆入pUC19质粒，用酶切及PCR方法筛选鉴定阳性克隆．结果：RT－PCR扩增片段与设计相符，且特异性好，无非特异产物出现，表明所设计引物符合要求．酶切及巢式PCR、PCR－RFLP方法证明克隆片段正确插入pUC19的HindIII和BamHI位点，并将重组克隆命名为pGE42．结论；克隆的完成为进一步研究该基因在胃癌的发生中的作用，寻找其胞外配体及进行表达产物的细胞定位等工作打下基础．     

用PCR插入突变法扩增和克隆HIV－env282肽基因

用ＰＣＲ插入突变法扩增和克隆ＨＩＶ－ｅｎｖ２８２肽基因［项秉懿，李飚，王俊楼等．中华微生物学和免疫学杂志，１９９５；１５（４）：２５１～２５４］作者借助于微机分析设计并合成了２个引物，通过聚合酶链反应插入突变法扩增出含有４个功能区（Ｔ肽区，与ＮＬＫ部...     

中国人神经生长因子(NGF)基因的扩增、克隆与测序(简报)

神经生长因子(NGF)由靶细胞产生,与神经纤维上的受体结合,经反向运输作用于神经元。神经生长因子促进神经的生长、发育和成熟,维持神经元的生存,并在神经机械损伤的修复中起作用。神经生长为子为正常细胞所分泌,无毒副作用,临床上对神经损伤以及Alzheimer's病的治疗有一定的应用前景,本实验扩增、克隆NGF基因,并测定其核苷酸顺序。     

CD_(44V6)在肺癌中的表达及其临床意义

目的　探讨 CD44 V6 在肺癌中的表达及其临床价值。方法　采用免疫组化 ( SP法 )检测了 45例非小细胞肺癌 ( NSCL C)和 16例小细胞肺癌 ( SCLC)中 CD44 V6 分子的表达情况。结果　 13 1例 NSCL C呈现 CD44 V6 阳性反应 ,阳性率为 68.9% ,而 SCLC则全部阴性 ( P<0 .0 1)。 2在鳞、腺癌中 ,有淋巴结转移组中的 CD44 V6 阳性率高于无淋巴结转移组 ( P<0 .0 5 )。结论　 CD44 V6 在 NSCL C转移过程中可能起重要作用 ,并可作为一个预后指标 ,而 SCL C的转移则不依赖于 CD44 V6 的介导 ;而且 CD44 V6 可作为一种新的标志物 ,用于鉴别肺癌的组织学类型。     

抗CD_3McAb鼠/人嵌合抗体可变区基因的克隆及序列测定(简报)

本研究表明,抗CD_3McAb具有双向调控T淋巴细胞的功能,对多种疾病,包括恶性肿瘤有明显的临床疗效,作者用DNA重组技术将鼠源抗CD_3McAb在基因水平改建为鼠/人嵌合抗体使之更适合临床应用时,用PCR法从HIT_(3a)(抗CD_3McAb)杂交瘤细胞株中分离出Ig重、轻链可变区基因,並分别克隆进了pGEM-7Zf(+),pGEM-3Zf(+)载体中,重组质粒DNA序列测定     

霍乱弧菌毒力表达调控基因toxR的PCR扩增及克隆

为了构建霍乱弧菌和杜氏利什曼原虫双价口服活疫苗候选株,作者采用ＰＣＲ对霍乱弧菌毒力表达调控基因ｔｏｘＲ进行扩增及克隆,并对霍乱弧菌ｔｏｘＲ基因进行限制性酶切分析。结果显示：７株霍乱弧菌均扩增出１．３ｋｂ的ｔｏｘＲ基因片段,ｔｏｘＲ基因中部含有ＥｃｏＲⅠ酶切位点,再将ＴｏｘＲ基因克隆在质粒ｐＡＴ１５３上,对所获的重组质粒ｐｔＲ４进行限制性酶切分析,证实质粒ｐｔＲ４插入的１．３ｋｂ的ＤＮＡ片段为ｔｏｐ     

霍乱弧菌毒力表达调控基因toxR的PCR扩增及克隆

为了构建霍乱弧菌和杜氏利什曼原虫双价口服活疫苗候选株,作者采用PCR对霍乱弧菌毒力表达调控基因toxR进行扩增及克隆,并对霍乱弧菌toxR基因进行限制性酶切分析.结果显示:7株霍乱弧菌均扩增出1.3kb的toxR基因片段,toxR基因中部含有EcoRⅠ酶切位点,再将toxR基因克隆在质粒pAT153上,对所获的重组质粒ptR4进行限制性酶切分析,证实质粒ptR4插入的1.3kb的DNA片段为toxR基因片段.     

CD_(117)和CD_(34)在胃肠道间质瘤中的表达及其临床意义

目的:探讨CD117和CD34在胃肠道间质瘤(GIST)中的表达及其临床意义。方法:应用免疫组织化学的方法检48例GIST患者手术切除肿瘤组织和真性平滑肌瘤组织(对照组)中CD117和CD34的表达,并观察病理学改变。结果:手术切除GIST患者的肿瘤组织在光镜下主要由呈束状上皮样细胞和不等数量的梭形和排列弥漫性而成,形态较多样。GIST组织中CD117、CD34阳性表达率分别为98.0%、85.6%,对照组真性平滑肌瘤组织中CD117和CD34均无表达。结论:CD117和CD34是诊断GIST比较有特异性的抗体,具有诊断价值。     

CD_(44V6)在鼻咽鳞癌中的表达及其临床意义

目的： 探讨转移特异性ＣＤ４４ 变体ＣＤ４４Ｖ６ 在鼻咽鳞癌中的表达及其临床意义。方法： 利用免疫组化ＳＰ方法检测５６ 例鼻咽鳞癌石蜡标本中ＣＤ４４Ｖ６的表达，并对其阳性表达与临床因素之间的关系进行探讨。结果：５６例鼻咽鳞癌中ＣＤ４４Ｖ６ 总阳性表达率为６２５ ％ 。Ⅰ－ Ⅱ期与Ⅲ－ Ⅳ期鼻咽鳞癌之间，高中分化与低分化鳞癌之间ＣＤ４４Ｖ６阳性表达率均无明显差别（ Ｐ＞ ００５） ；ＣＤ４４Ｖ６阳性率在有颈淋巴结转移组和无颈淋巴结转移组之间也无明显差别。远处转移组ＣＤ４４Ｖ６ 阳性率明显高于非远处转移组（ Ｐ＜ ００５） ；放疗后生存５ 年以上组ＣＤ４４Ｖ６ 阳性率明显低于生存５ 年以下组（ Ｐ＜ ００５） 。结论： ＣＤ４４Ｖ６ 的阳性表达与鼻咽鳞癌病人的远处转移及预后不良有关，并可作为判断鼻咽鳞癌生物学行为和预后的一个有用指标     

胃癌CD_(44V6)、nm23-H_1蛋白表达与淋巴结转移

目的 :研究胃癌 CD4 4V6、nm2 3- H1蛋白表达与淋巴结转移的关系。方法 :应用免疫组化SP法。结果 :胃癌 CD4 4V6、nm2 3- H1阳性率分别为 61 .4%和 45.2 % ,伴有淋巴结转移者 CD4 4V6、nm2 3- H1阳性率分别高于和低于无淋巴结转移者 (P<0 .0 1 )。结论 :转移相关基因和转移抑制基因之间的失衡是导致胃癌淋巴结转移的分子机制之一 ,CD4 4V6、nm2 3- H1可作为胃癌淋巴结转移的重要生物学标志物     

卵巢癌中CD_(44V6)基因蛋白的表达及其临床意义

目的 :探讨 CD4 4 V6基因在卵巢癌中的表达情况及其临床意义。方法 :选取 65例手术切除卵巢癌标本、卵巢良性肿瘤 30例和正常卵巢组织 2 9例 ,采用 SABC免疫组化染色 ,观察其在卵巢癌、良性卵巢肿瘤及正常卵巢组织的表达并分析相关的临床病理因素。结果 :1 CD4 4 V6基因表达阳性率恶性组显著高于良性瘤组和正常组 ;2 CD4 4 V6在转移癌的阳性率亦显著高于原发灶 ;3 CD4 4 V6在临床 ～ 期 ,生存期 <5年的患者癌组织 ,其阳性率分别高于临床 期、生存期 >5年者 (P<0 .0 5) ;4CD4 4 V6阳性表达率与患者年龄 ,病理类型及恶性度分级无关。结论 :CD4 4 V6表达在分化差的肿瘤组织中较高 ,且病人预后差 ,故 CD4 4 V6可以作为预测肿瘤转移潜能 ,评估预后的指标     

特发性血小板减少性紫癜患者外周血淋巴细胞的CD_4、CD_(28)表达

目的 :探讨T淋巴细胞表面分子CD4 、CD2 8在特发性血小板减少性紫癜 (ITP)的变化。方法 :用流式细胞术检测 2 1例ITP患者和 9例正常对照外周血淋巴细胞CD+4、CD+2 8、CD+4CD+2 8的表达率以及CD+4T淋巴细胞中的CD+2 8表达率。结果 :ITP患者外周血CD+4、CD+2 8、CD+4CD+2 8表达明显低于正常对照 ,但CD4 细胞中CD+2 8表达与正常对照相比无显著差异。ITP患者外周血淋巴细胞中的CD+2 8表达率与CD+4表达率呈正相关。结论 :ITP患者CD+4T淋巴细胞减少并非因协同刺激信号分子CD2 8表达下降所致 ,CD+4T淋巴细胞无协同刺激信号分子CD2 8表达缺陷     

CD_1(HIT_(((6-1)、(6-2)))、CD_(38)(HIT_(1、2、3、))和一个新单克隆抗体(HIT_4)的基础和应用研究

用胎儿胸腺细胞免疫BALB/C小鼠与P,X63Ag8.635小鼠骨髓瘤细胞融合,获得一组抗人白细胞分化抗原单克隆抗体(IncAb):HIT_1、HIT_2、HIT_8、HIT_4、HIT_(6-1)和HIT_(6-2)。HIT_1为IgG_3,HIT_4为IgM,其余4个mcAb均为IgG_1。HIT_1、2、3是一组特异性相似的mcAb,类似OKT_(10),识别一个43KD抗原分子。T_(10)抗原早期是作为T细胞标记进行研究,现     

甘油和聚乙二醇对PCR扩增的影响(摘要)

耐热DNA聚合酶的分离成功及应用,简化了聚合酶链式反应(Polymerasechain reaction,PCR)技术,提高了PCR扩增的特异性,加速了PCR操作自动化过程。国内外已对耐热DNA聚合酶的特性进行了较深入的研究。除耐热DNA聚合酶外,还有许多因素影响PCR扩增效果。我     

TGF-β_1和COX-2对CD_4~+CD_(25)~+调节性T细胞的调控作用

作为一种抑制性T细胞功能亚群,CD4+CD2+5调节性T细胞(CD4+CD2+5Treg)在维持机体的免疫自稳和免疫耐受方面发挥了关键作用。近年来研究表明,CD4+CD2+5Treg能通过相同的机制削弱机体的抗肿瘤效应。在乳腺癌、卵巢癌、肺癌以及肝癌等多种实体肿瘤和血液恶性肿瘤患者外周血和肿瘤局部微环境中,CD4+CD25+Treg比例增高,且数目与患者肿瘤进展程度和预后、生存率呈负相关,是免疫治疗的新的有效靶点。现就转化生长因子β1和环氧合酶2对CD4+CD2+5Treg参与肿瘤免疫逃逸的调控及作用方式予以综述。     

1例CD_(34)~+的M_(2a)转化为M_(4c)探讨

1病历摘要患者男,56岁。持续高热,伴周身皮肤瘀点、瘀瘢一周于2003年4月6日入院。查:体温39.6°,脉搏118次/min,血压120/70mmHg,皮肤粘膜散在瘀点、瘀瘢,全身及浅表淋巴结未触及肿大。睑结膜略苍白,巩膜无黄染,耳鼻无异常分泌物,口唇无苍白,齿龈无增生,咽赤(+),右侧扁桃体Ⅱ°肿大,表面光滑,无异常分泌物附着。胸骨压痛(+),心肺(—),腹软,肝肋下未触及,脾肋下可触及边缘,质韧。血常规:WBC34×109/L,Sg16%Ly26%,RBC256×1012/L,Hb80g/L,PLT17×109/L幼稚细胞占58%。骨髓:有核细胞增生极度活跃,原粒62%、早幼粒2%POX62%(+)CD34:2.21%…