混合样品中微量SRY基因的毛细管电泳检测

建立一种灵敏度高，重现性好的检测混合样品中微量目的基因的方法。方法采用聚合酶链反应扩增混合样品中微量男性ＤＮＡ的ＳＲＹ序列，分别通过琼脂糖凝胶电泳和毛细管电泳检测ＰＣＲ扩增产物，比较二者的检测灵敏度。     

用通用引物PCR检测HBV DNA的研究

本文设计一对ＨＢＶ亚型通用的ＰＣＲ引物，用于检测血清ＨＢＶ ＤＮＡ。ＰＣＲ扩增后，产物经２％琼脂糖凝胶电泳分析与ＥＩＡ法有较高的阳性符合率。阳性扩增条带单一清晰，扩增产物的分子量可靠，可测出８０ｆｇ／ｍｌ的微量ＨＢＶ ＤＮＡ。本法准确、敏感，可用于临床常规检测ＨＢＶ ＤＮＡ。     

通用引物聚合酶链反应一次检测4种疱疹病毒DNA

为了能一次分型检测４种疱疹病毒ＤＮＡ，防止漏诊，故采用在疱疹病毒高度同源序列ＤＮＡ聚合酶基因中设计一对通用引物的方法，对４种疱疹病毒（单纯疱疹病毒Ｉ型，ＩＩ型，爱泼斯坦巴尔病毒，人巨细胞病毒）ＤＮＡ进行扩增，继而用凝胶电泳和限制性内切ＢａｍＨＩ或ＳｍａＩ酶切扩增产物进行鉴别，建立了能一次性分型检测上述４种病毒的聚合酶链反应（ＰＣＲ）法，敏感性和特异性试验表明，灵敏度可测到ｉｆｇＤＮＡ相当于６个病毒     

同时检测三种Myc基因的聚合酶链反应技术

目的建立同时检测Ｍｙｃ基因３个成员Ｌｍｙｃ、Ｎｍｙｃ及Ｃｍｙｃ异常扩增的简便方法。方法采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术，用一对引物同时扩增Ｍｙｃ基因３个成员第２外显子中的高度保守区，扩增产物经非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳及激光扫描。结果此法可以检测Ｍｙｃ基因家族中３个成员的扩增情况。经检测，正常组织细胞没有Ｍｙｃ基因扩增，３２例喉癌组织中４７％有Ｌｍｙｃ和Ｃｍｙｃ扩增，４１％有Ｎｍｙｃ扩增，与正常比差异均有显著意义（χ２＝６．７６４，７．６０９，５．９６１；Ｐ均＜００５）。Ｃｍｙｃ扩增率与用ＰＣＲ琼脂糖凝胶电泳检测的结果基本相符（χ２＝０．２５４，Ｐ＞００５）。结论此法对检测肿瘤组织中Ｍｙｃ基因３个成员提供了简易、特异、无放射污染，并且适于临床应用的、优于ＰＣＲ琼脂糖凝胶电泳的方法。     

PCR产物的聚丙烯酰胺凝胶电泳分析

ＰＣＲ产物检测方法的灵敏度对临床诊断结果有较大的影响。我们对端粒酶催化亚基蛋白质（ｈＴＲＴ）ｍＲＮＡ［１］的ＲＴ－ＰＣＲ扩增产物琼脂糖凝胶电泳ＥＢ染色法和聚丙烯酰胺凝胶电泳银染法进行比较，以期在ＰＣＲ检测方面引起重视。１材料和方法１．１材料ＨＬ－６０...     

通用引物聚合酶链反应一次检测4种疱疹病毒DNA

为了能一次性分型检测４种疱疹病毒ＤＮＡ，防止漏诊，故采用在疱疹病毒高度同源序列ＤＮＡ聚合酶基因中设计一对通用引物的方法，对４种疱疹病毒（单纯疱疹病毒Ⅰ型、Ⅱ型、爱泼斯坦巴尔病毒、人巨细胞病毒）ＤＮＡ进行扩增，继而用凝胶电泳和限制性内切酶ＢａｍＨＩ或ＳｍａＩ酶切扩增产物进行鉴别，建立了能一次性分型检测上述４种病毒的聚合酶链反应（ＰＣＲ）法。敏感性和特异性试验表明，灵敏度可测到１ｆｇＤＮＡ，相当于６个病毒颗粒，且引物仅对４种疱疹病毒扩增。用建立的ＰＣＲ法和酶切分型法检测病毒性脑炎患者脑脊液和慢性宫颈炎患者宫颈分泌物中的疱疹病毒，取得较好结果。该法的建立为疱疹病毒感染的临床早期准确诊断、判定药物疗效和流行病学研究等提供了有效的手段。     

用PCR技术检测沙眼衣原体主要外膜蛋白基因序列

本实验应用ＰＣＲ技术从宫颈分泌物中直接检测沙眼衣原体。ＰＣＲ所用的引物衣原体主要外膜蛋白（ＭＯＭＰ）基因中具有特异性的稳定区域中的两条核苷酸序列，扩增片段长度为１４４ｂｐ。将经过蛋白酶Ｋ处理的标本作了模板，经变性，退火和延伸，在毛细管ＰＣＲ仪上循环６０个周期后，扩增出的衣原体特异性片段在２．０％的琼脂糖凝胶上电泳后即可被检出。在７７个标本中，１６个为ＰＣＲ阳性。与荧光单克隆抗体免疫学方法比较证明。     

人乳头瘤病毒PCR产物酶标-微孔板杂交分型

目的建立聚合酶链反应（ＰＣＲ）产物直接酶标记微孔板反向分子杂交法用于人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）型别鉴定。方法利用ＨＰＶ通用引物介导ＰＣＲ（ＧＰＰＣＲ）扩增靶ＤＮＡ，然后对产物直接标记辣根过氧化物酶复合物（ＨＲＰＰＥＩＱＩ），与预先包被在微孔板上的ＨＰＶ寡核苷酸探针杂交后酶显色法检测。结果ＨＰＶ各型之间无交叉杂交；杂交灵敏度可达１３～７６个病毒ＤＮＡ拷贝，比ＰＣＲ琼脂糖凝胶电泳检测高１０倍；该法重复性好，阳性孔批内ＣＶ为６．３４％，批间ＣＶ为１０．５３％，阴性孔批内ＣＶ为１％，批间ＣＶ为５．７９％；而且杂交影响因素较少。结论该法特异性强、灵敏度高、操作简便，无放射性和ＥＢ染料污染，杂交时间短、仪器读取结果，便于大量常规临床样本定性或定量检测。     

快速反应杂交法检测HBV DNA

为建立一种简便快速的该酸探针杂交法检测产产物中的ＨＢＶ ＤＮＡ,将ＰＣＲ上游引物用生物素标记后进行扩增;核酸探针固定于硝酸纤维素膜上,与带有生物素的ＰＣＲ扩增产物杂交,杂交信号用链霉亲和素－酶结合物显色检测。结果表明,该法检测的敏感性为５ｆｇ,杂交时间为４０分钟。２００例临床标本检测的阳性率（２７．５％）高于琼脂糖电流法（２４．５％）。同时具有操作简便的特点,可作为ＰＣＲ扩增产物中ＨＢＶ ＤＮＡ的     

聚合酶链反应凝胶呈像技术检测乙型肝炎病毒

目的建立聚合酶链反应（ＰＣＲ）凝胶呈像（ｇｅｌｄｏｃｕｍｅｎｔａｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍｓ，ＧＤＳ）技术，并应用于临床检测乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）核酸ＤＮＡ。方法用凝胶呈像技术对血清ＨＢＶＤＮＡＰＣＲ扩增产物的电泳凝胶进行摄像、分析，并与紫外灯下的肉眼观察结果相比较，对肉眼未判断出阳性而凝胶呈像分析出阳性的血清标本，用定量ＰＣＲ（ＱＰＣＲ）方法检测ＨＢＶＤＮＡ。结果通过３８份血清标本的检测，发现用凝胶呈像技术判断的结果比单纯肉眼观察的阳性率高。前者１９份阳性（５０％），后者１６份阳性（４２．１％），符合率为９２．１％。经χ２检验（χ２＝０．４７７，Ｐ＞０．０５），说明两种方法有很好的一致性。凝胶呈像分析为阳性，而肉眼观察阴性的３份血清标本，经定量ＰＣＲ检测为阳性。结论应用凝胶呈像技术比ＰＣＲ产物电泳后紫外灯下肉眼观察的灵敏度高、客观性强，能避免与紫外线接触，并可长期保留检测结果。