新生牛跟腱胶原蛋白海绵与动物肾、睾丸、皮肤细胞的生物相容性

背景：随着新生牛血清的产业化，新生牛跟腱资源大量积累，使得利用其制备医用胶原蛋白海绵并产业化成为可能。 目的：采用新生牛跟腱制备胶原蛋白海绵，观察其与Vero 细胞、天祝白牦牛胚胎皮肤细胞和岷县黑紫羔羊睾丸细胞的生物相容性。 设计、时间、地点：重复测量观察，于2006- 02/05 在西北民族大学生命科学与工程学院生物工程与技术国家民委重点实验室完成。 材料：用出生24 h内的新生牛跟腱经冰醋酸、胃蛋白酶等消化, 经盐析、透析及冻干等处理后，制成胶原蛋白海绵。天祝白牦牛胚胎皮肤f2代细胞和岷县黑紫羔羊睾丸f2代细胞为自制，Vero 细胞为协和医科大学细胞中心提供。 方法：在6孔板中, 将3种细胞分别接种于经紫外线、臭氧灭菌后的胶原蛋白海绵上，于37 ℃、 体积分数为0.05 的CO2 恒温箱培养，同时设对照实验。 主要观察指标：相差显微镜观察接种5，12，24，72 h时 3种细胞在胶原蛋白海绵上和6孔板底的生长情况，接种11 d对共培养物行考马斯亮蓝、苏木精-伊红染色。 结果：接种后5 h, 在胶原蛋白海绵周围的6孔板底部可看到细胞已贴壁、伸展, 个别细胞有分裂现象, 在胶原蛋白海绵表面, 隐约可见圆形细胞排列。接种后48~72 h 时, 6孔板底部细胞铺满单层。接种后11 d，考马斯亮蓝和苏木精-伊红染色显示3 种共培养物中均有大量细胞良好生长, 胶原海绵外观变得挺拔、透明、有韧性。 结论：新生牛跟腱胶原蛋白海绵与上述3种来自不同动物、不同组织的细胞有很好的生物相容性，可做皮肤细胞、肾细胞和睾丸细胞的培养支架。     

人肾间质成纤维细胞体外增殖及胶原的合成*★

背景：肾间质成纤维细胞体外研究时间点的选取多在72 h以内，但对于体外长时间动态观察培养过程中成纤维细胞增殖及胶原分泌规律少见报道。 目的：观察人肾间质纤维化来源的成纤维细胞体外增殖及胶原蛋白合成的规律。 方法：采用组织块培养法获取、纯化并鉴定肾间质纤维化来源的人肾间质成纤维细胞，选取第3 代对数生长期细胞用于实验。MTT 比色法及Masson三色染色结合图像分析法分别检测体外培养第1，3，5，7，9 天细胞的吸光度值和成纤维细胞胶原蛋白染色阳性细胞的平均吸光度值。 结果与结论：肾间质成纤维细胞体外生长曲线呈“S”形，体外培养第3~5天为细胞倍增时间，随培养时间延长，胶原蛋白由线状分布转变成片状分布，其中以第3~5天增长最快(P < 0.05)。结果证实，肾间质成纤维细胞在体外培养第3~5天增殖能力和胶原合成活性最强。     

纳米晶羟基磷灰石/胶原骨与骨髓间充质干细胞的相容性

背景：组织工程支架材料表面的微观和亚微观结构对细胞的黏附与生长有很重要的影响。利用纳米技术和三维造孔技术制备的纳米晶羟基磷灰石/胶原骨模仿了天然骨的成分与微结构特征。 目的：观察体外培养的人骨髓间充质干细胞与纳米晶羟基磷灰石/胶原骨的细胞相容性。 设计、时间及地点：单一样本观察，于2005-09/2006-12在江苏大学医学技术学院完成。 材料：纳米晶羟基磷灰石/胶原骨由清华大学材料科学与工程系研制。人骨髓间充质干细胞由健康成年志愿者自愿捐献，受试者对实验内容知情同意。 方法：全骨髓法体外培养骨髓间充质干细胞，应用成骨诱导剂（地塞米松、维生素C、β-磷酸甘油、碱性成纤维细胞生长因子）诱导向成骨细胞表型转化。将第3代骨髓间充质干细胞与纳米晶羟基磷灰石/胶原骨复合培养14 d。 主要观察指标：通过碱性磷酸酶组织化学染色、Von Kossa染色鉴定诱导培养的成骨细胞的细胞学特性。通过倒置显微镜、扫描电镜观察细胞生长及其在纳米晶羟基磷灰石/胶原骨上的生长情况。 结果：原代培养的骨髓细胞增殖迅速，10~ 12 d左右即可稳定传代，传代细胞7~9 d即可传代。经诱导培养的细胞碱性磷酸酶组织化学染色阳性，Von Kossa染色阳性，可见钙化的基质沉积，呈现典型的成骨细胞形态和生物学特征。构建的骨髓间充质干细胞与纳米晶羟基磷灰石/胶原骨共培养模型中，细胞可在纳米晶羟基磷灰石/胶原骨表面良好贴壁。复合培养8 d,分布于支架材料上的细胞大量增殖、分泌细胞外基质。复合培养14 d，大量细胞在材料表面和孔隙中生长，细胞之间广泛存在突起连接。 结论：纳米晶羟基磷灰石/胶原骨适合种子细胞的贴附、生长和增殖，细胞相容性良好。     

胶原海绵和温敏型Ⅰ型胶原细胞相容性比较★

背景：因心脏结构高度复杂、心肌组织有很高的机械顺应性，心肌组织工程对材料的要求高。以往研究表明Ⅰ型胶原和胶原海绵材料均适宜心肌细胞生长及分化。 目的：拟进一步对比观察胶原海绵和温敏型Ⅰ型胶原与骨髓间充质干细胞的相容性, 为心肌组织工程选择更理想的载体材料。 设计、时间及地点：在解放军第四军医大学西京医院心血管内科实验室2007-03/10完成对比观察设计的实验。 材料：胶原海绵由上海其胜制剂有限公司提供；温敏型Ⅰ型胶原由第四军医大学组织工程中心提供。 方法：将体外培养的大鼠骨髓间充质干细胞分别复合于胶原海绵和温敏型Ⅰ型胶原材料，共同培养7 d，分别于培养第1，3，5 和7天取材。 主要观察指标：扫描电镜和苏木精-伊红染色观察骨髓间充质干细胞细胞形态及附着情况；MTT检测骨髓间充质干细胞细胞增殖情况。 结果: ①扫描电镜检测显示温敏型Ⅰ型胶原材料中骨髓间充质干细胞细胞黏附优于胶原海绵材料，细胞在Ⅰ型胶原材料中生长连接成片，表面有大量分泌颗粒。②MTT检测表明在培养第1，3，5，7天温敏型Ⅰ型胶原材料中骨髓间充质干细胞细胞活性（吸光度值）及细胞分裂增殖速度均高于胶原海绵材料（P < 0.01）。 结论:温敏型Ⅰ型胶原体外与骨髓间充质干细胞的相容性优于胶原海绵。     

以3种材料为载体体外构建组织工程软骨

背景：纤维胶原蛋白被公认是非常理想的载体,但其胶性易流动,降解较快,且通透性有待置疑。而海绵状胶原蛋白多微孔,三维立体结构,吸附性好,临时基质与细胞基质相近（Ⅱ型胶原）,作者所查文献中作为骨髓间充质干细胞载体用于软骨形成的报道较少。 目的：对比观察骨髓间充质干细胞在纤维蛋白海绵、生物蛋白海绵、明胶海绵载体中软骨形成的能力和可行性。 设计、时间及地点：体外对比观察实验,于2004-12/2008-08在海南省人民医院中心实验室完成。 材料：纤维胶原蛋白海绵由美国Sigma 公司提供,生物蛋白海绵 (主要成分为Ⅱ型胶原,并吸附定量的碱性成纤维细胞生长因子)由辽宁绿谷制药有限公司提供,明胶海绵由南京金陵制药有限公司提供。 方法：抽取猪髂骨骨髓血,用密度梯度离心法分离出有核细胞,在含转化生长因子β1的DMEM培养液中扩增骨髓间充质干细胞,将第3代骨髓间充质干细胞以载体内多点注射和表面点滴法植于Ⅱ型纤维胶原蛋白海绵、生物蛋白海绵及明胶海绵3种载体上,继续以含有转化生长因子β1的DMEM培养液体外培养。 主要观察指标：观察细胞的生长情况,于4周取材进行大体组织观察,组织学分析及超微结构观察。 结果：骨髓间充质干细胞在体外分离后可在转化生长因子β1培养液下扩增。纤维胶原蛋白海绵组可见少量的软骨基质与细胞;生物蛋白海绵组可见较多的基质与软骨细胞,细胞生长活跃,明胶海绵组可见少量散在的胶原基质,但无细胞生长。生物蛋白海绵组软骨细胞阳性数量多于纤维胶原蛋白海绵组(P < 0.01),两组都明显多于明胶海绵组（P < 0.01）。 结论：骨髓间充质干细胞在生物蛋白海绵载体中软骨形成能力最强,纤维蛋白海绵次之,而明胶海绵与细胞生长不同步,软骨形成能力最差。     

双相沉降法重构同种异体脱钙颗粒骨/Ⅰ型胶原的制备及细胞相容性

背景：同种异体脱钙颗粒骨的重构塑型是目前材料开发的热点研究，但至今仍未找到理想的方法。 目的：采用双相沉降法用Ⅰ型胶原将同种异体脱钙颗粒骨黏合制备成重构同种异体骨，并体外考察其与骨髓间充质干细胞的生物相容性。 设计、时间及地点：对比观察实验，于2007-09/12在山西省医用组织库完成。 材料：成年健康Wistar大鼠18只。Ⅰ型胶原为美国Sigma公司生产。 方法：取10只大鼠四肢骨，制备同种异体脱钙颗粒骨，用双相沉降法将Ⅰ型胶原和同种异体脱钙颗粒骨制备成凝胶样复合体；取8只大鼠股骨，分离培养骨髓间充质干细胞；取第5代细胞，分别与同种异体脱钙颗粒骨/Ⅰ型胶原、同种异体脱钙颗粒骨共培养，另以单纯骨髓间充质干细胞为空白对照组。 主要观察指标：双色流式细胞仪分析细胞表型特征。复合培养第7天倒置显微镜观察细胞的黏附和生长状况。复合培养第5天扫描电镜观察同种异体脱钙颗粒骨/Ⅰ型胶原的表面结构和细胞生长情况。共培养第4，7天时收集并计数细胞量，用全自动生化分析仪测定碱性磷酸酶含量。 结果：①细胞呈CD45-CD90+CD44+CD71+，符合骨髓间充质干细胞表面抗原特征。②共育7 d时，倒置显微镜观察各组细胞形态无明显差异，生长状态良好。③共育4，7 d时，活细胞数和碱性磷酸酶活性测定结果显示，同种异体脱钙颗粒骨/Ⅰ型胶原组显著高于同种异体脱钙颗粒组和空白对照组（P < 0.01）。④扫描电镜观察重构同种异体骨由胶原联结成团块状，表面粗糙。同种异体脱钙颗粒骨/Ⅰ型胶原组共育5 d时，细胞紧密贴附于材料表面，有长突起伸入材料内部；同种异体脱钙颗粒组细胞贴附较少。 结论：双相沉降法制备的重构同种异体骨（同种异体脱钙颗粒骨/I型胶原）具有良好的细胞相容性。     

人胚胎干细胞饲养层的制备及生物学活性

背景：建立一种既可以大量制备,又能保存并保持较高活性的饲养层是胚胎干细胞培养研究不可缺少的环节。 目的：体外分离培养、冻存复苏ICR小鼠胚胎成纤维细胞,观察其生物学特性。 方法：取ICR小鼠13.5 d胚胎,用胰蛋白酶分步消化法分离培养小鼠成纤维细胞,对冻存复苏后的小鼠胚胎成纤维细胞形态、生长曲线、贴壁率、细胞化学染色及支持人胚胎干细胞生长特性等进行观察。 结果与结论：复苏后的小鼠胚胎成纤维细胞在体外传代30 min时80%以上细胞贴壁,生长曲线显示细胞增殖活跃,细胞化学染色AKP、PAS、POX阴性,能长期支持人胚胎干细胞传代生长。提示此方法所获得的小鼠胚胎成纤维细胞复苏后有较高的生物学活性,可为人胚胎干细胞扩增提供稳定、优质的饲养层细胞。     

海藻酸钙纳米羟基磷灰石胶原复合材料与兔骨髓基质干细胞的体外细胞相容性

背景：采用仿生学原理，利用海藻酸钙、纳米羟基磷灰石及胶原按一定比例复合，制成一种可注射、可任意塑形且具有良好骨传导、骨诱导性的组织工程骨，其应用在微创外科技术中，具有组织损伤小、不破坏修复区血供、操作简便易行等优点。 目的：验证海藻酸钙纳米羟基磷灰石胶原复合材料与兔骨髓基质干细胞的相容性。 设计、时间及地点：对比观察实验，于2008-02/05在南方医科大学珠江医院中心实验室完成。 材料：2周龄健康新西兰大白兔用于骨髓基质干细胞的分离培养。海藻酸钙纳米羟基磷灰石胶原复合材料由清华大学材料系研制提供，孔隙率90％，孔径50~200 μm。 方法：选取生长良好的第5代兔骨髓基质干细胞与海藻酸钙纳米羟基磷灰石胶原复合材料体外复合培养。 主要观察指标：共培养5 d后倒置显微镜下观察细胞在材料表面、孔隙内的生长情况，扫描电镜下观察细胞在材料上附着情况。细胞和支架共培养后CCK-8法测定细胞活性。 结果：骨髓基质干细胞能在海藻酸钙纳米羟基磷灰石胶原复合材料上良好地黏附、增殖、生长，细胞活性未受到海藻酸钙纳米羟基磷灰石胶原复合材料的影响。 结论：海藻酸钙纳米羟基磷灰石胶原复合材料与兔骨髓基质干细胞有良好的细胞相容性。     

重建胶原纤维对细胞生长的影响*★

背景：胶原种类很多，而不同细胞只在特定类型的胶原环境中才表现出最佳的增殖和表型。 目的：观察Ⅰ型胶原和Ⅱ型胶原对小鼠皮肤成纤维细胞、人牙周膜成纤维细胞和兔软骨细胞生长的影响。 设计、时间及地点：对比观察，细胞学体外实验，于2007-09/2008-09在四川大学生物材料工程研究中心胶原研究室完成。 材料：自制达到中试水平的猪皮Ⅰ型胶原和猪软骨Ⅱ型胶原。 方法：分别将3种细胞在猪皮Ⅰ型胶原和猪软骨Ⅱ型胶原环境中进行体外培养，比较不同细胞在材料上的行为差异。 主要观察指标：傅里叶变换红外光谱、示差扫描热分析和凝胶动力学分析比较2种胶原的热变性温度及在结构和性质上的差异；MTT法观察细胞在2种胶原环境中的黏附、增殖情况。 结果：猪软骨Ⅱ型胶原和猪皮Ⅰ型胶原的热变性温度分别为105.8，87.5 ℃，2种胶原的官能团区相似。凝胶化曲线的对比中猪皮Ⅰ型胶原的成纤维过程较猪软骨Ⅱ型胶原迅速。MTT值显示细胞生长初期，小鼠皮肤成纤维细胞在软骨Ⅱ型胶原环境表现了较好的黏附性，但是更适于在猪皮Ⅰ型胶原上生长；人牙周膜成纤维细胞与小鼠皮肤成纤维细胞对胶原纤维的反应恰好相反。兔软骨细胞第2天在两种胶原上的黏附相似，第4天时在猪软骨Ⅱ型胶原环境中表现出较大的细胞生长密度。 结论：不同细胞对Ⅰ，Ⅱ型胶原纤维表现了不同的时间依赖性，但猪软骨Ⅱ型胶原环境更接近于软骨生长的真实环境，更有利于软骨细胞朝特定方向分化，使软骨细胞维持稳定的表型。     

海绵状Ⅰ型胶原蛋白与兔脂肪干细胞的生物相容性☆

背景：脂肪组织工程研究中,寻找一种优良的生物支架材料作为脂肪干细胞的载体极为重要。 目的：评价兔脂肪干细胞与海绵状Ⅰ型胶原蛋白的生物相容性。 设计、时间及地点：细胞-支架学体外观察,于2007-01/03在南方医科大学组织工程研究中心完成。 材料：三四月龄雌性新西兰大白兔8只,由南方医科大学实验动物中心提供。海绵状Ⅰ型胶原蛋白为广州创尔公司产品。 方法：兔麻醉后取颈部皮下脂肪,体外分离培养脂肪干细胞,选取生长良好的第3代细胞,调整密度为1×109 L-1细胞悬液。将无菌的Ⅰ型胶原蛋白海绵裁成10 mm×10 mm×5 mm放入96孔板内,培养液平衡后,每孔支架材料表面接种0.1 mL细胞悬液,加入含胎牛血清的DMEM培养液。 主要观察指标：脂肪干细胞的形态及表面标志表达,细胞在支架材料上的黏附、增殖情况,光镜及电镜下观察细胞-支架复合物。 结果：原代培养的脂肪干细胞形态主要呈宽大扁平短梭形,传代后细胞形态以长梭形为主,第3代脂肪干细胞CD29,CD44免疫荧光染色均呈阳性。细胞与支架混合培养后平均黏附率为92.38%,并保持正常的生长增殖速度。光镜下随培养时间延长,支架上的细胞逐渐增多,极少从支架材料上掉落,DiI荧光染色后可见细胞膜发出红色荧光。电镜下部分细胞呈团簇状生长,聚集性分布,黏附于胶原海绵表面或孔隙内,细胞周围有大量的基质。 结论：海绵状Ⅰ型胶原蛋白与兔脂肪干细胞具有良好的体外生物相容性,能够为组织工程种子细胞的生长提供适宜的三维空间,可作为脂肪组织工程种子细胞的载体材料。 关键词：组织工程;脂肪干细胞;胶原蛋白;支架;生物相容性;兔     

壳多糖-胶原凝胶构建组织工程口腔黏膜固有层

背景：有研究探讨了以胶原/壳聚糖聚合物为支架材料构建组织工程人工皮肤的可行性。 目的：拟探讨以壳多糖-胶原凝胶支架材料与口腔黏膜成纤维细胞在体外构建人工固有层的可行性。 方法：口腔黏膜成纤维细胞取自成年鼠颊部、牙龈或腭部。以2×DMEM培养液、胎牛血清、胶原溶液、壳多糖等或2×DMEM培养液、胎牛血清、胶原溶液等按一定比例配置成凝胶溶液,将大鼠口腔黏膜成纤维细胞与上述凝胶溶液迅速混合制成口腔黏膜人工固有层,动态观察细胞生长状况和凝胶收缩情况。 结果与结论：胶原-口腔黏膜成纤维细胞复合物、壳多糖-胶原-口腔黏膜成纤维细胞复合物体外培养1 d,口腔黏膜成纤维细胞在支架材料中生长良好,细胞呈长梭形,排列无一定方向。随时间推移,口腔黏膜成纤维细胞逐渐增多,凝胶颜色变浅,厚度变薄,分别于2,3 d后发生收缩。结果证实,口腔黏膜成纤维细胞可在壳多糖-胶原凝胶形成的三维空间结构生长并分泌基质,形成类似黏膜固有层的致密结缔组织。壳多糖-胶原凝胶是构建组织工程化口腔黏膜固有层的合适材料。 关键词：口腔黏膜成纤维细胞;胶原;凝胶;壳多糖;组织工程 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2010.25.016     

酶消化及差速贴壁法原代培养新生C57小鼠耳蜗膜蜗管外侧壁成纤维细胞

背景：目前对耳蜗膜蜗管外侧壁成纤维细胞的培养没有特定的方法。 目的：采用酶消化与差速贴壁相结合的方法,原代培养新生C57小鼠膜蜗管外侧壁成纤维细胞,提供良好的体外细胞模型。 方法：显微解剖分离新生C57小鼠膜蜗管外侧壁组织,对膜蜗管外侧壁组织进行胰蛋白酶消化与差速贴壁相结合的方法培养成纤维细胞,倒置相差显微镜下观察细胞生长状态,苏木精-伊红染色,绘制细胞生长曲线,免疫组织化学染色鉴别细胞来源。 结果与结论：膜蜗管外侧壁组织来源传代纯化的成纤维细胞呈梭形和三角形,生长曲线成S形,免疫组织化学检测波形蛋白,细胞胞浆中呈棕黄色阳性反应。结果证实培养出小鼠膜蜗管外侧壁成纤维细胞     

体外分离培养小鼠骨髓间充质干细胞I、III型前胶原的表达

背景：尽管目前研究将骨髓间充质干细胞的Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白高表达作为细胞向某一方向分化的重要标志，但未分化的骨髓间充质干细胞是否表达该类蛋白目前尚无定论。 目的：观察分离培养的小鼠骨髓间充质干细胞内Ⅰ、Ⅲ型前胶原的表达情况。 设计、时间及地点：细胞学体外对照观察，于2007-10/2008-05在广东药学院完成。 材料：ICR小鼠3只，1 d龄ICR乳鼠1只，由广东省医学实验动物中心提供。 方法：利用差速贴壁法体外分离纯化小鼠骨髓间充质干细胞，待细胞至70%~80%融合时传代。取1 d龄ICR乳鼠皮肤组织，自行分离传代并冻存，经复苏后获得乳鼠皮肤成纤维细胞。实验组将稳定传代3次的小鼠骨髓间充质干细胞接种到6孔培养板中，按109 L-1密度接种，1 mL/孔；对照组同法接种乳鼠皮肤成纤维细胞，培养72 h。 主要观察指标：骨髓间充质干细胞的形态及生长情况，RT-PCR法检测细胞内Ⅰ、Ⅲ型前胶原的表达。 结果：原代培养的小鼠骨髓间充质干细胞集落形成初期，细胞核较大，胞浆较少，细胞呈三角形、多角形和长梭形等多种形态；传代后细胞生长旺盛，多数呈长梭型，细胞表面有大量微绒毛。培养48 h时，实验组无Ⅰ、Ⅲ型前胶原表达，对照组表达Ⅰ、Ⅲ型前胶原；培养72 h时，实验组Ⅰ、Ⅲ型前胶原表达量显著低于对照组（t=42.692，85.349，P < 0.01）。 结论：传代培养48 h时，骨髓间充质干细胞内Ⅰ、Ⅲ型前胶原基因尚未启动，至72 h后Ⅰ、Ⅲ型前胶原基因出现低表达，其并非像成纤维细胞那样在生长过程中持续的表达Ⅰ、Ⅲ型前胶原基因。     

有序胶原支架联合胶原靶向神经营养因子3对背根节细胞突起延伸的影响

目的 研究天然有序胶原支架联合具有胶原靶向结合域(CBD)的神经营养因子3(NT3)(CBD-NT3)对背根节细胞(DRGs)突起延伸的影响,探讨这种联合策略对脊髓损伤修复的意义. 方法 将SD大鼠尾肌腱行去细胞处理制备胶原支架,HE染色评价支架的处理效果;去细胞处理后支架负载CBD-NT3并与SD大鼠原代DRGs体外共培养1、3、5 d,同时设NT3、PBS组作对照;FDA染色观察共培养后DRGs并定量分析各组细胞突起的长度及角度;扫描电镜观察共培养3 d后支架和DRGs的超微结构. 结果 HE染色显示经处理后支架内细胞成分基本去除;共培养3 d后CBD-NT3组DRGs突起延伸长度最长,与NT3组和PBS组比较差异均有统计学意义(P＜0.05);细胞突起总体延伸方向与支架纤维长轴夹角的双侧95%可信区间为(18.8～20.7)°;扫描电镜显示DRGs能依靠胶原支架表面地貌锚定和生长. 结论 有序胶原支架联合CBD-NT3能定向引导并促进细胞突起延伸,为脊髓损伤修复的研究提供了一种有效的途径.     

内皮祖细胞在膀胱细胞外基质上的生长及分化

背景：传统的组织工程膀胱支架材料本身无血管结构,植入体内后面临血管化不足的问题。 目的：观察内皮祖细胞与膀胱细胞外基质的生物相容性。 方法：分离培养兔内皮祖细胞,种植于兔膀胱细胞外基质上与其复合培养。将复合生长材料植入兔背部皮下检测其组织相容性。 结果与结论：兔内皮祖细胞能够在膀胱细胞外基质表面正常黏附、生长、增殖,细胞形态良好。内皮祖细胞-膀胱细胞外基质植入兔体内后1周时,可见材料周围炎症反应明显,粘连严重,出血较多;苏木精-伊红染色可见组织中较多炎性细胞浸润,胶原及弹性纤维排列松散。植入后8周时可见材料已降解成碎细丝状,与周围组织融合生长在一起,但质地略脆,易出血;苏木精-伊红染色可见组织中已无明显炎症细胞浸润反应,胶原及弹性纤维排列紧密并且有新生血管长入其中。结果表明内皮祖细胞与膀胱细胞外基质具有良好的相容性,复合培养物与体内组织具有良好的相容性。     

异种(猪)无细胞真皮基质的制备及体外生物相容性*

背景：人同种无细胞真皮基质作为一种永久性真皮支架,已成功应用于烧伤创面修复及美容医学等领域,但由于来源有限,限制了其应用。 目的：研制异种(猪)无细胞真皮基质,并对其体外生物相容性进行评价。 设计、时间及地点：体外细胞学对比观察实验,于2007-08/2008-06在中国辐射防护研究院生物材料与制药技术研究所实验室完成。 材料：实验猪由中国辐射防护研究院实验动物中心提供;人成纤维细胞来自武警山西总队医院健康儿童包皮环切术切除的包皮组织。 方法：无菌条件下获取健康小白猪猪皮,用高渗盐溶液-去污剂、胰酶消化及超声清洗的方法,制备猪无细胞真皮基质。体外培养人成纤维细胞,用猪无细胞真皮基质浸提液法及人成纤维细胞和猪无细胞真皮基质直接贴附法,评价猪无细胞真皮基质体外生物相容性。 主要观察指标：①猪无细胞真皮基质的组织学形态。②猪无细胞真皮基质的体外生物相容性。 结果：制备的猪无细胞真皮基质,完全去除了表皮和真皮中的细胞成分,保留了胶原基质。猪无细胞真皮基质浸提液对人成纤维细胞增殖无明显影响。人成纤维细胞可以在猪无细胞真皮基质上贴附、增殖。 结论：此种方法制备的无细胞真皮基质完全去除了表皮和真皮中的细胞成分,有较好的体外生物相容性。 关键词：猪无细胞真皮基质;人成纤维细胞;生物相容性     

生肌玉红胶原海绵修复创面损伤

背景：生肌玉红胶原海绵能显著促进创面愈合。 目的：观察生肌玉红胶原海绵对兔皮肤创面愈合的影响。 方法：在新西兰白兔背部制造3处全层皮肤缺损创面,分别以生肌玉红胶原海绵、贝复剂(重组碱性成纤维细胞生长因子外用溶液)、生理盐水修复。观察各组创面愈合时间、创面愈合率,检测创面修复组织内成纤维细胞数、血红素氧化酶1、转化生长因子β1 mRNA与蛋白及增殖细胞核抗原蛋白表达。 结果与结论：与贝复剂、生理盐水比较,生肌玉红胶原海绵可显著促进成纤维细胞增殖(P < 0.05),增加创面血红素氧化酶1、转化生子因子β1及增殖细胞核抗原的表达(P < 0.05),提高创面愈合率(P < 0.05),缩短创面愈合时间(P < 0.05)。证实生肌玉红胶原海绵能够促进创面修复,其作用机制可能是通过提高创面血红素氧化酶1、转化生长因子β1表达促进细胞增殖,增加成纤维细胞等创面修复细胞。     

碱性成纤维细胞生长因子/双层胶原基复合材料制备及其生物安全性

背景：胶原特殊的分子结构和生物活性有利于多种细胞黏附、增殖和分化,并可降解为新生组织提供足够空间。 目的：制备一种复合负载碱性成纤维细胞生长因子的壳聚糖-肝素纳米粒子双层胶原基复合材料,并评价其生物安全性。 方法：制备交联风干胶原膜和交联冻干胶原膜。将壳聚糖-肝素纳米粒滴于交联冻干胶原膜上,再将湿态交联风干胶原膜置于复合纳米粒子的交联冻干胶原膜上风干,即碱性成纤维细胞生长因子/双层胶原基复合材料。采用急性全身毒性试验、溶血试验、热原试验和细胞毒性试验评价其生物安全性。 结果与结论：碱性成纤维细胞生长因子/双层胶原基复合材料为双层结构,一侧表面致密,另一侧疏松多孔。在其中间负载碱性成纤维细胞生长因子的壳聚糖-肝素纳米粒子呈不规则球形分布于胶原膜内侧面;急性全身毒性试验、热原试验、溶血试验均为阴性,细胞毒性为0级。说明碱性成纤维细胞生长因子/双层胶原基复合材料具有良好的生物安全性,对机体无毒,符合ISO 10993-1评价标准。     

钙通道阻滞剂对体外培养神经瘢痕成纤维细胞增殖及胶原分泌的影响☆

目的：钙通道阻滞剂可抑制瘢痕成纤维细胞的增殖及胶原蛋白的分泌，减少瘢痕的增生。实验拟进一步观察钙通道阻滞剂对体外培养神经瘢痕成纤维细胞增殖及胶原分泌的影响。 方法：实验于2006-03/06在吉林大学中日联谊医院中心实验室完成。①实验材料：Wistar大鼠10只；盐酸维拉帕米注射液为上海禾丰制药有限公司产品。②实验过程及分组：制作大鼠双侧坐骨神经损伤模型，术后2周取损伤处神经瘢痕，按组织块法培养神经瘢痕成纤维细胞，实验所用细胞为4~8代，分4组，其中3组培养基中维拉帕米药物浓度分别为10，50及100 μmol/L，1组为空白对照组。③实验评估：分别用四甲基偶氮唑盐法观察细胞增殖能力、羟脯氨酸比色法测定细胞上清液中的胶原含量和胞浆中的胶原含量。 结果：①四甲基偶氮唑盐法观察细胞增殖结果：钙通道阻滞剂对神经瘢痕成纤维细胞的生长增殖具有明显抑制作用，且呈现剂量依赖性(P < 0.05)。②羟脯氨酸比色法测定胶原含量：钙通道阻滞剂可使分泌到细胞培养上清中的胶原含量明显减少，以100 μmol/L浓度组作用最为显著(P < 0.05);胞浆中的胶原含量增加，具有明显剂量依赖性，以100μmol/L浓度组作用最为显著（P < 0.05）。 结论：钙通道阻滞剂可以抑制神经瘢痕成纤维细胞的增殖及胶原分泌。     

丝素蛋白/羟基磷灰石复合支架对骨髓间充质干细胞增殖分化的支持：优于胶原海绵材料吗？

背景：传统的羟基磷灰石强度低、孔隙度小、骨诱导性和传导性较差。因此,人们采用各种方法制备羟基磷灰石生物复合材料,以改进其性能。 目的：观察丝素蛋白/羟基磷灰石复合材料对骨髓间充质干细胞生物特性的影响,并与常用的胶原海绵相比较。 设计、时间及地点：重复测量观察及多样本观察实验,于2007-01/2008-06在苏州大学附属第一医院骨科实验室完成。 材料：丝素蛋白/羟基磷灰石纳米材料由苏州大学材料学院李明忠教授研制提供,胶原海绵购买于上海其胜公司。 方法：取SD大鼠股骨和胫骨分离提取骨髓间充质干细胞,进行培养,传代。取第3代骨髓间充质干细胞分别接种到丝素蛋白/羟基磷灰石复合材料及三维胶原海绵材料上进行共培养。未加材料,单独培养细胞,作为空白对照组。 主要观察指标：应用倒置显微镜观察细胞生长情况;在培养第2,4,6,8天用MTT法测定细胞增殖情况及测定碱性磷酸酶活性。 结果：①倒置显微镜显示骨髓间充质干细胞能在两种材料上良好地黏附、增殖和生长。②MTT法检测显示两种材料上的细胞增殖明显,碱性磷酸酶活性随培养时间延长而增加,均高于空白对照组。 结论：丝素蛋白/羟基磷灰石复合材料显示出良好的生物相容性,并能促进细胞生长分化,其有望成为胶原组织工程支架材料很好的补充和替代。 关键词：丝素蛋白;羟基磷灰石;组织工程;骨髓间充质干细胞;增殖分化