广西柳州16～25岁HIV-1感染者中流行毒株亚型及耐药分析北大核心

目的通过对广西壮族自治区柳州市,2011-2013年艾滋病病毒Ⅰ型（HIV-1）新近感染者毒株基因特征的研究,了解当地HIV毒株流行及耐药毒株发生传播的情况。方法采集当年新确证的、16~25岁未接受抗病毒治疗的HIV-1感染者的血浆样本,共176份。提取病毒核糖核酸（RNA）,通过扩增HIV-1 pol区片段,进行测序和耐药基因变异分析。结果 3年共获得pol区序列176条,主要以CRF01_AE为主（86.9%,153/176）;其次也发现了少量CRF07_BC、CRF08_BC和B亚型。共有5例（2.8%,5/176）出现耐药突变,4例为异性性传播,1例为注射吸毒传播,其中1例针对蛋白酶类抑制剂（PI）,3例针对非核苷类抑制剂（NNRTIs）,另有2例针对核苷类抑制剂（NRTIs）发生耐药突变。结论当地主要流行毒株为CRF01_AE,广西柳州HIV-1新近感染者耐药传播目前处于低度传播水平,但仍要进一步加强对新近感染者的耐药监测和病人的治疗管理。     

2008-2010年深圳市HIV-1耐药警戒线调查及耐药趋势分析

目的根据世界卫生组织(WHO)推荐的Ⅰ型艾滋病病毒(HIV-1)耐药警戒线调查方案,调查分析深圳HIV感染者的病毒株耐药突变情况,并分析耐药株传播水平的3年发展趋势。方法通过连续3年系列横断面调查,于2008年至2010年,每年采集<25岁未接受抗病毒治疗的HIV-1感染者血浆样本,提取病毒RNA,采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增HIV-1 pol区片断,进行序列测定和耐药基因变异分析。结果 2008年检测耐药传播率为0(0/45),2009年检测耐药传播率上升至6.1%(3/49),其中1份对核苷类反转录酶抑制剂耐药(T215S),2份对蛋白酶抑制剂出现耐药(M46L);2010年检测耐药传播率为4.0%(2/50),其中1份对核苷类反转录酶抑制剂耐药(T215S),1份对蛋白酶抑制剂出现耐药(M46I)。所有耐药株均来自经性传播人群,其中,蛋白酶抑制剂耐药株全部来自男男性行为人群。核苷类反转录酶抑制剂耐药株全部属于重组亚型CRF07_BC,而蛋白酶抑制剂耐药毒株全部属于CRF01_AE。结论深圳地区HIV-1耐药已经进入或即将进入中度传播水平,应该为深圳地区发现的HIV感染者提供耐药检测,尤其是针对性传播人群。     

广西柳州16～25岁HIV-1感染者中流行毒株亚型及耐药分析

目的通过对广西壮族自治区柳州市,2011-2013年艾滋病病毒Ⅰ型(HIV-1)新近感染者毒株基因特征的研究,了解当地HIV毒株流行及耐药毒株发生传播的情况。方法采集当年新确证的、16~25岁未接受抗病毒治疗的HIV-1感染者的血浆样本,共176份。提取病毒核糖核酸(RNA),通过扩增HIV-1 pol区片段,进行测序和耐药基因变异分析。结果 3年共获得pol区序列176条,主要以CRF01_AE为主(86.9%,153/176);其次也发现了少量CRF07_BC、CRF08_BC和B亚型。共有5例(2.8%,5/176)出现耐药突变,4例为异性性传播,1例为注射吸毒传播,其中1例针对蛋白酶类抑制剂(PI),3例针对非核苷类抑制剂(NNRTIs),另有2例针对核苷类抑制剂(NRTIs)发生耐药突变。结论当地主要流行毒株为CRF01_AE,广西柳州HIV-1新近感染者耐药传播目前处于低度传播水平,但仍要进一步加强对新近感染者的耐药监测和病人的治疗管理。     

应用HIV-1耐药性基因型检测广东部分地区HIV耐药株

目的利用艾滋病病毒1型(HIV-1)耐药性基因型检测法,在HIV-1感染者中监测HIV-1耐药性病毒株,掌握广东省HIV-1感染者在利用抗病毒药物治疗前是否存在耐药突变及其流行情况。方法从未接受高效抗逆转录病毒联合疗法(HAART)治疗的HIV-1感染者血浆中提取病毒RNA,采用套式PCR扩增目的基因片断,并对扩增片断进行序列测定和分析。结果HIV-1耐药性基因型检测法能够从HIV-1感染者血浆病毒载量大于1 000拷贝/ml以上、CD4低于400以下的样本中扩增到目的片断。在广东省50例未治疗对象中,低中度耐药相关突变例数为2例,占4%;高度耐药相关突变例数为0;总耐药相关突变例数为2例,占4%。结论HIV-1耐药性基因型检测法能有效地监测HIV-1感染者血浆中的耐药性病毒株的存在,并且方法提供的结果准确、可靠。对广东省未接受抗病毒治疗的HIV-1感染者中耐药突变的检测表明,HIV-1感染者中存在病毒的耐药性突变,也反应了HIV毒株自然变异情况的存在。     

2010-2013年新疆HIV亚型和耐药传播研究

目的通过对新疆艾滋病病毒(HIV)感染者的病毒基因序列分析,了解2010-2013年新疆HIV亚型和耐药传播情况。方法采集当年新报告的16~25岁未接受抗病毒治疗的HIV-1感染者的血浆样本,提取病毒核糖核酸(RNA),通过扩增HIV-1 pol区片段,进行测序和耐药基因变异分析。结果 4年共获得pol区序列150条,主要以CRF07_BC为主(96.7%,145/150),共有3例出现耐药,分别针对非核苷类抑制剂(NNRTIs)和核苷类抑制剂(NRTIs)。耐药株主要出现在性传播人群中。结论各传播途径中仍主要流行CRF07_BC,新疆HIV-1耐药传播目前处于低度传播水平,但仍需进一步加强对感染者的耐药监测和病人的治疗管理。     

2012年杭州市HIV耐药株传播状况的研究

目的了解2012年浙江省杭州市新报告的艾滋病病毒(HIV)感染者耐药株的传播水平。方法根据世界卫生组织推荐的HIV耐药警戒线调查方法,收集新报告的HIV感染者的血浆样本,进行基因型耐药检测和耐药株传播水平分析。结果共采集58例样本进行调查,最终成功获得序列51例。根据HIV耐药警戒线调查方法,纳入47例进行耐药分析。按pol区分型,CRF01_AE占66.0%(31/47),CRF07_BC占29.8%(14/47),B亚型占2.1%(1/47),新型重组型CRF01_AE/B/C占2.1%(1/47)。3例样本出现监测性耐药突变,包括蛋白酶区的L90M、I85IV突变以及反转录酶区的T215S,Y188L和K103N突变。结论杭州市处于HIV耐药株中度传播水平,且亚型重组复杂化,突变位点多样化。     

福建省MSM人群中HIV-1感染者原发性耐药基因突变研究

目的研究我省男男性行为者(MSM)中未经抗病毒治疗的人类免疫缺陷病毒(HIV)感染者的原发性基因耐药性突变发生情况,为该人群的抗病毒治疗药物选择提供依据。方法采集福建省尚未接受抗病毒治疗的MSM HIV-1感染者的外周静脉抗凝全血,分离血浆,提取血浆中HIV RNA,用RT-PCR方法扩增HIV pol区蛋白酶基因全序列与部分逆转录酶序列。所得扩增片段进行序列测定后,数据运用Contig Express拼接编辑校正后上传至斯坦福大学HIV耐药数据库进行比对,同时运用Bio-Edit和Mega等软件进行系统发生分析。结果获得50份HIV-1分离株完整的PR和RT基因序列,其中60%(30/50)为01_AE重组亚型,18%(9/50)为B亚型,20%(10/50)为07_BC重组亚型,1例08_BC重组亚型。耐药分析显示,1例发生PI(蛋白酶抑制剂)药物的主要耐药突变M46I,造成对NFV中度耐药。10例样本出现NNRTIs和NRTIS的耐药相关突变,仅1例解释为对NNRTIs的潜在低水平耐药,由V179E引起。结论福建省MSM HIV-1感染者的原发性耐药突变发生率低,有利于今后该人群抗病毒治疗工作的开展,但需加强监控该人群耐药毒株的传播。     

绍兴市HIV-1毒株的耐药变异研究

目的了解绍兴市1型艾滋病病毒(HIV-1)株的耐药变异情况。方法分析2013-2014年绍兴地区新确认未经抗病毒治疗的130例HIV-1感染者,以及2014年前抗病毒治疗满一年且病毒未抑制的34例感染者样本,采用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)和巢式-聚合酶链式反应(Nested-PCR)方法扩增HIV-1的pol基因区全长,参照美国斯坦福大学HIV耐药数据库,确定HIV亚型及耐药突变位点。结果 34例新诊断HIV感染者及33例病毒未抑制感染者的样品检测到耐药突变,主要亚型为CRF01_AE和CRF07_BC。仅在病毒未抑制感染者中检测到针对核苷类反转录酶抑制剂(NRTIs)的耐药突变,主要类型有M184V(42.42%)、K70R(15.15%)、D67N(12.12%)。在新确认感染者和病毒未抑制感染者两组人群中,均检测到针对非核苷类反转录酶抑制剂(NNRTIs)耐药的突变,主要类型有V179D/E/T(10.00%和18.18%)、K103N(2.22%和21.21%);在病毒未抑制感染者中还有Y181CY(21.21%)、V90I(12.12%)、G190A(15.15%)。在反转录酶(RT)区和整合酶(IN)区仅检测到少量次要耐药突变。结论绍兴市HIV经抗病毒治疗后易产生耐药性,部分可在新感染人群中传播,应对HIV耐药变异加强监测。     

河北省治疗前人群HIV-1耐药毒株分子传播网络研究

目的 了解河北省抗病毒治疗前人群HIV-1耐药毒株流行与分子传播网络情况。方法 用in-house的方法扩增HIV-1 pol区基因序列,并利用TN93模型计算pol序列基因距离,构建HIV-1分子网络图。结果 研究发现17名HIV-1感染者出现耐药突变,耐药突变率为6.16%(17/276),其中,NNRTI类耐药率为4.35%(12/276),PI类耐药率为1.09%(3/276), NRTI类耐药率为0.36%(1/276),NNRTI类和PI类双重耐药率为0.36%(1/276);多因素Logistic回归分析显示年龄和亚型是HIV-1产生耐药的影响因素,虽然HIV-1耐药突变在CRF07_BC(2.44%)亚型中的分布明显低于CRF01_AE(8.03%)和B(3.70%)亚型,然而CRF07_BC序列构建的分子传播网络最多,传播速度最快。结论 河北省治疗前HIV-1耐药突变处于较高水平, 应制定措施实时监测未治疗人群中HIV-1耐药毒株流行情况。     

福建省MSM哨点监测HIV新近感染影响因素及分子流行特征研究

目的 了解福建省MSM人群HIV新近感染状况,探讨其分子流行特征和相关影响因素,为制定艾滋病防治策略提供科学依据。方法 对福建省2019年MSM哨点监测人群HIV抗体阳性样本采用HIV-1限制性抗原亲和力酶联免疫法(简称LAg-Avidity EIA)进行新近感染检测,用多因素Logistic回归分析其影响因素,通过RT-PCR扩增pol和gag区,利用系统进化树和HIV db Program 软件对序列进行基因亚型和耐药突变分析。结果 福建省2019年哨点监测MSM人群863人,其中总的HIV抗体阳性率为12.17%(105/863), HIV新近感染率为11.97%;Logistic回归分析显示,样本来源和最近6个月内同性肛交安全套使用频率是新近感染的影响因素;基因亚型以CRF07_BC(47.61%)和CRF01_AE(38.10%)为主,其次为CRF55-01B(9.52%)、B亚型(4.76%);HIV-1耐药率为6.67%(1/15),其中15例对蛋白酶类抑制剂、核苷类逆转录抑制剂均敏感; 1例对非核苷类逆转录酶抑制剂efavirenz (EFV)和nevirapine (NVP)产生高度耐药, 1例为潜在耐药。结论 福建省2019年哨点监测MSM人群HIV新近感染率处于较高水平,多种亚型并存,发现原发耐药株传播,应加强对HIV新近感染者的分子流行特征变化趋势以及原发耐药传播的动态监测,及时调整防控策略,有效控制福建省艾滋病感染与传播。     

广东省吸毒人群新发HIV-1感染pol基因多态性和耐药分析

目的研究广东省部分吸毒人群2007年新发现的艾滋病病毒Ⅰ型（HIV-1）感染者pol基因的多态性耐药突变。方法选取2007年吸毒人群中新发现的HIV感染者63例,从血浆中提取病毒RNA,运用一步法逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）和套式聚合酶链反应（Nested—PCR）扩增HIV pol基因段,并对扩增的目的片段进行测序,将测序结果与斯坦福大学耐药数据库比对,获得耐药和基因多态性相关信息。结果在63例HIV感染者中,有效扩增并且测序成功49例。检出耐药者2例,占4．1％,分别为低度和潜在耐药,耐药突变类型分别为V179D和Q151LQ。pol基因耐药突变的发生率为38．7％,主要突变类型为：L33I、A71V、A71T、T69S。其中T69S为主要的耐药突变位点,占耐药突变的33％。在不同的基因亚型中,pot基因蛋白酶区和逆转录酶区的突变的多态差异较大。结论广东省吸毒人群2007年新发现HIV感染者耐药发生率仍处于较低水平,为4．1％,但耐药突变的发生率较高。     

云南省临沧市2012年HIV-1基因型和耐药传播警戒线调查

目的了解2012年临沧市未经抗病毒治疗的艾滋病病毒I型（HIV1）感染者中,病毒的基因型分布和耐药株传播水平。方法根据HIV-1耐药警戒线调查实施方案,对2012年2—7月,临沧市符合方案要求的50份年龄在18—25岁的、新发现的HIV-1感染者的血浆样本,进行耐药基因型检测和耐药株传播水平分析。结果50份血浆样本中,36份完成了基因型及耐药鉴定。通过进化分析对pol区进行分型,75．0％（27／36）的样本为CRF08-BC,其他依次为URF—BC（8．3％,3／36）、CRF07-BC（5．6％,2／36）、CRF01-AE（5．6％,2／36）和c亚型（5．6％,2／36LURF—BC重组中有两例重组模式相同。获得的序列中未检测到监测相关的耐药突变（Surveillancedrugresistancemutations,SDRM）,按照耐药警戒线的统计方法估算,耐药株流行率〈5％。结论临沧市目前主要流行的HIV-1亚型为CRF08-BC,HIV-1耐药株处于低度流行水平。为控制耐药传播水平的上升,在加强重点人群艾滋病防治的基础上,应加强规范艾滋病抗病毒治疗及科学管理,同时有计划地开展相关的耐药监测。     

深圳地区男男同性恋人群中HIV-1感染者耐药基因变异研究

目的调查分析深圳地区未接受抗病毒治疗的男男同性恋人群中,人免疫缺陷病毒（HIV）感染者的耐药突变流行情况,以进一步指导抗病毒药物的选择。方法收集2007—2008年,从未接受抗病毒治疗的男男同性恋人群中HIV—1感染者的血浆,采用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）和套式聚合酶链反应（Nested—PCR）方法,扩增蛋白酶（PR）1基因区和反转录酶（RT）基因区,并对扩增片断进行序列测定和分析,并用Mega等软件构建进化树及亚型分析。结果共获得94份HIV-1分离株的完整的PR和RT基因序列,发生耐药突变位点的35份（37．2％）样本序列检出42个耐药性突变位点,其中1份样本产生了核苷类抑制剂（NRTI）、非核苷类抑制剂（NNRTI）耐药性突变,以及蛋白酶抑制剂（PI）主要耐药突变和P1次要耐药突变;5份样本产生了NRTI耐药性突变,20份样本产生了NNRTI耐药性突变,9份样本产生了P1次要耐药突变。非核苷类耐药性突变、核苷类耐药性突变和P1次要耐药突变位点分别以V179E、V118I和A71V为主,分别占65．0％（13／20）、66．7％（4／6）和55．6％（5／9）。结论深圳地区男男同性恋人群中的、未经抗病毒治疗的HIV1感染者中,存在原发性耐药相关基因突变位点变异,耐药基因变异处于较低水平的流行状态。     

福建省HIV-毒株耐药基因变异分析

目的了解福建省I型艾滋病病毒（HIV-1）的耐药基因变异情况。方法选取2005-2012年福建省抗病毒治疗1年以上、病毒载量高于1000拷贝／mL的HIV感染者／艾滋病病人标本,进行基因型耐药性检测。同时收集前期研究中的耐药性检测数据进行对比分析。结果共检测73例病毒学治疗失败病人标本,其中60例（82.19％）成功扩增序列,结合125份未接受抗病毒治疗者的样本,共获得185份样本进行耐药分析。未治疗组和治疗组对蛋白酶抑制剂（PI）的耐药发生率均较低,分别为1.60％（2／125）和8.33％（5／60）;未治疗组对反转录酶抑制剂（RTI）的耐药发生率为4.80％（6／125）;治疗组对RTI耐药发生率较高,为61.67％（37／60）,尤其是对NVP、EFV、3TC和FTC。最常见的耐药突变有M184V、D67N、K70R、K219Q、T215F、G190A、Y181C和K103N。结论福建省HIV-1感染者的总体原发性耐药突变率较低,病毒学治疗失败病人对PI耐药发生率仍处于低水平,但对RTI耐药发生率较高。     

云南省2008-2012年HIV-1耐药基因型检测情况

目的了解云南省2008—2012年艾滋病病毒Ⅰ型（HIV-1）耐药基因检测及临床应用情况。方法采用反转录套式聚合酶链反应（RT-nested—PCR）方法,检测病毒抑制失败病人血浆HIV-1耐药基因型。结果截止2012年12月31日,云南省累计治疗艾滋病（AIDS）病人38055人。2008—2012年,HIV1病毒载量（VL）检测率逐年提高（54．0％～95．2％）。HIV-1VL〈50拷贝／mL者占88．7％,VL在51～1000拷贝／mL者占3．4％,VL〉1000拷贝／mL者占7．9％。对VL〉1000拷贝／mL病人血浆进行HIV-1耐药基因突变检测,共检测3766人次,获得可用序列2586例。其中未检出耐药突变的占46．2％（1196／2586）,发生耐药突变的占53．8％（1390／2586）。以2012年末累计治疗人数为基数,计算得到抗病毒治疗（HAART）人群的耐药发生率为3．7％（1390／38055）。16个地市中除丽江和迪庆两地未发现耐药毒株外,其余各地均有不同程度的耐药发生。核苷类反转录酶抑制剂（NRTI）、非核苷类反转录酶抑制剂（NNRTI）和蛋白酶抑制剂（PI）的突变率分别为63．3％、95．1％和8．5％。NRTI突变位点的前3位依次为M184V／I（52．7％）、T215Y／F（11．7％）、D67N（10．2％,）,NNRTI前3位是K103N／S（37．8％）,G190A／S／E（24．4％）,Y181C／I／V（22．0%）,PI出现最多的是L33F,其次还有M46I、V82A。结论云南省抗病毒治疗病毒学失败病人中,以NNRTI耐药最为多见,其次为NRTI,PI较少,各地、市HIV耐药发生存在一定差异。HIV耐药基因检测有助于科学抉择治疗方案,在提高HAART的效果的同时,有效地节约匮乏的药物资源,减少耐药毒株的流行传播。     

2018年至2019年浙江省绍兴市新确证人类免疫缺陷病毒1型感染者的分子传播网络特征分析

目的:分析浙江省绍兴市新确证人类免疫缺陷病毒1型(human immunodeficiency virus type 1,HIV-1)感染者传播关系的分子网络特征,为疫情流行趋势和防治提供依据。方法:纳入2018年8月至2019年12月绍兴市新确证未经抗病毒治疗的423份HIV-1感染/艾滋病病例血液样本,获得375份...     

基于In-fusion技术的高通量HIV表型耐药检测系统的建立及应用研究

目的 构建基于In-fusion技术的高通量新型HIV表型耐药检测系统,用于临床表型耐药检测。方法 扩增LacZ基因,插入并替换原骨架质粒pLWJ-SV40-Luc中耐药检测片段构建新的骨架质粒pLWJ-SV40-Luc-LacZ,利用In-fusion定向克隆技术,将耐药检测片段插入到改造后的骨架质粒中构建耐药检测载体(RTV),并与膜蛋白表达质粒VSV-G共转染293T细胞产生HIV假病毒,在药物干预下,通过检测感染细胞中Luc+表达量来反应其对药物的敏感性。结果 成功引入蓝白斑筛选改造出新的骨架质粒pLWJ-SV40-Luc-LacZ。36例临床检测样本成功扩增出30例,利用In-fusion无缝连接技术成功构建26例RTV,其中21株产生的假病毒具有活性。药物敏感性实验结果显示所得的假病毒表型耐药检测结果与基因型耐药解释结果完全一致。结论 成功构建出基于In-fusion技术的高通量新型HIV表型耐药检测系统,可应用于临床耐药检测,以指导临床抗病毒治疗。     

HIV-1 Subtype C Drug Resistance Mutations in Heavily Treated Patients Failing Integrase Strand Transfer Inhibitor-Based Regimens in Botswana

There are limited real-world mutational and virological outcomes data of treatment-experienced persons diagnosed with HIV-1 subtype C (HIV-1 C) who are failing Integrase Strand Transfer Inhibitor-based regimens. Requisition forms sent for HIV-1 genotypic resistance testing (GRT) between May 2015 and September 2019 were reviewed and participants experiencing virologic failure while on dolutegravir (DTG) or raltegravir (RAL) cART at sampling recruited. Sanger sequencing of the HIV-1 Pol gene was performed from residual plasma samples and drug resistance mutational (DRM) analysis performed using the Stanford University HIV drug resistance database. 40 HIV-1C integrase sequences were generated from 34 individuals, 24 of whom were on DTG cART, three on RAL cART and seven on an unknown (DTG or RAL)-anchored cART at time of GRT. 11/34 (32%) individuals had DRMs to DTG and other integrase inhibitors. 7/11 (64%) patients had exposure to a RAL-based cART at the time of sampling. Out of the 11 individuals with DRMs, one (9%) had 2-class, 6 (55%) had 3-class, and 4 (36%) had 4-class multidrug-resistant HIV-1C. 7/11 individuals (64%) are currently virologically suppressed. Of the four individuals not virologically suppressed, three had extensive DRMs involving 4-classes of ARV drugs and one individual has demised. Resistance to DTG occurs more often in patients exposed to RAL cART. Individuals with 4-class DRMs plus integrase T97 and E157Q mutations appear to have worse outcomes. There is a need for frequent VL monitoring and GRT amongst treatment-experienced HIV-1C diagnosed individuals.     

广西16例患AIDS儿童抗病毒治疗病毒学失败者的基因型耐药性研究

目的了解广西自治区患艾滋病（AIDS）儿童抗病毒治疗病毒学失败病例的耐药规律及特点。方法分析16例患AIDS儿童接受过高效抗反转录病毒治疗（HAART）,并出现病毒学失败的临床及实验室资料,进行基因型耐药检测并对耐药突变结果进行分析。结果 16例患AIDS儿童的平均年龄（3.4±1.6）岁,平均治疗的时间为（13.2±5.5）个月,平均CD4T淋巴细胞百分比（11.08±7.05）%个,病毒载量的平均值（4.02±0.58）log10 IU/ml。在16例儿童中,基因型耐药检测结果为耐药的有15例,病毒学失败后耐药发生率为93.75%。在15例耐药的儿童中,7例（占46.67%）对非核苷类反转录酶抑制剂（NNRTI）的三种药物全部高度耐药,15例（占100%）对NVP耐药;10例（占66.67%）对DLV高度耐药,1例（占6.67%）为可能耐药;7例（46.67%）对EFV高度耐药,8例（占53.33%）为可能耐药。在15例耐药的儿童中,对核苷类反转录酶抑制剂（NRTI）的耐药突变结果显示：13例（占86.67%）对3TC和FTC高度耐药,1例对AZT高度耐药;1例对ddI高度耐药,1例为可能耐药;1例对d4T高度耐药,2例为可能耐药;1例对ABC高度耐药,2例为可能耐药;1例对TDF高度耐药,1例为可能耐药。结论 15例病毒学失败的艾滋病患儿,对正在使用的抗病毒药有不同程度耐药,需考虑更换新的抗病毒治疗方案。