小鼠肝细胞线粒体磷酸化蛋白质组的初步研究

目的 提取小鼠肝细胞线粒体磷酸化蛋白并利用双向凝胶电泳技术对其进行分离. 方法 提取小鼠肝细胞线粒体蛋白并利用金属磷酸盐亲和层析树脂富集磷酸化蛋白后,进行一维等电聚焦分离和二维聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,质谱鉴定感兴趣的蛋白点. 结果 成功提取了小鼠肝细胞线粒体磷酸化蛋白,并通过双向凝胶电泳分离技术成功建立了小鼠肝细胞线粒体磷酸化蛋白质组图谱. 结论 磷酸化蛋白纯化技术与二维凝胶电泳分离技术的结合是研究亚细胞器磷酸化蛋白质组的有效方法,为进一步全面鉴定和研究线粒体磷酸化蛋白的功能打下了基础.     

小鼠肝脏磷酸化蛋白质组的二维液相色谱分离

目的利用二维液相色谱法分离小鼠肝脏磷酸化蛋白质组.方法取正常小鼠肝脏,裂解肝脏后利用磷酸盐金属亲和层析（PMAC）树脂提取磷酸化蛋白.将磷酸化蛋白用初始缓冲液置换后,进行一维色谱聚焦分离,再将一维收集的pH值在8.5至4.0之间的组分分别进行二维无孔硅胶反相高效液相色谱（RP-HPLC）分离.最后利用ProteoVue软件将二维UV图转换成胶图进行分析.结果成功提取了小鼠肝脏磷酸化蛋白,并在浓缩除盐后通过二维液相色谱分离成功建立小鼠肝脏磷酸化蛋白质组pI/UV图谱.其中,一维色谱聚焦分离pH值在8.5至4.0之间共收集16个组分,每个组分的二维UV图转换成pI/UV胶图.结论磷酸化蛋白纯化技术与二维液相色谱技术的结合是研究磷酸化蛋白质组的有效方法,为下一步鉴定和研究磷酸化蛋白的功能打下了基础.     

线粒体蛋白质组分离鉴定策略及数据诠释

线粒体功能和蛋白质组的改变可以导致各种退化性疾病如心肌病、衰老和癌症的发生，因此线粒体蛋白质组研究日显重要。线粒体纯度是困扰线粒体蛋白质组研究的一个基本但却关键的问题，也是线粒体蛋白质组数据诠稃及亚细胞定位的关键。对线粒体蛋白质一般采用质谱鉴定，鉴定前的分离纯化是高效鉴定的前提。线粒体蛋白质的分离有基于凝胶电泳和液相色谱的两种策略，它们可以以合理的方式组合达到最佳分离效果。对鉴定的线粒体蛋白质数据的合理诠释是解读线粒体表达谱和不同生理状态功能的最终目标。     

Liverbase：人类肝脏蛋白质组数据库应用系统的研发

目的人类肝脏蛋白质组计划（HLPP）的顺利实施产出了大量的肝脏蛋白质组数据,这也是迄今最大的人类组织器官的蛋白质组数据。为帮助科学家方便有效地利用这些数据,我们开发了人类肝脏蛋白质组数据库Liverbase。方法 Liverbase基于MySQL、JSP、JavaBean和JDBC等技术而开发。主要针对数据库系统结构、数据处理及注释、数据库系统功能及使用三方面展开并进行详细的阐述。结果 Liverbase的主要功能是展示、管理和检索人类肝脏蛋白质组计划鉴定到的蛋白质及其功能注释信息。对每个鉴定到的蛋白质提供了全面的注释信息,整合了mRNA/蛋白质丰度信息。结论 Liverbase具有简捷实用、易于查询和访问、可扩展性好以及便于维护等特点。数据库的访问地址是http：//liverbase.hupo.org.cn。     

p38分子与TAB1分子的相互作用及其自我磷酸化研究进展

一直以来,炎症的发生、发展受到人们的广泛关注.自1994年MAPK家族的p38分子被首次报道以来,大量相应的研究逐渐确立了p38分子在炎症调控中的重要作用.TAB1是MAP3K家族成员TAK1的结合蛋白,近来发现它能与p38发生相互作用并使p38自我磷酸化.最近,关于TAB1与p38相互作用的研究越来越多,在分子、细胞和组织器官层面都有新的发现,而且以TAB1和p38相互作用为靶向也成为新型p38抑制剂研究的新策略.     

细菌脂多糖引发的B淋巴细胞蛋白质酪氨酸磷酸化研究

细菌脂多糖（ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ，ＬＰＳ）有较强的促Ｂ淋巴细胞有丝分裂功能，使培养小鼠脾细胞中多克隆Ｂ细胞活化〔１〕。某些特定的革兰阴性（Ｇ－）厌氧菌特别是牙龈卟啉菌（Ｐｇ）与牙周病发病有密切关系，ＰｇＬＰＳ与大肠杆菌（Ｅｃ）ＬＰＳ...     

膜蛋白质组分析技术的研究进展

膜蛋白在细胞中执行着一些非常重要的功能。膜蛋白的溶解性是膜蛋白质组分析面临的主要挑战。膜蛋白溶解性的提高，使得经典的基于凝胶的蛋白质组策略和新兴的鸟枪蛋白质组策略在膜蛋白质组分析中逐渐被广泛应用，进而可以揭示膜蛋白的拓扑学特征和鉴定其翻译后修饰，为深入研究其重要的生物学功能积累数据。     

SP600125对重复持续性高+Gz暴露大鼠肝脏细胞损伤的保护作用

目的 探讨JNK抑制剂SP600125对重复持续性高正加速度(+Gz)作用下大鼠肝脏细胞JNK/c-jun表达的影响及其作用机制。方法 近交系成年雄性Wistar大鼠18只,随机分为对照组、+10Gz组、SP600125组,每组6只。+10Gz组、SP600125组大鼠进行+10Gz离心,峰值作用时间3min,加速度增长率1G/s,间隔30min一次,连续5次。SP600125组第1次在离心前30min腹腔注射SP600125。各组大鼠分别于实验结束后30min处死,下腔静脉采血,测定血浆丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)水平;取肝组织,通过实时定量PCR(q-PCR)检测c-jun m RNA的表达,Western blotting检测p-JNK、JNK、p-c-jun和c-jun蛋白的表达,并行HE观察肝组织病理学变化。结果 与对照组比较,+10Gz组、SP600125组大鼠血浆ALT、AST水平,肝组织c-jun m RNA及p-JNK、p-c-jun、c-jun蛋白的表达均明显增高(P<0.05),且+10Gz组明显高于SP600125组(P<0.05),而3组肝组织JNK蛋白的表达差异无统计学意义(P>0.05)。HE染色显示,+10Gz组部分肝细胞索排列紊乱,细胞形态不规则,部分出现空泡样改变,明显水肿,部分肝窦闭合;SP600125组肝细胞索排列基本清晰,轻度水肿,部分细胞形态不规则,肝窦清晰。结论 SP600125可减轻重复持续性高+Gz暴露对大鼠肝脏细胞的损伤作用。     

细菌内毒素对血管内皮细胞ERK1/ERK2和P38分裂原激活的蛋白激酶磷酸化的影响

研究细菌内毒素（ＬＰＳ）对血管内皮细胞的直接损伤机制,有助于了解内毒素血症对血管内皮的直接损害机制及其在多脏器损害中的作用。本研究通过观察ＬＰＳ刺激血管内皮细胞后,对内皮细胞中细胞外信号调节激酶（ＥＲＫ）１／ＥＲＫ２和Ｐ３８分裂原激活的蛋白激酶（ＭＡＰＫ）磷酸化的影响,发现ＬＰＳ（１ｍｇ／Ｌ）直接作用内皮细胞后Ｐ３８ＭＡＰＫ磷酸化程度明显增强,并与ＬＰＳ剂量有明显依赖关系。２．５ｍｇ／ＬＬＰＳ刺激后,Ｐ３８ＭＡＰＫ磷酸化在１５ｍｉｎ反应最强,３０ｍｉｎ后减弱,约６０ｍｉｎ后消失。而ＥＲＫ１和ＥＲＫ２的磷酸化在１５～３０ｍｉｎ明显,６０ｍｉｎ减弱,其总强度不如Ｐ３８ＭＡＰＫ。由此证明,ＬＰＳ直接作用内皮细胞后其信号可以通过跨膜传导,将ＭＡＰＫ激活,并可能引起细胞核内的基因转录和胞浆内功能蛋白的磷酸化,导致血管内皮细胞的多种功能变化。     

吸入氡致大鼠肺蛋白质组表达变化的分析

目的 从蛋白质组学角度分析氡染毒后大鼠肺组织蛋白质表达谱的变化。方法 雄性Wistar大鼠氡吸入染毒累积剂量分别达100、200、400工作水平月(WLM)后,取大鼠肺组织,裂解提取其总蛋白;双向电泳(2-DE)分离总蛋白,ImageMaster 2D Platinum软件分析差异表达蛋白,切取差异蛋白点,胶内酶解并进行质谱(MALDI-TOF-MS)鉴定。结果 正常对照组和氡染毒组大鼠肺组织的2-DE图谱有明显差异,差异表达点中与氡染毒呈剂量变化关系的点有14个表达上调,9个表达下调,质谱鉴定出其中的15个差异蛋白点。结论 氡染毒组大鼠肺组织的蛋白表达谱发生了一定的差异性,氡吸入致靶器官肺损伤可能与多种蛋白相关。     

Janus激酶2在实验性重症急性胰腺炎肝损伤中的作用

目的 观察Janus激酶/信号转导和转录激活因子(JAK/STAT)信号通路的核心分子Janus激酶2(JAK2)在实验性重症急性胰腺炎(SAP)肝损伤中的表达变化.方法 以4%牛磺胆酸钠胰胆管逆行注射诱导大鼠SAP模型.32只雄性SD大鼠随机分为4组:对照组(NC组)和SAP 6h、12h、18h组,每组8只.动态测定各组血清淀粉酶(AMY)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平;光镜下观察肝脏组织病理变化;免疫组化及Westem blotting法检测JAK2在肝组织中的蛋白表达水平变化.结果 与NC组比较,SAP各组AMY、ALT、AST水平均明显升高(P<0.05),光镜下肝脏组织损伤随病情进展而逐渐加重,SAP后6h有少量JAK2蛋白表达,12～18h达高峰(P<0.05),且JAK2表达与肝损伤的严重程度相一致.结论 JAK2蛋白在SAP发生时高表达,参与SAP形成的病理过程,JAK/STAT通路活化可能促进SAP肝损伤.     

Receptor tyrosine kinase signaling in cancer radiotherapy and its targeting for tumor radiosensitization

Purpose: One of the most important implications of ‘Radiation Biology’ research is to improve cancer radiotherapy with minimum side effects. In this regard, combination of chemotherapy with radiation has significantly improved tumor control as well as overall survival in a variety of cancers. However, this has been achieved at the cost of significant normal tissue toxicity, due to the lack of specificity of chemotherapy. Membrane-localized receptor tyrosine kinases (RTKs) have been found to play a driving role in various hallmarks of cancer. Moreover, an early successful clinical trial using RTK-antagonist (cetuximab) to improve tumor radiosensitivity has led to an advancement in this field of research. However, a comprehensive review integrating these findings of various oncogenic RTKs, from basic radiobiology-to-radiotherapy clinical trials, is lacking in literature. Therefore, the present review analyses relevant in-vitro, in-vivo, preclinical/clinical studies and postulates the concept of ‘Radiation Biology of RTKs in Cancer’.

Conclusions: The present review elucidates the effect of IR on various oncogenic RTKs and their mechanisms, downstream signaling, intracellular translocations, their role in the repair of radiation-induced DNA damage and post-irradiation survival. Based on the knowledge derived from RTK biology and the analysis of relevant clinical trials, this review attempts to identify radiobiological considerations, which could be implemented in future trials, combining radiotherapy with RTK-antagonist. Additionally, we identify the radiosensitizing potential of recently developed RTK-targeted nanoformulations. This review would probably change the Radiation Oncologist’s view for translation of tumor-specific radiosensitization in clinic.     

新型喹啉类蛋白酪氨酸激酶抑制剂的合成

目的 设计合成一系列新型喹啉双芳基脲类化合物作为潜在的蛋白酪氨酸激酶抑制剂.方法 以2-甲基-2苯基丙酸为原料经过9步反应,合成了12个喹啉衍生物,结构经过1H-NMR鉴定.结果 合成的12个目标化合物,均未见文献报道.结论 该合成方法简单易行,可作为一系列喹啉类蛋白酪氨酸激酶抑制剂的合成通法.     

胰腺炎与脂肪肝的相关性探讨

目的：探讨胰腺炎与脂肪肝之间的相关性。方法：８６例胰腺炎都进行肝、胆、胰腺ＣＴ扫描。１２例查血甘油三酯。结果：８６例胰腺炎中急性胰腺炎８０例,慢性胰腺炎６例。８６例中伴脂肪肝者５１例,占５９．３％,其中Ⅰ级脂肪肝３１例,Ⅱ级脂肪肝１３例,Ⅲ级脂肪肝７例。伴胆系统疾病者１７例,占１９．７％,不伴脂肪肝和胆系疾病者１８例,占２０．９％。１２例查血甘油三酯,其中７例不同级别脂肪肝的甘油三酯呈不同程度的升     

Texture analysis of human liver.

PURPOSE: To classify healthy and diseased livers by texture analysis (TA). MATERIALS AND METHODS: We studied 43 patients divided into four groups according to their clinical stage and 10 controls on a 1.5-T magnetic resonance (MR) imager, using a T2-weighted breath-hold sequence. For the TA, features of the first and second order were used, and several classification procedures were applied for the classification of patients and controls. The choice of features was performed manually and by use of the Fischer coefficient, average correlation coefficients between features and multidimensional discrimination measure. RESULTS: All the statistical methods employed were able to differentiate between controls and patients in each group. The classification error varied around 8%. CONCLUSION: We have shown that texture analysis can be successfully used for separating cirrhotic patients and healthy volunteers. Different sets of TA features can be used for a similar classification of patients.     

蛋白激酶C对大鼠逼尿肌肌条收缩活动影响的实验研究

 目的 探讨蛋白激酶C对大鼠离体逼尿肌肌条自发收缩活动的影响.方法 建立逼尿肌不稳定(detrusor instability ,DI)大鼠模型,制做大鼠逼尿肌肌条,观察不同浓度(3×10-7～3×10-4) mol/L的PMA和H-7对DI及逼尿肌稳定(detrusor stability,DS)大鼠逼尿肌肌条自发收缩活动的影响.结果 3×10-7～3×10-6 mol/L的PMA可明显增加DI、DS大鼠逼尿肌肌条自发收缩频率及收缩幅度,且DI组收缩频率高于DS组(P<0.05),但(3×10-5～3×10-4) mol/L的PMA对DI、DS大鼠逼尿肌肌条自发收缩频率和收缩幅度的促进作用无统计学差别(P>0.05).H-7能逆转PMA诱发的DS肌条的收缩作用,可明显抑制DI肌条自发收缩频率(P<0.05),但对其收缩幅度无影响(P>0.05).结论 蛋白激酶C信号通路可能介导了DI逼尿肌自发兴奋性增高的细胞内信号转导过程.     

蛋白激酶C亚型在慢性"炎症性"肺动脉高压大鼠肺动脉中的表达

目的 研究慢性"炎症性"肺动脉高压大鼠在肺动脉高压形成过程中肺动脉蛋白激酶C(PKC)亚型的表达.方法 建立野百合碱诱导的慢性"炎症性"肺动脉高压大鼠模型,应用Western blot技术检测肺动脉高压形成过程中大鼠肺动脉四种PKC亚型(PKCα、PKCβⅡ、PKCδ和PKCε)的表达变化.结果 PKCα、PKCβⅡ和PKCδ亚型在正常和肺动脉高压大鼠肺动脉中均有表达,而PKCε亚型未检测到.在肺动脉高压形成过程中,大鼠肺动脉胞浆和胞膜组分表达的PKCα均逐渐上升,到第14天达到高峰后略有下降,且胞膜表达量的升高远比胞浆明显.胞浆PKCβⅡ和PKCδ表达量均在第8天达最高,而胞膜中二者均表现出持续升高的趋势.结论 PKCα、PKCβⅡ和PKCδ亚型可能参与了慢性"炎症性"肺动脉高压的形成,其表达变化可能与其转位有关.     

高血压血小板中蛋白激酶C底物磷酸化程度的实验研究

目的　研究血小板蛋白激酶C(PKC)在高血压中的活性 ,以揭示PKC的致病作用。方法　利用32 P NaH2 PO4 标记血小板 ,以PKC底物 40kD蛋白磷酸化作为酶活性的标志 ,对高血压组及正常对照组PKC的基础活性及反应活性进行分析比较。结果　高血压组PKC的基础活性及经凝血酶刺激后的反应活性均较正常对照组显著增高 (P <0 .0 1)。结论　提示PKC活性增高为高血压病形成过程中的重要机制之一。     

蛋白激酶在大鼠缺血及再灌注脑损伤中的调节作用

 目的 探讨蛋白激酶在大鼠缺血及再灌注脑损伤中的调节作用。方法 孕18 d SD大鼠,取胚胎大鼠海马并分离培养海马神经元,加阿糖胞苷抑制神经胶质细胞增殖以纯化神经元,随机分为对照组与实验组,对照组正常培养,实验组缺血时间设定为30 min与60 min,采用Western blot检测蛋白激酶C活性及蛋白表达。结果 对照组、实验组缺血30 min和缺血60 min神经元胞浆PKC活性分别为(6.24±0.27)pmol/(min·mg)、(3.26±0.21)pmol/(min·mg)和(3.05±0.17)pmol/(min·mg),胞膜PKC活性为(2.63±0.13)pmol/(min·mg)、(8.85±0.32)pmol/(min·mg)和(10.63±0.35)pmol/(min·mg),缺血神经元胞浆PKC活性较正常明显下降,胞膜PKC活性明显增加;缺血再灌注损伤后,其胞浆PKC活性分别为(0.97±0.19)pmol/(min·mg)和(0.82±0.16)pmol/(min·mg),胞膜PKC活性为(12.38±0.39)pmol/(min·mg)和(12.66±0.99)pmol/(min·mg),上述改变依然存在并较前者明显。PKCα表达亦呈现上述相似的改变。所有改变均随着缺血时间的延长而加重,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 缺血损伤与PKC的移位激活密切相关,缺血损伤所致的Ca²⁺超载为其中心环节。