显齿蛇葡萄化学成分的研究

显齿蛇葡萄AmpelopsisgrossedentataW T Wang系葡萄科蛇葡萄属中的一种野生藤本植物 ,为粤蛇葡萄的变种A cantoniesis (H etA )Pl var grossedentataHand Mazz [1] 。主要分布于广东、广西、云南、贵州、湖南、湖北、江西、福建等省区[1] 。其味甘、淡、性凉 ,具清热解毒、祛风湿、强筋骨等功效 ,用于治疗感冒发热、咽喉肿痛、黄疸型肝炎、疱疔等症 ,已有数百年应用历史[2 ] 。前人已从该植物体中分离了二氢杨梅素 (ampelopsin/dihy dromyricetin)、杨梅素 (myricetin )、槲皮素(quercetin)、棕榈酸、龙涎香醇 (ambrein)、β 谷甾醇(β…     

湖南省显齿蛇葡萄资源调查研究

文献、标本研究与野外调查,考察湖南省显齿蛇葡萄Ampelopsis grossedentata (Hand.-Mazz.) W.T.wang 分布、生态与资源量。发现显齿蛇葡萄分布于海拔50~1000 m荒坡、路旁、灌丛,其中海拔400 m 左右山坡路旁、灌丛分布较为集中,湘南丘陵低山资源量最大;民间用其叶在沸水中略烫或搓揉后晒干,泡水做茶饮用或擦洗,用于保健与防治疾病。湖南省显齿蛇葡萄野生资源丰富,民间应用广泛,具有较大开发利用价值。     

檀香萜烯合成酶基因的克隆与序列分析

目的通过克隆技术获得参与檀香挥发油形成的萜烯合成酶基因。方法利用CTAB-LiCl法提取檀香已结香心材总RNA,采用RT-PCR技术克隆萜烯合成酶基因。结果克隆获得了一个檀香萜烯合成酶基因,该基因编码区全长1 731 bp,编码576个氨基酸残基。结论 CTAB-LiCl法能提取较高质量的檀香心材总RNA,克隆获得的萜烯合成酶具有编码区。     

HPLC法测定闽产显齿蛇葡萄中二氢杨梅素的含量

显齿蛇葡萄A mpelopsis grossedentata (Hand-Mazz) W.T.Wang是葡萄科蛇葡萄属的一种野生藤本植物,分布于福建、广西、广东、云南等省,又称藤茶.全株药用,味甘、淡,性凉,具有清热解毒、祛风湿、强筋骨的功效.民间常用显齿蛇葡萄幼嫩茎叶经过类似茶叶加工的方法制成保健茶,用于治疗风热感冒、咽喉肿痛、黄疸型肝炎、急性结膜炎,痈疖等[1].药理研究表明显齿蛇葡萄具有抗氧化、抗菌、保肝、降血脂、降血糖、抗炎、镇痛、抗肿瘤的作用[2].显齿蛇葡萄主要成分为黄酮类成分,其黄酮类成分中二氢杨梅素含量最高,我们通过采集福建省尤溪县不同海拔、不同部位的显齿蛇葡萄测定其二氢杨梅素含量,为闽产显齿蛇葡萄的开发利用提供实验依据.     

RP—HPLC法测定显齿蛇葡萄中杨梅素的含量

目的 测定显齿蛇葡萄中杨梅素的含量。方法 采用RP-HPLC法测定，色谱柱为Nova-PakC18不锈钢柱，检测波长为254nm，用甲醇-水=40：60为流动相。结果 方法的变异系数为2.763%，平均回收率为97.4%，最低检测量为15ng。湖南显齿蛇葡萄植物中不同部位的杨梅素含量为1.57%-2.17%。结论 方法简单、快速、精确，可作为显齿蛇葡萄植物质量检测方法之一。     

罗汉果法呢基焦磷酸合成酶基因的克隆及其序列分析

目的 对罗汉果甜苷V生物合成途径的关键酶法呢基焦磷酸合成酶（Farnesyl pyrophosphate synthase,FPPS）基因的全长cDNA序列进行克隆,为研究罗汉果甜苷V生物合成与基因调控奠定基础。方法 根据植物FPPS基因保守功能域设计简并引物,通过PCR和RACE方法克隆罗汉果FPPS基因的全长cDNA。结果 获得罗汉果FPPS（SgFPPS）基因的全长cDNA序列共1 354个核苷酸,包含一个1 026核苷酸的开放阅读框架（open reading frame, ORF）,cDNA编码的蛋白包含342个氨基酸,推断蛋白质相对分子质量为3.92×10⁴。NCBI Blastx结果显示,SgFPPS基因编码的蛋白与苹果树来源FPPS具有最高同源性,氨基酸一致度达85.1%。SgFPPS具有异戊烯基转移酶的5个典型保守功能域。进化树分析结果显示,SgFPPS基因与苹果树的FPPS具有较近的亲缘关系。结论 首次克隆SgFPPS基因的全长cDNA序列,为分析SgFPPS基因表达特性及其在罗汉果甜苷V生物合成中的功能奠定基础。     

吴茱萸Mn/Fe-SOD基因全长cDNA克隆及序列分析

目的 克隆吴茱萸Mn/Fe-SOD基因的全长cDNA序列。方法 根据已获得的吴茱萸Mn/Fe-SOD基因核心片段序列设计4条特异性引物,采用RACE和巢式PCR方法克隆获得吴茱萸Mn/Fe-SOD基因全长cDNA。结果 吴茱萸Mn/Fe-SOD基因全长cDNA序列共1 048 bp,包含一个687 bp的开放阅读框（open reading frame,ORF）,共编码228个氨基酸。结论 首次从吴茱萸中克隆得到了Mn/Fe-SOD基因的全长cDNA序列,为研究该基因在吴茱萸体内超量表达以提高植物抗逆性研究奠定基础。     

蛇葡萄素药理活性研究进展

蛇葡萄素亦称二氢杨梅素,化学名3,5,7,3’,4’,5’-六羟基-2,3-双氢黄酮醇,主要存在于葡萄科蛇葡萄属的显齿蛇葡萄、粤蛇葡萄、白蔹等藤本植物中,在于北枳椇、朱砂杜鹃等植物中也有发现[1-2]。在我国西南民间,自古就有将显齿蛇葡萄或粤蛇葡萄等的茎叶炮制成类茶饮品的记载,俗称“藤茶”、“无莿根”等,多用于治疗感冒发热、皮肤疮疖及黄疸肝炎等症。近年来,随着国内外对中草药认识的不断提升及生化技术的日益进步,不少学者对蛇葡萄素的药理活性进行了深入而广泛的研究,多集中于抗炎镇痛、抗氧化、保肝护肝、抗肿瘤及降糖减脂等方面的作用。     

当归肌动蛋白基因片段的克隆及序列分析

目的 对当归肌动蛋白（Actin）基因进行克隆及序列分析。方法 根据已经克隆的植物Actin基因的保守序列设计一对简并性引物,以当归根部总RNA为模板,采用RT-PCR方法扩增Actin基因片段并连接到pMD19-T载体上,阳性克隆经PCR检测后进行测序。结果 得到一段598 bp的序列,序列分析表明,该片段编码198个氨基酸,与高等植物Actin基因核苷酸序列同源性在83%以上,与其他肌动蛋白氨基酸序列同源性达94%以上。结论 首次从当归中克隆出了Actin基因,为有效利用该基因奠定了基础。     

大孔吸附树脂分离纯化藤茶总黄酮的研究

目的 研究不同大孔树脂对藤茶总黄酮的吸附及解吸性能,为分离纯化藤茶总黄酮提供选择树脂的依据。方法 以藤茶总黄酮质量浓度、洗脱率及总黄酮回收率为指标,通过考察静态和动态吸附试验,筛选最佳大孔吸附树脂分离纯化藤茶总黄酮的工艺条件。结果 HPD-100大孔树脂对藤茶总黄酮的静态饱和吸附容量为314.50 mg/g干树脂,静态洗脱率为97.81%;最佳动态吸附质量浓度为1.3~2.0 mg/mL、动态饱和吸附量为257.6 mg/g干树脂,吸附速度为1 mL/min;树脂柱吸附30 min后,先以蒸馏水洗脱至洗脱液无色,再用80倍干树脂的70%乙醇以1 mL/min洗脱。结论 HPD-100大孔树脂较适合分离纯化藤茶总黄酮,藤茶总黄酮质量分数从69.09%提高到83.74%,洗脱率高达78.20%,总黄酮回收率达77.23%。     

滇重楼环阿屯醇合酶基因的克隆及序列分析

目的 获取滇重楼甾体皂苷合成途径关键酶环阿屯醇合酶基因（PpCAS）的全长cDNA序列,并进行序列分析。方法 利用同源克隆和RT-PCR技术获得PpCAS基因保守片段,采用RACE技术获得PpCAS基因的3’及5’末端序列,并采用生物信息学方法进行序列分析。结果 PpCAS基因全长cDNA为2 309 bp,其开放阅读框（ORF）为2 283 bp,可编码760个氨基酸的蛋白质;PpCAS推导的蛋白质相对分子质量为8.69×10⁴,等电点（pI）为6.54;其氨基酸序列与GenBank中其他植物CAS的同源性在60%～83% PpCAS蛋白。结论 从滇重楼中首次获得PpCAS基因cDNA全长序列,该基因具有CAS同源基因的典型特征。     

那藤化学成分研究

目的 研究那藤Stauntonia obovatifoliola subsp. urophylla的化学成分。方法 采用溶剂法及多种色谱技术进行化学成分的分离纯化,利用现代波谱技术进行结构鉴定。结果 从那藤茎95%乙醇提取物中分离得到9个化合物,分别鉴定为软木三萜酮（1）、二十烷酸（2）、羽扇豆醇（3）、β-谷甾醇（4）、豆甾醇（5）、齐墩果酸（6）、常春藤皂苷元3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖苷（7）、β-胡萝卜苷（8）、蔗糖（9）。结论 所有化合物均为首次从该植物中分离得到。     

灯盏花栽培技术和原药配伍相关专利信息分析

通过国家知识产权局专利数据库,对我国中药灯盏花的栽培技术及原药配伍方面的专利申请情况进行了检索,并对其有效数据进行了全面分析,包括申请量发展趋势、处理技术分类、申请人IPC分类及法律状态等。     

刺五加亚精胺合成酶基因的克隆及内生真菌对其表达的影响

目的 克隆刺五加亚精胺合成酶（spermidine synthase,SPDS）基因,并分析内生真菌对其表达的影响。方法 采用cDNA末端快速扩增（rapid amplification of cDNA ends,RACE）技术克隆刺五加SPDS基因全长cDNA序列。运用生物信息学方法对该基因进行分析。RT-PCR法检测内生真菌菌株P116-1a、P116-1b、P109-4和P312-1对SPDS基因表达的影响。结果 刺五加SPDS基因的cDNA全长为1 541 bp,开放阅读框长1 002 bp,编码333个氨基酸的蛋白,包含SPDS家族的基本结构和标志性序列。RT-PCR结果显示,内生真菌可显著提高刺五加SPDS基因的表达量（P＜0.05）,最大表达量出现在菌株P116-1b回接90 d时,是对照的2.06倍。结论 首次克隆了刺五加SPDS基因的cDNA全长序列,并证实内生真菌可显著提高刺五加SPDS基因的表达,为阐明内生真菌提高刺五加三萜皂苷量的机制及刺五加的抗逆性改良奠定了基础。     

刺五加GAPDH基因的克隆及序列分析

目的 对刺五加Eleutherococcus senticosus GAPDH基因进行克隆及序列分析,使其成为可用的内参照基因。方法 采用改良的异硫氰酸胍法提取刺五加总RNA,运用RT-PCR法克隆GAPDH基因的部分序列,并以其为内参照基因进行半定量PCR。结果 克隆了长度为627 bp的刺五加GAPDH基因,推测其编码209个氨基酸,与三七、人参、拟南芥的GAPDH氨基酸序列同源性分别为97%、93%、93%,核苷酸同源性分别为94%、86%、84%。其作为内参照基因的半定量PCR具有良好的扩增效果和重现性。结论 首次分离并克隆了刺五加GAPDH cDNA,证实该序列可以作为基因表达分析的内参照基因,为刺五加苷生物合成中关键酶的表达分析及调控机制研究奠定基础。     

毛鸡屎藤全草的化学成分研究

目的 研究毛鸡屎藤Paederia scandens var. tomentosa 全草的化学成分。方法 采用各种色谱技术进行分离纯化,通过理化常数测定和波谱技术分析进行结构鉴定。结果 从毛鸡屎藤全草中分离得到10个化合物,分别鉴定为2, 3-二羟基-1-甲氧基蒽醌（1）、1, 4-二甲氧基-2-羟基蒽醌（2）、1, 3, 4-三甲氧基-2-羟基蒽醌（3）、邻苯二甲酸二异丁酯（4）、反式阿魏酸（5）、邻甲基苯乙醚（6）、水杨酸（7）、β-谷甾醇（8）、熊果酸（9）、齐墩果酸（10）。结论 所有化合物均为首次从毛鸡屎藤植物中分离得到。其中化合物1～7为首次从鸡屎藤属中分离得到。