HPLC法和UV-VIS法测定灵芝孢子粉中灵芝三萜及灵芝多糖的含量

目的建立测定灵芝孢子粉中的两个有效成分灵芝三萜及灵芝多糖含量的方法,为进一步开发和应用灵芝孢子粉提供依据。方法以灵芝酸C2为标准品,通过HPLC法对灵芝孢子粉中灵芝酸C2的含量进行测定。色谱条件为：检测波长254nm;流动相为甲醇：水=55∶45,各加1%冰醋酸;柱温40℃;流速0.7mL/min。以葡萄糖为标准品,采用硫酸-蒽酮比色法,通过UV-VIS法对灵芝孢子粉中灵芝多糖的含量进行测定。结果HPLC法测得三批灵芝孢子粉中灵芝酸C2含量约为0.129‰,0.108‰和0.094‰,灵芝酸C2在7.35～147μg/mL范围内,浓度与峰面积呈良好的线性关系,r=0.9999,回收率为95.9%,95.6%和96.4%。UV-VIS法测得三批灵芝孢子粉中灵芝多糖的含量约为1.152%,1.129%和1.007%,葡萄糖在14.9～119.1μg/mL的范围内,浓度和吸光度呈线性关系,r=0.9991,回收率为95.0%,95.1%和95.2%。结论方法简便、准确,可用于灵芝孢子粉中灵芝三萜和灵芝多糖的含量测定。     

RP-HPLC和UV-VIS法测定灵芝不同收获期的多糖肽和灵芝酸

目的 研究灵芝不同栽培方式和不同收获期中多糖肽和灵芝酸A、B的变化,为灵芝规范化栽培及制定产品质量标准提供依据。方法 RP-HPLC测定菌草灵芝和仿野生栽培的灵芝提取物的灵芝酸A、B的变化。色谱柱为XB-C₁₈柱（150 mm×4.6 mm,5 μm）,流动相为0.05%磷酸-乙腈（65∶35）,检测波长254 nm,常温,进样量50 μL。以灵芝多糖肽为对照品,采用Folin-酚试剂法,通过紫外-可见吸收光谱法检测菌草灵芝和仿野生栽培灵芝不同收获期提取物的多糖肽。结果 灵芝酸A、B线性范围分别为14.8～371.0和16.4～409.0 μg/mL,平均回收率为95.0%、100.5%,RSD分别为1.18%、3.37%（n＝6）。灵芝多糖肽在100～600 μg/mL与吸光度值呈线性关系,r＝0.999 5,回收率95%～100%。结论 该方法简便、快速,可用于灵芝及其产品中多糖肽和灵芝酸A、B的质量控制。菌草灵芝沸水提取能将多糖肽和灵芝酸分离,既简化了灵芝水、醇提取工艺,又提高经济效益。     

灵芝真菌发酵生产灵芝多糖和灵芝酸

提出了灵芝真菌同时高效生产灵芝多糖和灵芝酸的发酵过程。在摇瓶中考察了氮源、接种量、起始葡萄糖浓度和装液量对灵芝细胞生长及灵芝多糖和灵芝酸生产的影响。结果表明 ,酵母膏和蛋白胨复配作为氮源有利于细胞生长。接种量对细胞量有一定影响 ,但是对产物积累量影响更大。在 50 g/ L起始糖浓度下 ,细胞干重达到 1 6.7g/ L,胞内多糖、胞外多糖和灵芝酸分别达 1 .1 9g/ L,0 .854g/ L和 2 1 2 .3mg/ L。考察装液量发现 ,小装液量有利于提高细胞生长速率和产物的生产速率     

高效液相色谱法测定米诺膦酸片中米诺膦酸

摘 要：目的 建立高效液相色谱法测定米诺膦酸片中米诺膦酸。方法 采用安捷伦XDB-C18色谱柱（250 mm×4.6 mm,5 μm）,流动相为0.03 mol/L焦磷酸钠水溶液（含四丁基溴化铵0.322 g/L,以磷酸调节pH 7.5）-甲醇（85∶20）,体积流量1 mL/min,柱温30 ℃,检测波长280 nm,进样量20 μL。结果 米诺膦酸在0.02～0.18 mg/mL时,峰面积与质量浓度呈良好的线性关系（r=0.999 9）。结论 该方法准确、可靠,可作为米诺膦酸片的测定方法。     

HPLC测定不同产地茯苓中猪苓酸C和去氢土莫酸

目的 建立一种测定茯苓中猪苓酸C和去氢土莫酸的方法,并比较不同产地茯苓中猪苓酸C和去氢土莫酸量的差异。方法 应用HPLC法测定猪苓酸C、去氢土莫酸的量,色谱柱为AlltimaC18(250 mm×4.6 mm,5 μm);流动相为乙腈-水-磷酸(70∶2985∶015);体积流量为1 mL/min;检测波长为244 nm;进样量为20 μL;柱温为30 ℃。结果 测得8个产地茯苓中猪苓酸C、去氢土莫酸的量分别为0.188 6～0.575 6、0.113 7～0.216 7 mg/g,其中以浙江产茯苓药材中猪苓酸C、去氢土莫酸量最高,四川次之,其他几个产地的量相对较低;猪苓酸C定量测定的线性范围为0.179 2～2.240 0 μg(r2=0.999 9),平均加样回收率为98.88%,RSD为1.77%;去氢土莫酸测定的线性范围为0.137 2～1.715 0 (r2=1),平均加样回收率为97.76%,RSD为0.62%。结论 所建立的色谱方法可以简便、准确测定茯苓中猪苓酸C、去氢土莫酸的量,重现性好;各产地茯苓中的猪苓酸C、去氢土莫酸的量差别较大,有必要建立猪苓酸C、去氢土莫酸的定量控制方法。     

RP—HPLC法测定不同部位灵芝中灵芝酸B含量

目的：测定灵芝中具有苦味的成分灵芝酸B在灵芝中不同部们的含量,方法：采用RP－HPLC法测定灵芝菌盖的表皮层,木栓层,菌柄,孢子粉,菌盖子实体等部位分中灵芝酸B的含量,结果：灵芝药材中灵芝酸B主要集中在灵芝的表皮部位,其它部位则较少,结论：为寻找灵过的有效成分分布规律提供了客观依据。     

HPLC法测定白花蛇舌草注射液中去乙酰基车叶草苷酸和鸡屎藤次苷

目的:建立白花蛇舌草注射液中去乙酰基车叶草苷酸和鸡屎藤次苷的测定方法。方法: 采用HPLC法测定,色谱柱为Diamonsil C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为甲醇-乙腈-0.1%冰醋酸(3∶2∶95),检测波长230 nm,体积流量1.0 mL/min。结果:去乙酰基车叶草苷酸和鸡屎藤次苷的浓度分别在7.50～90.0 μg/mL(r=0.999 7)和6.00～72.0 μg/mL(r=0.999 9)线性关系良好;平均加样回收率分别为98.1%、99.0%,RSD分别为1.2%、1.1%。结论:本法快速、简便、准确, 可用于同时测定白花蛇舌草注射液中上述两种环烯醚萜类成分。     

HP LC-ELSD法测定灵芝中灵芝酸A的含量

目的 建立测定灵芝药材中灵芝酸A质量分数的HPLC-ELSD法.方法 采用Welch XtimateTM-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈-体积分数0.01%醋酸(体积比37:63),流速为1 mL/min,柱温为30℃,进样量为10μL;蒸发光散射器漂移管温度为105℃,空气流速为2.8 L/min.结果 灵芝酸A的进样量在0.8928~5.3568μg范围内,峰面积的对数值与进样量的对数值具有良好的线性关系;平均加样回收率为95.81%;不同批次的灵芝样品中灵芝酸A的质量分数范围为0.2143~2.8942 mg/g,结果差异较大.结论 本法操作简单、结果准确、重复性好,为灵芝的质量控制提供参考方法.     

HPLC法测定无糖型宁心安神糖浆中五味子醇甲和五味子乙素

目的 建立无糖型宁心安神糖浆中五味子醇甲和五味子乙素的测定方法。方法 采用Kromasil C18色谱柱（250 mm×4.6 mm,5 μm）,流动相：甲醇–水（73∶27）,检测波长：250 nm,柱温：30 ℃,体积流量：1.0 mL/min,进样体积：10 μL。结果 五味子醇甲、五味子乙素分别在0.16～1.6 μg（r=0.999 9）和0.04～0.40 μg（r=0.999 1）呈良好的线性关系,平均加样回收率分别为100.00%、100.04%,RSD分别为0.60%、0.18% （n=6）。结论 该方法简便、准确、重现性好,可作为无糖型宁心安神糖浆质量控制的方法。     

松杉灵芝的化学成分研究(Ⅱ)

目的研究松杉灵芝子实体的化学成分。方法采用硅胶、凝胶色谱法进行分离纯化,波谱法进行结构鉴定。结果从乙醇提取物的醋酸乙酯部分分离得到8个三萜类化合物。结构鉴定为:灵芝醇A(ganoderiol A,Ⅰ)、灵芝酮三醇(ganodermanontriol,Ⅱ)、灵芝三醇(ganodermatriol,Ⅲ)、灵芝酸C(ganodericacid C,Ⅳ)、灵芝酸A(gan-odericacid A,Ⅴ)、赤芝酮A(lucidone A,Ⅵ),赤芝酸C(lucidenicacid C,Ⅶ)、赤芝酸LM1(lucidenic acid LM1,Ⅷ)。结论化合物Ⅰ～Ⅷ均为首次从松杉灵芝中分离得到。     

基于GC-MS和UPLC-QTOF/MS的灵芝不同生长阶段的成分分析

[目的] 探究灵芝(Ganoderma lucidum)不同生长阶段的成分差异。[方法] 使用气相色谱-质谱检测法(gas chromatography-mass spectrometry,GC-MS)和超高效液相串联四极杆飞行时间质谱法(ultra performance liquid chromatography-quadrupole time-of-flight mass spectrometry,UPLC-QTOF/MS)技术,选用ACQUITY 超高效液相色谱仪HSS T3色谱柱在Waters超高效液相色谱(ultra performance liquid chromatography,UPLC)系统上对灵芝原基、产孢前和产孢后的子实体进行成分分析与鉴定。[结果] GC-MS共检测到24种成分,其中醛类8种、酯类4种、烃类1种、酸类1种、醇类1种、酮类2种、胺类2种、吡嗪类1种、咪唑类1种、吡咯类1种、呋喃类1种、酚类1种。UPLC-QTOF/MS共检测90种成分,最主要的成分三萜类共有67种,此外还包括脂肪酸类8种、氨基酸及其衍生物类3种、苷类2种、维生素1种、生物碱类2种、有机酸类2种、糖类2种、萜1种、杂萜1种、甾体1种。共有73种成分在原基中检出,其中三萜类成分54种;72种成分在产孢前子实体中检出,其中三萜类成分57种;52种成分在产孢后子实体中检出,其中三萜类成分有42种。[结论] 灵芝不同生长阶段成分存在明显差异,本研究结果为灵芝不同时期的化学成分的分析与鉴定,以及化学物谱图的完善提供了基础数据,为相关药理、药效分析提供了有效参考。     

灵芝酸A对人骨肉瘤细胞增殖、凋亡和迁移的影响

目的探讨灵芝酸A对骨肉瘤细胞增殖、凋亡和迁移的影响。方法体外培养人骨肉瘤HOS和mg-63细胞与0.1、0.25 和
0.5 mmol/L的灵芝酸A孵育,采用CCK8检测HOS和MG-63细胞的增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Transwell检测细胞的迁移
和侵袭。Western blot 检测细胞中p-STAT3、STAT3、p-p38、p38和NF-ΚB1蛋白的表达变化。结果灵芝酸A能够显著抑制人类
骨肉瘤HOS和MG-63细胞的增殖,促进细胞凋亡以及抑制细胞迁移,并且这种效应存在剂量依赖性。与0.5 mmol/L 灵芝酸A
孵育能够显著降低HOS和MG-63细胞中STAT3的磷酸化水平,增加p38磷酸化水平,同时增加NF-κB1的表达水平。结论灵
芝酸A能够杀死人类骨肉瘤HOS和MG-63细胞,可以作为抗骨肉瘤的药物进行开发。
     

灵芝酸A对癫痫样放电海马神经元的影响

目的：旨在验证灵芝酸A对海马神经元异常放电的影响。方法分离24h新生Wistar大鼠原代海马神经元。正常对照组：将培养9d的海马神经元全液换成正常细胞外液处理3h,然后恢复正常培养24h;无Mg2＋诱导组、灵芝酸A组、紫杉醇组、γ－氨基丁酸组、丙戊酸钠组分别将培养9d的海马神经元全液换成无镁细胞外液或添加相应的50μg／mL的灵芝酸A、50μmol／L的紫杉醇、100μmol／L的γ－氨基丁酸、100mg／L的丙戊酸钠混悬液处理3h,然后恢复正常培养,MTT法检测细胞存活率;分光光度计检测超氧化物歧化酶活性;流式细胞仪检测细胞线粒体膜电位的变化。结果50μg／mL灵芝酸A可提高海马神经元细胞存活率;能升高癫痫样海马神经元细胞SOD活性、升高线粒体膜电位。结论灵芝酸A可通过抑制细胞氧化损伤、抑制凋亡而保护异常放电的海马神经元。     

灵芝对鼠的外周血象和耗氧量的影响

选取大鼠22只,随机均分两组。实验组大鼠每日按2克/100克体重连续灌给灵芝浸膏72天,对照组灌给等量的蒸溜水。于给药第45天后测定两组的红细胞总数和血红蛋白等指标,实验组不仅显著地增加了红细胞和血红蛋白,而且于72天后其血氧含量亦有增加的趋势。取小鼠54只,采取自身对照的方法,按0.3克/100克体重由腹腔注入灵芝的总提取物后,结果能明显地降低其整体的耗氧量。上述实验结果表明,灵芝能增加红细胞和血红蛋白并能降低整体的耗氧量。     

灵芝酸A对人胶质瘤细胞U251细胞增殖、凋亡和侵袭的影响

目的探讨灵芝酸A对人胶质瘤细胞U251细胞凋亡、侵袭及KDR表达的影响。方法制备灵芝酸A,以人胶质瘤细胞细胞U251细胞为研究对象,根据细胞培养液所含灵芝酸A的不同浓度,将实验分为空白对照组(等量细PBS)、灵芝酸A低浓度组(0.1 mmol/L)和高浓度组(0.5 mmol/L)。用RT-PCR和Western blot法分别从mRNA水平和蛋白水平检测KDR基因的表达,CCK-8法测定细胞体外增殖能力,流式细胞技术(flowcytometry,FCM)检测各组细胞周期和凋亡情况,TUNEL染色检测各组细胞的的凋亡,细胞侵袭小室法检测各组细胞的体外侵袭力。结果 RT-PCR和Western blot显示,灵芝酸A高浓度组和低浓度组较空白对照组的KDR mRNA和蛋白表达都明显下降;灵芝酸A高浓度组和低浓度组细胞的生长速度明显减慢,降低G1期细胞比例,S期和G2/M期比例增高;与空白对照组相比,高浓度组和低浓度组细胞的凋亡率明显升高(P0.01),增殖、侵袭能力显著下降(P0.05);高浓度组和低浓度组细胞相比促进凋亡和抑制KDR表达的作用更明显(P0.05)。结论灵芝酸A可诱导人胶质瘤细胞U251细胞凋亡,抑制其增殖和侵袭能力,并能抑制Kdr DR mRNA和蛋白的表达,提示这可能是其抗肿瘤的作用机制之一。     

硬孔灵芝三萜酸提取工艺研究

目的 确定硬孔灵芝三萜酸乙醇回流提取法的最佳工艺. 方法 通过L9(34)正交试验,优选乙醇回流提取硬孔灵芝三萜酸的最佳工艺. 结果 影响95％乙醇回流提取硬孔灵芝三萜酸的因素是:温度＞提取时间＞提取次数＞料液比,最优水平组合为:提取温度60C、提取3次、料液比1:25、提取时间2h.在此条件下,硬孔灵芝三萜...