耐甲氧西林葡萄球菌HVR基因分型及其与耐药性的关系

目的 为获得成都地区耐甲氧西林葡萄球菌的HVR－PCR基因型,比较HVR基因型与耐药谱的关系,从而指导临床合理选用抗生素,并初步探讨其在分子流行病学分析中的作用。方法 从成都地区四家三甲医院收集到临床分离的葡萄球菌114株。其中86株MRSA、10株MRSE（Mc‘S.epidemidis)、5株MSSE（Mc‘S.epidemidis)、8株MRSH（Mc‘S.haemolyticus)和5株MSSH（Mc‘S.haemolyticus)。用琼脂平皿二倍稀释法测定其MIC值,优良的碱裂解法提取DNA,应用PCR技术,扩增mec基因高变区（HVR区）,聚丙烯酰胺凝胶垂直板和琼脂糖凝胶电泳分型。结果 根据PCR产物片段大小,MRSA、MRSE和MRSH分别被分为4种、3种和2种基因型,其中有9株MRSE的PCR扩增产物片段大小与MRSA相同。MRSA主要为A、D型,分别占52．32％和39．53％;B、C型最为耐药,而D型对多种药物敏感。MRSE的Ⅰ型为高度多重耐药株,而Ⅲ型对多种抗生素敏感。MRSH的a型比b型耐药。结论 HVR－PCR法对于由MRSA引起的院内感染的流行病学调查是一种快速、简单、可靠的分型法,且有利于抗菌药物的选用。这种方法能够部分比较MRSA菌株和耐甲氧西林的凝固酶阴性葡萄球菌（Mc‘CNSt)的mec决定因子,从而探讨其起源。     

皮肤软组织感染耐甲氧西林金黄色葡萄球菌SCC mec分型和同源性分析

目的 对从皮肤软组织感染(SSTI)患者中分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)进行葡萄球菌染色体mec盒(SCC mec)分型和同源性分析,并了解其耐药情况,为规范合理使用抗生素和医院感染控制提供实验室依据.方法 收集从SSTI患者中分离的44株MRSA,采用药敏纸片扩散(K-B)法和Vitek 2 Compact仪器法进行抗菌药物敏感性试验,采用普通PCR检测mec A基因,多重PCR进行SCC mec基因分型,基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术进行同源性分析.结果 44株MR-SA通过普通PCR检测均含有mec A基因,多重PCR共分出Ⅱ、Ⅲ、Ⅳa3种SCC mec基因型别,Ⅱ型5株(11.36％),Ⅲ型12株(27.27％),Ⅳa型8株(18.18％),未分型19株(43.18％).MALDI-TOF MS将44株MRSA分为两大簇.结论 SSTI患者分离的MRSA以SCCmec Ⅲ型为主,通过SCCmec基因分型和MALDI-TOF MS技术结合,为不同菌株间的同源性分析提供依据,并了解特定地区MRSA的分子生物学和流行病学特征.     

临床分离耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的耐药基因分型及药敏性分析

目的 分析临床分离耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的耐药基因分型及药敏性。方法 选择2018年3月至2020年7月南京市高淳人民医院住院及门诊患者各类临床标本中分离的254株金黄色葡萄球菌（SA）。采用普通聚合酶链式反应（PCR）检测mec A基因,采用多重PCR技术对MRSA分离株进行葡萄球菌染色体mec基因盒（SCCmec）基因分型,采用纸片扩散法（K-B）法对SCCmecⅡ型与SCCmecⅢ型进行药敏试验。结果 头孢西丁K-B结果显示,254株SA中共检出156株初筛MRSA阳性株,MRSA初筛阳性率为61.42%。mec A基因PCR扩增结果显示,254株中共检出150株MRSA确认阳性株,检出率为59.06%。多重PCR结果显示,150株MRSA中SCCmecⅡ型39株,SCCmecⅢ型86株,SCCmecⅣa、SCCmecⅣb型各2株,未分型21株。SCCmecⅡ型与SCCmecⅢ型对苯唑西林、氨苄西林/舒巴坦、头孢西丁、美罗培南、青霉素G、头孢唑林的耐药性均为100.00%,SCCmecⅢ型对环丙沙星、红霉素、克林霉素、氯霉素、庆大霉素、四环素、利福平的耐药性均高于S...     

成都地区耐甲氧西林金黄色葡萄球菌SCCmec基因分型的研究

目的研究成都地区2013至2014年耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的SCCmec基因分型,了解本地区现阶段主要流行株的分子流行病学特征及耐药现状。方法采用PCR方法对86株MRSA菌株的SCCmec进行基因分型;采用微量肉汤稀释法对86株MRSA进行药敏试验。结果 86株MRSA的基因分型为:SCCmecⅠ型3株,SCCmecⅡ型5株,SCCmecⅢ型63株,SCCmecⅣ型3株,SCCmec V型1株,未分型11株。SCCmecⅡ、Ⅲ型MRSA菌株对大多数抗菌药物均呈不同程度耐药。结论目前成都地区MRSA菌株的SCCmec基因型呈多态性分布,其中Ⅲ型仍为主要流行菌株;Ⅲ型MRSA菌株的耐药表型随时间的迁移而发生改变。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌及表皮葡萄球菌的监测与药敏分析

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 (MRSA)及表皮葡萄球菌(MRSE)为临床上常见致病菌 ,可引起伤口感染、尿路感染、肺部感染、心内膜炎、败血症及侵袭性操作后感染 ,由于它们对多种抗生素形成较高的耐药性 ,临床治疗较为困难 ,必须注重监测与药敏分析。1　材料与方法1.1　标本来源　从临床标本中共检出金黄色葡萄球菌 10 8株 ,其中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 (MRSA) 31株 ,占2 8.7% ,共检出表皮葡萄球菌 6 2株 ,其中耐甲氧西林表皮葡萄球菌 (MRSE) 2 5株 ,占 40 .3%。1.2　 MRSA与 MRSE检测及药敏试验　 MRSA与 MRSE检测及药敏试验均采用…     

医院获得性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的分子流行病学研究

目的 对本院2003年连续收集的122株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）进行染色体盒mec元件(SCCmec)分型。方法 用K-B法药敏试验常规进行抗生素敏感试验;按NCCLS标准,用琼脂板稀释法测定MRSA对苯唑西林的MIC值;用多重PCR方法对MRSA染色体盒mec元件的结构及其变异情况进行分型分析,对MRSA进行分子分型。结果 122株MRSA对青霉素及环丙沙星均耐药,苯唑青霉素的MIC为64-1024mg/L,对红霉素、四环素、甲氧苄啶/磺胺甲恶唑、克林霉素的耐药率分别为92%、95%、45%及47%,对万古霉素全部敏感;122株MRSA中有115株属于SCCmec-III型,4株属于SCCmec-IIIA亚型,1株属于SCCmec-IV型,1株属于SCCmec-I型,1株属于未定型株（NT SCCmec型）。结论 多数MRSA菌株对所用抗生素呈多药耐药;用多重PCR方法对MRSA进行分子分型,是基于对MRSA耐药基因mecA的结构进行分析的一种分型方法,方便快速,结果可靠,是MRSA分子分型的有效工具,对从基因水平阐述隐含的耐药机制及MRSA的耐药性变迁具有重要价值     

甲氧西林耐药溶血葡萄球菌的耐药基因检测及同源性分析

目的 了解本地区甲氧西林耐药溶血葡萄球菌(MRSH)携带耐药基因情况及其流行状况,提供临床治疗及感染控制的依据.方法 耐药基因的检测采用PCR,菌株同源性分型采用随机扩增DNA 多态性(RAPD)技术.结果 65 株MRSH 的mecA、Aac(6')/aph(2')、aph(3')-Ⅲ、ermB、ermC 和tetM 耐药基因的阳性率分别为100.0%、93.8%、76.9%、7.7%、96.9%和4.6%,未检测出ermA、tetO 和vanA 耐药基因.依照RAPD 检测方法将65 株MRSH 分为3型,其中A 型占83.1%.结论 本地区的MRSH 携带高比例的mecA、Aac(6')/aph(2')、aph(3')- Ⅲ和ermC 耐药基因,RAPD分析MRSH 的流行株以A 型为主.     

医院内常见革阳性球菌分布及耐药性研究

目的总结分析2000年1月～2003年12月各类临床送检标本中分离到的革兰阳性球菌的分布及对常用抗生素的耐药情况,指导临床合理应用抗生素.方法根据<全国临床检验操作规程>,应用Vitek-32全自动微生物分析仪对细菌进行鉴定和药敏实验,并监测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)、凝固醇阴性耐甲氧西林葡萄球菌(MRSCON)、耐青霉素肺类链球菌(PRP)、对高浓度氨基糖苷类耐药肠球菌(HLAR)和对万古霉素耐药肠球菌(VRE)的发生率.结果共分离到革兰阳性球菌2441株,葡萄球菌属1419株(58.1%),链球菌属719株(29.5%),肠球菌属303株(12.4%).葡萄球菌属对常用抗生素耐药严重,尤其对β-内酰胺类抗生素,耐药率达80%～100%;耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)分离率为56.7%,MRSE和耐甲氧西林溶血葡萄球菌(MRSH)分离率为84.2%和94.7%;未分离到耐万古霉素葡萄球菌.肺炎链球菌对青霉素耐药率(PRP)为23.2%,对红霉素耐药率为48.9%.屎肠球菌对青霉素和氨苄青霉素耐药率明显高于粪肠球菌;粪肠球菌和屎肠球菌对高浓度庆大霉素耐药率分别为57.9%;和66.7%,对高浓度链霉素耐药率分别为52.6%和33.3%;VRE分离率为5.6%.结论细菌耐药性仍是目前临床上抗感染治疗较为严重的问题,因此需加强革兰阳性球菌耐药性监测,严格控制和合理使用抗生素,避免医院感染爆发流行.     

老年病房耐甲氧西林金黄色葡萄球菌葡萄球菌染色体mec基因盒基因型和杀白细胞素基因的检测及特点

目的 了解复旦大学附属华东医院老年科临床分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)葡萄染色体mec基因盒(SCCmec)的分布和杀白细胞毒素(PVL)基因的携带状况.方法 收集复旦大学附属华东医院老年科病房2011年2-7月从临床标本中分离的不重复MRSA共57株.运用多重聚合酶链反应检测金黄色葡萄球菌16S rRNA基因、PVL基因和mecA基因,并同时检测SCCmec的基因型及亚型.采用琼脂稀释法进行13种药物的药物敏感试验.结果 57株MRSA中,SCCmec Ⅰ型1株(1.8％),SCCmec Ⅰ A型5株(8.7％),SCCmecⅡ型30株(52.6％),SCCmecⅢ型15株(26.3％),SCCmecⅢA型2株(3.5％),4株(7.0％)未能分型.57株MRSA中,PVL基因均为阴性.MRSA菌株最敏感的药物为万古霉素和利奈唑胺(敏感率均为100.0％),其次为呋喃妥因和甲氧苄啶-磺胺甲(哑)唑(98.2％、96.5％).结论 复旦大学附属华东医院老年科临床分离的MRSA呈多重耐药,其SCCmec型别主要以SCCmecⅡ型和SCCmecⅢ型为主,未发现PVL基因阳性菌株.     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌SCCmec分型研究

目的检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌SCCmec基因分型,初步了解MRSA分子流行病学特征,从而进一步指导临床感染MRSA的治疗,更好地控制MRSA引起的感染,并减少耐药株的出现。方法以MRSA菌株65株为研究对象,使用多重PCR扩增技术检测SCCmec基因分型,PCR产物进行琼脂糖电泳凝胶检测,阳性株进行基因测序,与目的基因进行比对。结果65株MRSA的SCCmec基因分型均为Ⅲ型。结论我院耐甲氧西林金黄色葡萄球茵SCCmec基因分型,均为SCCmec-Ⅲ型,尚未发现CA-MRSA菌株。     

重症监护室革兰阳性球菌分布及耐药性分析

目的 了解重症监护室(ICU)革兰阳性(G+)球菌临床感染情况和耐药现状,以指导临床用药.方法 回顾性分析2011年1月～2011年12月深圳市人民医院重症监护室分离的94株G+球菌的感染情况及耐药性.结果 94株中葡萄球菌属54株,分离株数最高为溶血葡萄球菌(21.28％),其次为金黄色葡萄球菌(13.83％);肠球茵属39株,分离株数最高为屎肠球菌(26.59％),其次为粪肠球菌(11.70％).标本来源以引流液标本分离率最高,其次为血标本,分离率分别为15.12％、3.45％;其中溶血葡萄球菌主要来源于血(40％),金黄色葡萄球菌主要来源于痰(83.33％),屎肠球菌(60％)主要来源于腹腔引流液.葡萄球菌和肠球菌属耐药现象严重,其中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)、耐甲氧西林表皮葡萄球菌(MRSE)、耐甲氧西林溶血葡萄球菌(MRSH)分离率分别为53.85％、83.33％、100％,发现耐替考拉宁MR.SH1株,未发现耐万古霉素及耐利奈唑胺葡萄球菌;肠球菌属中,发现耐利奈唑胺粪肠球菌一株,耐万古霉素海氏肠球菌一株,余肠球菌未发现耐万古霉素及利奈唑胺的菌株.结论 ICU分离的革兰阳性球菌以耐甲氧西林葡萄球菌为主,其次为肠球菌,标本来源以引流液标本分离率最高,存在多重耐药现象,对替考拉宁、万古霉素和利奈唑胺的敏感率最高,可作为治疗的选择,但临床已发现耐药菌株,应加强监测.     

无菌部位金黄色葡萄球菌耐药性及分子流行病学特征

目的:了解无菌部位分离的金黄色葡萄球菌对常用抗菌药物的耐药性及分子流行病学特征,为临床预防和控制其感染以及合理使用抗菌药物提供实验依据。方法:收集2011年8月至2012年6月某三甲医院无菌部位分离的非重复金黄色葡萄球菌50株。VITEK-2微生物分析系统进行菌株鉴定,PCR检测耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌(MRSA)杀白细胞毒素(PVL)基因,多重PCR对MRSA进行SCCmec基因分型。结果:在18种抗菌药物中,青霉素和红霉素的耐药率最高,分别为90.0%和62.0%;尚无对万古霉素、替加环素、替考拉宁、利奈唑胺、达托霉素的耐药菌株。50株金葡菌中,MRSA 15株(30.0%),MSSA35株(70.0%),MRSA对12种抗菌药物的敏感率明显低于MSSA。15株MRSA中,SCCmecⅢ型11株(73.3%),SCCmecⅣ型4株(26.7%),PVL基因扩增均为阴性。结论:该院无菌部位分离的金黄色葡萄球菌以MSSA为主;MRSA对抗菌药物呈多重耐药性,且以SCCmecⅢ型为主。     

Rapid detection of MDR–Mycobacterium tuberculosis using modified PCR-SSCP from clinical Specimens

ObjectiveTo design a rapid test to detect the rifampin (RIF) and isoniazid (INH) resistant mutant based on polymerase chain reaction-single strand conformation polymorphism (PCR-SSCP) technique that analyzes the katG, rpoB genes.MethodsBiochemical test as well as IS6110 targeting PCR revealed 103 clinical samples were tuberculosis. To determine the susceptibility of isolates to anti TB drugs, the proportional method was used. Mutations presented within the amplified products of the katG, rpoB genes were evaluated by SSCP.ResultsUsing proportional method, 12 (11.6%) and 9 (8.7%) isolates were resistant respectively to INH and RIF and 9 (8.7%) isolates showed resistance to both drug (multi-drug resistant tuberculosis). Three (2.9%) multi-drug resistant tuberculosis and two INH resistant isolates were detected by the PCR-SSCP and sequencing. The sensitivity and specificity of PCR-SSCP for multi-drug resistant isolates were 33% and 100%, respectively.ConclusionsComplete agreement between SSCP and sequencing can indicate that resistance-associated mutations have occurred in other genes except our considered genes.     

鲍曼不动杆菌OXA-23 型碳青霉烯酶相关耐药基因分析

目的:分析鲍曼不动杆菌的耐药性及其产碳青霉烯酶的类型.方法:收集南京医科大学第一附属医院对碳青霉烯类药物中介或耐药的鲍曼不动杆菌22株及敏感菌3株,用琼脂纸片扩散法(KB法)及肉汤稀释法测定最低抑菌浓度(MIC),用聚合酶链反应(PCR)检测分析其耐药基因.结果:22株细菌均为多重耐药株,PCR检出22株耐药菌株中18株携带OXA-23基因,未能检出OXA-24摹因.3株敏感株均未检出OXA-23及OXA-24基因,PCR产物纯化后测序表明与鲍曼不动杆菌(AY795964.1)blaOXA-23基因序列100%同源.结论:携带OXA-23型碳青霉烯酶基因的鲍曼不动杆菌对临床常用抗菌药的耐药率高,其编码基因为blaOXA-23.     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的多重聚合酶链反应检测方法

目的 建立多重聚合酶链反应9multiplex poly-merase chain reaction,mt-PCR)快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）。方法 对临床分离的63株金黄色葡萄球菌，采用mt-PCR快速检测MRSA的决定基因mec和辅助基因femA,用16SrRNA基因作内参照。结果 mt-PCR的预期扩增结果为耐药株出现3条扩增区带，敏感株只有femA基因和16SrRNA基因出现2条扩增区带。在63株金黄色葡萄球菌中，药敏法34.9%（22/63）耐药；mt-PCR增增mecA基因34.5%(23/63)阳性，femA基因和16SrRNA基因100%阳性；单引物PCR与mt-PCR两者阳性扩增符合率为100%。结论 采用多重聚合酶链反应，可在同一扩增体系内同时检出mecA基因，femA基因，对MRSA临床株的快速，及时检出，有效控制MRSA造成的感染，限制其传播等具有重要的现实意义。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌抗生素耐药和耐药基因的检测

目的探讨北京地区社区感染和院内感染中金黄色葡萄球耐药情况变化。方法用琼脂稀释法检测了471株从北京地区收集的金黄色葡萄球菌对11种抗生素的敏感水平(其中422株菌株从1993年至2000年门诊脓疱疮患儿分离获得,49株从2000年烧伤病房住院患者分离获得)。用聚合酶链反应方法对上述菌株进行了mecA耐药基因的检测。结果引起社区感染的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的比率由1993年的12.2%上升至2000年的29.8%,对甲氧西林均表现为低度耐药。引起院内感染的金黄色葡萄球菌对甲氧西林的耐药率为63.3%,表现为高度耐药。所有的金黄色葡萄球菌对青霉素100%耐药,对红霉素、四环素、克林霉素和氯霉素的耐药率分别约80%、70%、60%和50%。引起社区感染的金黄色葡萄球菌中未发现庆大霉素和利福平耐药菌株,对环丙沙星的耐药率由1993年的2.4%上升至2000年的21.3%;引起院内感染的金黄色葡萄球菌中对庆大霉素、环丙沙星和利福平的耐药率分别为63.3%、63.3%和57.1%。所有的金黄色葡萄球菌均对夫西地酸和万古霉素敏感。2000年分离的多重耐药菌株比例较1993年有所增加。PCR对mecA耐药基因的测定结果显示,所有对甲氧西林高度耐药的金黄色葡萄球菌mecA耐药基因均呈阳性;对甲氧西林低度耐药的金黄色葡萄球菌mecA耐药基因均呈阴性。结论在本实验所及范围内,北京地区金黄色葡萄球菌的耐药率逐渐上升,mecA耐药基因测定是筛选耐药MRSA菌株的快速、简易手段。     

整合子在鲍曼不动杆菌多重耐药机制分析

目的:调查我院鲍曼不动杆菌耐药性;了解整合子类型以及整合子携带耐药基因盒特征。方法:收集我院临床分离鲍曼不动杆菌。细菌鉴定及药敏由MicroScan Walk Away 40仪器完成,整合子分类检测及开放阅读框扩增由PCR法完成。开放阅读框扩增产物经琼脂糖凝胶电泳及凝胶回收试剂盒回收纯化后进行DNA测序分析,测序结果在Genebank上作比对。结果:62株鲍曼不动杆菌有11株呈多重耐药,阳性率17.7%,11株鲍曼不动杆菌对氨基糖苷类药物阿米卡星,妥布霉素,庆大霉素均耐药,其余菌株较敏感。11株鲍曼不动杆菌中均检出整合子;进一步分类鉴定显示均为Ⅰ类整合子,未检出Ⅱ类和Ⅲ类整合子。开放阅读框可变区扩增产物为(0.3～2.5)KB不等条带,测序结果证实11株Ⅰ类整合子含有6个不同耐药基因盒:blam-1,orfX,aacA4,catB3,dfrA1,aadA1。其中7株均出现catB3,aacA4和dfrA1组合。结论:与其他报道相比较,我院鲍曼不动杆菌多重耐药率相对较低,但耐药鲍曼不动杆菌携带整合子率较高,且均为Ⅰ类整合子;其整合子基因盒含有多种耐药基因编码,其中aacA4,catB3和dfrA1耐药基因组合在本地区占优势。     

长春地区部分医院革兰阴性杆菌超广谱β-内酰胺酶的基因类型及分布

目的:了解长春地区部分医院超广谱β-内酰胺酶 (ESBLs)基因在革兰阴性杆菌中的分布及类型,为合理使用抗生素提供依据。方法：对165株临床分离革兰阴性杆菌采用 PCR方法分别扩增SHV、TEM和CTX基因片段。PCR产物经测序后,登录GenBank查询并比较基因类型。结果：在165株革兰阴性杆菌中检出耐药基因及多重耐药基因68株, 其中 TEM型检出率最高（12.12%）,其余依次为CTX-M-1型（4.24%）,SHV型（3.64%）和CTX-M-9型（3.03%）;同时检出 SHV+TEM型、TEM+CTX-M-1型、TEM+CTX-M-9型、TEM+CTX-M-1+CTX-M-9型和 SHV+TEM+CTX -M-1+CTX-M-9型等多组多重耐药基因。随机选择扩增阳性的 PCR产物进行测序,得到 SHV-11亚型、TEM-1亚型、CTX-M-3亚型、CTX-M-15亚型、CTX-M-14和CTX-M-18亚型。结论:长春地区部分医院革兰阴性杆菌ESBLs的基因类型主要为TEM-1亚型、SHV-11亚型、CTX-M-14亚型和CTX-M-18亚型。     

转座子tnpU基因在多重耐药革兰阴性杆菌中的分布情况

目的 研究转座子tnpU基因和β-内酰胺酶在多重耐药革兰阴性杆菌中的分布情况.方法 用纸片扩散初筛试验、扩散确证试验进行超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)表型检查,头孢西丁三维试验进行AmpC β-内酰胺酶的表型检查,纸片协同试验筛选产金属β-内酰胺酶(MBL)菌株;用多重聚合酶链反应(PCR)技术扩增转座子tnpU基因,并进行DNA测序;用MIC药敏法分析多重耐药革兰阴性杆菌的药物敏感性.结果 转座子tnpU的总检出率为25.5％,在各菌种的检出率分别为大肠埃希菌占6.3％(3株)、肺炎克雷伯菌占8.3％(1株)、鲍曼不动杆菌占33.3％(20株)、铜绿假单胞菌占43.2％(16株);β-内酰胺酶表型检测中,ESBLs的检出率最高,转座子tnpU基因阳性的菌株大多数β-内酰胺酶表型为阳性;转座子tnpU基因阳性菌株对抗生素的耐药率显著高于转座子阴性菌株(P＜0.05).结论 转座子tnpU基因在非发酵菌中的分布较广泛,可能在多重耐药机制中起重要作用.