骨髓增生异常综合征CD34~ 细胞增殖与分化特性

利用吸附单克隆抗体的MACS分离系统分离纯化了16例MDS患者骨髓CD34~ 细胞,研究了其体外增殖与分化特性。结果表明:MDS CD34~ 细胞中CFU-GM,BFU-E和CFU-E均低于正常对照组,以BFU-E为显著,尤其是在MDS高转组。在MDS高转组中部分患者还可有白血病细胞集落的形成,说明MDS患者CD34~ 细胞在增殖与分化过程中存在明显异常,对其体外集落的培养在一定程度上可预测该MDS患者的预后。     

单个CD34^＋CD38^＋和CD34^＋CD38^—l细胞的增殖与分化性能

为深入探讨ＣＤ３４＾＋细胞亚群的不均一性及单个细胞的增殖分化特性，利用ＦＡＣＳ Ｖａｎｔａｇｅ自动细胞分选系统（ＡＣＤＵ）分选出单个ＣＤ３４＾＋亚群细胞：ＣＤ３４＾＋ＣＤ３８＾＋和ＣＤ３４＾＋ＣＤ３８＾－，在９６孔板无血清培养体系中，经ＳＣＦ、ＩＬ－３、ＩＬ－６、ＧＭ－ＣＳＦ、Ｇ－ＣＳＦ和Ｅｐｏ刺激，１４－１８天后扩增形成原代集藩。单个ＣＤ３４＾＋ＣＤ３８＾＋细胞形成原代集落的比例为３８．０％±９     

人参总皂甙协同造血生长因子体外诱导CD34+造血干/祖细胞扩增与分化的作用

为探讨人参总皂甙(total saponins of panax ginseng,TSPG)协同造血生长因子体外诱导CD34+造血干/祖细胞(HSC/HPC)扩增与分化的作用,收集人脐血、骨髓细胞并采用StemsepTM干细胞分选系统分离纯化CD34+HSC/HPC,用不同剂量TSPG加入不同组合的造血生长因子进行培养,检测细胞总数、CD34+细胞和CD33+细胞比例及集落形成细胞总数(CFC)、粒系祖细胞(CFU-GM)数量变化.结果显示10-70μg/ml TSPG均可不同程度地提高脐血细胞总数、CFC数和CD34+细胞数,50μg/ml是最佳刺激浓度,可使细胞总数、CFC数和CD34+细胞数分别增至(2470.5±79.96)×103、(53.96±4.29)×100%和(21.86±3.09)×100%;20μg/ml是液体培养诱导骨髓CD34+细胞向粒系分化的最佳浓度,可使细胞总数、CFU-GM和CD33+细胞分别增至(133.2±9.03)×103、(26.78±1.91)×100%和(16.98±1.73)×100%;甲基纤维素半固体培养检测显示,TSPG(10-50μg/ml)均能提高CD34+细胞形成CFU-GM的集落产率,以TSPG 20μg/ml效果最为明显.结论合适剂量的TSPG能够促进CD34+造血干/祖细胞体外扩增与定向诱导分化.     

人骨髓间充质干细胞体外支持脐血CD34+细胞增殖的研究

为了研究人骨髓间充质干细胞(MSC)作为滋养层细胞体外支持脐血CD34+细胞扩增的作用,将MSC和胎儿骨髓来源的成纤维细胞样骨髓基质细胞系(HFCL)经60Coγ线照射后分别制备细胞滋养层,比较不同滋养层细胞和添加或不加细胞因子对脐血CD34+细胞增殖数及LTC-IC数的影响.结果表明,无论有无添加细胞因子(rhFL、rhSCF、rhTPO),HFCL滋养层组培养12天扩增细胞数明显高于MSC滋养层组,以第0天细胞数为100%(下同),有细胞因子组为(9797±361)%vs(7061±418)%,无细胞因子组为(5305±354)%vs(1992±247)%,均P＜0.01.MSC滋养层组CD34+细胞扩增数与HFCL滋养层组相比无显著差异[(825±305)%vs(820±191)%,P＞0.05],但在细胞因子存在时低于HFCL滋养层组[(939±212)%vs(1617±222)%,P＜0.01].MSC滋养层组维持脐血中LTC-IC的能力明显优于HFCL滋养层组[第5周CFU-GM数(129.95±8.73)个/105接种细胞数vs(89.81±10.29)个/105接种细胞数,P＜0.05];细胞因子存在时,其作用更为明显[第5周CFU-GM数(192.93±4.95)个/105接种细胞数vs(90.47±14.28)个/105接种细胞数,P＜0.01].MSC与HFCL按一定比例混合,可提高扩增效率.当MSC与HFCL之比为41时,集落形成数量最高,达(186.89±11.11)个/105接种细胞数,明显高于比例为32(131.45±13.02)个/105接种细胞数和二者单用组[前者(138.92±14.84)个/105接种细胞数,后者(64.63±6.11)个/105接种细胞数;均P＜0.01].结论MSC维持脐血中LTC-IC集落形成的能力优于基质细胞系HFCL,HFCL支持脐血CD34+细胞的增殖能力优于MSC,MSC加上适量HFCL可显著提高CD34+细胞扩增效率.     

三七皂苷对人骨髓CD34+造血干/祖细胞的增殖分化作用

为了探讨三七皂苷 (PNS)对人骨髓CD34+ 造血干 /祖细胞的刺激增殖和诱导分化的作用 ,用DynalM 4 5 0CD34+ 免疫磁珠阳性选择法获取高纯度的人骨髓CD34+ 细胞 ,采用多向祖细胞 (CFU Mix)体外集落培养和流式细胞术检测细胞增殖与分化。结果显示 :经免疫磁珠阳性选择 ,从骨髓细胞收获的CD34+ 细胞获得率为 (1.0 3±0 .74 ) % ,流式细胞术分析纯度达到 86 % - 93%。PNS 10mg/L和 2 5mg/L能刺激CD34+ 细胞增殖 ,使CFU Mix集落生成增加 ,2 5mg/L的PNS对CFU Mix产率提高 (34.7± 16 .0 ) % (P <0 .0 1) ,是促进造血的最适浓度 ;PNS2 5 ,5 0和 10 0mg/L时 ,能诱导CD34+ 细胞向粒系细胞分化 ,粒系表面标记CD33+ 和CD15 + 的细胞百分比均明显高于无PNS的对照组 ,而红系细胞表面标记CD71+ 和G A+ 细胞百分比则无明显变化。结论 :PNS对CD34+ 造血干 /祖细胞不但具有显著的刺激增殖作用 ,而且能够诱导其向粒系细胞定向分化的效应     

骨髓增生异常综合征患者骨髓CD34-和CD34+细胞凋亡与增殖的意义及对生存的影响

本研究分析骨髓增生异常综合征（MDS）患者骨髓CD34^＋和CD34-细胞凋亡和增殖情况,探讨MDS的发病机制,并判断其与疾病预后的关系。流式细胞术分析20例高危MDS、20例低危MDS患者及10例正常对照者骨髓CD34^＋细胞的比例、CD34^＋细胞和CD34-细胞凋亡、增殖的百分率,计算各组中的凋亡／增殖（A／P）比。并用单变量和多变量生存分析法分析CD34^＋细胞和CD34-细胞增殖和凋亡对预后的影响。结果表明：①MDS高危组患者骨髓CD34^＋细胞的比例明显高于低危组（P〈0．05）,而低危组与对照组比较无显著差异;②CD34^＋,CD34-细胞的凋亡率在MDS低危组中均为最高,明显高于MDS高危组和对照组。在低危组中,CD34-细胞的凋亡率为（80．36±1．82）％,明显高于CD34^＋细胞的（54．75±2．18）％（P〈0．05）,而在高危组中,CD34^＋,CD34-细胞的凋亡率无显著差异;③CD34^＋细胞的增殖率在MDS高危组中最高,明显高于低危组和对照组,而CD34-细胞的增殖率在MDS高危和低危组间无显著差异。高危组CD34^＋细胞的增殖率为（50．67±3．37）％,明显高于CD34-细胞的（30．99±1．96）％（P〈0．05）;④CD34^＋、CD34-细胞的A／P值在MDS低危组均明显高于高危组和正常对照组,而CD34-细胞的A／P值在MDS高、低危组均明显高于CD34^＋细胞的A／P值（P〈0．05）。此外,CD34^＋细胞的凋亡率与生存及预后明显相关。结论：CD34^＋细胞百分率随MDS危险度增加而逐渐增加,在低危组中以CD34-细胞的凋亡占主导,随着病情进展,在高危组中则以CD34^＋细胞的增殖占主导,提示异常的凋亡和增殖在MDS的发生和发展中起重要作用。此外,CD34^＋细胞的凋亡率可能是独立的预后不良因素,抑制凋亡可能诱导MDS向白血病的转化。     

人参总皂甙及单体对脐血CD 34+细胞体外扩增的影响

目的 探讨人参总甙、人参皂甙单体对脐血CD34 细胞体外扩增的影响。方法 用Stem Span ^TM sFEM无血清液体培养基加入不同浓度的人参总皂甙(GS)、人参皂甙单体(Hgl、Rbl)，进行液体扩增，计数总细胞敷并检测CD34 细胞。收获扩增后的细胞用MethoCult^TM H4．435半固体培养基培养，计数CFU-E、BFU-E、CFU-GM集落。结果 GS、Rgl、Rbl具有刺激CD34 细胞液体培养的作用。GS的最佳浓度是50mg／L，Rgl最佳浓度是5mg／L，Rbl最佳浓度是5m/L。细胞总数分别扩增20．4、24．5、2，4．1倍，CD34 细胞数分别扩增4．22、5．19、4．12倍。在液体培养后仍可刺激扩增后脐血细胞集落形成，CFU-E集落形成能力分别比对照组高90．1％、70．8％、72．8％；BFU-E集落形成能力分别比对照组高53．4％、68．0％、67．0％；CFU-GM集落形成能力分别比对照组高67．0％、29．8％、39．4％；结论 人参总甙、人参皂甙单体能促进造血干／祖细胞增殖，并且能诱导定向分化，具有类似生长因子和协同生长因子作用。     

骨髓增生异常综合征CD34+细胞研究进展

骨髓增生异常综合征（ＭＤＳ）是一组以血细胞质、量异常和高风险发展成为急性白血病（主要是髓系白血病）为特征的恶性克隆性造血干细胞病［１］。ＣＤ３４（细胞表面磷酸化糖蛋白）选择性地表达于早期造血干（祖）细胞，可能起到使造血干（祖）细胞归巢及粘附的作用［２...     

不同来源骨髓间充质干细胞对CD34+细胞增殖的影响

背景:作者前期研究显示,银屑病患者与正常人骨髓间充质干细胞的生物学特性、免疫学反应及抗原提呈功能有明显差异,而与流产胎儿骨髓间充质干细胞无明显差异.目的:观察不同来源骨髓间充质干细胞对正常人骨髓CD34+细胞增殖的影响.方法:密度梯度离心法分离银屑病患者和流产胎儿骨髓单一核细胞并培养、传代,传至第2代72 h后收集培养上清液,流式细胞仪鉴定骨髓CD34+细胞及骨髓间充质干细胞纯度.倒置显微镜下观察培养细胞的生长状态,细胞磁珠分选仪分选出的正常人骨髓CD34+细胞加入骨髓间充质干细胞培养上清液培养24 h 后,四甲基偶氮唑盐比色法检测骨髓CD34+细胞的增殖活性.结果与结论:CD34+细胞加入银屑病患者和流产胎儿骨髓间充质干细胞培养上清培养24 h后,细胞形态无差别.银屑病患者和流产胎儿骨髓间充质干细胞培养上清液对正常人骨髓CD34+细胞增殖的影响差异无显著性意义(P > 0.05).     

MDS与AA患者骨髓CD34+和CD71+CD45-细胞水平的变化

本研究旨在观察MDS和AA患者骨髓血CD34＋和CD71＋CD45-细胞数的变化。2010年1月至2013年10月在河北联合大学附属医院血液科门诊和住院的25例初治MDS和43例AA患者（其中SAA18例,NSAA25例）纳入本研究。对所有患者均进行血常规、骨髓涂片、骨髓活检、染色体核型分析以及骨髓血细胞免疫分型检测（主要是CD34＋、CD71＋CD45-细胞占有核细胞的比例）;比较CD34＋和CD71＋CD45-细胞在MDs组、AA（sAA、NSAA）组中的变化;比较MDS和NSAA组CD71＋CD45-细胞数≥15％或〈15％有核细胞数的患者的外周血白细胞数、血小板数和血红蛋白含量的差异。结果表明,MDS组CD34＋数明显高于AA组、NSAA组和SAA组（P〈0．05）;MDS组CD71＋CD45-细胞数明显高于SAA组（P〈0．05）,MDS组与NSAA组间差异无统计学意义。CD71＋CD45-≥15％的MDS组外周血小板数明显高于NsAA组（P〈0．05）;而CD71＋CD45-〈15％的MDS组白细胞、血小板数和血红蛋白含量与NSAA组比较均无统计学差异（P〉0．05）。结论：MDS组CD34＋细胞数显著高于AA组和sAA组。MDS纽CD71＋CD45-细胞数显著高于sAA组。CD71＋CD45-细胞≥15％的MDS组外周血小板数显著高于NSAA组。     

转基因骨髓基质细胞对人脐血CD34+细胞体外扩增作用的研究

为探讨转染FL基因的人原代骨髓基质细胞对脐血CD34+ 细胞的体外扩增效应 ,建立了转基因骨髓基质细胞与人脐血CD34+ 细胞共培养体系。采用免疫磁珠法分离人脐血CD34+ 细胞 ,在不同的体外培养体系中进行培养并取样检测细胞总数 ,CFC和CD34+ 细胞百分率。结果表明 ,在不同组合的培养体系中 ,转基因骨髓基质细胞培养体系较骨髓基质细胞培养体系和无滋养层培养体系对有核细胞总数 ,CFC含量和CD34+ 细胞含量均具有明显的扩增作用 ,分别扩增了 12 2 .5± 4 .3,39.6± 2 .7和 11.8± 0 5 2倍 (P <0 .0 5 )。结论 :转染FL基因的人骨髓基质细胞协同其它细胞因子可增强对人脐血CD34+ 细胞的体外扩增作用。     

人骨髓间充质干细胞与脐血CD34+细胞体外扩增

为了研究骨髓间充质干细胞(MSC)及细胞因子对脐血CD34 造血祖细胞体外扩增的作用,及其扩增作用 对细胞黏附分子的影响,用免疫磁珠富集脐血CD34 细胞,然后接种到含有或不含有MSC和细胞因子的24孔培 养板,体外培养1周,观察不同指标并进行组间比较。结果表明:①SDF-1α SCF TPO FL因子组合与SCF TPO FL因子组合对脐血CD34 细胞的扩增作用无显著性差异(无论有无MSC细胞层存在)(P>0.05);②MSC 与上述细胞因子共存的培养体系优于相应的单纯细胞因子培养体系(P<0.05);③扩增前与扩增后脐血造血祖 细胞黏附分子CD44的表达没有明显变化。结论:趋化因子SDF-1α对SCF TPO FL因子组合的扩增作用无显 著影响;MSC增加细胞因子的脐血细胞体外扩增的作用;体外扩增不影响跻血细胞黏附分子CD44的表达。     

裸鼠腹腔输注体外扩增的阵发性睡眠性血红蛋白尿症病人骨髓CD34+CD59+细胞的研究

应用BALB／c裸鼠为移植模型，将在体外扩增的阵发性睡眠性血红蛋白尿症（paroxysmal nocturnal hemoglobinuria，PNH）病人的CD34^＋CD59^＋细胞进行移植。研究其增殖能力和重建造血的情况，为实现PNH患者进行临床自体骨髓移植（ABMT）或自体外周血干细胞移植（APBSCT）奠定基础。本研究利用免疫磁珠双阳性分选法。从PNH患者骨髓中分离出足够数量的CD34^＋CD59^＋细胞进行体外扩增，并将体外扩增的细胞输注给接受亚致死剂量照射的BALB／c裸鼠。结果显示：移植6周后，用流式细胞术和DNA检测方法均检测到裸鼠骨髓、脾脏和外周血中人的CD45^＋细胞，而接受PNH病人CD34^＋CD59^＋细胞移植后的裸鼠，其血常规指标有一定恢复，但并未完全恢复。结论：PNH病人骨髓CD34^＋CD59^＋细胞体外扩增后仍能保持造血祖细胞的生物特性，在照射的裸鼠中能重建造血。     

化疗联合G-CSF动员的骨髓及外周血CD34+细胞表达粘附分子的变化

探讨化疗合G－CSF动员前，后患骺髓及外周血CD34^ 细胞表达CD44，CD49d，CD62L及趋化因子CXCR4的动态变化，用免疫荧光直接三角标记和流式细胞术测定G－CSF动员前，后骨髓及外周血CD34^ 细胞的CD44，CD49d，CD62L及趋化因子CXCR4的表达，观察输注各表达亚群细胞数与移植后造血重建的关系。结果发现，动员后骨髓中CD34^ CD44^ 和CD34^＋CD49d^ 细胞的百分比较动员前明显降低, 而外周血中二的比例则显升高；动员前，后骨髓中CD34^＋CD62L^＋和CD34^＋CXCR4^ 细胞的变化并不明显，而外周血中前明显增加，后则显减少。输入CD44^＋，CD49d^ ，CD62L^ 及CXCR4^ 的CD34^＋细胞的量与移植后血中中性粒细胞和血小板恢复的时间未表明有显的相关，结论：G－CSF动员可下调骨髓CD34^＋细胞的CD44，CD49d，CD62L及CXCR4的表达，从而进入外周血循环，输注这些细胞的临床意义有待累积更多病例的分析。     

脐血CD34+CD38-早期造血祖细胞的体外增殖和凋亡

为了从适龄产妇脐血中分离出CD34^ CD38^-细胞，在体外较长时间培养后观察分析CD34^ CD38^-细胞分裂增殖、凋亡以及干细胞因子对CD34^ CD38^-细胞增殖的影响，用流式细胞仪从10例健康产妇脐血中分选出CD34^ 和CD38^-标记的脐血原始细胞．在添加IL-3、IL-6、GM—CSF、EPO、IGF—1和SCF6种混合因子的干细胞培养基中培养6个月，观察细胞并绘制生长曲线，用单细胞凝胶电泳检测干细胞因子对CD34^ CD38^-细胞生长的影响和用流式细胞仪检测CD34’CD38细胞凋亡情况。结果表明：脐血CD34^ CD38^-细胞可在体外较长时间培养增殖，无异常或过度的细胞凋亡发生。结论：通过控制培养条件，脐血CD34^ CD38^-早期造血祖细胞可在体外较长时间培养增殖，以作为大量脐血原始细胞移植的细胞来源.