争光霉素A5和争光霉素A2的抗肿瘤作用与毒性研究

争光霉素是由浙江平阳分离的链霉菌产生的抗肿瘤物质,是由十多种组分组成的复合物。理化性质研究表明,争光霉素A₂、A₅、B₂等组分与日本报道的博莱霉素(Bleomycin)相应的组分A₂、A₅、B₂等相同。目前国外临床使用的博莱霉素是以A₂为主要组分的复合物。我们对A₅与A₂组分进行了比较研究,结果表明,两者的生物活性有明显差别,主要表现为:(1)对小鼠食管癌(SGA-73)的抑制作用,A₆比A₂强;(2)在小鼠食管癌组织中的浓度(微生物测定法),A₅比A₂高;(3)对小鼠肺的损害作用,A₅比A₂轻;(4)对小鼠的急性毒性,A₅比A₂低。上述研究结果提示,争光霉素A₅是具有一定特点的新抗癌药。最近,单一组分的争光霉素A₅定名为平阳霉素。     

争光霉素A6和它在争光霉素复合物的地位

争光霉素A₅已鉴别为Bleomycin A₆,在争光霉素复合物中所占比例一般在10%左右,在某些批样中可高达15%以上。文献报告Bleomycin A₆在天然产的Bleomyein复合物中只有痕量。通过向发酵培养基中加入特定组分的末端胺可大大提高其特定组分在复合物中的含量比而其它组分的产生则不同程度地被抑制。但Bleomyein A₆例外,即使向培养基中加入其末端胺精胺(0.3mg/ml),在所产生的复合物中大大增多的组分是Bleomyein A₆,而Bleomycin A₆仍只有痕量。这表明争光霉素产生菌有和Bleomycin产生菌明显不同的特点。     

抗肿瘤抗生素1588的研究——Ⅱ.理化性质及主要组分的特性

本文报告抗生素1588的一般性质、紫外光谱、红外光谱、核磁共振谱等分析结果,表明其为腐草霉素—博莱霉素类的碱性水溶性抗生素。用CM-Sephadex C-25柱层析,可将抗生素1588分为15个组分。我们对其中两个主要组分1588-74-3及1588-74-9(所占比例分别为23.4%和11.3%)的理化及生物学性质进行了研究,其盐酸水解产物的纸层析、薄板层析图谱与博莱霉素A₂、A₅及B₂的酸水解产物图谱有明显差别;从紫外吸收峰比值、酸碱稳定性及层析行为等方面来看,这两个组分也不同于腐草霉素、YA-56等其它同类抗生素,可能是这类抗生素中的新成员。     

不同组分的57Co(钴57)——争光霉素在肿瘤动物中的分布特性及其与抑瘤和毒性关系的探讨

⁵⁷Co标记的七种争光霉素组分(A₂+B₂混合品、A₂、A₄、A₅、A₆、A₅₀₃₃和B₂)在实体型艾氏腹水癌小鼠的分布实验中,发现七种组分都亲瘤和抑瘤。争光霉素A₅和A₆的亲瘤性最高。用等毒性剂量,A₅、A₄和A₂具有最高的抑瘤性。小鼠肝、肾和肿瘤对各种标记的争光霉素组分的摄取以A₅₀₃₃为最低,A₆为最高,因此目前看来,以A₆进行临床试用的前景似比其他的组分为差。A₅₀₃₃在肺中集聚少,排出较快,急性毒性又最低,按相等的LD₅₀剂量给药其抑瘤率也较高,从减少肺纤维化这点考虑,它可能是值得进一步研究的。A₅亲瘤抑瘤较高,肾和肝摄取较高,但较A₆为低,排出较慢,在体内保留时间较长,也是一种有发展前途的单一争光霉素组分。     

LC-MS分析乙酰吉他霉素组分及水解产物

目的应用LC-MS鉴定乙酰吉他霉素中组分及其水解产物。方法以0.1 mol·L^-1乙酸铵溶液-乙腈(35∶65)为流动相，采用Diamonsil C₁₈柱，单四极杆质谱检测器，电喷雾正离子扫描，调节锥孔电压，对各色谱峰进行质谱分析。结果乙酰吉他霉素各组分可基本分离；根据所得到的有关相对分子质量以及碎片峰的信息, 对乙酰吉他霉素各组分及其水解产物的结构进行了鉴别。发现国产乙酰吉他霉素的主要组分为乙酰吉他霉素A₄，A₅；A₁，A₃和A₆，A₇，与日本药局方中报道的主要组分相同，但国产乙酰吉他霉素还含有较多的乙酰吉他霉素A₁₃。乙酰吉他霉素效价测定中的水解产物并非吉他霉素。结论LC-MS方法快速、灵敏，专属性强，适合用于多组分抗生素的组分分析。     

用流式细胞光度术(FCM)研究争光霉素对肿瘤及正常细胞周期的影响

用流式细胞光度术发现七种争光霉素组分(A₂+B₂混合品,A₂,A₂,A₅,A₆,A₅₀₃₃和B₂)都使中国仓鼠卵巢细胞(CHO)阻断在G₂期,而对G₁→S→G₂的进行无影响。这种G₂期阻断呈剂量依赖性。不同组分的G₂阻断效应不同,在40 μg/ml时,以A₄和A₅最强,其次为A₆,A₂,A₂+B₂混合物和B₂,而A₅₀₃₃无影响。用等毒性剂量,所有组分都使小鼠艾氏腹水癌产生多倍化细胞。由于争光霉素的G₂期阻断效应与抑瘤存在着平行关系,我们认为争光霉素的抑瘤作用与癌细胞被阻断在G₂期有关。     

平阳霉素(博菜霉素A5)对同步化的CHO细胞的敏感周期时相的研究

平阳霉素(博莱霉素A₅)作用于同步化的各个周期时相的CHO细胞。结果用集落形成率来表示。研究表明平阳霉素对M期细胞最为敏感,其敏感顺序为M>G₂>S>G₁。实验使用的细胞同步化方法是用有丝分裂选择法收集M期细胞;用2 mMTdR双阻断法获得S期同步化细胞,再由M期和S期细胞分别向后推移1.5～2小时和7小时以获得G₁期和G₂期的同步细胞,并附以有丝分裂指数(MI)和标记指数(LI)检测各周期时相细胞的同步化程度。     

微渗析结合RP-HPLC研究盐酸平阳霉素在家兔血中的药代动力学

采用微渗析技术研究盐酸平阳霉素在体药代动力学，用Supelco RP-amide C₁₆柱进行样品的HPLC分析，盐酸平阳霉素的血药浓度用3P87程序处理。结果表明，家兔静注盐酸平阳霉素后，渗析液中的药物浓度在1.04～66.56 μg·mL^-1时，浓度与峰面积有良好的线性关系(R²=0.999 4)。微渗析探针的在体回收率为(42.8±3.4)%(n =6)。所测血药浓度经3P87程序拟合后，药-时曲线符合二室模型，T_1/2α及T_1/2β分别为14.9及60.3 min。因此，该方法可用于盐酸平阳霉素药代动力学研究。     

Comparison of CGS 15943, ZM 241385 and SCH 58261 as antagonists at human adenosine receptors

Three structurally related non-xanthine compounds, CGS 15943, ZM 241385 and SCH 58261, are potent A_2A adenosine receptor antagonists and have been used as tools in many pharmacological studies. We have now characterized their affinity and selectivity profile on human adenosine receptors stably transfected into either CHO cells (A₁ and A_2B receptors) or HEK-293 cells (A_2A and A₃ receptors). In binding studies using [³H]SCH 58261 as a radioligand, the three compounds were equally potent at A_2A receptors, their K _i value being less than 1 nM. Affinity for A₁ and A₃ receptors was measured using [³H]DPCPX and [¹²⁵I]AB-MECA as radioligands. Given the lack of selective ligands, interaction with A_2B receptors was assessed using the cAMP accumulation assay following stimulation by the adenosine receptor agonist N-ethylcarboxamidoadenosine (NECA). CGS 15943 was almost as potent at A₁ receptors (K _i 3.5 nM) as at A_2A receptors, showed moderate affinity for A₃ receptors (K _i 95 nM) and also interacted with A_2B receptors (K _i 44 nM; pA₂ 7.5). ZM 241385 showed little affinity for A₁ receptors (K _i 255 nM), and did not interact with A₃ receptors (K _i>10 μM); however, it displayed moderate affinity for A_2B receptors (K _i 50 nM; pA₂ 7.3). SCH 58261 had weak affinity for A₁ receptors (K _i 287 nM), no interaction with A₃ receptors (K _i>10 μM), and showed negligible interaction with A_2B receptors (K _i 5 μM; pA₂ 6.0). These data indicate that SCH 58261 is the most selective A_2A antagonist currently available. Moreover, the different receptor selectivity of these three chemically related compounds provides useful information to progress with structure-activity relationship studies. Received: 2 July 1998 / Accepted: 6 October 1998     

辽东楤本化学成分的研究

从辽东楤本(Aralia elata)的根皮中分得8个化合物,利用理化和光谱方法鉴定分别为胡萝卜甙-6’-棕榈酸酯(6’-O-palmitoyl-β-sitosterol-3-O-β-D-glucoside,A₅)、罗盘草甙A(silphioside A,A₉)、楤木皂甙A甲酯(araloside A methyl ester,A₁₀)、竹节人参甙I_b(chikusetusaponin I_b,A₁₁)、楤木皂甙A(araloside A,A₁₂)、楤木皂甙C(araloside C,A₁₅、楤木皂甙G(araloside G,A₁₆)、无梗五加甙D(acanthoside D,B₁)。化合物A₅,A₉,A₁₁和B₁为首次从该植物中分得,A₁₀为新天然产物,A₁₆为新化合物命名为楤木皂甙G,归属了化合物A₉,A₁₅的¹³C-NMR化学位移。     

Preparation and Evaluation of a CD13/APN-Targeting and Hydrolase-Resistant Conjugate that Comprises Pingyangmycin and NGR Motif-Integrated Apoprotein

We have chemically synthesized NGR-LDP-PYM, a novel CD13/aminopeptidase (APN)-targeting and hydrolase-resistant conjugate by cross-linking of the antitumor antibiotic pingyangmycin (bleomycin A₅, PYM) to an engineered NGR motif-integrated apoprotein (NGR-LDP) with a noncleavable linker. This protein–drug conjugate not only basically retains the original properties of PYM but also can specifically deliver PYM to the CD13/APN-expressing tumor cells. Furthermore, the resulting conjugate exhibits more resistance to hydrolysis of recombinant human bleomycin hydrolase than parental PYM. These results may be useful for improving the therapeutic efficacy of PYM and have implications in the treatment of PYM-refractory and CD13/APN-overexpressing tumors. © 2014 Wiley Periodicals, Inc. and the American Pharmacists Association J Pharm Sci 103:1204–1213, 2014     

人单克隆抗体与平阳霉素偶联物治疗乳腺癌实验研究

抗乳腺癌人单抗CMI用DextranT-40为中介体的方法与平阳霉素(PYM)偶联,体外实验显示CMI-PYM偶联物对人乳腺癌细胞的IC₅₀(抑制50%克隆生成浓度)为0.35μmol·L^-1;游离PYM为4.0μmol·L^-1。裸鼠体内实验证明,局部给予CMI-PYM偶联物(2.5mg·kg^-1)对移植的人乳腺癌抑制率达95%,等剂量平阳霉素为58%。结果表明人单抗CMI-平阳霉素偶联物对乳腺癌有显著疗效,偶联物对肿瘤的抑制作用比游离平阳霉素更强。     

博来霉素A6抗人体肝癌的实验研究

用克隆形成测定法检查博来霉素A₆对人肝癌、鼻咽癌和胃癌等细胞系的杀伤作用,发现对肝癌BEL-7402细胞有高度活性,半数杀伤浓度(IC₅₀)为6×10^-11mol/L。用流式细胞光度术研究表明,博来霉素A₆对肝癌BEL-7402细胞有G₂期阻断作用。在裸鼠可以耐受的剂量下,博来霉素A₆对移植性人肝癌的肿瘤生长有显著抑制作用,抑制率为75%。研究结果提示博来霉素A₆有可能用于肝癌化疗。     

平阳霉素与单克隆抗体Fab′片段偶联物的抗肿瘤作用

目的　研制一种以单抗Fab′片段为基础的抗肿瘤导向药物。方法　制备单抗3A5 Fab′片段及其与平阳霉素(PYM)偶联物Fab′-PYM后,测定Fab′-PYM与肿瘤细胞的免疫反应性、偶联物中PYM的抑菌活性、对肿瘤细胞的杀伤作用和体内抑瘤作用。结果　Fab′及Fab′-PYM保持了与靶细胞C26的免疫反应性;偶联物中PYM的抑菌活性为游离PYM的15%;Fab′-PYM对C26细胞的杀伤作用强于PYM;对非靶细胞KB的杀伤作用与PYM相似;ip和iv给药,Fab′-PYM对小鼠皮下接种的肠癌26生长抑制作用均强于3A5-PYM和PYM。结论　Fab′-PYM具有比PYM及3A5-PYM更强的体内外抗肿瘤作用。     

丹参酮IIA通过调控PI3K/Akt/mTOR信号通路对食管癌细胞放疗敏感性的影响

目的 研究丹参酮II_A对人食管癌细胞放疗敏感性的影响，并基于磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（PI3K/Akt/mTOR）信号通路探讨其潜在机制。方法 以人食管癌Eca-109细胞为受试细胞，分别采用不同浓度丹参酮II_A和不同放射剂量处理Eca-109细胞，48 h后MTT法检测细胞增殖活力，计算丹参酮II_A半数抑制浓度（IC₅₀）和放射的IC₅₀，分别作为后续实验丹参酮II_A浓度和放射剂量。取对数生长期Eca-109细胞，设对照组、丹参酮II_A组、放射组、丹参酮II_A＋放射组、丹参酮II_A＋放射＋PI3K抑制剂（LY294002）组。通过平板克隆实验、MTT法、流式细胞术、荧光质粒转染法检测细胞克隆形成能力、增殖活力、凋亡率和自噬状况，RT-PCR、Western blotting法检测细胞中PI3K/Akt/mTOR信号通路相关mRNA和蛋白表达。结果 丹参酮Ⅱ_A和放射对人食管癌Eca-109细胞增殖活力的抑制作用均呈现剂量相关性，丹参酮II_A IC₅₀为8.75 mmol/L，放射量IC₅₀为4.63 Gy。与对照组相比，丹参酮II_A组、放射组、丹参酮II_A＋放射组、丹参酮II_A＋放射＋LY294002组细胞克隆形成能力和增殖活力明显降低，凋亡率和自噬体数量明显升高（P＜0.05）；PI3K、Akt、mTOR mRNA和蛋白表达量明显降低（P＜0.05）；Bcl-2、Bax、cleaved Caspase-3、LC3-I、LC3-II蛋白表达量及Bax/Bcl-2、Cleaved Caspase-3/Caspase-3、LC3-II/LC3-I明显升高（P＜0.05）。与丹参酮II_A组或放射组相比，丹参酮II_A＋放射组和丹参酮II_A＋放射＋LY294002组对各检测指标的调控作用明显增强（P＜0.05）。与丹参酮II_A＋放射组相比，丹参酮II_A＋放射＋LY294002组对各指标的调控作用明显增强（P＜0.05）。结论 丹参酮II_A可能通过下调PI3K/Akt/mTOR信号通路，抑制细胞增殖并促进其凋亡与自噬，进而增强人食管癌细胞放疗敏感性。