蛋白芯片检测结核分枝杆菌对肺结核病的临床诊断价值

肺结核病是一种由结核分枝杆菌引起的慢性传染病,是我国重点控制的重大疾病之一。目前结核病的诊断方法有：痰涂片、结核菌培养、结核菌基因检测、胸部X线和CT等,但这些方法存在特异性差或需要时间长、敏感性低等缺点。因此,敏感、特异、快速的检测方法对肺结核病的诊断与鉴别十分重要。     

建立结核分枝杆菌抗原K6 IFN-γ ELISPOT用于结核病辅助诊断

目的:建立结核分枝杆菌抗原K6作为刺激源的IFN-γ ELISPOT检测方法,并初步评价该方法用于结核病辅助诊断价值.方法:结核病患者和非结核性肺部相关疾病患者外周血单核细胞(PBMC)分别加入预包被ELISPOT板对应孔,分别加入抗原K6、T-SPOT.TB试剂盒抗原A和B,每个PBMC样品设阴性对照孔和阳性质控孔.37℃、5％ CO2培养20 ～ 24小时,弃细胞,依次加入酶标检测抗体、底物显色获得斑点.ELISPOT读板仪进行斑点计数和分析.结果:K6和T-SPOT.TB试剂盒检测敏感度分别为80.0％和85.9％、特异度分别为83.9％和73.2％,两者比较差异均无统计学意义.K6作为刺激原的IFN-γ ELISPOT诊断结核病阳性预示值为88.3％,阴性预示值为73.4％.结核病组,抗原B刺激PBMC分泌IFN-γ的细胞斑点数(SFC)平均值分别高于抗原A和K6(P=0.011和P=0.004),抗原A和K6刺激PBMC分泌IFN-γ的SFC平均值比较差异无统计学意义(P＞0.05).非结核性肺部相关疾病组,抗原A、抗原B和K6刺激PBMC分泌IFN-γ的SFC平均值两两比较差异均无统计学意义(P＞0.05).结论:K6可作为结核病IFN-γELISPOT诊断候选抗原之一.     

Xpert结核分枝杆菌/利福平试验对结核病及耐多药结核病诊断价值的Meta分析

目的 评估Xpert结核分枝杆菌/利福平（MTB/RIF）试验对结核病的诊断价值.方法 检索PubMed、Medline、中国知网、万方数据库等,收集Xpert MTB/RIF试验对结核病诊断价值的文献,检索起止时间均为建库至2012年6月.2名研究者独立进行资料提取和文献质量评估.采用Meta-Disc 1.4软件进行Meta分析.结果 共纳入26篇文献,其中2篇文献涉及儿童病例,包含了13 270例来自临床患者的检测标本.Meta分析结果显示,Xpert MTB/RIF试验诊断结核病的汇总敏感度为87%（95%CI：86%～88%）、特异度为97%（95%CI：97%～97%）.按照结核病的类型和患者年龄进行亚组分析,Xpert MTB/RIF试验诊断肺结核的敏感度高于肺外结核病,90%（95%CI：89%～91%） vs 76%（95%CI：72%～79%）;诊断涂阴菌阳性和涂阳菌阳性结核病的敏感度分别为74%（95%CI：71%～76%）和99%（95%CI：98%～99%）;对儿童肺结核的诊断敏感度比成人肺结核低,74%（95%CI：65%～83%） vs 90%（95%CI：89%～92%）.Xpert MTB/RIF试验诊断耐多药结核病的敏感度为96%（95%CI：94%～97%）,特异度为98%（95%CI：98%～99%）.结论 Xpert MTB/RIF试验诊断结核病的价值较高,尤其是成人结核病及耐多药结核病.Xpert MTB/RIF试验在儿童结核病中的诊断价值由于纳入文献较少,尚待进一步研究.     

多肿瘤标志物蛋白芯片检测对原发性肺癌的诊断价值

研究多肿瘤标志物蛋白芯片检测对原发性肺癌的诊断价值.本文应用蛋白芯片检测45例原发性肺癌患者血清中12项肿瘤标志物: AFP、 CEA、 神经元特异性烯醇化酶(NSE)、 CA125、 CA15-3、 CA242、 CA19-9、 PSA、 游离前列腺特异性抗原(f-PSA)、铁蛋白(FER)、β-HCG及人生长激素(HGH).阳性率由高至低顺序为 FER(42.2%), CEA(35.6%), CA125(24.4%), CA15-3(17.8%), CA242(13.3%), CA19-9(11.1%), β-HCG(8.9%), HGH(6.7%), NSE(4.4%), AFP(0), f-PSA(0)及PSA(0).除FER外, 有一项指标异常占57.8%.蛋白芯片检测对原发性肺癌的多指标联检阳性率明显较单一指标高,对原发性肺癌的诊断有较高的临床应用价值.     

结核分枝杆菌抗原分析及免疫交叉反应研究

目的：筛选和鉴定结核分枝杆菌特异性和保护性抗原，研究结核杆菌的免疫反应特点，以探索结核病诊断和治疗的新途径。方法：采用超声破碎和滤膜抽滤的方法分别得到菌体蛋白和滤液蛋白，通过Western blot试验用结核杆菌的单克隆抗体及结核病人血清来检测蛋白样品，把发生阳性反应的蛋白在BECKMAN LF3200／多肽氨基酸序列测定仪上进行N末端序列分析，并用结核杆菌的单抗对自身抗原组蛋白进行了检测。结果：结核杆菌的31kD和30kD蛋白与结核杆菌的单抗及病人血清反应均呈阳性，但与正常小鼠血清和健康人血清反应呈阴性。31kD和30kD蛋白的N末端序列分别为：Ala Glu Val Asp Trp Leu Val Phe Ala Val和Phe Ser Arg Pro Gly Leu Pro Val Glu Tyr。结核分枝杆菌的单抗与自身抗原组蛋白能发生免疫交叉反应。结论：结核杆菌的31kD和30kD蛋白是免疫保护性抗原，对免疫交叉反应分子基础的进一步研究必将增加对结核免疫机理的了解。     

结核分枝杆菌实验室诊断技术的概述

近年来,结核病日益严重,已成为传染病的首位杀手。建立快速、准确、敏感、特异以及简便的诊断方法是全球控制结核蔓延的关键。为了建立更好的结核诊断方法,现从病原学、免疫学、分子生物学检测等3个方面对结核分枝杆菌实验室诊断技术的现状作一简要综述。     

多肿瘤标志物蛋白芯片检测系统鉴别附件肿块性质的价值

目的:探讨多肿瘤标志物蛋白芯片检测系统(C-12系统)鉴别附件肿块性质的价值。方法:采用C-12系统定量检测125例良性、55例恶性附件肿块患者术前和115例健康女性血清中的12种肿瘤标志物:CA125、CA199、Ferritin、CEA、CA153、CA242、AFP、?-HCG、NSE、HGH、F-PSA和PSA,评价诊断价值。结果:C-12系统在恶性附件肿块中的阳性率显著高于良性肿块组及正常对照组;浆液性癌中CA125阳性率较高,联合检测CA125+CA199+CEA可提高对浆液性肿瘤诊断的灵敏性;粘液性癌中以CA199阳性率较高,联合检测CA199+CA125可显著提高对粘液性肿瘤诊断的灵敏性。4.AFP在卵巢恶性生殖细胞肿瘤中具有特异性联合检测AFP+CA125可以有效鉴别良恶性卵巢生殖细胞肿瘤。5.HGH、PSA和F-PSA在鉴别附件肿块性质中无显著意义。结论:C-12系统是辅助诊断卵巢癌、鉴别附件肿块性质的有效方法之一,可提高卵巢癌诊断的灵敏性和特异性,但联合检测的指标选择尚需改进。     

儿童结核病现状

全球有1/3人群感染结核分枝杆菌,结核病已是继艾滋病之后导致人类死亡的第二大传染病。儿童结核病由于自身的特点致使其在公共卫生中并未受到重视,而且在诊断和治疗的研究中均落后于成人。儿童结核病一定程度上反映了未来成人的结核病水平,重视儿童结核病对结核病控制具有重要意义。本文就目前儿童结核病流行病学、诊断、治疗等方面进行了概述。     

BCG多克隆抗体在结核性病变组织中的诊断价值

目的 :探讨用卡介苗 (BCG)多克隆抗体检测结核性病变组织中BCG抗原对结核病的诊断价值。方法　收集各种组织不同类型的结核性病变组织标本 175例 ,非结核性病变组织标本 5 4例 ,采用BCG多克隆抗体免疫组化染色标记检测组织中BCG抗原 ,同时与细菌学的抗酸染色作比较。结果　结核组对BCG呈阳性反应者 135例 ,占 77 12 %。阳性染色在朗汉斯巨细胞、上皮样细胞的胞质及干酪样坏死组织呈鲜红色颗粒 ;而抗酸染色阳性仅有 11例。占 6 2 9%。结核病的基本病理类型对BCG反应的阳性率分别是渗出为主型 >坏死为主型 >增殖为主型。结论　采用BCG多克隆抗体的免疫组化标记对结核病诊断的敏感性明显高于抗酸染色 ,有一定的鉴别诊断价值     

儿童结核病的诊断

由结核分枝杆菌（MTB）感染引起的结核病仍然是当前导致发展中国家儿童死亡的重要疾病之一。据估计,结核病患儿已占全球结核病人总数的10%~15%,且该比率在结核病高发国家和地区如非洲更高。在结核病发病率最高的地区之一——南非开普敦,     

结核杆菌CFP-10蛋白的原核表达、纯化及抗血清制备

目的:获得原核表达及纯化结核杆菌CFP-10蛋白及其抗血清。方法:从H37RV结核杆菌基因组中扩增得到CFP-10的编码基因,通过原核表达系统(BL21-pET28a+)表达及镍亲和层析和Q sepharose阴离子交换层析获得内毒素合格的CFP-10蛋白。将此蛋白免疫家兔,获得抗CFP-10的抗血清,并通过间接ELISA的方法检测其抗体滴度。结果:重组质粒pET28a-CFP-10构建成功,其编码的蛋白在BL21中获得了高效表达,且经纯化获得了内毒素合格的CFP-10蛋白,免疫家兔获得的抗血清效价能达到1∶256 000。结论:成功的表达及纯化了CFP-10蛋白,并制备了高滴度的CFP-10抗血清,为临床血清学检测以及新型结核疫苗研究奠定基础。     

视觉、脑干听觉诱发电位对多发性硬化的诊断价值

目的 :探讨视觉诱发电位 (VEP)、听觉诱发电位 (BAEP)对多发性硬化 (MS)的诊断价值。方法 :对 30例临床诊断为MS的患者进行VEP、BAEP检测 ,并与正常对照组进行比较分析。结果 :MS患者VEP和BAEP的异常率分别为 73%和 6 0 %。异常中VEP有 6 8% ,BAEP有 78%的患者 ,临床有相应的症状 ;VEP 32 % ,BAEP 2 2 %的患者临床无相应症状。 5例MS患者在临床缓解期复查VEP、BAEP ,1例VEP、BAEP恢复正常 ,4例仍异常。结论 :VEP、BAEP检测对MS的诊断具有重要意义。     

Immunoprophylactic properties of 71-kDa cell wall-associated protein antigen of Mycobacterium tuberculosis H37Ra

Proteins associated with the cell wall peptidoglycan (CW-Pr) of Mycobacterium tuberculosis H₃₇Ra were isolated to evaluate their immunoreactivity and immunoprophylactic properties against experimental tuberculosis. Chemical treatment of the cell wall with trifluoromethanesulfonic acid: anisole (2 : 1) resulted in the release of three proteins of 71, 60 and 45 kDa as resolved by sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis. A comparative study of immune responses elicited to individual proteins in mice immunized with CW-Pr emulsified in incomplete Freund's adjuvant showed the 71-kDa protein to be the most immunoreactive antigen. This 71-kDa protein was found to cross-react with the 70-kDa heat shock protein from M. leprae and possessed ATPase activity. Mice immunized with the 71-kDa protein exhibited significantly higher immune responses, on the basis of T and B cell reactivity, as compared to a M. bovis Bacillus Calmette Guerin (BCG)-vaccinated group. The culture supernatants collected from 71-kDa stimulated lymphocytes stimulated exhibited increased interferon-γ and interleukin-2 production. The protective efficacy of the 71-kDa protein in comparison to BCG was determined by challenging the mice with a virulent strain M. tuberculosis H₃₇Rv. The 71-kDa protein was found to be more protective in animals challenged at 8 and 16 weeks post immunization, shown by increased survival rates and decreased viable bacilli counts in the target organs as compared to BCG-vaccinated animals. Received: 6 January 1997     

抗原处理相关蛋白基因多态性及与多发性硬化的相关性

目的对广东地区汉族MS患者作抗原处理相关蛋白基因(TAP)分型,探讨这些基因与广东人群中MS遗传易感性的可能关系。方法采用PCR扩增阻碍突变系统(PCR-ARMS)法对30名无亲缘关系的MS的病人和95名无血缘关系的广东籍健康汉族人作TAP分型。结果TAPl-333、637位等位基因基因型在广东汉族MS组及NC组中均以I和D为主,TAP2-379、565、665等位基因基因型分别为:V-A-T;TAP1和TAP2各等位基因基因型频率在MS组和正常人组间无显著差异(P>0.05)。结论从目前调查的例数,广东人群中MS与TAP基因不关联。     

PCR-膜芯片检测石蜡包埋组织中结核杆菌耐药基因突变

目的探讨PCR-膜芯片技术检测石蜡包埋组织中结核杆菌耐药基因突变的可行性及其在临床病理中的应用价值。方法采集100例石蜡包埋的肺或淋巴结组织标本(临床诊断为结核患者80例,非结核患者20例),TB膜芯片检测标本中的结核杆菌IS6110基因,阳性者利用12对特异性引物进行多重PCR,扩增产物与含有59个探针的耐药-TB膜芯片反向点杂交检测结核杆菌耐药基因突变并测序验证。结果 TB膜芯片检测石蜡包埋组织标本中的结核杆菌IS6110基因,以临床诊断为标准时,灵敏度为52.5%(42/80),特异度为100%(20/20);以抗酸染色结果为标准时,灵敏度为90.5%(19/21),特异度为61.0%(36/59)。耐药-TB膜芯片检测石蜡包埋组织结核杆菌耐药基因突变,在42例结核杆菌IS6110基因阳性的标本中,检出INH基因突变2例,RFP或SM基因突变各1例,INH、RFP和EMB基因同时突变1例,与测序结果基本符合,提示上述5例可能为耐药结核病。结论应用PCR-膜芯片技术可提高石蜡包埋组织中结核杆菌基因的检出率,耐药-TB膜芯片检测结果可为耐药结核病的病理学诊断提供有价值的参考。     

纯化的结核杆菌多肽抗原刺激人γδT细胞的效应分析

目的：探讨从结核杆菌多肽抗原(Mtb-Ag)纯化的多肽(C主肽)对人新鲜外周血γδT细胞的促增殖效应以及对已活化扩增的T细胞再次刺激的激活效应。方法：采用不同剂量的C主肽体外刺激健康人外周血PBMC，培养10天时经流式细胞仪检测细胞表型；另外以γδT细胞活化标志分子CD69的表达为指标，分析C主肽对已被Mtb-Ag激活扩增13天的γδT细胞再次刺激的激活效应。同时以MTT法检测C主肽的再刺激对已活化扩增的γδT细胞的促增殖活性。结果：结核杆菌C主肽对人新鲜的γδT细胞具有显著扩增效应；当C主肽再刺激已经活化的γδT细胞时，可使其显著表达CD69分子，同时对γδT细胞具有显著促增殖活性。结论：结核杆菌C主肽可能是Mtb-Ag发挥特异性激活人γδT细胞的有效成分。     

Comparison of antibodies raised against the peptide 10–24 of chicken riboflavin carrier protein (cRCP) by classical and multiple antigen peptide (MAP) approaches

Riboflavin carrier protein is an essential protein required for the growth and development of the embryo and hence for the maintenance of pregnancy. Our efforts to delineate the antigenic determinants of chicken riboflavin carrier protein (cRCP) resulted in the identification of a bioneutralization epitope in the region 10–24 of cRCP. The present work compares the properties of the antibodies raised against the peptide epitope by classical and multiple antigen peptide (MAP) system approaches. The extent of cross-reaction of the antibodies to the MAP construct with the parent protein was found to be significantly less as compared to the antibodies raised against the peptide-diphtheria toxoid conjugate. Furthermore, the bioneutralizing ability of the antisera to the MAP construct was also found to be very poor. The results suggest that there are resious limitations in the ability of antibodies raised against MAP constructs to cross-react with the native proteins.     

儿童失神癫痫240例治疗及预后随访报告：应用改良的1989年儿童失神癫诊断标准

目的总结儿童失神癫痫（CAE）的治疗和预后，为CAE的合理用药和评价远期预后提供依据。方法对1999年10月至2005年12月北京市3家医院为研究CAE易感基因收集的CAE患儿的治疗用药、疗效及预后进行随访。CAE诊断标准参考1989年国际抗癫痫联盟（ILAE）提出的癫痫及癫痫综合征分类诊断标准，并制定了统一的CAE纳入标准和排除标准。根据CAE的选药原则进行治疗，评估CAE患儿的远期预后。结果3家医院共收集符合ILAECAE诊断标准的患儿339例，其中296例符合本研究制定的CAE纳入标准。296例患儿中有56例患儿因失访未得到远期预后随访结果，有随访结果者240例（81．1％），其中男94例（39．2％），女146例（60．8％）。失神发作起病年龄为3岁3个月至12岁，其中4～8岁174例（72．5％）。39例（16．2％）有热性惊厥史，18例（7．5％）有热性惊厥家族史和（或）癫痫家族史，5例（2．1％）有失神癫痫家族史。失神癫痫发作频率为每日5～50次，其中每日发作10～30次占80％。出现失神持续状态1例。伴全面强直一阵挛发作12例（5．0％）。所有患儿发作期EEG均表现为双侧对称同步的3Hz棘慢波爆发，头颅影像学检查均未见异常。治疗首选丙戊酸234例，其中217例（92．7％）于服药后3d至6个月发作完全控制，15例加用另一种药物（其中氯硝西泮7例、硝西泮4例及拉莫三嗪4例）后发作控制，余2例单用丙戊酸2年后仍有发作，但发作次数明显减少；首选拉莫三嗪4例，其中3例发作控制，1例服药1年发作未控制，改用丙戊酸1周后发作控制。2例首选托吡酯治疗，其中1例发作控制，1例服药5个月效果不明显，改用丙戊酸2个月后发作控制。240例患儿随访时间为2～7年，158例（65．8％）已停用抗癫痫药物，其中停药1年以上者96例，停药后均无复发；82例尚未停用抗癫痫药物患儿中，80?     

Evaluation of a newly developed HIV antigen test

A new monoclonal antibody-based enzyme immunoassay (Innogenetics) for the detection and quantification of p24 core antigens of HIV-1 (group M and group O) and of HIV-2 was evaluated on 2745 serum samples and 18 culture supernatants and compared with a reference (Coulter) HIV-1 p24 antigen assay. Positive results were confirmed by neutralization with the reagents of the respective tests. As demonstrated by dilution series of HIV cocultures, the new test recognizes p24 antigen of the most common HIV genetic subtypes, including group O and HIV-2. Titres ranged from 729 to 531441. Therefore p24 antigen assay is but very weakly reactive with HIV-2 (titres from 9 to 81). The new test is considerably more sensitive than the reference. In a population of 365 follow-up samples from 86 different patients, representing all stages of infection, the new test detected p24 antigen at least once in 52% (45/86) of these patients, whereas the reference was positive in 31% (27/86). The newly designed test detected antigen in 40% (145/365) of the samples, while the reference was positive in 21% (75/365). In a group of PCR and/or culture positive neonates, 33% (9/27) of the samples were positive with the new test versus 18% (5/27) with the reference. The specificity of the new test, as determined on 2,000 blood donor samples, was 99.65% (initially), 99.80% (after repetition), and 100% (with neutralization). The reference scored 99.95%, 100%, and 100%, respectively. In 300 seronegative samples from persons at risk, the initial specificity of the new test was 98.67% (the reference, 99.00%). With neutralization, both assays were 100% specific. J. Med. Virol. 53:31–35, 1997. © 1997 Wiley-Liss, Inc.