制备转基因小鼠的胚胎干细胞基因打靶途径研究现状（续上期）

制备转基因小鼠的胚胎干细胞基因打靶途径研究现状（续上期）戴旭明，傅继梁综述上海第二军医大学生物学教研室２００４３３３．２对无选择性基因打靶时的正负双向选择系统ＥＳ细胞基因打靶最先是针对ｈｐｒｔ基因获得成功的，在基因打靶技术的初建阶段选择ｈｐｒｔ基因有...     

小鼠胚胎细胞染色体制备方法及应用

小鼠胚胎细胞染色体制备方法及应用阮明，芦春林，牛浩儒，肖贞（北京医科大学毒理教研室１０００８３）随着生殖发育毒理学的发展，人们对胚胎损伤的机理研究越来越重视，环境因素对胚胎遗传物质的损伤也是研究的一个热点。通过时遗传物质ＤＮＡ的载体——染色体分析，可...     

氟嗪酸的小鼠胚胎毒性及致畸性研究

ＮＩＨ小鼠于孕期ｄ６－１５ｐｏ氟嗪酸２１００、７００ｍｇ／ｋｇ，结果闹剂量的嗪酸使ＮＩＨ孕鼠增重减少，透过胎盘屏障影响胎鼠的生长发育，胎鼠的身长和体重均是显著低于溶剂对照组，构胄和胸胄发育不良率显著增高，颚裂的发生率有增高趋势，因此临床上应避免给怀孕和哺乳的妇女以及儿童使用该类药物。     

转基因小鼠及其在体内突变研究中的应用

早在十五年前,就有人想到将外源性DNA引入哺乳动物体细胞和生殖细胞中,例如将胚胎从体内移出后在体外培养,再植入假孕的母体内使其完成正常的胚胎发育,这一技术使一个动物的胚胎细胞与其它动物的结合以形成嵌合动物成为可能。他们还发明了将生殖细胞或早期胚胎来源的畸胎瘤培养细胞引入到发育胚胎中的方法。与此同时,遗传学家和病毒学家正在探索将选择的基因引入组织培养细胞的方法。于是便可将基因转入畸胎瘤细胞,并将这些细胞导入发育胚胎的囊胚以产生嵌合动物。到了七十年代中期,有人用小鼠白血病病毒(MuLV)     

建立转基因小鼠突变研究模型的研究

建立转基因小鼠突变研究模型的研究黄建，成国辉，陈耀富，印木泉（上海第二军医大学卫生毒理教研室２００４３３扬州大学农学院生物所扬州２５０００９）本研究的目的是建立一个以ＸｙｌＥ（邻苯二酚氧化酶）基因为诱变靶基因，ｐＥＳｎｘ（１２．７ｋｂ）穿梭质粒为载体...     

莫合烟对小鼠胚胎细胞致突变的研究

本文用微核试验的方法检测了新疆产莫合烟（1种粗制烟草）对小鼠胚胎细胞的遗传毒作用，并与新疆卷烟厂生产的天地牌香烟加以比较。给妊娠13-15d的瑞士小鼠腹腔注射烟雾凝聚物，共2次，间隔24h，第2次染毒后16h杀死动物，取胎鼠的肝脏及母鼠的骨髓，制片，计数多染红细胞（PCE）的微核率。     

胚胎操作方式对受精卵成活率影响的初步分析

胚胎操作方式对受精卵成活率影响的初步分析黎怀星，李建秀，杨桦，胡以平，王肖鹏，傅继梁（上海第二军医大学生物教研室２００４３３成都华西医科大学分子生物学研究室成都６１００４１）正确的胚胎操作是以显微注射法制备转基因小鼠的主要步骤之一，它直接影响胚胎的成...     

五氧化二钒对体外小鼠胚胎生长发育的影响

本研究采用体外着床后全胚胎培养方法，观察了Ｖ２Ｏ５对小鼠胚胎生长发育的影响，结果显示，Ｖ２Ｏ５浓度达１５ｍｇ／ｌ时可影响胚胎的生长发育和形态分化，导致胚胎畸形率增加。在１５ｍｇ／ｌ以下浓度仅显示个别动物生长发育受影响，无明显的剂量－反应关系。     

转基因小鼠：研究体内基因突变的模型系统

携带细菌报告基因转基因小鼠已用于研究体内自发或诱发的基因突变。这种突变分析方法是基于报告基因在适当的宿主菌内重新有效表达上的。转基因小鼠的运用使人们首次将体内的突变机制与其最终的生理效应，如癌变或衰老直接联系起来了。     

xylE-ICR转基因小鼠模型体内致突变试验的规范化研究

本文通过ＭＮＮＧ作用于ｘｙｌＥＩＣＲ转基因小鼠,按１／１０ＬＤ５０给药,每天１次,连续５ｄ,最后一次给药后２１ｄ,测小鼠肝组织突变率为２１．４６×１０－５,与对照组（＜４．３８×１０－５）比相差极其显著（Ｐ＜０．０１）,表明该检测方法可作为规范化程序,对诱变物进行致突变研究的系统分析。     

基于质粒载体的转基因小鼠突变研究模型的建立

基于质粒载体的转基因小鼠突变研究模型的建立黎怀星，李建秀，杨桦，胡以平，王肖鹏，傅继粱（上海第二军医大学生物教研室２００４３３华西医科大学分子生物学研究室成都６１００４１）本研究拟建立一个以ＬａｃＩ作为诱变靶基因，ｐＳＰＯＲＴＩ（４．１ｋｂ）作为载体...     

乙肝病毒X蛋白诱导HeLa细胞和转基因小鼠肝细胞凋亡的研究

背景与目的:探讨乙型肝炎病毒X蛋白在细胞凋亡中的作用.材料与方法:采用基因重组技术构建乙型肝炎病毒x基因的真核表达载体pcDNA3-HBx.脂质体FuGENE6转染HeLa细胞,并用蛋白印迹检测pcDNA3-HBx在HeLa细胞中的表达.流式细胞术检测细胞凋亡率.结果:成功构建了可在真核细胞中稳定表达X蛋白的HBx基因真核表达载体pcDNA3-HBx.稳定转染pcDNA3-HBxDNA的HeLa-Xs细胞的凋亡率为9.8%,较空白HeLa细胞的凋亡率(0.4%)以及对照细胞HeLa-Vs细胞的凋亡率(1.3%)高;两只转基因小鼠肝细胞的细胞凋亡率分别为54.4%和40.4%,较正常小鼠肝细胞的细胞凋亡率(6.8%)明显增高.结论:X蛋白可在体外和体内诱导细胞凋亡.     

xy1E—ICR转基因小鼠模型体内致致突变试验的规范化研究

本文通过ＭＮＮＧ作用于ｘｙＩＥ－ＩＣＲ转基因小鼠,按１／１０ＬＤ５０给药,每天１次,连续５ｄ,最后一次给药后２１ｄ,测小鼠肝组织突变率为２１．４６＊１０^-5,与 对照组（〈４．３８＊１０^-5）比相差极其显著（Ｐ〈０．０１）,表明该检测方法可作为规范化程序,对诱变物进行致突变研究的系统分析。     

丙肝病毒ns3基因转基因小鼠的产生

通过受精卵原核显微注 途径，产生带有可诱导型丙肝病毒非结构蛋白３基因的重组载 转基因小鼠。     

HBV转基因小鼠的解毒活力变化的研究

ＡＦＢ１和ＨＢＶ是致肝癌的两个主要因素。研究表明ＡＦＢ１与ＨＢＶ有协同致肝癌作用，但其机理不明。方法利用ＨＢＶ转基因小鼠模型，分析小鼠肝组织的细胞色素Ｐ４５０酶的含量和活性，ＧＳＨ和ＧＳＴ的含量和活性，并测定ＨＢＶ转基因小鼠暴露于ＧＳＨ和ＧＳＴ的含量的含量和活性，并测定了ＨＢＶ转基因小鼠暴露于ＡＦＢ１后血清ＡＦＢ１后血清ＡＦＢ１－白蛋白加成物的含量，结果加成物的含量在ＨＢＶ转基因小鼠都较对照小鼠高     

血管内皮生长因子促进小鼠胚胎干细胞生成CD34+细胞的研究

目的:研究血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)体外促进小鼠胚胎干细胞系ES-D3生成CD34 细胞的能力.方法:将ES-D3形成拟胚体,将拟胚体细胞转入含不同浓度的VEGF和VEGF 干细胞因子(stem cellfactor,SCF)的培养基中.实验分6组,分别为VEGF 5μg/L组、VEGF 10 μg/L组、VEGF 20μg/L组、VEGF 5μg/L SCF组、VEGF 10μg/L SCF组、VEGF20μg/L SCF组,同时设不加因子的自发分化对照组.RT-PCR检测CD34 mRNA的表达,流式细胞仪检测CD34 细胞的比例,甲基纤维素半固体培养法检测生成造血集落的能力.结果:经过1周的诱导培养,实验组生成的细胞可以表达CD34 mRNA,CD34 细胞的比例也升高,并可形成造血祖细胞的集落.从CD34 mRNA的表达水平、诱导生成CD34 细胞的比例和生成的集落数量看,VEGFμg/L SCF组和VEGF 10μg/L SCF组的诱导效率最高.结论:VEGF能够促进ESC生成CD34 细胞,尤以与SCF合用时,其诱导效率更高.     

TNNT3突变转基因小鼠筛选及肌钙蛋白表达的研究

目的:研究TNNT3(R69H)突变转基因小鼠快反应骨骼肌肌钙蛋白表达和组织结构的变化。方法:将杂合TNNT3(R69H)突变转基因小鼠与野生型C57BL/6J小鼠杂交,选同窝阳性杂合后代鼠进行交配,再用野生型C57BL/6J小鼠对后代进行检测,得到TNNT3(R69H)突变转基因纯合个体。取野生型C57BL/6J小鼠、杂合转基因小鼠、纯合转基因小鼠的快反应骨骼肌进行RT-PCR和WESTERN实验并制备透射电镜切片。结果:RT-PCR和WESTERN电泳条带从亮到暗依次为纯合转基因小鼠、杂合转基因小鼠、野生型C57BL/6J小鼠。电镜结果显示转基因小鼠快反应骨骼肌明暗带不清、出现肌纤维间水肿和线粒体空泡等现象。结论:TNNT3(R69H)突变纯合转基因小鼠快反应骨骼肌中TNNT3的mRNA和蛋白质量高于杂合转基因小鼠、杂合转基因小鼠高于野生型C57BL/6J小鼠,并且转基因的表达使快反应骨骼肌结构异常。