慢性粒细胞白血病细胞中Skp2的表达及其临床意义

目的研究慢性粒细胞白血病(CML)细胞中S期激酶相关蛋白2(Skp2)的表达及其与p27的关系.方法用免疫细胞化学染色和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分别检测CML细胞中Skp2和p27蛋白水平及转录水平的表达.结果免疫细胞化学染色显示,CML细胞Skp2蛋白表达增高(14.3%±2.9%),与正常对照(8.6%±0.9%)相比有显著性差异(P＜0.05);CML细胞中Skp2蛋白和p27蛋白呈负相关(r=-0.75,P=0.001).但RT-PCR结果显示,Skp2蛋白过度表达的CML细胞中p27 mRNA未见明显变化.结论 Skp2在调控p27蛋白表达过程中起重要作用,Skp2表达异常可能与CML病程进展有关.     

Skp2通过调控Snaill水平对上皮性卵巢癌细胞EMT的作用研究

目的 探讨S期激酶相关蛋白2(Skp2)通过调控转录因子Snaill水平对上皮性卵巢癌细胞上皮间质转化(EMT)的作用.方法 分别检测15例上皮性卵巢癌组织和正常卵巢组织中Skp2和Snaill mRNA水平;体外培养SKOV3细胞,将其分为阴性对照组(只加脂质体)、Skp2干扰表达组(加Skp2干扰表达载体和脂质体)...     

PPARγ和Skp2在乳腺癌中的表达及临床意义

目的 探讨过表达过氧化物酶增殖物激活受体(PPARγ)对Skp2表达的调节作用,以及PPARγ和Skp2在乳腺癌中的关系,进而解释PPARγ在乳腺癌细胞中发挥生物学效应的机制,为肿瘤的特异疗法提供靶向作用.方法 采用Western blot、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、细胞转染等技术研究PPARγ和Skp2在乳腺癌中的关系.结果 PPARγ蛋白在乳腺癌中的表达明显低于乳腺癌旁组织,Skp2蛋白在乳腺癌中的表达明显高于乳腺癌旁组织;过表达PPARγ在MDA-MB-231细胞促进Skp2 mRNA和蛋白水平降低.结论 激活PPARγ可能是治疗雌激素受体阴性乳腺癌的一种新途径.     

抑制Skp2基因表达对NK/T细胞淋巴瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究抑制Skp2基因表达对NK/T细胞淋巴瘤细胞系HANK1细胞增殖和凋亡的影响,探讨抑制Skp2基因表达治疗NK/T细胞淋巴瘤的潜在应用价值。方法:用RNA干扰(RNA interference,RNAi)方法抑制HANK1细胞Skp2基因表达,实时定量RT-PCR和Western blot检测Skp2基因表达,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期分布和细胞凋亡。结果:Skp2-shRNA表达载体明显抑制HANK1细胞Skp2基因表达,细胞增殖受抑,细胞周期G1期停滞,凋亡细胞增多。结论:抑制Skp2蛋白功能可能是治疗NK/T细胞淋巴瘤的好方法,值得深入研究。     

Skp2及Thr187磷酸化p27kip1蛋白在非霍奇金淋巴瘤中的表达及相关性分析

研究发现,p27kip1为细胞周期重要调控蛋白,其水平及功能异常参与了非霍奇金淋巴瘤(NHL)的发生发展.S期激酶相关蛋白2(S-phase kinase-associated protein 2,Skp2)能够特异性识别第187位苏氨酸(Thr187)磷酸化的p27kip1,并介导其多聚泛素化及降解,这一过程的异常直接影响细胞内p27kip1蛋白的绝对含量,并可能与NHL的发病机制有关[1-2].我们检测了与p27kip1降解相关的Skp2及Thr187磷酸化p27kip1蛋白在NHL中的表达,以探讨二者的表达异常与NHL发生发展的关系.     

Skp2和p27在乳腺癌分子亚型中的表达及与基底样型乳腺癌的关系

目的 探讨Skp2和p27在乳腺癌分子亚型中的表达及与基底样型乳腺癌的相关性.方法 1452例乳腺癌标本制作组织芯片,免疫组化MaxVision快捷法检测ER、PR、HER2、CK5/6和EGFR,按照Nielsen标准进行分子分型.同时检测Skp2和p27.结果 在乳腺癌基底样型、HER2过表达、裸表达型、腺腔A型、腺腔B型中,Skp2表达率为63.3%、51.9%、53.1%、21.3%和13.7%;p27表达率为35.2%、46.3%、41.4%、55.9%和63.0%.Skp2在基底样型、HER2过表达型和裸表达型的表达中显著高于腺腔A和B型(P＜0.01);而p27在基底样型、HER2过表达型和裸表达型中的表达率显著低于腺腔A和B型(P＜0.05).Skp2和p27的表达水平与ER表达相关(P＜0.01).Skp2和p27的表达在基底样型乳腺癌中呈负相关(P＜0.01).结论 Skp2的高表达及p27的失表达可能与ER阴性乳腺癌的发生和发展有关,并且Skp2在基底样型乳腺癌的发生、发展中起重要作用.在基底样型乳腺癌中二者基因相关性的研究为其发病机制的阐明提供帮助.     

乳腺癌细胞中过表达S期激酶相关蛋白2对曲格列酮敏感性的影响

目的本文主要研究过表达S期激酶相关蛋白2(Skp2)能否影响曲格列酮(TRG)对乳腺癌细胞的敏感性,致力于发展一种新的药物来提高患者的生存率,最终达到治愈的目的。方法荧光报告基因方法观察过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)γ型转录活性的变化;流式细胞和CCK-8法研究Skp2过表达影响TRG对乳腺癌细胞生长和凋亡的改变。结果 Skp2过表达能抑制PPARγ的活性,耐受TRG对乳腺癌细胞生长和凋亡的影响。结论 Skp2过表达的乳腺癌细胞能耐受TRG的敏感性,因此通过下调Skp2可能会增强TRG对乳腺癌细胞的生长抑制。     

弥漫性大B细胞淋巴瘤中Skp2表达的临床意义

目的探讨Skp2、p27及Ki-67在弥漫性大B细胞淋巴瘤（DLBCL）中表达的临床意义。方法应用免疫组化染色检测60例DLBCL及20例正常淋巴结中Skp2、p27和Ki-67的表达情况,并检测12例DLBCL和12例正常淋巴结中Skp2和p27 mRNA的水平,分析Skp2、p27及Ki-67的表达与DLBCL的关系。结果60例DLBCL中,Skp2、Ki-67表达阳性率均明显高于正常淋巴结（P〈0.01）;p27表达阳性率明显低于正常淋巴结（P〈0.01）;Skp2与p27表达呈明显负相关,与Ki-67表达呈明显正相关（P〈0.05）;Skp2的表达与Ann Arbor分期、疗效及预后显著相关,而与性别、年龄及结外病灶数均无明显相关性,即Ann Arbor分期为Ⅲ/Ⅳ期者以及疗效差者Skp2为高表达,Skp2低表达组生存率明显高于Skp2高表达组。p27和Ki-67的表达与上述临床指标无明显相关性。12例DLBCL的Skp2 mRNA表达水平相对量升高（P〈0.05）,而p27 mRNA表达水平相对量并无明显降低。结论Skp2的高表达可能在DLBCL的发生发展中起着重要的作用,且与病程的进展、疗效及预后密切相关,可以作为DLBCL极有价值的分子生物学预后指标。     

慢性低氧通过上调Skp2的生成而减少p27在大鼠肺动脉的表达

目的 研究慢性低氧对细胞周期抑制蛋白p27及S期蛋白相关激酶2的影响,探讨低氧性肺动脉高压的机制.方法 复制慢性低氧性肺动脉高压大鼠模型,将大鼠分为常氧对照组(Normoxia)和低氧模型组(Hypoxia)两组.待模型复制完毕后,测定大鼠RVPSP和RV/LV+S,然后进行组织病理分析,测定MA%和MT%.利用Western-blot实验和RT-PCR实验检测p27、Skp2蛋白及RNA水平的变化.结果 慢性低氧显著增加大鼠RVPSP、RV/LV+S、MA%和MT%,引起大鼠肺动脉压力增高、右心室肥厚和肺中小动脉中膜增厚及外膜增生.Western-blot实验发现,低氧组大鼠肺动脉中p27蛋白表达显著减少,Skp2蛋白表达上调.结论 慢性低氧导致Skp2表达升高,p27表达减少.p27表达减少而对平滑肌细胞抑制作用减弱,进而导致细胞增殖.因此,把p27或Skp2作为靶点可能为治疗低氧性肺动脉高压提供新的思路.     

应用shRNA抑制Skp2表达对喉癌化疗的增敏作用研究

目的探讨shRNA(small hairpin RNA)抑制S期激酶相关蛋白2(S-phase kinase associated protein 2,Skp2)基因表达对化疗后喉癌Hep-2细胞增殖和凋亡的影响。方法将喉癌细胞分为空质粒对照组、Skp2 shRNA组、Skp2 shRNA加化疗组、空质粒加化疗组及化疗组。应用脂质体将Skp2 shRNA转染到人喉癌Hep-2细胞,6 h后加入顺铂,培养48 h后流式细胞术检测Skp2、p27蛋白表达和细胞凋亡,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖变化,并进行比较。结果 Skp2 shRNA组与空质粒对照组比较,Skp2蛋白表达明显降低,p27蛋白表达明显增高,差异有统计学意义(P0.01,P0.05)。Skp2 shRNA加化疗组与空质粒加化疗组比较,各剂量顺铂(0 mg/L、1 mg/L、2 mg/L、3 mg/L)作用下细胞增殖抑制率均明显增高,差异均有统计学意义(P均0.01);与空质粒加化疗组(2 mg/L顺铂)比较,Skp2 shRNA加化疗组细胞凋亡率明显增加,差异有统计学意义(P0.01)。结论 Skp2 shRNA可选择性阻断细胞Skp2基因表达,联合化疗可能为喉癌的综合治疗提供新的途径。     

Skp2在导管上皮不典型增生和乳腺癌表达及意义的初步研究

目的:探讨Skp2高表达与乳腺癌发生及生物学行为的关系。方法:采用EnVision免疫组化法检测正常组织、导管上皮不典型增生、导管原位癌各30例和56例浸润性癌中Skp2的表达水平,并分析Skp2高表达与乳腺癌发生及生物学行为的关系。结果:Skp2阳性表达率在正常组织、导管上皮不典型增生、导管原位癌、浸润性癌中总体上有差异(χ2=54.02,P<0.005)。导管原位癌中Skp2阳性表达率高于正常组织(χ2=21.82,P<0.005),且与导管上皮不典型增生差异也有显著性(χ2=5.08,P<0.025);浸润性癌Skp2阳性表达率显著高于导管原位癌(χ2=6.52,P<0.01);浸润性癌伴淋巴结转移阳性组Skp2阳性表达率显著高于淋巴结阴性组(χ2=7.38,P<0.025);Skp2阳性表达率在浸润性癌组织学Ⅰ～Ⅱ级与组织学Ⅲ级之间差异有显著性(χ2=6.66,P<0.01)。结论:Skp2高表达在乳腺癌发生和生物学行为中可能有重要作用。     

Skp2和p27kip1蛋白在B细胞性非霍奇金淋巴瘤中的表达、定位及意义

目的 探讨B细胞性非霍奇金淋巴瘤(B-NHL)组织中Skp2和p27kip1蛋白的表达、定位及意义.方法 用免疫组织化学方法检测72例B-NHL和14例反应性增生淋巴结组织Skp2、p27kip1蛋白及细胞增殖指标Ki-67的表达情况,结合病理资料进行统计分析;用免疫荧光双标记技术检测淋巴瘤Raji细胞株Skp2和p27kip1蛋白的定位情况.结果 Skp2蛋白在B-NHL组织中的表达高于反应性增生的淋巴结(不含生发中心),在侵袭性B-NHL组织中的表达高于惰性组;p27kip1蛋白在B-NHL组织中的表达低于反应性增生淋巴结(不含生发中心),在侵袭性B-NHL组织中的表达低于惰性组;skp2蛋白主要在Raji细胞的胞浆中表达,p27kip1蛋白主要表达于胞核.结论 在B-NHL组织中,Skp2的高表达和p27kip1的低表达可能与其发生发展有关;skp2和p27kip1在Raji细胞中的亚细胞定位与其生物学功能一致.     

Skp2和p27在扁桃体恶性肿瘤中的表达及意义

目的:探讨Skp2与p27在扁桃体恶性肿瘤组织中的表达及与扁桃体恶性肿瘤多项临床病理特征的关系,并探讨二者的相关性。方法:30例手术切除并经病理证实的扁桃体恶性肿瘤标本,同时收集慢性扁桃体炎标本18例。选乳腺癌作为阳性对照。常规HE染色和免疫组织化学S-P法检测各组Skp2和p27的表达,并进行统计学分析。结果:Skp2在扁桃体恶性肿瘤组织中的阳性表达明显高于其在慢性扁桃体炎组织中的阳性表达(P<0.05);p27在扁桃体恶性肿瘤组织中的阳性表达率明显低于其在慢性扁桃体炎组织中的阳性表达率(P<0.01);Skp2、p27的蛋白表达与扁桃体恶性肿瘤的组织类型有关(P<0.05),与年龄、性别、分化程度无关(P>0.05);Skp2、p27在扁桃体恶性组织中的表达呈负相关(P<0.01)。结论:扁桃体恶性肿瘤中Skp2蛋白表达与靶蛋白p27蛋白降解有关,联合检测Skp2、p27蛋白表达可作为判断扁桃体恶性肿瘤生物学行为的指标之一。     

Cullin-1和Skp2在鼻咽癌及癌前病变组织中的表达

目的：探讨细胞周期蛋白Cullin-1（Cul-1）和S期激酶相关蛋白2（Skp2）在鼻咽癌及癌前病变组织中的表达及意义,同时对比它们在鼻咽癌及癌前病变组织中的表达水平,比较二者的分布情况,找出其差异性及相关关系。方法应用免疫组化方法检测Cul-1和Skp2蛋白在20例分化型癌、20例未分化癌和20例鼻咽癌前病变中的表达。结果在20例分化型癌、20例未分化癌和20例鼻咽癌前病变中Cul-1的平均阳性表达率分别为76%、77%、54%;阳性表达值分别为1.63±0.7、1.62±0.68、1.15±0.64, Cul-1在2种鼻咽癌中的表达高于癌前病变,差异有统计学意义（P〈0.05）,2种鼻咽癌之间无差异;Skp2在20例分化型癌、20例未分化癌和20例鼻咽癌前病变中的平均阳性表达率为32%、41%、33%,平均阳性表达值分别为0.53±0.49、0.82±0.54、0.72±0.43,无统计学差异。对20例分化型鼻咽癌标本Cul-1、Skp2阳性表达值进行相关关系分析,两者相关性不显著。结论 Cul-1参与了鼻咽癌发生、发展,Skp2则可能参与了鼻咽癌的发生过程,它参与的细胞周期调节可能是鼻咽癌发生的早期事件;两种蛋白因子在细胞周期调控中的关系有待进一步验证。     

p27kip1及相关分子Skp2在U937细胞增殖过程中的表达变化及相互关系

p27kip1为CIP/KIP家族的主要成员,对细胞周期起负调节作用.由于p27kip1的蛋白水平主要受到S期激酶相关蛋白2(S-phase kinase-associated protein 2,Skp2)介导的细胞周期依赖性、底物特异性的泛素-蛋白酶体途径调节,因此p27kip1降解水平的调节对其正常生物学功能的发挥至关重要.Skp2为人类F-box蛋白家族成员,介导p27kip1的多聚泛素化及随后的蛋白水解[1].     

Skp2蛋白在非小细胞肺癌中的表达与预后

目的:研究Skp2蛋白在非小细胞肺癌中的表达及其指标的关系,以探讨其在预后中的意义。方法:纳入武汉大学人民医院1995-01/2001-1242例非小细胞肺癌(NSCLC)组织,10例肺良性病变及8例癌旁不典型增生石蜡组织切片。采用免疫组化技术检测Skp2蛋白在42例NSCLC、10例肺良性病变、8例癌旁不典型增生组织中的表达,并借助HPIAS-1000图像分析系统对结果进行分析。结果:肺癌组织中Skp2蛋白的阳性率为(24.83±13.64)%,明显高于肺良性病变组织(3.07±1.32)%(P<0.01),也高于癌旁不典型增生组织(13.89±3.95)%(P<0.01)。Skp2蛋白表达水平与分化程度、TNM分期及淋巴结转移有密切关系,但与年龄、性别、肿瘤组织学分型无明显关系。结论:Skp2蛋白的过量表达在NSCLC的发生发展中起重要作用,Skp2蛋白可能为肺癌的一个独立预后因子,与肺癌患者的生活质量可能有一定的关系。     

全反式维甲酸对人白血病细胞系U937细胞生长的影响及其机制分析

目的 研究全反式维甲酸(ATRA)作用于人白血病细胞系U937细胞后,对细胞生长的影响及可能的机制.方法 收集1 μmol/L ATRA作用后的U937细胞,利用流式细胞术检测细胞周期分布,Western blot法检测细胞周期相关蛋白(cyclinA、p16、021、027及p27相关分子skp2)表达水平的变化,采用免疫沉淀方法检测U937细胞中027与Skp2的结合情况.结果 流式细胞术分析显示,在1μmol/L ATRA作用72 h后,72%的U937细胞被阻滞在G0/G1期.Western blot分析显示,ATRA能诱导cyclinA、Skp2表达下凋,p21、p27表达上调.免疫沉淀法检测结果显示在U937细胞中p27与skp2存在相互结合的情况.结论 ATRA可能主要通过诱导p27表达上调引起U937细胞生长阻滞,其过程是由p27相关分子Skp2所介导的.     

FoxM1、Skp2在宫颈癌中的表达及与临床特征的关系分析

目的研究叉头转录因子蛋白1(FoxM1)、S期激酶相关蛋白2(Skp2)在宫颈癌组织中的表达及与临床特征的关系。方法选择2017年3月至2019年5月于都江堰市中医医院及深圳市龙岗区第三人民医院活检、手术所获的106例宫颈癌组织标本作为宫颈癌组,另选同期所获50例正常宫颈组织作为正常组,以免疫组化染色法对两组标本中的FoxM1、Skp2表达情况进行检测,探讨二者在宫颈癌组织中的表达特性与患者临床特征的关系。结果宫颈癌组FoxM1与Skp2阳性表达率显著高于正常组(P<0.05);二者在宫颈癌组织中的表达呈正相关(P<0.05)。FoxM1、Skp2在FIGO分期Ⅱ期、低分化、肌层浸润≥1/2组织的阳性表达率均显著高于FIGO分期Ⅰ期、高+中度分化、肌层浸润<1/2组织的阳性率(P<0.05);有淋巴结转移、脉管受侵犯的宫颈癌组织Skp2阳性率显著高于无淋巴转移、脉管受侵犯的宫颈癌组织(P<0.05)。结论 FoxM1、Skp2蛋白在宫颈癌组织中高度表达,二者的高度表达与患者临床分期、肌层的浸润程度等临床特征密切相关。     

p27^kipl及相关分子Skp2在U937细胞增殖过程中的表达变化及相互关系

p27^kipl为CIP／KIP家族的主要成员，对细胞周期起负调节作用。由于p27^kipl的蛋白水平主要受到S期激酶相关蛋白2（S-phase kinase—associated protein 2，Skp2）介导的细胞周期依赖性、底物特异性的泛素-蛋白酶体途径调节，因此p27^kipl降解水平的调节对其正常生物学功能的发挥至关重要。Skp2为人类F-box蛋白家族成员，介导p27^kipl的多聚泛素化及随后的蛋白水解。研究发现Skp2在人类多种肿瘤中都有表达，并且与肿瘤组织的分化程度及预后相关。我们旨在对Skp2参与介导的p27^kipl的泛素-蛋白酶体途径降解与p27^kipl的稳定性之间的关系进行探讨，运用目前比较公认的血清饥饿合并释放方法同步化处理U937细胞，结合Western blot、免疫荧光双标记及激光共聚焦技术检测在不同生长状态下p27^kipl、Skp2及其他细胞周期相关分子在U937细胞内的表达和定位情况。     

Skp2和p27Kip1表达异常与乳腺癌发生及临床病理特征的相关性研究

目的从蛋白水平研究Skp2和p27Kip1表达异常与乳腺癌发生及临床病理特征的相关性。方法采用En Vision两步法检测30例乳腺正常组织,30例导管上皮不典型增生组织(ADH)、30例导管原位癌(DCIS)和56例浸润性导管癌(非特殊类型)(IDC)中Skp2和p27Kip1的表达水平,并分析Skp2和p27Kip1表达异常与乳腺癌发生及临床病理特征的关系。结果 1ADH组、DCIS组及IDC组的Skp2阳性率均高于正常对照组(P0.05,P0.01,P0.01),IDC组和DCIS组高于ADH组(P0.01,P0.05),IDC组又高于DCIS组(P0.01)。ADH组、DCIS组和IDC组p27kip1阳性率均低于正常对照组(P0.05,P0.01,P0.01),IDC组和DCIS组均低于ADH组(P0.01,P0.05),IDC组又低于DCIS组(P0.01)。2IDC伴淋巴结转移组Skp2阳性率显著高于DCIS淋巴结转移组(P0.05);IDCⅢ级高于IDCⅠ~Ⅱ级(P0.01)。反之,p27kip1阳性率在IDC伴淋巴结转移组低于无淋巴结转移组(P0.05);IDCⅢ级低于Ⅰ~Ⅱ级(P0.01)。结论 Skp2与p27Kip1异常表达与乳腺癌发生、病理分级和淋巴结转移有密切相关性。