老年痴呆症大脑皮质神经元超微结构的研究

用电子显微镜对１０例老年痴呆症和１０例正常老年人大脑额叶、顶叶和颞叶皮质神经细胞进行对比研究，发现两组间神经细胞有较一致性变化。它们包括：核内包含物的出现，神经原纤维缠结，胞质内脂褐素体的堆积等。但统计学资料表明，老年痴呆症组的上述变化明显高于正常老年人组     

Sertoli细胞对体外培养的大脑皮质神经元的营养作用

为研究睾丸支持细胞 (Sertolicells,SCs)对体外培养的大脑皮质神经元的营养作用 ,采用 2种实验方法 :1 )将Sertoli细胞与大脑皮质神经元共培养 ;2 )在神经元培养基内添加Sertoli细胞条件培养基 (Sertolipreconditionedmedium ,SCM)。结果 :在培养早期SCs能显著促进大脑皮质神经元的贴壁 ,对神经元胞体及突起的生长也有显著的效果 ,培养晚期SCs组的神经元生长状况也显著优于DMEM培养组和SCM组 ,说明SCs对神经元有显著的促生长作用 ;同时实验还证实SCM对神经元在体外的生长也具有一定的促进作用     

NGF对大鼠创伤性脑损伤后大脑皮质神经元的影响

目的研究神经生长因子(NGF)对大鼠创伤性脑损伤后大脑皮层神经元的影响，为NGF的临床应用提供实验依据。方法用原代培养的胎龄17d SD大鼠胎鼠大脑皮质细胞，机械划痕法建立体外创伤性脑损伤模型，通过细胞形态学、MTT法及琼脂糖凝胶电泳观察NGF的保护作用。结果培养10d的神经细胞行机械性损伤，神经细胞皱缩，突起消失，神经网络减少，胞浆内尼氏颗粒减少、溶解、消失，出现典型的DNA梯状断裂带；给予NGF后，NGF中、高剂量组倒置显微镜下及尼氏染色后观察细胞形态结构损伤减轻；MTT比色法数值增高；DNA Ladder无梯状断裂带出现。结论NGF对创伤性脑损伤所致的大脑皮层神经细胞损伤具有保护作用。     

大鼠皮质神经元的体外培养和纯化

目的：探讨大鼠皮质神经元分离纯化的有效方法。方法：取胎鼠大脑皮质细胞，分别在不同的培养液中进行原代培养，利用相差显微镜对培养的细胞进行动态观察；并以免疫细胞化学技术对神经元进行染色。结果：在相差显微镜下可见加用N2添加剂和胎牛血清培养的神经元生长良好，胞体形态多样，突起数目多，长度长，与邻近神经元的胞体或突起形成接触，而胶质细胞则大量死亡，神经元纯化率达94％以上，未加用N2添加剂培养的神经元胶质细胞大量存在，神经元纯化率达50％左右。结论：N2添加剂和胎牛血清联合应用可使大鼠皮质神经元得到良好的生长和有效纯化。     

氨对体外培养胚胎大鼠大脑皮质神经元凋亡的影响

目的通过观察体外培养的胚胎大鼠大脑皮质神经细胞在氨作用下的形态学、超微结构的变化,探讨氨与细胞凋亡及肝性脑病的关系.方法不同浓度的氨作用于体外培养的18d胎龄胚胎大鼠大脑皮质神经细胞24h后,采用光镜、透射电镜观察细胞形态及超微结构;利用流式细胞仪进行凋亡细胞定量观察.结果对照组与实验组在光镜下形态不同,两组在透射电镜下可见到典型的"凋亡小体”,流式细胞仪定量显示出两组凋亡细胞数量具有显著性差异(P＜0.01),且不同浓度的氨引起的神经细胞凋亡数量也存在显著性差异(P＜0.01).结论氨可诱导体外培养神经细胞产生过量的细胞凋亡.     

PC12细胞诱导分化成神经元样细胞的培养机制研究

目的：研究适宜PC12细胞的培养方法及其在神经生长因子（NGF）作用下的分化效果.方法：PC12细胞培养于F12K培养基中,传代时直接将细胞吹打下来,并用注射器吹散成单细胞悬液;PC12细胞接种于6孔培养板中,并用含NGF 50μg/L的无血清培养基进行诱导分化5d,倒置显微镜下观察细胞的形态特征,Image J软件进行图像分析.结果：PC12细胞生长状态良好,且经NGF作用5d后,细胞体积显著增大,突起增多增长,细胞分化率达（72.60±3.61）％.结论：本实验中对PC12细胞培养的方法简单易行,适用于PC12细胞的培养;NGF能够诱导PC12细胞分化成神经元样细胞,可为神经退行性疾病的研究奠定基础.     

老龄大鼠大脑皮质、海马与尾壳核内神经元型一氧化氮合酶阳性神经元的分布

目的研究老龄大鼠大脑皮质、海马与尾壳核内神经元型一氧化氮合酶 (neuronalnitricoxidesynthase,nNOS)阳性神经元的分布。方法以兔抗鼠NOS I多克隆抗体为I抗 ,应用免疫细胞化学法和计算机图像分析技术研究nNOS阳性神经元的分布。结果nNOS阳性神经元散布于大脑皮质的Ⅱ Ⅵ层 ,多数神经元呈中度或弱阳性标记 ,少数则为强阳性标记 ,偶见阴性标记者 ,积分光密度 (intergratedopticaldensity ,IOD)值为4 79.3 8± 15 0 .91( x±s)。海马皮质中的多数中间神经元和极少数锥体细胞呈弱阳性标记 ,个别中间神经元则呈强阳性标记 ,IOD值为 4 0 0 .19± 168.3 4。尾壳核内多数神经元呈强阳性或中度阳性标记 ,少数为弱阳性或阴性标记 ,IOD值为2 0 3 .0 3± 4 1.2 8。结论老龄大鼠大脑皮质、海马与尾壳核内的神经元对nNOS多克隆抗体的免疫细胞化学反应具有鲜明的异质性。     

脑缺血后大脑皮质神经元NT-3的表达变化

为探讨NT－3与局灶性脑缺血后大脑皮质神经元损伤修复的关系。采用免疫组织化学ABC法观察了缺血1h后大鼠大脑皮质NT－3的变化。结果：NT－3样免疫阳性反应物主要分布于大脑皮质第3，5层的神经元，脑缺血1h后，NT－3在皮质神经元的表达明显减少（P＜0．05），提示NT－3可能通过不同于其它生长因子的调节方式参与脑缺血后大脑皮层神经细胞的损伤修复。     

一种体外培养大鼠皮层神经元创伤后继发性损伤模型的建立

目的 建立一种简便的体外培养大鼠神经元创伤性损伤模型。方法 采用机械痕创伤性损伤培养大鼠皮层神经元,根据培养细胞锥虫篮活力计数和培养上清乳酸脱氢酶（LDH）检测评估损伤程度,用中性红复染确定未损伤细胞。结果 创伤性损伤培养神经元后,锥虫篮细胞活力计数和培养上清LDH检测对损伤程度的判定具有显著的相关性,远离创道未直接损伤区域的神经元可产生继发性损伤。结论 本模型可用于体外研究神经元创伤后原发性和继发性损伤。     

低密度体外培养大鼠海马神经元的形态学观察

目的 :建立大鼠海马神经元低密度体外培养方法 ,并观察其发育分化过程中的形态学指征变化情况 .方法 :采用神经元与星形胶质细胞立体共培养方法 .首先以新生大鼠为实验材料培养纯化单层星形胶质细胞 ,随后以孕 18d胎鼠为实验材料 ,分离海马皮层 ,经胰酶消化制备单细胞悬液 .以(2～ 5 )× 10 3·cm-2 密度接种于包被有多聚赖氨酸的盖玻片上 ,而后采用无血清培养液与星形胶质细胞立体共培养 ,并对不同培养时间的神经元进行形态学观察 .结果 :利用低密度体外培养方法成功培养出海马神经元 ,其在不同发育分化阶段具有不同的形态学特征 .结论 :低密度培养的海马神经元不同发育分化阶段具有不同的形态学特征 ,为今后的相关研究奠定了基础     

一种体外培养大鼠皮层神经元创伤后继发性损伤模型的建立

目的　建立一种简便的体外培养大鼠神经元创伤性损伤模型。方法采用机械划痕创伤性损伤培养大鼠皮层神经 元,根据培养细胞锥虫篮活力计数和培养上清乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）检测评估损伤程度,用中性红复染确定未损伤细胞。结 果创伤性损伤培养神经元后,锥虫篮细胞活力计数和培养上清ＬＤＨ检测对损伤程度的判定具有显著的相关性,远离 创道未直接损伤区域的神经元可产生继发性损伤。结论本模型可用于体外研究神经元创伤后原发性和继发性损伤。     

异丙酚对发育期小鼠大脑皮质锥体细胞成熟和树突发育的影响

目的 探讨异丙酚对小鼠大脑皮质发育阶段神经元成熟和树突发育的影响.方法 选用同窝的发育期小鼠按随机数字表法分为3组:1％脂肪乳剂注射对照组,30 mg异丙酚注射组,60 mg异丙酚注射组.于出生后第7天(P7)经腹腔注射.采用免疫荧光方法检测异丙酚注射注射对P7小鼠大脑皮质内胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)免疫反应阳性的星形胶质细胞及NeuN免疫反应阳性的成熟神经元的变化,MAP2B免疫组化检测锥体细胞形态与数量的变化.运用高尔基染色观察异丙酚对P14小鼠大脑皮质内锥体细胞树突棘总数及亚型数量的变化.结果 不同剂量异丙酚对P7小鼠大脑皮质星形胶质细胞和成熟神经元细胞数量均无显著影响,MAP2B免疫组化显示60 mg异丙酚注射显著减低P7小鼠大脑皮质内锥体细胞的数量与树突总数,而30 mg异丙酚注射则无显著改变.高尔基染色结果进一步证实:与对照组比较,60 mg异丙酚注射显著减少P14小鼠大脑皮质锥体细胞树突棘总数(P＜0.05)及蘑菇样树突棘数量(P ＜0.05);30 mg异丙酚注射亦显著减少蘑菇样树突棘数量(P＜0.05),而对树突棘总数的影响未达到统计学差异.结论 异丙酚单次注射对发育期小鼠大脑皮质成熟神经元及星形胶质细胞数量影响不明显,但高剂量注射对皮质锥体细胞树突的发育与树突棘的成熟有显著抑制作用.     

大鼠脑皮质星形胶质细胞体外培养方法的改进

目的改进大鼠脑皮质星形胶质细胞体外培养方法,获得纯度较高的大鼠脑皮质星形胶质细胞。方法取出生后1d内SD大鼠大脑皮质,用机械吹打法使细胞分散制成初细胞悬液,10μm尼龙膜过滤除去成纤维细胞后接种。待7d细胞铺满瓶底后,"十"字形震荡培养液5min后传代接种。传代2次后行GFAP免疫组化染色鉴定。结果通过微孔尼龙膜过滤和传代前"十"字形震荡培养液等操作可以得到形态典型、纯度较高的星形胶质细胞。通过纯度计算可得离体培养的星形胶质细胞的纯度平均值为95.49%(n=6)。结论改进的星形胶质细胞体外培养方法,降低了实验操作难度,方法稳定有效,得到的星形胶质细胞纯度较高。     

对硒鼠皮层神经细胞生长发育及NSE IGFR表达的影响

目的 :研究硒对体外神经细胞生长发育的直接影响及可能的作用机制 .方法 :采用体外新生大鼠皮层神经细胞培养法观察微量元素硒对神经细胞生长发育及其相关蛋白NSE、IGFR表达的影响 .结果 :中、低浓度的硒 (0 0 6 2 5～ 0 5 0mg·L 1)在培养 3d开始能增加体外培养的神经细胞最长突起长度和细胞平均直径 (培养 3,5 ,7d对照组最长突起长度分别为 4 9,6 4 ,6 4 μm ,加硒各组最小值分别为 5 9,78,76 μm ,对照组平均直径分别为 19,19,2 1μm ,加硒各组平均值分别为2 6 ,2 5 ,2 6 μm ,P <0 0 5 ) ,也能促进体外培养的神经细胞表达NSE蛋白 (对照组平均秩次为 14 1,实验各组最低为 2 1 4 ,P <0 0 5 ) ,也能促进体外培养的神经细胞IGFR蛋白的表达(对照组平均秩次为 16 6 ,实验各组最低为 2 1 9,P <0 0 5 ) ;高浓度的硒 (0 75～ 1 0mg·L 1)对培养细胞有明显的细胞毒性作用 ,可致细胞死亡 .结论 :硒可能是通过促进、增强NSE ,IGFR蛋白的表达 ,进而直接作用于体外培养的神经细胞 ,促进神经细胞的生长发育与分化     

预吸氧对大鼠脑皮质神经元损伤的影响

目的：观察不同浓度预吸氧、缺氧和复氧对大鼠脑皮质神经元损伤的影响。方法：72只成年雄性Wistar大鼠随机分为A、B、C 3组,每组又分为4个亚组。AⅠ-AⅣ（预吸氧）亚组分别吸入21%、50%、75%和95%氧30min;BⅠ-BⅣ（预吸氧-缺氧）亚组按A组方法处理后再吸入5%氧20min;CⅠ-CⅣ（预吸氧-缺氧-复氧）亚组按B组方法处理后,再吸入98%氧20min。取各组大鼠大脑皮质,测定乳酸（LA）、丙二醛（MDA）、氧自由基（OFR）、总抗氧化能力（T-AOC）、总超氧化物歧化酶（T-SOD）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）和氨基酸的含量或活力。用免疫组化法检测诱导型一氧化氮合酶（iNOS）。在光镜下观察神经元形态学改变。结果：AⅠ、AⅡ亚组神经元无明显改变,AⅢ、AⅣ亚组神经元轻度肿胀。B组神经元肿胀明显,以BⅢ、BⅣ亚组较为严重。C组神经元胞核固缩,核仁缩小、消失,其中以CⅡ亚组最轻,CⅢ、CⅣ亚组最重,甚至可见核裂解、消失、只残余细胞轮廓的鬼影细胞。与AⅠ亚组相比,AⅢ-AⅣ亚组OFR、iNOS和LA增加（P〈0.05）,提示这三种损伤因子参与了脑损伤;T-AOC增加（P〈0.05）,可能是由于损伤因子引起了某些抗氧化因子的反馈性增加;T-SOD降低（P〈0.05）,可能与其消耗增加有关。CⅠ-CⅢ亚组的OFR和CⅠ、CⅣ亚组的iNOS以及CⅡ、CⅣ亚组的LA高于A组中各对应亚组（P〈0.05）,提示复氧性脑损伤可能与这三种因子的增加有关。结论：75%以上浓度预吸氧可引起大鼠轻微脑损伤,并使随后发生的缺氧复氧性脑损伤加重。50%浓度预吸氧不引起大鼠脑损伤,并可使随后发生的缺氧复氧性脑损伤减轻。     

刺五加皂苷对体外培养大鼠脊髓运动神经元缺氧损伤的保护作用

目的:观察刺五加皂苷(acanthopanax senticosus saponins, ASS)对脊髓运动神经元缺氧损伤有无保护作用,并探讨其可能机制.方法:对胚鼠运动神经元进行原代分离培养,免疫组化鉴定后建立缺氧诱导的神经元凋亡模型.取运动神经元培养在24孔板中,每组10孔,分为4组:对照组,无缺氧损伤;缺氧损伤组;ASS保护组,缺氧前24 h加入50 μg/ml的ASS;神经胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)保护组,缺氧前24 h加入0.1 μg/ml的GDNF.倒置显微镜及电镜下观察细胞形态学变化;MTT法测定神经元细胞活性;检测细胞外液LDH释放量来观察ASS对神经元细胞膜稳定性的影响.提取细胞匀浆液,Western印迹法检测分析ASS对缺氧的运动神经元HIF-1α表达的影响.结果:形态学观察显示ASS、GDNF保护组神经元缺氧损伤较缺氧损伤组明显减轻.ASS保护组神经元的细胞活性(0.21±0.028)比缺氧损伤组(0.15±0.012)高(P<0.05),而LDH的释放量(28.6±1.309)比缺氧损伤组(40.7± 1.885)低(P<0.01);缺氧损伤组的神经元HIF-1α的相对表达量(0.72±0.027)比对照组(0.16±0.003)高(P<0.01),但ASS保护组HIF-1α的表达(1.15±0.016)最高(P<0.01).ASS对大鼠脊髓运动神经元缺氧损伤的保护作用与GDNF相仿.结论:ASS可以提高体外缺氧损伤的运动神经元的细胞活性,对细胞的缺氧损伤有明显的保护作用,其保护作用的发挥,可能与增强细胞膜的稳定性及提高细胞HIF-1α的表达有关.     

兔骨髓间质干细胞的体外分离、培养及活性鉴定

目的：建立一种体外分离培养自体兔骨髓间质干细胞（ Ｍ ａｒｒｏｗ Ｓｔｒｏｍ ａｌ Ｃｅｌｌｓ， Ｍ Ｓ Ｃｓ）的方法。方法：抽取兔骨髓液３～５ ｍ ｌ，经密度梯度离心得骨髓单个核细胞，以１６×１０４／ｃｍ ２ 细胞浓度培养，１２～１４ ｄ 后得到贴壁生长的单层细胞，随后进入传代培养，每传一代约 ５～７ ｄ。结果：原代培养的、以及传代后培养的细胞均为贴壁生长的、均匀一致的纺锤形细胞。两种细胞经体外特殊环境诱导后均可转化为骨髓网状间质细胞和成骨细胞。结论：该细胞经体外长期培养后仍具有多潜能转化活性，确系骨髓间质干细胞。为该细胞的广泛应用奠定基础。     

不同浓度臭氧对脊髓神经元的影响

目的 观察臭氧(O3)对体外培养脊髓神经元(SCN)的影响,为临床合理应用O3提供实验依据.方法 体外培养SCN随机分为4组,行NSE、Bcl-2、Bax染色计数阳性细胞率,并在倒置相差显微镜下观察细胞形态学变化.结果 随O3浓度增加,神经元胞体皱缩或肿胀,突起变短断裂成串珠状,部分细胞破裂消失.Ⅲ组、Ⅳ组NSE免疫组化染色、免疫荧光阳性细胞率低于Ⅰ组,Ⅱ组、Ⅲ组、Ⅳ组Bcl-2阳性细胞率低于Ⅰ组,Ⅱ组、Ⅲ组Bax阳性细胞率高于Ⅰ组.结论 低浓度O3引起SCN凋亡,高浓度引起SCN坏死.