腺病毒介导的热休克蛋白70对脑缺血缺氧大鼠保护作用的研究

热休克蛋白(HSP)是生命体在高温、发热、缺血、缺氧、病毒感染以及炎症等不良环境因素作用下所产生的一组蛋白质,能保护机体或细胞不受或少受伤害,这一反应过程称为热休克反应[J].研究证明,采用基因工程技术诱导HSP70高效表达对心、肺、肠等器官的损伤有保护作用[2-4].本课题组前期成功构建了携带HSP70编码基因的重组腺病毒表达载体,并在体外研究中观察到其对神经细胞的缺血缺氧损伤具有保护作用[5].在此基础上,本研究中将重组腺病毒载体通过尾静脉注入脑缺血缺氧大鼠体内,观察重组腺病毒介导的外源性HSP70表达对脑缺血缺氧大鼠的保护效应,有望为脑缺血缺氧的防治提供可行性的基因治疗途径.     

HSP70基因转染对缺氧-再复氧肠上皮细胞生长能力影响的研究

目的 :研究重组腺病毒介导的热休克蛋白 70转染对缺氧再复氧损伤后肠上皮细胞生长能力的影响。方法 :将重组含人全长 HSP70基因的腺病毒转染体外培养的肠上皮细胞株 IEC 6 ,检测转染细胞 HSP70的 m RNA表达水平。 IEC 6细胞经缺氧再复氧处理后 ,对未转染组 ,转染 2 4 h、4 8h及 72 h组细胞的细胞活力、生长曲线、增殖能力进行检测分析。结果 :腺病毒转染组细胞 HSP70 m RNA表达呈阳性。经缺氧再复氧处理后 ,IEC 6转染细胞活力较未转染组活力明显增强 (P<0 .0 1) ,生长能力提高 (P<0 .0 5 ) ,分裂指数增高(P<0 .0 5 )。结论 :重组腺病毒介导的 HSP70转染可增强肠上皮细胞生长及增殖能力 ,从而保护其抵抗缺氧再复氧损伤。     

构建人热休克蛋白70基因重组腺病毒载体及鉴定

背景:腺病毒载体作为低毒高效的基因载体己被广泛应用,但是人热休克蛋白70基因腺病毒载体较为少见.目的:构建重组人热休克蛋白70基因的腺病毒载体,鉴定外源基因在真核细胞中的良好表达.方法:采用AdMax腺病毒系统将外源基因人热休克蛋白70基因重组入腺病毒载体中,转染人胚肾293细胞并重组包装出毒,检测外源基因的表达和病毒滴度.结果与结论:观察转染后的人胚肾293细胞出现明显细胞病变效应后,收获并纯化重组病毒;荧光显微镜观察绿色荧光蛋白表达情况良好,Western blot检测人热休克蛋白70蛋白表达良好,收获病毒的滴度为1×1011 efu/mL,证明实验己成功构建携带人热休克蛋白70基因的重组腺病毒载体.     

热休克蛋白70在大鼠黑质多巴胺神经元损伤中的表达

目的 :探讨热休克蛋白 70 (HSP70 )在大鼠黑质多巴胺 (DA)神经元损伤中的表达以及在帕金森病 (PD)诊断中的意义。方法 :将 48只大鼠随机分为黑质DA神经元损毁组 (PD组 )和对照组各 2 4只。PD组注射 6 羟多巴胺 (6 OHDA)损毁大鼠黑质DA神经元 ,对照组仅注射 6 OHDA溶媒。于注射后 1、7、14及 2 1d采用免疫组织化学、尼氏染色、电镜手段动态观察HSP70在损毁的DA神经元中的表达以及DA神经元形态学变化。结果 :在 6 O HDA损毁黑质 1～ 2 1d ,对照组黑质HSP70表达和尼氏细胞计数差异无显著性 (P >0 .0 5 )。PD组HSP70表达在 1d最高 ,7d锐减 ,14和 2 1d则逐渐减少 ,分别为 2 5 %、74%、87%及 88% ;尼氏细胞计数在 4个时间点分别减少1%、13%、35 %及 48% ;超微结构损伤程度呈进行性加重。结论 :PD渐进性发病具有其形态学基础 ,HSP70可作为DA神经元存活的指标和早期诊断PD的指标。     

热休克蛋白70与白血病

热休克蛋白(HSP)是机体在应激刺激下合成的一类蛋白，主要参与蛋白质折叠、跨膜转运，促进不稳定蛋白降解，保护细胞的生存和功能。HSP异常表达与肿瘤的发生、预后和耐药性密切相关。本文就HSP70与白血病的关系作一综述。     

热休克蛋白70与细胞保护

热休克蛋白70（HSP70）是生物体在不良环境因素作用下所产生的一组具有高度保守性的应激蛋白，目前认为HSP70具有多种功能，是一种非特异性细胞保护蛋白。HSP70对各脏器组织细胞均有一定保护作用，其机制主要有：（1）提高细胞对应激原的耐受性；（2）分子伴侣作用；（3）抗凋亡作用；（4）减轻过氧化及炎性损伤。     

热休克蛋白70在脑缺血损伤中的作用研究进展

热休克蛋白70(HSP 70)是生物体产生的一种有高度保守性的应激蛋白,可以增强细胞对损害的耐受程度,维持细胞的正常代谢功能,提高细胞的生存率.本文主要描述其在脑缺血损伤中的作用以及相关机制的研究进展.     

热休克蛋白70与心肌保护的研究进展

热休克蛋白70(HSP70)作为一种重要的应激蛋白,在抗心肌缺血中发挥着重要作用。近年来实施心肌保护方面的研究多注重于调动心脏内源性的保护机制,其中HSP70已成为新近较受重视的“内源性”保护途径之一。现就其特性及其在心血管疾病中的应用进展作一综述。     

热休克蛋白70与白血病

热休克蛋白(HSP)是机体在应激刺激下合成的一类蛋白,主要参与蛋白质折叠、跨膜转运,促进不稳定蛋白降解,保护细胞的生存和功能。HSP异常表达与肿瘤的发生、预后和耐药性密切相关。文就HSP70与白血病的关系作一综述。     

骨肉瘤细胞热休克蛋白70基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

目的从人的骨肉瘤细胞中钓取热休克蛋白70(HSP70)基因并在大肠杆菌中表达出热休克蛋白,为进行热休克蛋白的功能试验提供抗原。方法热休克人骨肉瘤细胞后,采用One-Step,RT-PCR方法从人骨肉瘤细胞中钓取HSP70基因,DNA测序正确的HSP70基因和表达载体pET28a连接后,构建成功了重组表达质粒pET28a-HSP70,并转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,用IPTG诱导蛋白表达后,进行SDS-PAGE及Westernblot鉴定。结果人骨肉瘤细胞HSP70基因的PCR产物约为1.9 kb,DNA序列测定结果证实,所获目的序列与文献报道的基本一致,仅有两个碱基的差异。构建的重组表达质粒pET28a-HSP70,能够在大肠杆菌中表达。结论从人骨肉瘤细胞中成功地钓取了HSP70基因并在大肠杆菌中表达出HSP70蛋白,为研究人骨肉瘤细胞HSP70的结构、功能与临床应用奠定了基础。     

高压氧对缺氧/复氧模型下大鼠骨髓间充质干细胞的影响及其相关机制

目的:探讨高压氧对缺氧/复氧模型下大鼠骨髓间充质干细胞的影响及其相关机制。方法:选取3—4周龄SD雄性大鼠,采用全骨髓贴壁法培养至P3代,随机分为正常组A(细胞置于常规培养箱内培养)、缺氧/复氧组B(置于95%N2、5%CO_2密闭培养箱中培养9h,复氧6h)、缺氧/复氧+高压氧组C(90%O_2,2.5ATA、90min)、缺氧/复氧+高压氧+YC-1组D,实验组其余时间处理和正常组相同。A、B、C、D组均于处理结束12h后行CCK-8比色法、流式细胞仪检测细胞存活率及凋亡率。Western blot检测HIF-1α、β-catenin、LEF-1蛋白表达水平。结果:(1)与A组相比,缺氧/复氧后B、C、D组细胞存活率明显降低,差异具有显著性意义(P0.05),给予高压氧后C组存活率比B组升高,D组存活率较C组降低(P0.05)。(2)实验组B、C相比,C组中HIF-1α、β-catenin、LEF-1蛋白表达水平升高(P0.05)。(3)实验组C、D组相比,给予YC-1阻断剂后HIF-1α、β-catenin、LEF-1蛋白表达减少(P0.05)。结论:高压氧能够提高缺氧环境下骨髓间充质干细胞存活率,其机制可能与调控HIF-1α介导的Wnt通路有关。     

高血压脑梗死与血浆热休克蛋白70抗体水平关系的研究

目的通过测定高血压脑梗死患者血浆热休克蛋白70（HSP70）抗体水平，探讨HSP70抗体与脑梗死损伤程度的关系及其在脑梗死发病机制中的作用。方法100例脑梗死患者经头颅CT或MRI确诊，其中男64例，女36例；高血压者67例，血压正常者33例。选100名社区居民作为对照组，其中男58名，女42名；高血压者35名，血压正常者65名。采用蛋白质免疫印迹-酶联免疫吸附法（Western blot—ELISA）测定血浆HSP70抗体，并进行Logistic回归分析。结果脑梗死组HSP70抗体阳性率明显高于对照组（69％比13％）；脑梗死组高血压者HSP70抗体阳性率明显高于血压正常者（57％比12％），对照组高血压者HSP70抗体阳性率亦高于血压正常者（11％比2％）。上述结果差异均有显著性（P均〈0．05）。结论HSP70抗体增多与高血压脑梗死发病相关，可作为高血压脑缺血时一种分子生物学诊断指标；HSP70抗体表达越强，脑梗死病情越严重。因此，HSP70抗体增高是反映脑组织损伤程度的标志。     

The diagnostic value of urine heat shock protein 70 and prostatic exosomal protein in chronic prostatitis

ObjectiveTo explore the diagnostic value of the levels of prostatic exosomal protein (PSEP) and heat shock protein 70 (HSP70) in the urine of patients with chronic prostatitis (CP).MethodUrine samples from 210 CP patients (70 cases of the USA National Institutes of Health Category II [NIH‐II], 70 NIH‐IIIa, and 70 NIH‐IIIb patients) and 70 control subjects were collected between May 2018 and February 2020. The levels of PSEP and HSP70 in urine were detected by enzyme‐linked immunosorbent assay. The differences in urine PSEP and HSP70 levels between the groups were analyzed, and receiver operating characteristic (ROC) curves were used to analyze the clinical value of PSEP and HSP70 in the diagnosis of CP.ResultsThe PSEP levels of CP patients were significantly higher than those of the control group (p < 0.001), but there was no difference in PSEP levels among CP subgroups. The level of HSP70 in the urine of the NIH‐II patients was significantly lower than the levels in the NIH‐IIIa and NIH‐IIIb subgroups and the control group, but there was no difference in HSP70 levels between the NIH‐IIIa and NIH‐IIIb subgroups and the control group. ROC curve analysis results showed that the area under the curve (AUC) of PSEP for the NIH‐II, NIH‐IIIa, and NIH‐IIIb patients was 0.751, 0.776, and 0.731, respectively. The AUC of HSP70 in NIH‐II patients was 0.784, and the AUC of combined detection of PSEP and HSP70 in NIH‐II patients was 0.858.ConclusionUrine PSEP can be used as a marker for the diagnosis of CP, but it cannot distinguish between the various types of CP, and HSP70 can be used as a diagnostic index for NIH‐II classification.     

颅脑损伤患者血清热休克蛋白70水平的变化

目的探讨颅脑损伤患者不同时期血清中热休克蛋白70(Hsp70)水平的变化。方法用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测颅脑损伤患者伤后1~6 h、24~36 h、60~90 h血清Hsp70浓度并与其他创伤组及健康对照组进行比较。结果颅脑损伤患者1~6 h、24~36 h血清Hsp70浓度显著高于其他创伤组和健康对照组,60~90 h显著高于对照组。结论血清Hsp70浓度有可能作为颅脑损伤早期诊断的参考指标。     

热休克蛋白70与严重多发伤后早期继发性肝脏损害

目的 :探讨热休克蛋白 70 (HSP70 )在严重多发伤后肝脏继发性损害中的作用。方法 :成年雄性 Wistar大鼠 ,采用严重胸部撞击伤伴单侧股骨骨折多发伤模型。动态观察致伤后 2 4 h及用糖皮质激素受体阻断剂米非司酮后大鼠肝组织 HSP70、肝功能指标及致伤 2 4 h死亡率等变化。HSP70表达测定采用免疫印迹法 ,并进行计算机图像分析。结果 :伤后 HSP70在肝组织中表达伤后迅速增加 ,8h达到峰值 ,2 4 h仍维持在较高水平 ;但血清丙氨酸转氨酶 (AL T)、总胆红素 (TB)及白蛋白的改变无显著差异。使用糖皮质激素受体阻断剂米非司酮能使肝组织 HSP70表达明显增多 ;血清 AL T及 TB在伤后早期即有明显升高 (P均 <0 .0 1) ,白蛋白明显下降(P<0 .0 1) ;伤后 2 4 h动物死亡率明显增加 (P<0 .0 1)。结论 :HSP70可能参与了肝组织细胞抗损伤机制的启动 ,但 HSP70过高表达则可能对肝脏造成损害。 HSP70可作为创伤后肝损伤与抗损伤机制的一个重要指标。     

戊四氮致癫痫大鼠脑组织形态结构及热休克蛋白70表达的初步研究

目的：探讨癫痫的不同发作级别所造成的神经元损伤及热休克蛋白70（HSP70）的表达情况及其意义。方法：采用戊四氮致癫痫模型,随机分为生理盐水对照组和模型组,模型组按癫痫发作级别又分为Ⅰ、Ⅲ、Ⅴ级组。采用常规病理学染色观察各组海马区神经元的受损情况;免疫组织化学方法观察不同级别癫痫发作海马内HSP70表达的变化。结果：Ⅲ、Ⅴ级组与对照组和Ⅰ级组相比,海马结构内存在受损异常神经元,Ⅴ级组更明显（P〈0．05）。同时Ⅲ级组、Ⅴ级组海马各区的HSP70阳性细胞数亦逐渐增多（P〈0．05）。结论：戊四氮致癫痫模型中,随着发作级别的增加,海马结构内神经元损伤逐渐加重,HSP70的表达亦逐渐增加,提示海马结构HSP70的表达与癫痫发作严重程度有关。     

热休克蛋白70与慢性阻塞性肺疾病的关系

目的探讨热休克蛋白70(HSP70)与慢性阻塞性肺疾病(COPD)的关系。方法选取COPD患者130例,按照暴露情况分为吸烟COPD组100例(按肺功能分为轻、中、重度)、不吸烟COPD组30例;同时选取对照组60例,按暴露情况分为吸烟对照组30例、不吸烟对照组30例。采用Westernblot法检测各组HSP70表达。分析四组及不同程度的吸烟COPD患者与HSP70的关系。结果吸烟COPD组、不吸烟COPD组、吸烟对照组和不吸烟对照组的HSP70吸光度分别为:19.22±5.33、21.96±7.85、22.65±10.01和22.21±8.94,吸烟COPD组中外周血HSP70的表达明显低于不吸烟COPD组、吸烟对照组及不吸烟对照组,差异均有统计学意义(t分别=2.41、3.25、2.98,P均<0.05);重、中、轻度COPD组的HSP吸光度分别为:17.92±5.81、24.13±13.11和26.82±14.93,重度的COPD患者外周血HSP70的表达明显低于中度及轻度的COPD患者,中度COPD患者低于轻度的COPD患者,差异均有统计学意义(t分别=2.50、3.93、3.18,P均<0.05)。线性回归分析显示:HSP70与COPD的严重程度呈负相关(r=-0.57,P<0.05)。结论 HSP70与COPD的发生相关,且HSP70表达的高低与COPD疾病的严重程度呈负相关。     

抗热休克蛋白72多克隆抗体血清的制备和检测

目的 探讨在大肠杆菌中表达人热休克蛋白72（hHSP72）与组氨酸（His）的融合蛋白并制备其抗体血清的方法。方法 将hHSP72片断插入His融合表达载体pPROEX-1^TM，重组载体酶切鉴定后，在大肠杆菌中经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达获得His-hHSP72融合蛋白。采用纯化后的HSP72免疫新西兰白兔，制备抗血清；蛋白质免疫印迹法（Western blot）检测重组抗原的免疫活性。结果 重组质粒酶切鉴定结果表明，hHSP72基因已正确插入到pPROEX-1^TM中，经IPTG诱导后，表达出分子质量约为73ku的蛋白，获得了效价为1：100000的多克隆抗体。Western blot检测证明，所制备的多克隆抗体可以与hHSP72特异性结合，其效价高于市售的单克隆抗体。结论 用hHSP72片断在大肠杆菌中能成功表达，并能制备得到多克隆抗体；这种多克隆抗体是一种新的高特异性和高灵敏度的试剂。     

早期谷氨酰胺强化肠外营养对危重病患者体内热休克蛋白70的影响

目的探讨早期给予谷氨酰胺(Gln)强化肠外营养对危重病患者脏器功能的影响及其与预后的关系。方法选择本院急诊及神经外科重症加强治疗病房(NICU)收治的44例危重病患者,按随机原则分为常规治疗组和Gln治疗组,每组22例。两组患者均行肠内、外营养,同时Gln治疗组静脉注射Gln 0.4g·kg~(-1)·d~(-1),连用7d;观察两组患者治疗前后体内热休克蛋白70(HSP70)、Gln含量,机械通气时间、入住ICU时间及肝、肾功能不全的发生率。结果常规治疗组和Gln治疗组治疗前Gln、HSP70水平差异无显著性(P均>0.05);常规治疗组治疗后Gln、HSP70水平较治疗前稍有增加,但差异无显著性;而Gln治疗组治疗后Gln、HSP70水平均较治疗前显著升高,差异有显著性(P均<0.01),且两组治疗后Gln、HSP70水平比较差异均有显著性(P均<0.01)。Gln治疗组体内Gln浓度和HSP70含量的变化存在显著正相关(r=0.650 5,P=0.001)。两组机械通气时间和肝功能不全的发生率差异有显著性(P均<0.05),入住ICU的时间和肾功能不全的发生率则差异无显著性(P均>0.05)。结论给危重病患者早期肠外补充Gln能有效改善患者的预后,降低脏器功能不全的发生率,其机制可能与提高患者体内HSP70水平有关。