肝癌患者p16基因甲基化与DNMTs表达相关性分析

目的:研究p16基因启动子区域异常甲基化所导致的基因表达异常在肝癌形成过程中的作用,探讨p16基因甲基化与DNMTs(DNMT1、DNMT2、DNMT3A和DNMT3B)表达之间的相关性。方法:检测肝癌患者癌组织、癌旁组织和肝硬化组织中p16基因的异常甲基化状态及p16、DNMTs基因mRNA的表达水平;采用甲基化特异性PCR技术检测甲基化状态,荧光定量技术检测mRNA的表达。结果:p16基因在肝癌组织、肝硬化组织和癌旁组织中的甲基化率分别为70.5%(31/44)、37.1%(13/35)和9.1%(4/44),肝癌组织和肝硬化组织中的甲基化改变与癌旁组织比较差异有统计学意义,P<0.01。31例甲基化阳性组织中17例p16基因表达降低或缺失,13例甲基化阴性组织中2例基因表达降低或缺失,甲基化阳性与阴性的p16基因表达水平存在明显差异。癌组织和肝硬化组织中4种DNMT mRNA水平均高于相应癌旁组织。其中DNMT1、DNMT3A和DNMT3BmRNA的表达水平差异有统计学意义,DNMT1:P值分别为0.009和0.020;DNMT3A:P值分别为0.005和0.010;DNMT3B:P值分别为0.039和0.036。DNMT2mRNA的表达水平虽然高于相应癌旁组织,但差异无统计学意义,P值分别为0.120和0.350。DNMT1、DNMT 3A和DNMT3B的表达与p16甲基化有相关性,P值分别为0.013、0.025和0.041。结论:p16基因甲基化是肝癌的早期、频发事件,其改变是其基因表达下降甚至失活的重要原因。DNMTs活性的改变可能促进p16基因的异常甲基化。     

乳腺癌组织中DNA甲基化转移酶与多药耐药基因ABCG2表达的关系

背景与目的:研究乳腺癌组织中DNA甲基化转移酶(DNA methyltransferase,DNMT)与多药耐药基因ABCG2表达的关系,以进一步探讨ABCG2表达的表观遗传学机制.材料与方法:用实时定量RT-PCR法检测22例乳腺癌及其匹配的癌旁组织中DNMT1、DNMT3A、DNMT3B和ABCG2的表达.并采用Spearman等级相关分析DNMTs与ABCG2基因表达的相关性.结果:乳腺癌组织中ABCG2、DNMT1、DNMT3A、DNMT3B mRNA表达量显著高于癌旁组织(P<0.01),并且DNMT3B表达量显著高于DNMT1和DNMT3A(P<0.01),与ABCG2基因表达呈负相关性(r=-0.664,P<0.01). 结论:乳腺癌组织中DNMT3B可能参与了ABCG2基因的表达调控,这为寻找药物靶点并逆转其介导的药物耐受提供了新的科学依据.     

DNA甲基转移酶3A基因与肿瘤发生的分子调控机制研究进展

DNA甲基化是最重要的表观遗传修饰之一,在基因表达、基因组印记、X染色体失活和肿瘤发生的调节中发挥关键作用。DNA甲基转移酶3A（DNMT3A）被称为从头甲基转移酶,负责在胚胎发生期间建立DNA甲基化模式并在生殖细胞发育期间建立基因组印记,其异常表达与肿瘤的发生发展密切相关。本文就DNA甲基转移酶3A基因与肿瘤发生的分子调控机制作一综述。     

正反义人DNA(5-胞嘧啶)甲基转移酶基因片段真核表达载体的构建

DNA(5-胞嘧啶)甲基转移酶[DNA (Cytosine-5)-methyltransferase,DNMT]以组织特异的方式识别、催化和调节半甲基化的DNA子链胞嘧啶残基,并维持DNA甲基化模式[1].异常的DNA甲基化方式与人的某些肿瘤和发育异常有关[2～6].为探讨反义DNA片段对肝癌细胞株的阻抑作用,并阐明与恶性表型有关的癌相关基因转录和DNA甲基化水平的关系,我们采用PCR克隆技术进行构建DNMT正、反义基因片段真核表达载体的研究,现介绍如下.     

MicroRNA与DNA甲基化相互调节机制在肝细胞癌中的研究进展

肝细胞癌是原发性肝癌的主要类型,也是人类恶性程度较高的肿瘤之一,其发病机制至今尚未完全阐明.表观遗传学机制在肿瘤的发生、发展中起重要作用,DNA甲基化和微小RNA (microRNA,miRNA)的调控机制属于表观遗传学的研究范畴.研究表明,DNA甲基化及miRNA在肝细胞癌的形成中分别或协同发挥着重要作用,miRNA是一类在转录后水平调节基因表达的非编码短链RNA.研究表明,DNA甲基化和组蛋白修饰不仅可以调节蛋白编码基因的表达,而且可以调节miRNA的表达.在肝细胞癌中,一些异常表达的miRNAs(如miR-125b、miR-1-1、miR-124、miR-203和miR-191)是通过表观遗传学机制调控的.另外,在肝细胞癌中还发现了一类miRNAs通过调控表观遗传学通路中关键分子来改变整个基因组的表观遗传学状态.本文就DNA甲基化和miRNA之间复杂的相互调节机制在肝细胞癌发生和发展中的研究进展进行综述.     

肝细胞癌组织中β-Catenin的表达与第三外显子突变的关系

背景与目的:广西南部是肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)高发地区,也是粮食受黄曲霉毒素B1(aflatoxin B1,AFB1)污染较重的地区.β-Catenin 的异常表达与多种肿瘤有关.而AFB1是诱发HCC的重要因素.本研究旨在探讨AFB1高暴露地区HCC患者癌组织中β-Catenin基因突变及表达情况.方法:用基因直接测序、RT-PCR、免疫组化和Western blot等方法,检测52例来自广西南部AFB高暴露地区HCC患者癌、癌旁组织和18例非肝癌肝组织中β-Catenin基因的表达.结果:癌组织中未见β-Catenin基因第三外显子的突变.β-Catenin mRNA 在癌、癌旁和正常肝组织中的表达分别为0.42±0.24、0.20±0.16和0.23±0.12,癌组织中的表达显著高于癌旁组织或正常肝组织(P＜0.01);免疫组化染色癌组织中阳性率为55.8%(29/52),显著高于癌旁组织[36.5%(19/52)](P＜0.05).β-Catenin蛋白表达与肝外转移、术后复发、门静脉癌栓和临床分期有关(P＜0.05),而mRNA的表达与上述临床参数均无明显关系(P＞0.05).结论:β-Catenin在HCC组织中高表达,但其异常表达不是由基因第三外显子上GSK-3β磷酸化位点的突变引起.     

黄曲霉毒素诱导大鼠肝细胞癌变中JNK1的变化

目的 观察黄曲霉毒素诱导大鼠肝细胞癌变过程中JNK的变化,进一步了解JNK1信号转导通路在肝癌（Hepatocellular carcinoma,HCC）发生发展过程中的作用。方法 取雄性4周龄SD大鼠77只为研究对象,随机分为实验组66只,空白对照组11只。实验组应用黄曲霉毒素B1（Aflatoxin B1,AFB1）诱发大鼠肝细胞癌,空白对照组大鼠,按正常饲养方法饲养,两组大鼠分别于实验第12、20、36、46周进行肝组织活检,58周时处死取肝。所有标本均进行常规病理组织学检测,并应用RT-PCR、Western blot分别检测癌组织及肝组织JNK1 mRNA及JNK1活性蛋白质水平。结果 实验组大鼠46周时发现首例肝癌,存活至实验结束并发生肝癌的大鼠共24只,6只无任何肿瘤发生,空白对照组大鼠11例均未发生肿瘤。实验组及空白对照组大鼠均可检出不同程度的JNK1 mRNA表达,其中肝癌组织较癌旁组织及正常肝组织明显增强（P<0.05）。Western blot结果显示,实验组中无癌大鼠20周、出癌大鼠36周始即有不同程度p-JNK1活性表达,并随着AFB1作用时间延长阳性率明显增加,且无癌大鼠p-JNK1检出的时间较出癌大鼠早;半定量分析表明无癌大鼠肝组织p-JNK1活性较同期出癌大鼠肝组织及肝癌组织增强,在实验第46周及58周时尤其明显（P<0.01）。结论 在AFB1诱导肝细胞癌的过程中JNK信号通路处于激活状态,JNK信号通路的激活可能起到抑制HCC的作用,如JNK信号通路激活时间较早、强度较大可阻止HCC的发生。     

DNA甲基转移酶在肿瘤发病机制中的研究进展北大核心CSCD

0引言 与经典的遗传学不同,表观遗传学是指在DNA序列未发生异常改变的前提下,基因的功能发生了叮遗传的信息变化,并最终导致了表型的改变。DNA甲基化是表观遗传学修饰的主要形式之一,而DNA甲基转移酶（DNA methyltransferase,DNMT）则是DNA甲基化的主要调节酶。本文就DNMT在肿瘤中的研究进展作一综述。     

DNA甲基转移酶1与妇科恶性肿瘤

DNA甲基转移酶1（DNMTl）作为DNA甲基转移酶（DNMT）家族的主要成员,对维持和调节肿瘤细胞全基因组和局部区域甲基化起着核心作用。DNMTl在妇科恶性肿瘤中高表达,引起基因DNA的甲基化异常,特别是抑癌基因的高甲基化,继而造成相关基因表达沉默,导致细胞的恶性生长。     

DNA甲基转移酶基因在MDS患者中的表达及其临床意义

研究DNA甲基转移酶（DNA methyltransferase,DNMT）基因在骨髓增生异常综合征（MDS）患者中的表达及其与抑癌基因p15INK4B甲基化状态的相关性,并进一步探讨其与临床预后的关系。方法:采用SYBR Green I实时定量逆转录聚合酶链反应（Real-time RT-PCR）方法对48例初治MDS患者和20例正常人骨髓进行DNMT1、DNMT3A、DNMT3B mRNA水平检测;采用甲基化特异性PCR（MSP-PCR）方法检测48例初治MDS患者和20例正常人p15INK4B基因的甲基化状态。结果:低危组MDS患者3种DNMTs mRNA与正常对照组相比,表达水平差异均无统计学意义（P>0.05）;高危组MDS患者3种DNMTs mRNA表达显著高于低危组和正常对照组（P均<0.01）;MDS患者DNMTs mRNA表达水平与p15INK4B基因甲基化程度呈正相关。12例高危MDS患者接受了地西他滨治疗,另外15例高危MDS患者接受了IA/DA联合化疗,地西他滨组疗效与联合化疗组比较差异无统计学意义（P>0.05）。结论:DNMTs基因的异常高表达,导致细胞周期调控相关的p15INK4B等抑癌基因启动子CpG岛过甲基化失活,在MDS患者由低危向高危转变乃至进展为急性髓系白血病（AML）过程中,起着至关重要的作用,DNMTs mRNA表达水平可以作为一种判断MDS预后的指标。      

DNA甲基转移酶3B4过表达与肾透明细胞癌的关系

  目的  探究DNA甲基转移酶（DNA methyltransferase,DNMT）在肾透明细胞癌（clear cell renal cell carcinoma,ccRCC）发生发展中的机制。  方法  收集2012年1月至12月15例内蒙古科技大学包头医学院第一附属医院术前均未结予放化疗并行肾癌根治术患者的组织标本,均经病理证实为ccRCC。应用实时定量PCR、蛋白印迹、联合亚硫酸氢钠限制酶分析法和甲基化特异PCR等方法检测ccRCC组织中DNMT的mRNA表达,及ccRCC组织中整体甲基化（global methylation）水平和抑癌基因RASSF1A甲基化和表达水平。  结果  ccRCC组织中DNMT3B4的mRNA表达增加,同时其蛋白含量也相应增加。ccRCC患者癌组织中DNA重复序列Alu的甲基化水平0.106±0.04较癌旁组织中0.115±0.03低,差异具有统计学意义（P < 0.05）。而肿瘤抑制基因RASSF1A启动子区域发生高甲基化,其mRNA和蛋白的表达均降低。  结论  DNMT3B4基因过表达可能与染色体不稳定以及RASSF1A基因低表达有关,在ccRCC的发生发展中可能扮演着重要的角色。      

DNA甲基化在肝细胞癌中的研究进展

近来大量研究表明,DNA甲基化异常在肿瘤的发生发展中起着重要的作用。目前针对肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）中DNA异常甲基化的研究逐渐由基础实验拓展到临床应用领域,其具体内容涉及HCC的早期诊断、病情监测和预后评估以及针对基因异常甲基化的治疗等。     

利用甲基化芯片及转录组测序方法筛选哈萨克族食管癌DNA异常甲基化谱

目的： 筛选新疆哈萨克族食管鳞癌DNA异常甲基化谱,为深入研究食管癌的发生机制提供线索。方法：采用Illumina Human Methylation 450K甲基化芯片,对6例哈萨克族食管癌组织及其癌旁正常组织进行全基因组甲基化检测,筛选DNA异常甲基化基因;利用Hiseq2000测序平台,对2例哈萨克族食管癌组织及其癌旁正常组织进行RNA水平检测,建立mRNA文库,并与DNA 甲基化结果进行关联分析,筛选DNA异常甲基化谱,同时对这些基因进行生物信息学分析。结果：食管癌组织中含高甲基化基因227个,低甲基化基因6个;癌组织mRNA表达量在0.031 2～8 192,癌旁正常组织在0.031 2～1 024。DNA异常甲基化基因与表达谱关联分析,呈负相关关系(即DNA高甲基化、mRNA低表达,或DNA低甲基化、mRNA高表达)的启动子区域基因共20个,包括启动子区域CpG岛高甲基化且表达下调10个位点、10个基因,低甲基化且表达上调11个位点、10个基因。生物信息学分析表明这些基因参与甲酰四氢叶酸分解代谢及调控细胞增殖等生物学过程,涉及一碳代谢通路及诱导细胞凋亡通路等。结论：初步建立了新疆哈萨克族食管癌DNA 异常甲基化谱,为哈萨克族食管癌的发病机制研究提供了新的思路。     

DNA甲基转移酶在肿瘤形成中的研究进展

DNA甲基化是基因表达调控中重要的调节方式之一,可通过影响癌基因和抑癌基因的表达以及基因组的稳定性而参与肿瘤形成。DNA甲基化是由DNA甲基转移酶(DNMT)催化发生并维持的,并认为DNMT活性增高是肿瘤细胞具有特征的早期分子改变,因而受到越来越多的学者关注。     

基于RNA-seq分析黄曲霉毒素B1诱导大鼠肝癌的可变剪接事件

目的 探讨黄曲霉毒素B1（aflatoxin B1，AFB1）诱发大鼠致肝癌的可能机制及其阻断肝癌分子机制的可变剪接事件。方法 构建AFB1诱发大鼠致肝癌模型，提取大鼠肝组织总RNA，采用Illumina HiSeq 2000测序平台对大鼠肝组织进行RNA-seq测序，以大鼠基因组数据为参考，纳入目前已知的具有多种可变剪接存在的332个参考基因，鉴定和分析大鼠基因组的可变剪接基因，并对具有差异表达的可变剪接基因进行GO分类的生物过程（biological process，BP）富集分析。结果 RNA-seq测序结果显示，未成癌组与对照组有18个基因的可变剪接模式存在较大差异，差异基因主要富集在刺激反应功能上；成癌组与对照组有37个基因的可变剪接模式存在差异，差异基因主要富集在刺激反应和细胞增殖调节功能上；成癌组与未成癌组有32个基因的可变剪接模式存在明显差异，差异基因主要富集在细胞增殖调节功能上。成癌组发现7个与细胞增殖调节相关基因的可变剪接模式发生异常，其中成癌组、未成癌组和对照组IgfI、Carm1、Tcfe2a基因的可变剪接模式存在显著差异。结论 IgfI、Carm1、Tcfe2a基因的可变剪接改变可能在AFB1诱导大鼠肝癌形成过程中发挥重要作用。     

DNA甲基转移酶在肿瘤形成中的研究进展

DNA甲基化是基因表达调控中重要的调节方式之一，可通过影响癌基因和抑癌基因的表达以及基因组的稳定性而参与肿瘤形成。DNA甲基化是由DNA甲基转移酶（DNMT）催化发生并维持的，并认为DNMT活性增高是肿瘤细胞具有特征的早期分子改变，因而受到越来越多的学者关注。     

雷公藤内酯醇对急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞系APC基因去甲基化

 目的　以抑癌基因即腺瘤性结肠息肉病相关基因（APC）存在异常甲基化的急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞为研究对象,探究雷公藤内酯醇（TPL）对APC基因的影响,并对其机制进行初步探讨。方法　运用四甲基偶氮唑盐（MTT）法等检测TPL对Jurkat细胞株增生的影响。巢式甲基特异性PCR（n-MSP）检测TPL对Jurkat细胞APC基因甲基化模式的影响。半定量RT-PCR检测经TPL作用后Jurkat细胞APC基因、甲基转移酶DNMT3A、DNMT3B mRNA的表达。Western blotting检测TPL作用后APC蛋白的表达。结果　TPL对Jurkat细胞生长有明显的抑制作用,并有时间及剂量依赖性,48 h IC50为19.7 ng／ml;TPL可逆转APC基因的高甲基化;TPL能够诱导Jurkat细胞APC基因mRNA的表达,具剂量依赖性;TPL能够诱导Jurkat细胞APC蛋白重新表达,亦有剂量依赖性。结论　小剂量TPL可明显抑制Jurkat细胞的增生,其可能机制为通过诱导Jurkat细胞中异常甲基化的APC基因去甲基化,使APC基因恢复表达。     

叶酸对1,3-丁二烯诱发的小鼠DNA低甲基化和染色体损伤的影响

目的：探讨叶酸（FA）对1,3-丁二烯（BD）诱发的小鼠遗传损伤和DNA甲基化改变的保护作用。方法：雄性昆明小鼠喂养相应饲料3周建立叶酸正常组（FA-C）、叶酸缺乏组（FA-D）以及叶酸补充组（FA-S）动物模型,每组小鼠18只,再随机分为对照组、BD低剂量和高剂量染毒组（0、13.82、1 382.14 mg/m³）,染毒组小鼠每天吸入染毒6 h,每周5 d,连续染毒2周。采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测小鼠血清中FA浓度和肝组织基因组DNA总体甲基化水平,荧光定量PCR检测DNA甲基转移酶DNMT1和DNMT3a mRNA的表达,胞质分裂阻滞微核试验分析外周血淋巴细胞的染色体损伤。结果：动物喂养3周后,与FA-C组相比,FA-D组血清FA浓度显著降低,FA-S组显著升高。在相同FA处理条件下,随BD染毒剂量升高,小鼠肝组织基因组DNA甲基化水平及甲基转移酶表达出现降低趋势,微核、核质桥及核芽突比率显著升高。在相同BD染毒条件下,与FA-C组比较,FA-D组的DNA甲基化水平和DNMT1、DNMT3a的mRNA表达出现下降趋势,而微核率等染色体损伤出现升高趋势;相反,FA-S组的DNA甲基化水平及DNMT1、DNMT3a的mRNA表达出现升高趋势,染色体损伤出现降低趋势,尤其在高剂量BD染毒条件下,叶酸补充对上述指标的影响均存在显著性差异（P < 0.05或0.01）。结论：BD可诱导小鼠的DNA低甲基化改变及染色体损伤,叶酸缺乏可加重BD所致DNA低甲基化和遗传损伤,而补充叶酸则对BD诱导的甲基化改变和遗传损伤具有保护效应。     

DNA低甲基化及其与肿瘤关系的研究进展

DNA甲基化是DNA的一种表观遗传学修饰方式,是基因表达调控的一种重要机制,现已用于研究非遗传毒物的致癌机制。在人类肿瘤中存在的DNA甲基化异常既包括局部的DNA甲基化水平降低或升高,也包括全基因组的DNA甲基化水平降低,而基因组DNA甲基化水平降低是较早被发现的DNA甲基化改变形式之一。本文简要综述DNA低甲基化及其与肿瘤关系的研究进展。     

5-氮-2'-脱氧胞嘧啶对U266细胞系P16基因去甲基化作用研究

  目的 探讨5-氮-2'-脱氧胞嘧啶（5-Aza-CdR）诱导骨髓瘤细胞系U266 p16基因 DNA 5′CpG岛去甲基化作用及对U266细胞增生的影响。方法 采用巢式甲基特异性PCR法（n-MSP）、DNA序列分析、RT-PCR、细胞生长曲线、流式细胞仪DNA含量分析法检测5-Aza-CdR对U266细胞 p16基因去甲基化作用及其对U266细胞的生长、增生及细胞周期的影响。结果 （1）5-Aza-CdR能够逆转U266细胞 p16 基因异常甲基化；（2）5-Aza-CdR能激活p16基因沉默的再转录；（3）5-Aza-CdR能下调U266细胞甲基转移酶DNMT1、DNMT3A、DNMT3B 的表达并呈浓度依赖性；（4）5-Aza-CdR作用的U266细胞被阻滞于G0 ~ G1期。结论 5-Aza-CdR可能通过抑制甲基转移酶直接对p16 基因去甲基化，逆转U266 细胞DNA 异常甲基化，并有效地激活因高甲基化所致p16基因沉默的再转录