儿童急性白血病微小残留病检测

目的 研究微小残留病(MRD)的检测在儿童急性白血病中的临床意义.方法 对已诊断并坚持治疗的40例急性白血病患儿采集骨髓标本,应用单克隆抗体直接免疫荧光标记法和三色流式细胞术(FCM)多参数分析技术的方法,进行MRD的检测并进行随访,随访期为1～5年.结果 40例急性白血病患儿中,已停药25例,维持治疗15例.停药的25例患儿中,诱导缓解结束时有18例MRD阴性,7例由阴性转阳性.15例维持治疗患儿中,缓解时至今MRD阴性者为8例,缓解时阳性者为7例.结论 连续监测MRD对儿童急性白血病预测预后及指导个体化治疗有重要的意义.     

急性淋巴细胞白血病微小残留病与中枢神经系统白血病的关系

目的探讨急性淋巴细胞白血病患儿外周血和脑脊液微小残留病（MRD）与中枢神经系统自血病（CNSL）的关系。方法对2003年1月～2007年8月在我院确诊的50例急性淋巴细胞白血病患儿采集外周血和脑脊液,利用单克隆抗体直接免疫荧光标记法和流式细胞仪多参数分析技术进行微小残留病的检测,并动态随访。结果50例患儿中发生CNSL的共有12例,12例中脑脊液MRD和脑脊液形态学同时阳性仅4例。其中初诊时伴CNSL者2例,脑脊液微小白血病（MRD）和脑脊液形态学检查均阳性。缓解期复发的10例CNSL中,脑脊液形态学检查阳性的仅2例;10例患儿外周血和脑脊液MRD同时阳性4例。缓解期CNSL复发的10例患儿中,完全诱导缓解第33天测血MRD和脑脊液MRD均阳性,但脑脊液细胞数正常,脑脊液涂片显示幼稚细胞阴性,临床不符合CNSL的诊断,故未按CNSL治疗,分别于6个月内出现CNSL复发1例、6～18月有2例、18月后有2例复发,复发率为50％（5／10）。结论流式细胞术检测脑脊液MRD较脑脊液形态学更加敏感,可较早预知CNSL状况,以提前实行针对性治疗,可早期阻止CNSL的发生。     

急性髓系白血病微小残留病检测的临床意义

目的探讨微小残留病（MRD）检测在急性髓系白血病预测复发及指导治疗的临床意义。方法选择32例初治急性髓系白血病（除外M3）患者128份标本,利用多参数流式细胞术（FCM）进行微小残留病检测,CD45/SSC设门,选择2-4组四色抗体组合,从诱导化疗后第21天开始,每1-3个月监测一次。结果按照首次诱导治疗后第21天MRD水平将32例AML分为高（MRD〉1×10-2）、中（1×10-2〉MRD〉1×10-4）、低（MRD〈1×10-4）三组。高、中、低三组的2年复发率依次为83.3%、11.1%、0。其中MRD〉1×10-2组2年复发率最高,MRD〈1×10-4组预后好,两组的复发概率差异有统计学意义（P〈0.05）。形态学与MRD动态监测两年结果显示,其中26例缓解,6例复发。6例形态学复发者均在MRD持续阳性4-6个月出现。形态学完全缓解时MRD阳性组与阴性组的复发率有显著性差异（P〈0.05）。结论 MRD〉1×10-2高度提示复发,MRD阳性比形态学复发出现早,连续监测MRD对个体化治疗和预测复发有重要意义。     

Flt3／FL在急性白血病中的表达及其临床意义

急性白血病（AL）患者5年生存率较低，因为大多数常由于复发而死亡。目前认为微小残留病（MRD）是白血病治疗缓解后复发的最重要的原因。因此，研究一些特征性的分子标志物作为残留病变检测，以便在疾病的早期预测复发，及早加以治疗干预有重要意义。但目前尚缺乏合适的的MRD的检测指标。     

FLT3基因动态监测在急性髓系白血病治疗中的应用

微小残留病（Minute Residual Disease,MRD）是急性髓系白血病（Acute myeloid leukaemia,AML）复发和妨碍长期无病生存率的重要原因。本研究旨在探讨FLT3基因在AML发病中的作用及对微小残留病（MRD）检测的意义。应用PCR技术检测了125例AML患者在化疗与异基因造血干细胞移植（allo-HSCT）治疗前后FLT3基因的表达,并对FLT3基因阳性者进行了随访观察。结果表明：PCR检测FLT3基因的灵敏度为10-4;AML初诊患者中FLT3基因的阳性表达率为69.6%;完全缓解（CR）患者FLT3表达基因阳性表达率44.90%,FLT3转为阴性者占48.98%;FLT3表达无改变者占6.12%;复发者FLT3基因表达转为阳性,而未缓解者FLT3持续阳性,治疗前FLT3阳性AML患者完全缓解率低于FLT3基因表达阴性患者,两者有显著性差异（p〈0.05）。获得CR的FLT3阳性AML患者的复发率显著高于FLT3阴性患者（p〈0.05）。结论：FLT3基因表达与白血病发生有关,PCR动态检测AML患者治疗前后FLT3表达水平,可作为判断AML白血病预后和监测微量残留病的一项指标。     

动态监测微小残留病对B—ALL预后的临床意义

目的探讨微小残留病（MRD）监测在B急淋（B-ALL）复发预测及指导治疗中的临床意义。方法选择2008年1月到2012年7月32例初治急性B淋巴细胞白血病160份骨髓标本,利用四色多参数流式细胞术（FCM）进行微小残留病检测。以CD45／SSC设门,选择2-3组四色抗体组合,从诱导化疗第33天开始,每1—3个月监测MRD一次,动态监测MRD变化与白血病复发的关系。结果按照诱导治疗第33天的MRD水平分成三组,高（MRD〉1×10^-2）,中（1×10^-2≥MRD≥1×10^-4）,低（MRD〈1×10^-4）;MRD〉10^-2组与MRD％10^-4组比较复发率筹异有统计学意义（P〈0．05）;10^-4≤MRD≤10^-2组与MRD％10^-4组比较复发率差异无统计学意义（P〉0．05）。MRD％10t是预后好的指标。儿童B-ALL多次发现MRD阴性、阳性（10^-4≤MRD％10^-2）交替出现,一直未复发;B-ALL。病人复发前次MRD值均大于10^-2,且在g-6个月内复发。结论MRD阳性比形态学复发出现早,凼此连续监测MRD对白血病预测复发和指导个体化治疗有重要意义。     

流式细胞术检测微小残留病预测儿童急性B淋巴细胞白血病复发的意义

目的:探讨流式细胞术在儿童急性B淋巴细胞白血病(B-lineage acute lymphoblastic leukemia,B-ALL)患者化疗全程检测微小残留病(minimal residual disease,MRD),观察其在预测复发中的意义。方法:采用四色多参数流式细胞术对我中心291例B-ALL患儿在化疗第19天、第35天、第55天(中高危组)、第14～17周、第28～36周、第52～54周、第78～83周、第102～107周、停药及停药后分别进行MRD检测。结果:①291例患儿中MRD1%分别有169例、35例、44例和43例,其7年累计复发率分别为4.1%、17.1%、29.5%和62.8%。4组复发率差异有统计学意义(P﹤0.0001)。②各时间点MRD阳性组复发率均高于MRD阴性组,差异均有统计学意义(第19天,P=0.0021;第55天,P=0.0008;停药后,P=0.0025,余P均<0.0001)。③第35天MRD阳性在早期复发和晚期复发患儿中均常见;14～17周MRD阳性对预测早期复发意义较大;停药后MRD阳性对预测晚期复发意义较大。结论:采用流式细胞术检测MRD阳性情况在一定程度上可预测白血病复发。各时间点MRD阳性与复发均有一定相关性,且预测复发的意义不同。     

CD66c在成人急性白血病细胞上的表达及意义

目的探讨CD66c及其基因CEACAM6在成人急性白血病细胞上的表达及意义.方法体外培养HL-60、K562、LCL721.221和Jurkat等急性白血病细胞,RT-PCR检测急性白血病患者骨髓细胞和白血病细胞中CEACAM6 mRNA的表达,并用多参数流式细胞术检测白血病细胞及白血病患者骨髓细胞CD66c分子的表达.同时对199例白血病患者骨髓细胞作细胞遗传学分析,并对25例CD66c阳性急性B淋巴细胞白血病（B-ALL）患者进行白血病微量残留病（MRD）分析.结果①HL-60、K562、LCL721.221和Jurkat细胞的细胞膜和细胞质CD66c均阴性.②127例急性髓系白血病（AML）患者中4例CD66c阳性（3.15%）,以M2、M4为主;79例ALL中CD66c阳性28例（35.44%）,均为B-ALL;CD66c只在common B-ALL（54例中有20例）和pre B-ALL（11例中有8例）亚型表达,8例Ph＋B-ALL患者CD66c均阳性.③MRD阳性与阴性组患者比较,6个月内复发率差异有统计学意义（维持治疗14周时MRD阳性者8例,其中6例复发;MRD阴性者17例,其中2例复发）.④CEACAM6 mRNA在CD66c阳性B-ALL细胞强表达,在HL-60细胞呈弱表达,在K562、LCL721.221和Jurkat细胞不表达.结论CD66c在ALL中阳性表达是白血病MRD检测的标志之一.CD66c抗原表达与CEACAM6 mRNA的表达高度相关.     

多参数流式细胞术动态监测急性髓系白血病微小残留病的临床研究

目的:探讨8色流式细胞术动态监测急性髓系白血病(AML)患者微小残留病(MRD)的预后意义。方法:使用8色流式细胞术对282例初治缓解的AML患者进行MRD动态监测,通过受试者工作特征曲线(ROC)确定预测复发的MRD阈值,分析患者从出现MRD⁺到临床复发的时间,比较不同MRD变化情况的患者总生存时间(OS)和无复发生存时间(RFS)的差异,对影响MRD^-患者复发的相关因素进行单因素和Logistic回归分析。结果:ROC曲线确定预测复发的MFC-MRD阈值为0.105%,MRD⁺患者复发率明显高于MRD^-患者[52.45%(75/143例) vs 35.97%(50/139例),P=0.005]。MRD持续阳性组和阴性转阳性组患者比阳性转阴性组和阴性阳性波动组患者在出现MRD⁺后更早出现复发(P<0.005)。生存分析结果表明,MRD持续阳性组患者的OS、RFS时间较持续阴性组、阳性转阴性组和阴性阳性波动组患者明显缩短(P<0.005)。MRD阴性转阳性组与持续阳...     

四色流式细胞术检测B细胞急性淋巴细胞白血病微量残留病的临床意义

目的探讨利用四色流式细胞术（FCM）检测B细胞急性淋巴细胞白血病（B-ALL）微量残留病（MRD）的临床意义.方法采用以抗CD34/CD10/CD45/CD19为主的两种四色荧光标记抗体组合,对98例B-ALL患者的671份骨髓标本和1份脑脊液标本进行FCM多参数MRD检测,98例随访患者中26例无发病初期的免疫分型资料.结果FCM检测显示白血病细胞＜0.0001（MRD阴性）的标本为579份;白血病细胞＞0.0001的样本数为93份,其中64份骨髓标本白血病细胞比例＜0.05,29份标本白血病细胞比例＞0.05,我们将其归为复发病例（包括治疗后未达CR的病例）.共20例患者复发,其中19例血液学复发,1例中枢神经系统复发.15例血液学复发者在复发前7～17周发现MRD阳性,包括发病时免疫分型资料不明者6例,MRD水平均＞0.0001;2例分别在复发前3个月和9个月检测MRD为阴性,此后中断检测.在诱导治疗结束和治疗3个月时,如果MRD水平＞0.0001,复发率为50%（12例中有6例复发）,而MRD阴性组复发率为7.5%（40例中有3例复发）（P=0.000）.结论利用FCM进行MRD跟踪监测可预测复发,治疗初期患者MRD＞0.0001,复发的危险性较高.而在掌握了正常B祖细胞抗原表达规律的基础上,可不完全依赖于发病时的免疫表型资料.