慢性粒细胞白血病bcr-ablP210融合基因表达水平及其临床意义

 目的　探讨bcr-ablP210融合基因水平与慢性粒细胞白血病（CML）临床分期及实验室指标的相关性。方法　应用实时定量PCR（RQ-PCR）技术对33例不同病期CML患者骨髓细胞bcr-ablP210融合基因及其内参照ABL基因进行检测。结果　33例CML患者中bcr-ablP210融合基因水平为0.02～49.71（中位水平0.92）,与患者性别、年龄、白细胞总数、血红蛋白含量、血小板计数均无相关性（r＝0.003、-0.207、-0.096、-0.297、0.066,P＝0.986、0.248、0.270、0.535和0.961）,但与患者病情分期呈显著相关（r＝0.720,P＝0.000 002）。1例患者由慢性期进展到加速期和急变期时bcr-ablP210融合基因水平明显增高,由0.2上升到1.16及6.92。结论　bcr-ablP210融合基因的检测可用于CML的临床诊断及疗效观察,并有助于CML患者体内微小残留病的监测。     

慢性粒细胞白血病bcr-ablp210融合基因表达水平及其临床意义

目的 探讨bcr-ablp210融合基因水平与慢性粒细胞白血病(CML)临床分期及实验室指标的相关性.方法 应用实时定量PCR( RQ-PCR)技术对33例不同病期CML患者骨髓细胞bcr-ablp210融合基因及其内参照ABL基因进行检测.结果 33例CML患者中bcr-ablp210融合基因水平为0.02～ 49.71(中位水平0.92),与患者性别、年龄、白细胞总数、血红蛋白含量、血小板计数均无相关性(r=0.003、-0.207、-0.096、-0.297、0.066,P=0.986、0.248、0.270、0.535、0.961),但与患者病情分期呈显著相关(r=0.720,P=0.000).1例患者由慢性期进展到加速期和急变期时bcr-ablp210融合基因水平明显增高,由0.20上升到1.16及6.92.结论 bcr-ablp210融合基因的检测可用于CML的临床诊断及疗效观察,并有助于CML患者体内微小残留病的监测.     

BCR-ABL持续表达在慢性粒细胞白血病急性变中的作用

BCR-ABL持续表达可影响慢性粒细胞白血病细胞的生物学改变,促进白血病细胞的增殖、抑制细胞凋亡、阻断细胞分化、导致p53基因功能失活、c-myc基因表达增加及引起其他继发性染色体改变。该文就近年来BCR-ABL持续表达在慢性粒细胞白血病急性变中的作用的研究进展作一综述。     

塞来昔布对慢性粒细胞白血病原代细胞bcr-abl融合蛋白的影响

 目的　探讨塞来昔布对慢性粒细胞白血病（CML）原代细胞bcr-abl融合基因的mRNA表达、p210蛋白表达和蛋白质酪氨酸激酶（PTK）活性的影响。方法　以不同浓度的塞来昔布（0、10、20、40、80、160 μmol／L）分别干预CML原代细胞36 h,进行荧光实时定量反转录聚合酶链反应（RQ-RT-PCR）、Western blotting和PTK活性检测。结果　80 ~ 160 μmol／L的塞来昔布下调bcr-abl的mRNA表达;随着塞来昔布浓度增加,p210蛋白表达逐步下调;40 μmol／L以上的塞来昔布能明显抑制PTK活性,但非浓度依耐性。结论　塞来昔布能不同程度地下调CML原代细胞bcr-abl的mRNA和蛋白表达,并抑制PTK活性。     

顺铂对bcr/abl转化BaF3-P210细胞DNA损伤与修复能力的影响

目的:研究顺铂(cisplatin,Cis)对白血病BaF3-MIGR1细胞和bcr/abl转化BaF3-P210细胞中DNA损伤修复能力的影响.方法:锥虫蓝染色法检测2种细胞经0.5、1、5、10、20和40 μg/mL Cis处理0、2、4、6、8、12、24和48 h时的存活率,免疫荧光法检测上述6种浓度Cis处理细胞8 h后诱导的γH2AX焦点数,Western印迹法检测DNA修复0、4、12和24 h后的γH2AX蛋白表达情况.结果:随着Cis处理时间和剂量增加,2种细胞的存活率降低,BaF3-P210转化细胞的存活率比BaF3-MIGR1细胞高(P<0.05);随着Cis剂量上升,2种细胞的γH2AX焦点数上升, BaF3-P210转化细胞的焦点数比BaF3-MIGR1细胞少(P<0.05);随着DNA修复时间延长,2种细胞的γH2AX蛋白表达均下调,BaF3-P210转化细胞的γH2AX蛋白表达量比BaF3-MIGR1细胞低.结论:Cis对BaF3-MIGR1细胞和BaF3-P210转化细胞的损伤呈时间、剂量效应,2种细胞的γH2AX焦点数与损伤之间存在剂量效应,bcr/abl可增强BaF3-P210转化细胞的DNA修复能力.     

实时定量聚合酶链反应监测慢性粒细胞白血病患者接受伊马替尼治疗期间bcr-abl融合基因拷贝数的变化

 目的　应用实时定量聚合酶链反应（RQ-PCR）技术动态监测接受伊马替尼(IM)治疗的慢性粒细胞白血病（CML）患者bcr-abl融合基因拷贝数的变化,探讨RQ-PCR技术在微小残留病（MRD）检测以及预测复发方面的应用。方法　应用RQ-PCR技术动态监测106例接受IM治疗的CML患者bcr-abl融合基因拷贝数,bcr-abl融合基因定量结果以校正比值（NQ）表示,NQ＝bcr-abl拷贝数／abl拷贝数。结果　IM治疗前患者的NQ值与其疾病进展及Ph+细胞数量均显著相关（r＝0.9824,r＝0.9346）。使用IM治疗的106例患者,62例在治疗12个月内NQ值迅速下降并长时间维持在较低水平,其中仅2例复发;8例在治疗后NQ值略有下降但随后又马上升高,其中7例在NQ值升高后的5～9个月内复发;31例治疗后NQ值未见明显下降且仍>0.1,其中11例获得过短暂的形态学缓解,随后迅速复发,7例治疗无效或疾病进展;另有5例虽然NQ值波动较大,且无规律性,但治疗后一直处于形态学缓解。结论　RQ-PCR方法准确、可靠、敏感度高,在监测CML患者的MRD、判断疗效以及预测复发等方面具有重要的临床应用价值。     

bcr3／abl2反义寡核苷酸诱导慢性髓细胞白血病凋亡作用的研究

目的 探讨癌基因bcr_3/abl_2反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotide,ASO)对慢性髓细胞白血病(CML)的作用及其作用机理.方法 通过形态学观察、流式细胞仪(FCM)检测和片断DNA含量测定等技术研究ASO对15例初发CML的作用.结果 bcr_3/abl_2 ASO(ASO-ba)可诱导CML细胞凋亡.结论 ASO技术可为CML治疗提供一项新手段.     

慢性粒细胞白血病DNA聚合酶β蛋白研究

目的探讨慢性粒细胞白血病（CML）DNA聚合酶β蛋白表达及其与CML急变机制的关系。方法用Western blotting方法检测62例CML患者及K562细胞DNA聚合酶β蛋白表达,并与23例健康人作对照;对26例异基因外周血干细胞移植（allo-PBSCT）及12例使用伊马替尼治疗的CML患者用RT-PCR、Western blotting分别动态检测bcr-abl mRNA和DNA聚合酶β蛋白表达;伊马替尼体外作用于CML患者MNC及K562细胞后,用Western blotting方法检测DNA聚合酶β表达及bcr-abl融合蛋白磷酸化。结果与健康人比较,CML患者及K562细胞DNA聚合酶β蛋白的表达明显升高（P〈0．05）。allo-PBSCT及伊马替尼治疗后患者DNA聚合酶β蛋白的表达随着bcr-abl mRNA表达的降低而下降。伊马替尼体外作用后,DNA聚合酶β蛋白表达随着bcr-abl融合蛋白酪氨酸磷酸化水平的降低而下降。结论bcr-abl融合基因增加DNA聚合酶β蛋白表达;DNA聚合酶β蛋白增加可能是CML急变机制之一。     

慢性粒细胞白血病患者骨髓来源间充质干细胞生物学特性的研究

目的 研究慢性粒细胞白血病患者骨髓来源间充质干细胞的生物学特性.方法 体外培养慢性粒细胞白血病患者骨髓来源间充质干细胞,进行细胞表型测定、细胞周期分析,并分别用RT-PCR及FISH方法检测培养的细胞中bcr-abl的表达情况.结果 观察到贴壁细胞成梭形生长,其细胞表型主要特点为Hk1+CD-31 CD-34,95%的细胞处于G0/G1期,并且能够检测到bcr-abl融合基因的表达.结论 慢性粒细胞白血病恶性克隆可能起源于比造血干细胞更高水平的干细胞.     

2-甲氧基雌二醇对白血病细胞K562增生、凋亡及细胞周期的影响

 目的 探讨2-甲氧基雌二醇（2-ME）对体外培养的慢性粒细胞白血病（CML）急变期细胞系bcr-abl（+）K562细胞增生、凋亡及细胞周期的影响。方法 将不同浓度和作用时间的2-ME与K562细胞共同培养，采用相差显微镜观察细胞的形态学变化；四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测2-ME对K562细胞增生的抑制作用；流式细胞术分析2-ME对K562细胞凋亡及细胞周期的影响。结果 1~ 16μmol／L浓度的2-ME在24、36、48及60 h均可明显抑制K562细胞增生，并在一定范围内呈时间和剂量依赖性；2-ME作用后G0／G1期细胞增加，并伴随细胞凋亡峰和凋亡率的升高。结论 2-ME可抑制K562细胞增生，诱导其凋亡，为2-ME的临床应用提供实验依据。     

塞来昔布联合三氧化二砷对慢性粒细胞白血病原代细胞bcr-abl蛋白及信号转导的影响

 目的　探讨塞来昔布联合三氧化二砷（As2O3）对慢性粒细胞白血病（CML）原代细胞bcr-abl融合基因mRNA表达、bcr-abl蛋白（P210蛋白）表达、蛋白质酪氨激酶（PTK）活性以及对下游增殖信号转导途径的影响。方法　将塞来昔布（40 μmol／L）、As2O3（2 μmol／L）分别以及二者联合干预CML患者骨髓单个核细胞36 h,进行实时荧光定量反转录聚合酶链反应（RQ-RT-PCR）、Western印迹和PTK活性检测,分析bcr-abl融合基因mRNA的表达、P210蛋白表达以及PTK活性的变化,以Western印迹检测STAT1、STAT5、磷酸化STAT1（p-STAT1）、磷酸化STAT5（p-STAT5）以及ID1的表达变化。结果　RQ-RT-PCR结果显示,对照组、塞来昔布组、As2O3组和塞来昔布联合As2O3组的mRNA水平分别是（5.97±0.53）%、（5.74±0.46）%、（5.94±0.57）%和（3.06±0.41）%,仅塞来昔布联合As2O3组与对照组的比较差异有统计学意义（t＝28.35,P＝0.00）。P210蛋白表达量化分析显示,塞来昔布组与As2O3组均可下调P210蛋白,而塞来昔布联合As2O3组则显著下调P210蛋白。PTK活性检测显示,对照组、塞来昔布组、As2O3组和塞来昔布联合As2O3组吸光度450值分别为1.17±0.11、1.14±0.19、1.16±0.21和0.83±0.15,塞来昔布联合As2O3组与对照组比较差异有统计学意义（t＝4.38,P＝0.04）。Western印迹检测显示,塞来昔布联合As2O3组可更显著下调STAT1、STAT5、p-STAT1、p-STAT5和ID1蛋白表达。结论　塞来昔布联合As2O3对CML原代细胞bcr-abl的mRNA和蛋白表达的下调、抑制PTK活性以及抑制STAT及ID1信号转导通路具有协同作用。     

RNA干扰和伊马替尼杀伤K562细胞效果的比较

目的比较RNA干扰（RNAi）和伊马替尼（imatinib）杀伤K562细胞的效果。方法设计有效的bcr—abl干扰shRNA序列，利用基因工程技术插入到干扰载体构建RNAi质粒。测序鉴定正确的RNAi质粒转染K562细胞，48h后荧光显微镜观察转染效率。RT—PCR技术检测K562细胞中bcr—abl表达水平。同时，伊马替尼作用K562细胞。利用凋亡分析、MTT增生实验和磷酸化的酪氨酸蛋白含量检测来评估RNAi和伊马替尼作用效果。结果与伊马替尼一样，RNAi使K562细胞凋亡增强，增生减少，磷酸化的酪氨酸蛋白含量减少。结论RNAi达到伊马替尼杀伤K562细胞的效果，有望在临床用于治疗慢性髓细胞白血病（CML）患者，尤其是那些对伊马替尼等化疗药物不敏感的CML患者。     

Inhibition of apoptosis by bcr-abl fusion gene in K562 cells

Chronicmyel0idleukemia(CML)isahematologicalmalignancycharacterizedbyaninitialchronicphaseofexpandedclonalhematop0iesiswithcontinueddifferentiationintomaturemyeloidcells.Itscyt0genetichallmarkisthephiladelphiachromosome(Ph),ort(9;22)(q34.l;qll.2);thisbalancedtranslocati0nresultedinthecreationofachimericbcr-ablgene,whichisthemolecularbiologyfeatureofCML.Thebcr-ablhasbeenprovedtocausehumanCML-likesyndromeinmice.Toelucidatetheeffectofachimericbcr-ablgeneinCML,weobservedtheapopt0sisofK562cell…     

bcr-abl融合基因抑制K562细胞凋亡的研究

目的研究ｂｃｒａｂｌ融合基因在慢性粒细胞白血病细胞（ＣＭＬ）凋亡调控中的作用。方法用人工合成的与ｂｃｒａｂｌｍＲＮＡ（ｂ３ａ２型）融合点碱基序列互补的反义寡聚脱氧核苷酸（ＡＳＯＤＮ）作用于体外培养的ＣＭＬ细胞株Ｋ５６２细胞,观察Ｋ５６２细胞凋亡的情况。结果ｂｃｒａｂｌ融合基因表达受抑后,Ｋ５６２细胞凋亡显著增加。结论ｂｃｒａｂｌ融合基因可抑制ＣＭＬ细胞凋亡,这可能是ＣＭＬ发病的主要机制。     

伊马替尼联合造血干细胞移植或化疗治疗bcr-abl+急性淋巴细胞白血病

 目的　探讨伊马替尼联合异基因造血干细胞移植（allo-HSCT）或化疗治疗bcr-abl+融合基因成年人急性淋巴细胞白血病（ALL）（以下简称成年人ALL）的疗效。方法　12例成年人ALL经骨髓细胞学、细胞化学、免疫学表型、bcr-abl融合基因检测确诊为bcr-abl+ ALL（B细胞型）。初治时接受伊马替尼联合化疗诱导治疗,伊马替尼剂量为400 mg／d。完全缓解（CR）后8例接受allo-HSCT治疗,移植后bcr-abl融合基因转为阳性者给予伊马替尼（400～600 mg／d）治疗,3例接受伊马替尼与化疗交替巩固治疗。结果　11例获得CR,CR率91.7 %;诱导治疗2个疗程时bcr-abl融合基因转阴率为41.7 %;8例接受移植患者3例复发,3例化疗与伊马替尼交替巩固治疗的患者2例复发,伊马替尼联合造血干细胞移植组与伊马替尼联合化疗组患者的中位缓解期分别为16个月与10个月（P＜0.01）;中位生存期为18个月与12个月（P＜0.01）。结论　伊马替尼联合化疗诱导治疗bcr-abl+成年人ALL有较高的血液学和分子生物学缓解率,伊马替尼联合allo-HSCT的疗效优于伊马替尼联合化疗。     

大黄素诱导耐药白血病细胞株K562/Adr凋亡及下调P210表达

 目的 研究大黄素对多药耐药白血病细胞株K562／Adr（KAR）增生、凋亡的影响及探讨bcr-abl、mdr-1基因在其中的变化。方法 应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法、DNA片段化分析及TdT酶介导的末端缺失原位标记（TUNEL）法检测大黄素对KAR细胞增生及凋亡的影响；RT-PCR法检测大黄素对KAR细胞bcr-abl、mdr-1基因mRNA表达的影响；Western blotting法检测大黄素对KAR细胞bcr-abl融合蛋白P210表达的影响。结果 大黄素能有效抑制KAR细胞的增生，作用72 h的IC50约为20μmol／L，并能诱导其凋亡,随药物作用浓度的增加，凋亡率也逐渐上升；大黄素下调KAR细胞bcr-abl、mdr-1基因mRNA的表达；也下调了KAR细胞P210蛋白的表达。结论 大黄素能有效抑制KAR细胞增生，诱导其凋亡；并可能通过下调bcr-abl和mdr-1 的表达起作用。     

双色双融合荧光原位杂交检测bcr/abl融合基因的临床意义

目的 检测bcr/abl融合基因在慢性粒细胞白血病（CML）,急性淋巴细胞白血病（ALL）和真性红细胞增多症（PV）中的表达,以了解其临床意义。方法 采用双标记双融合bcr/abl探针进行荧光原位杂交（D-FISH）。检测了7例患者骨髓中期和（或）间期细胞。结果 38例CML患者中bcl/abl阳性为34例,占89.5%,其中1例患者发病时,细胞遗传学显示典型的t(9;22),应用干扰素治疗38个月后,bcr/abl基因转为阴性;1例异基因外周血造血干细胞移植术后60d的患者,细胞形态学及细胞遗传学均显示完全缓解,但FISH检测仍有3.0%的细胞为bcr/abl基因因阳性,24例ALL患者中,6例bcr/abl阳性,占25.0%,2例PV患者bcr/abl阴性,3例CML待排的患者bcr/abl均阴性,其中1例确诊为原发性血小板增多症;1例进一步检测ETO/AML1基因后诊断为M2a;1例仍未能明显诊断,3例bcr/abl阴性的CML中,难治性白血病2例;6例bcr/abl阳性的ALL中,难治性白血病5例,结论 用双色双融合bcr/abl探针进行FISH杂交,可准确地检测出bcr/abl融合基因,是临床诊断,判定预后及微小残留病的有效监测指标。