腺病毒介导的p53基因对喉癌细胞生长的抑制作用

目的探索ｐ５３基因在喉癌基因治疗方面的可行性。方法以人喉癌细胞系Ｈｅｐ－２为实验对象,将载有人野生型ｐ５３ｃＤＮＡ并含巨细胞病毒（ＣＭＶ）启动子的重组腺病毒（Ａｄ５ＣＭＶ－ｐ５３）感染Ｈｅｐ－２细胞及肿瘤组织,体内外实验观察Ａｄ５ＣＭＶ－ｐ５３对Ｈｅｐ－２细胞生长的影响。结果当Ａｄ５ＣＭＶ－ｐ５３在１００ＭＯＩ效靶比时,全部Ｈｅｐ－２细胞得到转染。感染２天后ｐ５３蛋白表达达到高峰,Ｈｅｐ－２生长受到明显的抑制。Ａｄ５ＣＭＶ－ｐ５３感染Ｈｅｐ－２细胞在裸鼠中失去致瘤性。瘤内注射Ａｄ５ＣＭＶ－ｐ５３后,荷瘤裸鼠的肿瘤体积明显减小。结论Ａｄ５ＣＭＶ－ｐ５３转导野生型ｐ５３基因可能是一种有效的喉癌基因治疗途径。     

腺病毒介导野生型p53基因诱导膀胱癌细胞凋亡

p53基因是一种抑癌基因,它在肿瘤发生过程中有重要作用.p53基因的突变可引起细胞增殖,导致悼瘤的发生.迄今已在许多恶性肿瘤细胞中发现p53基因的突变.将外源野生型p53基因导入p53基因突变的肿瘤细胞,能抑制其恶性增殖,逆转其恶性表型.这些研究为肿瘤的基因治疗奠定了基础;值得注意的是,至今大多数研究均用有p53基因缺失或突变的肿瘤细胞,但并非所有的肿瘤细胞都发生p53基因突变;本文将外源野生型p53基因导入表达内源野生型p53基因的膀胱癌细胞株EJ,观察其抑制效应及凋亡的诱导作用.     

经门静脉注射重组p53腺病毒治疗肝转移肿瘤的实验研究

目的观察经门静脉注射重组p53腺病毒(Adv-p53)对肝转移肿瘤的治疗作用。方法通过门静脉注射2×105个MCA-205肿瘤细胞建立小鼠肝转移肿瘤模型,同时将脾脏移植到皮下,作为反复多次向门静脉注射的途径。经门静脉注射不同剂量Adv-p53,注射等体积的平衡盐水或相同剂量的对照腺病毒Adv-CMV作为对照,第21天检查肝脏重量和肝脏转移结节数。结果经门静脉注射1×108 pfu Adv-p53组的肝脏重量为(1.20±0.34)g,明显低于门静脉注射同剂量Adv-CMV组(P<0.05);肝脏转移结节数目为(9.0±9.9)个,明显少于Adv-CMV组(P<0.05)。Adv-p53抑制肝转移肿瘤形成的作用具有剂量效应。在门静脉注射肿瘤细胞的第5天,肝转移肿瘤已经形成,门静脉注射1×108 pfu Adv-p53组的肝脏重量为(1.22±0.09)g,明显低于Adv-CMV组(P<0.05),肝脏转移结节数目(5.5±3.5)明显少于Adv-CMV组(113.2±5.8,P<0.05)。反复多次门静脉注射Adv- p53,可以加强这一抗肿瘤效果。结论通过门静脉系统应用Adv-p53是治疗肝转移肿瘤的有效方法。     

腺病毒介导HSV-tk联合野生型p53

应用自杀基因治疗肿瘤是一种有效的手段和方法,但p53基因突变的肿瘤细胞可以对抗自杀基因转换前药对瘤细胞的杀伤作用。     

腺病毒载体转染p53基因提高肿瘤放射敏感性的实验研究进展

几十年来,许多放射生物学和放射肿瘤学专家致力于寻找提高肿瘤放射敏感性的理想药物,试用了生物还原剂、亲电子化合物、修复抑制剂等诸多药物,均因效果欠佳或毒性大而未能广泛应用于临床［１］。近年来分子生物学迅猛发展,为肿瘤学和放射肿瘤学研究提供了新的线索。癌...     

p53基因异常与头颈部癌

 自1979年发现p53蛋白以来, 人们对它的认识经历了肿瘤抗原、癌基因蛋白到肿瘤抑制因子的发展过程。现已在人类许多肿瘤中发现其结构异常或功能失活, 推测可能是肿瘤发生发展过程中重要的分子事件。     

重组腺病毒介导突变型p27基因转移对肝癌细胞SMMC-7721生长的影响

 目的 探讨突变型p27基因（p27mt）对肝癌细胞SMMC-7721的细胞增生和凋亡的调节作用。方法 利用重组体腺病毒Ad-p27mt转染培养的人肝癌细胞SMMC-7721，用3H -TdR掺入法检测细胞增生；流式细胞术、DNA片段分析法、TUNEL法检测细胞凋亡。结果 重组体腺病毒Ad-p27mt在MOI≥ 50时， 可达到100 %的转导效率。Ad-p27mt转染肝癌细胞后，3H -TdR掺入检测发现细胞增生抑制；流式细胞术检测在G1期前出现亚二倍体凋亡峰；细胞DNA抽提电泳后发现凋亡特征性梯带。Ad-p27mt组及空白对照组TUNEL法检测凋亡指数分别为58.6±4.3及4.5±1.6，差异有统计学意义（P＜0.01）。结论 重组腺病毒介导的p27mt基因转移可抑制肝癌SMMC-7721细胞增生并诱导其凋亡。     

腺病毒介导的p21基因联合顺铂对胃癌细胞的影响

目的：探讨腺病毒介导的p21基因^WAF1/CIP1基因（p21基因）在人胃癌细胞系SGC0－7901中的表达及其联合顺铂化疗对胃癌细胞生长和荷瘤小鼠的作用。方法：采用腺病毒载体携带p21基因感染人胃癌细胞系，用流式细胞仪测定p21基因对SGC－7901细胞周期的影响，并与DDP联合应用，观察p21基因和（或）DDP对SGC－7901细胞系和荷瘤小鼠的作用。结果：腺病毒介导的p21基因可在胃癌细胞系SGC－7901中过度表达，使胃癌细胞系S期含量下降，抑制其生长，并可诱导胃癌细胞的凋亡；p21基因联合DDP作用使SGC－7901细胞G2／M含量明显下降，并可抑制荷瘤小鼠肿瘤细胞的生长，且联合作用比单一用药作用更明显。结论：腺病毒介导的p21基因可抑制人胃癌细胞系的生长，抑制瘤体的生长，结合化疗药物其作用更强，为临床应用提供了依据。     

腺病毒介导的野生型p53基因对肺腺癌细胞株生长的抑制作用

为研究野生型p53基因对肺腺癌细胞株GLC-82细胞生长的作用,确立腺病毒介导的野生型p53基因在肿瘤治疗中的意义,应用分子克隆技术首先构建了野生型p53复制缺陷型腺病毒重组体,应用生化染色方法确定了重组体的转染效率,以免疫组化法及PCR技术分别确定了腺病毒载体介导的p53基因转染GLC-82细胞后p53蛋白和p53 cDNA的表达情况;最后应用细胞生物学方法检测了p53对GLC-82细胞扩增及细胞周期的影响.结果表明所构建的重组体可以高效、快速转染GLC82细胞,抑制GLC-82细胞扩增,使细胞合成期和分裂后期的量减少,出现细胞凋亡现象:提示野生型p53基因导入可作为治疗肺腺癌的途径之一     

重组腺病毒载体介导的人野生型p53基因增强肝癌细胞对化疗药物的敏感

目的：观察表达人野生型和p53,GM－CSF和B7－1基因的重组腺病毒载体（BB－102）提高肝癌细胞对化疗药物的敏感。方法：BEL－7402,HLE和HuH-73株肝癌细胞被50MOI的BB－102转染后,Western blot检测p53基因的表达,MTT方法检测肝癌细胞对化疗药物的敏感性。结果：当MOI为50pfu／细胞时,腺病毒载体对3株肝癌细胞的转染的效率均达到80％以上。转染BB－102后,LHE和HuH-7细胞对顺铂的敏感性分别提高11倍和28倍,对丝裂霉素－3的敏感性分别提高3．75倍和20倍,而BB－102的转染对BEL－7402细胞的化疗敏感性没有影响。结论：BB－102腺病毒载体转染后能显著提高p53基因突变的HEL和HuH-7细胞对顺铂和丝裂霉素－C的敏感性,因而增强顺铂和丝裂霉素－C对HLE和HuH-7细胞的杀伤作用。     

重组人p53腺病毒联合香菇多糖治疗癌性浆膜腔积液

目的观察和评价胸腹腔和心包腔置管引流注入重组人p53腺病毒注射液和香菇多糖联合治疗恶性浆膜腔积液的临床疗效。方法11例恶性浆膜腔积液患者,其中胸腔积液6例、腹腔积液3例,心包腔积液患者2例,于B型超声定位后行浆膜腔穿刺置管引流术,并注入重组人p53腺病毒（商品名：今又生）2×10^12VP／次（第1、8、15天）和香菇多糖4．0mg／次（第4、11、19天）,疗效评价依据WHO癌性积液疗效判定标准。结果11例癌性浆膜腔积液患者治疗总有效率81．8％（9／11）,完全缓解率54．5％（6／11）,部分缓解率273％（3／11）。不良反应主要表现为可耐受性的发热（63．6％,7／11）,24h内可自行消退或对症处理后消退。结论浆膜腔置管引流联合注入重组人p53腺病毒和香菇多糖疗效确切,见效快,不良反应轻,是治疗癌性浆膜腔积液安全有效的方法,值得进一步推广应用。     

逆转录病毒介导的野生型p53基因对原位肺癌的治疗效应

非小细胞肺癌(NSCLC)在所有肺癌中所占比例比较高．达75％-80％．但所有治疗措施中仅10%有一定效果，其它均不能令人满意。随着科学的发展．人们从分子水平上对其发病机理的了解也越来越深刻，并逐渐认识到，这类癌症的发生与多基因的变异有关．其中，p53抑癌基因的突变(如Tp53)在人类肺癌中最为普遍，因此，肺癌细胞中野生型p53功能的恢复有可能抑制肿瘤细胞的生长。本研究观察了表达野生型p53的逆转录病毒载体应用于原位肺癌的治疗效果。     

重组人p53腺病毒注射液(rAd/p53)治疗小鼠乳腺癌的实验研究

目的 探讨重组人p53腺病毒注射液(rAd/p53)不同用药方式对荷瘤小鼠乳腺癌的治疗效果.方法 细胞毒性实验,流式细胞术观察rAd/p53对乳腺癌细胞的体外抑制作用及促凋亡作用.建立乳腺癌小鼠模型,不同方式瘤内注射rAd/p53,观察对肿瘤的生长情况的影响,并对肿瘤组织进行免疫组化检查微血管密度(MVD).结果 rAd/p53体内外均可显著抑制乳腺癌细胞Ca761的生长,且早期连续瘤内给药效果好于隔天给药.结论 实验研究提示重组人p53腺病毒注射液治疗乳腺癌是有效的,早期连续用药疗效可能会更佳.     

腺病毒介导HSV-tk联合野生型p53 基因对直肠癌细胞的杀伤作用

应用自杀基因治疗肿瘤是一种有效的手段和方法 ,但ｐ53基因突变的肿瘤细胞可以对抗自杀基因转换前药对瘤细胞的杀伤作用。为克服突变ｐ53对自杀基因杀伤作用的影响 ,我们用腺病毒介导单纯疱疹病毒编码的胸苷激酶 (ＨＳＶ ｔｋ)基因和人野生型ｐ53基因共转染ＳＷ83 7直肠癌细胞 ,该细胞ｐ53基因第 2 4 8密码子发生了突变 ,观察ＨＳＶ ｔｋ/ＧＣＶ系统和ｐ53基因联合对肿瘤细胞的杀伤作用。将ＨＳＶ ｔｋ、人野生型ｐ53ｃＤＮＡ插入ｐＡｄＣＭＶ Ｌｉｎｋ1穿梭质粒多克隆位点 ,构建ｐＡｄＣＭＶ Ｌｉｎｋ1 (ｔｋ/ｐ53 ) ,ｐＡｄＣＭＶ Ｌｉｎ…     

p53腺病毒注射液联合得力生对H22腹水瘤的作用

目的:探讨p53腺病毒注射液(Ad-p53)联合中药得力生治疗腹水瘤的作用。方法:建立H22肝癌腹水瘤昆明小鼠模型,建模48h后分组给予Ad-p53、得力生及两药联用。用药1周后检测体重、腹围、腹水量、腹水瘤细胞计数,流式细胞仪测定瘤细胞凋亡百分比以及细胞周期情况。结果:Ad-p53、得力生单用组,除体重以外的上述指标与对照组比较均有统计学差异(P<0.05),析因分析两药联用也有统计学差异(P<0.05)。结论:腹腔注射Ad-p53、得力生均可抑制H22细胞生长并减少腹水形成,Ad-p53与中药得力生联合腹腔内给药对治疗腹腔转移癌有协同作用。     

重组人p53腺病毒治疗原发性肝癌的血清p53蛋白检测及其临床意义

目的:初步观察重组人p53腺病毒注射液(recombinant adenovirus-p53,rAd-p53)治疗肝癌临床疗效,和治疗前后血清p53蛋白的变化及其临床意义。方法:对38例原发性肝癌患者,采用瘤内注射、血管介入和静脉滴注rAd-p53联合化疗和放疗,行至少1个疗程以上的治疗,治疗结束一个月后评价疗效。应用ELISA检测患者治疗前和治疗后血清p53蛋白。结果:38例患者总的疾病控制率为94.74%,其中CR7例,PR11例,SD18例,PD2例。38例肝癌患者经人p53腺病毒注射液治疗后血清p53蛋白含量比治疗前明显升高(P<0.01)。治疗前血清p53蛋白较高的患者比p53蛋白低的对人p53腺病毒注射液的治疗反应较好。结论:人p53腺病毒注射液治疗对肝癌具有一定疗效,临床应用安全;治疗前血清p53蛋白含量以及动态变化可能是预测rAd-p53治疗肝癌疗效的有价值指标,并对人p53腺病毒注射液的临床应用具有一定的指导作用。     

肝细胞癌p53基因突变初步研究

本文应用快速银染多了矣酶链反应单链构像多态（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）方法检测了３０例肝细胞癌（ＨＣＣ）组织中ｐ５３基因变异情况。结果１３例癌组织中有异常电带，其中２闰于第５外显子，各有３例位于第６和第７外显子，位于第８显子有５例，ｐ５３基因变异的病例乙型肝炎表面抗原均阳性，实验结果表明：本技术能有效检测出基因突变；肝细胞癌中ｐ53基因突变率较高且有多个位点；肝细胞癌ｐ５３基因突变可能与乙型肝炎病毒感染有关     

腺病毒介导HSV—tk自杀基因联合野生型p53基因对直肠癌细胞的杀伤作用

目的 观察重组腺病毒介导单纯疱疹病毒胸苷激酶（HSV－tk)基因联合人野生型p53基因共转染,对直肠癌细胞杀伤作用。方法 构建重组腺病毒质粒pAdCMV-Link1(tk/p53)、pAdCMV-Link(tik),pAdCMV-Link(p53),分别感染p53炎变的人直肠癌细胞SW837。进行细胞集落形成实验、细胞存活率的测定和裸鼠移植瘤治疗实验,观察HSV－tk/GCV系统与野生p53基因联合对肿瘤细胞的杀伤作用。结果 应用pAdCMV-Link1(tk/p53),pAdCMV-Link(-),pAdCMV-Link(tk),pAdCMV-Link(p53)重组腺病毒感染SW837细胞,加入GCV,各组细胞集落数分别为8、95、40、70。pAdCMV-Link(CD/53)组肿瘤细胞集落形成减少、细胞存活率显著下降（P＜0．01）。裸鼠移植肿瘤生长抑制率分别为76．5％、0．8％、55．8％、23．2％,pACMV-Link(tk/p53)重组腺病毒对肿瘤的抑制作用最强。结论 HSV－tk自杀基因与野生型p53基因共转染,对肿瘤细胞有更强的杀伤作用。     

重组腺病毒载体介导的人野生型p53基因增强肝癌细胞对化疗药物的敏感性

目的： 观察表达人野生型p53,GM-CSF和B7-1基因的重组腺病毒载体（BB-102）提高肝癌细胞对化疗药物的敏感性。方法： BEL-7402,HLE和HuH-7 3株肝癌细胞被50 MOI的BB-102转染后,Western blot检测p53基因的表达,MTT方法检测肝癌细胞对化疗药物的敏感性。结果： 当MOI为50 pfu/细胞时,腺病毒载体对3株肝癌细胞的转染效率均达到80％以上。转染BB-102后,HLE和HuH-7细胞对顺铂的敏感性分别提高11倍和28倍,对丝裂霉素-C的敏感性分别提高3.75倍和20倍。而BB-102的转染对BEL-7402细胞的化疗敏感性没有影响。结论： BB-102腺病毒载体转染后能显著提高p53基因突变的HLE和HuH-7细胞对顺铂和丝裂霉素-C的敏感性,因而增强顺铂和丝裂霉素-C对HLE和HuH-7细胞的杀伤作用。     

重组人p53腺病毒治疗结肠腺癌腹壁转移1例

患者,男,65岁。2002年11月行乙状结肠癌根治术术后病理:腺癌,Ⅱ级,侵及深度不详,淋巴结1/3转移。