局灶性脑缺血大鼠海马bcl-2 mRNA、Bax mRNA表达水平的改变

局灶性脑缺血大鼠海马ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ、ＢａｘｍＲＮＡ表达水平的改变张苏明王伟选用局灶性脑缺血模型，观察缺血及再灌注期大鼠海马细胞程序性死亡（ＰＣＤ）调控基因ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ、ＢａｘｍＲＮＡ表达水平的变化，以期了解缺血与神经元ＰＣＤ二者的关系。材料...     

培养海马CA1神经细胞中谷氨酸受体介导BDNF mRNA的表达

用原位杂交法观察了培养海马神经元中ＢＤＮＦｍＲＮＡ的表达，得出与他人报道略有不同的结果，上述神经元经ＫＡ处理后，ＢＤＮＦｍＲＮＡ表达增高不仅可经非ＮＭＤＡ受体介导，而且可通过谷氨酸的释放再间接活化ＮＭＤＡ受体。     

GM_1对大鼠全脑缺血再灌注中钙平衡紊乱、氧自由基代谢异常以及病理损伤的影响

目的　研究单唾液酸四已糖神经节苷脂（ＧＭ１）对大鼠全脑缺血再灌注中钙平衡紊乱、氧自由基代谢异常以及病理损伤的影响。方法　运用大鼠全脑缺血再灌注模型（４ＶＯ）,观察假手术组、脑缺血３０ 分钟再灌注６０ 分钟生理盐水（ＮＳ）处理组（ＮＳ组）和缺血３０ 分钟再灌注６０ 分钟ＧＭ１ 处理组（ＧＭ１ 组）的脑海马组织线粒体钙（ＭＣａ）、钙调素（ＣａＭ）、丙二醛（ＭＤＡ）及海马ＣＡ１ 区病理改变。结果　ＮＳ组海马组织ＭＣａ、ＣａＭ、ＭＤＡ含量显著升高（Ｐ＜ ０．０１）,海马ＣＡ１ 区神经元呈较严重缺血损伤性改变,而ＧＭ１ 组较ＮＳ组生化和病理变化明显改善。结论　ＧＭ１ 能改善脑缺血再灌注中钙平衡紊乱和氧自由基代谢异常,减轻脑缺血再灌注病理损伤。     

脑缺血纹状体细胞外液单胺类介质及其代谢物的微透析研究

目的观察脑缺血再灌注时鼠脑纹状体区细胞外液（ＥＣＦ）多巴胺（ＤＡ）、去甲肾上腺素（ＮＥ）、５－羟色胺（５－ＨＴ）及其代谢产物高香草酸（ＨＶＡ）和５－羟吲哚乙酸（５－ＨＩＡＡ）的动态变化。方法采用脑内微透析技术，用高压液相色谱测定了前脑缺血３０ｍｉｎ、再灌注１２０ｍｉｎ时ＥＣＦＤＡ、ＮＥ和５－ＨＴ的变化。结果脑缺血１０ｍｉｎ时ＥＣＦＤＡ、ＮＥ迅速升高为缺血前的２８２和９１４倍，持续整个缺血期，再灌注后迅速下降达缺血前水平。脑缺血期ＨＶＡ、５－ＨＩＡＡ迅速下降，在缺血３０ｍｉｎ时达缺血前的４５％和５２％，再灌注后升高并在再灌注后６０ｍｉｎ，９０ｍｉｎ达缺血前的１５０％、１１３％。结论单胺类介质代谢紊乱参与了缺血性神经元损害     

尼莫地平,MT—801对海马迟发性神经元坏死治疗作用的实验研究

采用大鼠全脑缺血模型、观察脑缺血再灌注过程中海马神经元的病理变化，并用尼莫地平（钙拮抗剂）及ＭＫ－８０１（ＮＭＤＡ受体拮抗剂）治疗，观察其对迟发性神经元坏死的疗效，旨在探讨钙及兴奋性氨基酸在海马神经元缺血损害中的作用，为缺血性脑损伤的治疗探索新的途径。     

关节炎大鼠疹髓背角内脑源性神经营养因子和促肾上腺皮 …

研究表明，外周感染可导致脑源性神经营养因子（ＢＤＮＦ）的过度表达，ＢＤＮＦ可影响其他神经递质的合成。采用免疫组化和原位杂交的方法观察了完全福氏佐剂所致的关节炎大鼠脊髓内ＢＤＮＦ及其功能性受体酷氨酸蛋白激酶Ｂ（ｔｒｋＢ）的表达和促肾上腺皮质激素释放因子（ＣＲＦ）ｍＲＮＡ的水平。实验发现，在皮下注射完全福氏佐剂后４ｈ，脊髓腰膨大同侧背角中的ＢＤＮＦ免疫活性神经元和ＣＲＦ ｍＲＮＡ阳性神经元数升高，在２     

针刺对缺血再灌注大鼠海马脑源性神经营养因子mRNA的影响

目的 探讨针刺对缺血再灌注大鼠海马内脑源性神经营养因子（BONF）基因表达的影响，推测针刺改善缺血再灌注的可能机制。方法 采用4-血管阴断法制备大鼠全脑缺血再灌注模型，电针刺激百会、肾俞、足三里穴后，利用RT-PCR检测BDNF mRNA。结果 正常组大鼠海马BDNF mRNA表达极低，缺血再灌注组大鼠海马BDNF mRNA表达明显增高，治疗15d的针刺1、2组大鼠海马BDNF mRNA表达较缺血再灌注组更高，及早治疗且治疗时间为20d的针刺3组大鼠海马BDNF mRNA表达较降低。结论 缺血再灌注大鼠海马BDNF水平增高有利于损伤的神经元存活、恢复；针刺促进脑内细胞分泌内源性BDNF可能是针刺有效治疗缺血再灌注的机制之一。     

谷氨酸载体在鼠脑缺血神经元死亡中的作用

目的研究谷氨酸载体在脑缺血神经元死亡中的作用。方法用原位杂交和免疫组织化学方法观察大鼠脑缺血后脑内谷氨酸载体ＧＬＡＳＴｍＲＮＡ和胶质纤维酸性蛋白（ＧＦＡＰ）表达的变化，用药理分析手段观察谷氨酸载体摄取抑制剂Ｌ反式吡咯烷２，４二羧酸（ＬｔｒａｎｓＰＤＣ）对脑缺血致神经元损伤的影响。结果脑缺血后２４小时，大脑皮层缺血周边区ＧＬＡＳＴｍＲＮＡ和ＧＦＡＰ表达无显著变化；而缺血后７２小时，缺血周边区ＧＬＡＳＴｍＲＮＡ和ＧＦＡＰ表达都显著增加，脑缺血后２４小时和７２小时，缺血侧海马ＣＡ１区ＧＬＡＳＴｍＲＮＡ表达则无显著变化；与侧脑室注射生理盐水组相比，侧脑室注射１μｇ或２μｇＬｔｒａｎｓＰＤＣ有使脑梗塞体积增大的趋势，但差异无显著意义；侧脑室注射５μｇＬｔｒａｎｓＰＤＣ使脑梗塞体积显著增大。结论脑缺血后谷氨酸载体功能可能呈代偿性增强，提示谷氨酸载体在限制脑缺血时谷氨酸神经毒中起重要作用。     

脑源性神经营养因子在大鼠脑缺血再灌注损伤过程中基因表达的变化

目的 :观察脑缺血再灌注损伤后脑皮层、梗塞区和海马神经元脑源性神经营养因子 (BDNF)水平的变化 ,及与脑病理变化的关联性 ;探讨 BDNF在脑缺血再灌注损伤中的可能作用机理。方法 :线栓法复制大鼠大脑中动脉脑缺血再灌注模型 ,原位核酸分子杂交检测脑不同区域 BDNFm RNA,图象分析间接定量其水平。结果 :1.脑缺血及缺血再灌注均能诱导双侧脑皮层、海马和梗塞区及其对侧相应区神经元 BDNFm RNA水平增高。2 .梗塞区因缺血损伤过重 ,神经元 BDNFm RNA水平增高的幅度小。 3.再灌注后神经元 BDNFm RNA的水平继续升高 ;其变化规律在不同脑区大致相似。 4.神经元 BDNFm RNA基础水平与神经元抗损伤力呈正相关。结论 :脑缺血及缺血再灌注损伤均导致双侧大脑 BD-NFm RNA表达的变化 ,BDNFm RNA水平的提高能增强神经元的抗损伤能力。     

神经生长因子对严重烫伤大鼠海马神经元的保护作用

观察大鼠严重烫伤时海马神经元的病理变化,探讨ＮＧＦ对烫伤大鼠海马神经元的保护作用及其可能机制。ＳＤ大鼠侧脑室埋管,分成假烫组、烫伤组、烫伤＋ ＮＧＦ小剂量组、烫伤＋ ＮＧＦ大剂量组;大鼠在麻醉下造成３０％ ＴＢＳＡⅢ度烫伤,伤后３ ｄ,测定脑组织含水量,海马乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）和一氧化氮（ＮＯ）的含量;部分脑组织做病理切片,尼氏染色。烫伤后７２ ｈ,脑组织含水量增加,海马出现明显的病理变化,尼氏小体减少或消失,胞体肿胀;ＬＤＨ和ＮＯ的含量明显增加;给予ＮＧＦ后,能明显改善上述病理变化,并能降低脑组织含水量、海马ＬＤＨ 和ＮＯ的含量。烫伤可引起海马神经元损伤、海马组织ＮＯ含量升高;ＮＧＦ对烫伤后海马神经元的损伤有保护作用,并能降低ＮＯ含量。     

脑缺血再灌注损伤过程中脑的病理变化与脑内脑源性神经营养因子的基因表达

目的 研究在脑缺血-再灌注损伤过程中，脑组织的病理变化与脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophic factor，BDNF)基因表达之间的关系。方法 采用Zea longa线栓法创建局部脑缺血-再灌注模型。光镜下观察病理变化，原位寡核酸分子杂交检测在脑缺血-再灌注损伤过程中，脑的不同区域BDNF mRNA的表达，图像分析BDNF的间接定量水平。结果 (1)脑缺血和脑缺血再灌注均可导致BDNF mRNA在脑的广泛区域表达活跃；(2)损伤过重反而抑制BDNF mRNA的表达；(3)BDNF mRNA的表达具有组织差异性；(4)脑缺血-再灌注后，早期BDNF mRNA的表达水平即明显增加，12h达高峰。结论 BDNF的提高是一种保护性反应，脑缺血和脑缺血再灌注损伤均可以导致BDNF mRNA在脑的广泛区域表达水平明显提高，表达水平与局部神经元的抗损伤能力呈正相关，与病理改变呈负相关。     

细胞外信号调节激酶在NGF/VEGF介导的神经保护作用中的动态变化及其调控机制

目的探讨细胞外信号调节激酶1(ERK1)在局灶性脑缺血/再灌注不同时间、不同脑区的动态时空变化,以及其在NGF/VEGF介导的神经保护作用中的调控表达机制。方法采用兔大脑中动脉阻断(MCAO)局灶性脑缺血再灌注模型,所有动物随机分为假手术组(n=6)、缺血/再灌注组(n=60)、因子干预组(n=40)。应用免疫组化检测ERK1在脑缺血/再灌注损伤不同脑区的动态表达,同时,应用免疫组化、流式细胞术和电镜检测caspase-3表达、凋亡和超微结构的变化。结果免疫组化分析显示,再灌注损伤1hERK1首先在海马CA3和齿状回(DG)表达增加,6h后其它脑区也相继增加,随再灌注时间延长而加剧,1~3d达高峰。再灌注1hcaspase-3活性表达在各脑区迅速增加,3d达高峰。应用神经保护剂(NGF/VEGF)后各脑区ERK1表达呈明显抑制,caspase-3表达同时被抑制。结论ERK信号通路可能通过调节死亡受体途径介导神经保护作用,抑制ERK信号途径可能是减轻脑缺血损伤过程中神经细胞死亡的有效方法。     

Matrix metalloproteinase-9 expression and blood brain barrier permeability in the rat brain after cerebral ischemia/reperfusion injury

BACKGROUND: The integrity of the blood brain barrier (BBB) plays an important role in the patho-physiological process of cerebral ischemia/reperfusion injury. It has been recently observed that metalloproteinase-9 (MMP-9) is closely related to cerebral ischemia/reperfusion injuryOBJECTIVE: This study was designed to observe MMP-9 expression in the rat brain after cerebral ischemia/reperfusion injury and to investigate its correlation to BBB permeability.DESIGN, TIME AND SETTING: This study, a randomized controlled animal experiment, was performed at the Institute of Neurobiology, Central South University between September 2005 and March 2006.MATERIALS: Ninety healthy male SD rats, aged 3-4 months, weighing 200-280g, were used in the present study. Rabbit anti-rat MMP-9 polyclonal antibody (Boster, Wuhan, China) and Evans blue (Sigma, USA) were also used.METHODS: All rats were randomly divided into 9 groups with 10 rats in each group: normal control group, sham-operated group, and ischemia for 2 hours followed by reperfusion for 3,6,12 hours, 1,2,4 and 7 days groups. In the ischemia/reperfusion groups, rats were subjected to ischemia/reperfusion injury by suture occlusion of the right middle cerebral artery. In the sham-operated group, rats were merely subjected to vessel dissociation. In the normal control group, rats were not modeled.MAIN OUTCOME MEASURES: BBB permeability was assessed by determining the level of effusion of Evans blue. MMP-9 expression was detected by an immunohistochemical method.RESULTS: All 90 rats were included in the final analysis. BBB permeability alteration was closely correlated to ischemia/reperfusion time. BBB permeability began to increase at ischemia/reperfusion for 3 hours, then it gradually reached a peak level at ischemia/reperfusion for 1 day, and thereafter it gradually decreased. MMP-9 expression began to increase at ischemia/reperfusion for 3 hours, then gradually reached its peak level 2 days after perfusion, and thereafter it gradually decreased.CONCLUSION: MMP-9 expression increases in rat brain tissue after focal cerebral ischemia/reperfusion injury, which correlates with increased permeability of the BBB.     

成年大鼠局灶脑缺血/再灌注后海马BDNFmRNA和bFGF mRNA的动态变化研究

目的观察局灶脑缺血/再灌注大鼠海马脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophic factor,BDNF)mRNA和碱性成纤维生长因子(basic fibroblast growth factor,b FGF)mRNA的动态表达。方法将108只雄性Wistar大鼠随机分为正常组(NC组)、假手术组(SC组)、模型组(I/R组),每组再于缺血1h后再灌注于1,3,7,14,21,28d六个时间点进行观察,正常组和假手术组于相应时间点同步观察。采用线栓法制备大鼠右侧大脑中动脉局灶脑缺血/再灌注模型。应用原位杂交法检测大鼠缺血再灌注后1,3,7,14,21,28d缺血侧海马BDNF mRNA和b FGF mRNA表达。结果正常海马区可见少量BDNF mRNA和b FGF mRNA的阳性表达。BDNF mRNA阳性反应主要集中于齿状回颗粒细胞以及CA2、CA3中的锥体细胞胞浆中,b FGF mRNA主要位于海马锥体细胞层、CA1、CA2区。局灶脑缺血/再灌注后,I/R组缺血侧海马BDNF mRNA表达增加,主要见于齿状回颗粒细胞层和锥体细胞层。缺血/再灌注后1d时BDNF mRNA阳性反应即有增多,3d时达到高峰(P0.01),阳性产物染色较深,7d后迅速下降(P0.01),28d时接近正常水平。局灶脑缺血/再灌注后,I/R组缺血侧海马可见b FGF mRNA的强阳性表达,1d时开始增加(P0.05),3d即达一小高峰(P0.01),7d开始下降,21d时明显下降,28d时降到正常水平(P0.05)。结论局灶脑缺血/再灌注可上调BDNF mRNA和b FGF mRNA的表达,有利于脑缺血后神经功能恢复,具有神经保护作用。     

电针对MCAO大鼠皮层神经营养因子表达的影响

目的　应用免疫组织化学法观察电针对缺血皮层神经元脑源性神经营养因子 (BDNF)和神经生长因子 (NGF)表达的影响。方法　实验分缺血组和缺血 电针组 ,大脑中动脉线栓 (MCAO)造成局灶性缺血 75 m in,缺血 电针组在缺血后立即给予电针 1h。在缺血再灌不同时间分别处死 ,然后进行免疫组织化学染色。结果　 BD-NF和 NGF主要在缺血灶周围的皮层表达。在再灌后 8h内缺血 电针组 BDNF和 NGF免疫阳性细胞的表达高于缺血组 (P<0 .0 1)。结论　电针能够提高 NGF和 BDNF在缺血灶周围皮层的表达 ,这种高表达可能对脑缺血具有保护作用。     

大鼠全脑缺血再灌注损伤后调控基因Bcl-2、Bax的表达及与细胞凋亡的关系

目的:本研究旨在探讨Bcl-2及Bax蛋白在大鼠全脑缺血再灌注损伤中的变化及与细胞凋亡的关系。方法:雄性Wistar大鼠56只,随机分为假手术组、缺血15分钟再灌注1、6、12、24、48、72小时组。采用大鼠四条血管阻断方法制备大鼠全脑缺血再灌注模型。采用TUNEL法观察不同再灌注时间组海马CAl区细胞凋亡的变化。采用免疫组化法观察Bcl-2及Bax蛋白表达水平的变化。结果:脑缺血损伤后随再灌注时间延长凋亡细胞逐渐增多,至再灌注48小时达到高峰,72小时后减少。Bcl-2表达至再灌注12小时达高峰,再灌注24~72小时组逐渐减弱。Bax表达至48小时达高峰,再灌注72小时减少。结论:Bcl-2于再灌注早期表达增强,Bax于再灌注中期表达增强,Bcl-2/Bax比例失衡可能是大鼠全脑缺血再灌注后神经细胞凋亡的机制之一。     

脑缺血再灌注时bcl-2蛋白的表达及药物干预作用的研究

探讨ｂｃｌ－２在脑缺血再灌注时脑损伤过程的作用,以及川芎嗪和尼莫通对其影响。方法：采用免疫组化法检测大鼠缺血再灌注不同时间内ｂｃｌ－２蛋白表达的水平,以及川芎嗪和尼莫通干预后ｂｃｌ－２蛋白表达的变化。结果（１）脑缺血再灌注时缺血侧皮层和基底节区均有ｂｃｌ－２阳性表达,其阳性表达率随再灌注时间不同而不同,于缺血２再灌注３ｈ阳性表达达高峰。（２）川芎嗪,尼莫通干预组脑缺血再灌注时层和基底节区ｂｃｌ－２     

环磷酰胺对大鼠脑缺血再灌注后脑组织中ICAM-1、白细胞影响的研究

目的观察环磷酰胺对大鼠脑缺血再灌注后脑组织中ICAM-1表达、白细胞浸润的影响。方法36只雄性SD大鼠分为假手术组和脑缺血再灌注组。脑缺血再灌注组中包括环磷酰胺治疗组和生理盐水对照组,每组按脑缺血2h后再灌注2h、4h、6h、24h又分为4个亚组。脑缺血再灌注组于脑缺血2h再灌注后2h、4h、6h、24h处死动物,用免疫组织化学法观察再灌注后不同时间点脑组织中ICAM-1的表达,HE染色法观察白细胞的浸润程度。结果(1)脑缺血再灌注后,脑缺血坏死区周边ICAM-1的表达及白细胞的浸润增多,并于24h达高峰;环磷酰胺组在相同再灌注时间点的ICAM-1表达及白细胞的浸润均明显低于对照组。(2)ICAM-1的表达与白细胞的浸润呈现正相关性。结论脑缺血再灌注后,ICAM-1的表达上调,介导了白细胞和内皮细胞的粘附,参与了脑缺血再灌注损伤的过程。环磷酰胺治疗组ICAM-1的表达、白细胞的浸润均少于对照组,说明环磷酰胺有抑制粘附分子表达上调、抑制白细胞浸润的作用,因而具有神经保护的作用,为该治疗应用于临床提供了理论基础。