慢性膝关节炎关节滑膜组织阿片μ受体的表达

目的 观察慢性膝关节炎滑膜组织阿片μ受体的表达.方法 以成年人膝关节滑膜组织为研究对象,分为炎性组和对照组,每组25例.炎性组为关节镜下诊断为慢性膝关节炎患者;对照组为关节镜下需行髌骨内固定的髌骨脱位患者.滑膜组织分别在关节镜手术时取自膝关节腔髌上囊、关节前室、髁间窝、关节后室4个部位,采用免疫组化法和RT-PCR技术检测滑膜组织阿片μ受体的表达.结果 炎性组膝关节四个部位的滑膜组织阿片μ受体光密度值、阳性细胞百分率、mRNA表达量较对照组显著增高(P＜0.05),但各组内膝关节4个部位的滑膜组织阿片μ受体光密度值、阳性细胞百分率、mRNA表达量无明显差异(P＞0.05).结论 慢性滑膜炎时膝关节滑膜组织内阿片μ受体表达明显增加,这可以解释膝关节腔内使用阿片类药物缓解疼痛的作用机制.     

慢性膝关节炎关节滑膜组织阿片μ受体的表达

目的观察慢性膝关节炎滑膜组织阿片μ受体的表达。方法以成年人膝关节滑膜组织为研究对象,分为炎性组和对照组,每组25例。炎性组为关节镜下诊断为慢性膝关节炎患者;对照组为关节镜下需行髌骨内固定的髌骨脱位患者。滑膜组织分别在关节镜手术时取自膝关节腔髌上囊、关节前室、髁间窝、关节后室4个部位,采用免疫组化法和RT-PCR技术检测滑膜组织阿片μ受体的表达。结果炎性组膝关节四个部位的滑膜组织阿片μ受体光密度值、阳性细胞百分率、mRNA表达量较对照组显著增高(P<0.05),但各组内膝关节4个部位的滑膜组织阿片μ受体光密度值、阳性细胞百分率、mRNA表达量无明显差异(P>0.05)。结论慢性滑膜炎时膝关节滑膜组织内阿片μ受体表达明显增加,这可以解释膝关节腔内使用阿片类药物缓解疼痛的作用机制。     

μ阿片受体与镇痛

μ阿片受体是G蛋白偶联受体,有七个跨膜域,一个细胞外的氨基端区域和一个细胞内的羧基端尾区。目前已发现其有μ1和μ2两种亚型。μ阿片受体在脑内的分布与痛觉整合的通路相平行。在炎症情况下,μ阿片受体的表达量显著增加,从而增强了内源性阿片肽的镇痛作用。此外,μ阿片受体还参与阿片耐受。通过对μ阿片受体的探讨,人们可以更加清楚地了解阿片类药物和受体的关系,有助于开发新型的镇痛药物。     

杏仁中央核μ-阿片受体介导大鼠钠盐的摄入

目的 探讨杏仁中央核参与钠欲中枢调控的阿片能机制.方法 应用大脑插管术和脑微量注射法给大鼠双侧杏仁中央核内单独或联合注射选择性μ-阿片受体激动剂DAMGO和选择性μ-阿片受体拮抗剂CTAP,观察不同的摄钠模型大鼠对0.3 mol/LNaCl和水摄入的影响.结果 在“禁水-不完全补水(WD-PR)”摄钠模型大鼠,在双瓶测试中,双侧杏仁中央核内分别注射1、2、4 nmol剂量的DAMGO引起剂量依赖性的0.3 mol/L NaC1和水摄入增加的效应,而双侧杏仁中央核内分别注射0.5、l、2nnol剂量的CTAP则产生剂量依赖性的抑制DAMGO 2 nmol注射到同一部位所引起的0.3 mol/L NaCl和水摄入增加的效应;在单瓶测试中,双侧杏仁中央核内注射DAMGO 2 nmol对水摄入量没有影响.在“皮下联合注射利尿剂呋塞米(FURO)与血管紧张素转换酶抑制剂卡托普利(CAP)”摄钠模型大鼠,双侧杏仁中央核内注射2 nmol剂量的DAMGO引起0.3 mol/L NaCl和水摄入增加,而双侧杏仁中央核内注射1 nmol CTAP阻断μ-阿片受体则降低了DAMGO 2 nmol注射到同一部位所引起的0.3 mol/LNaCl和水摄入增加的效应;在单瓶测试中,双侧杏仁中央核内注射DAMGO 2 nmol对水摄入量没有影响.结论 杏仁中央核μ-阿片受体介导钠盐摄入,参与钠欲的兴奋性调控;μ-阿片受体阻断剂有望成为研发钠欲抑制剂的靶标.     

μ阿片受体的研究进展

临床上常用的吗啡等阿片类镇痛药具有严重的耐受性和成瘾性,深入研究阿片受体的结构特征和作用机制,对于开发新型的镇痛药物具有重要意义.人类对阿片受体的研究已有20多年的历史.1992年以来,已成功克隆出μ、δ、κ三种阿片受体,本文就μ阿片受体的结构、功能及其镇痛机制做一综述.     

μ阿片受体及其与抑郁症相关性研究进展

μ阿片受体(MOR)是一种G蛋白偶联受体,在痛觉传导区以及与情绪和行为相关的区域广泛存在,影响着动物的神经反应和行为表现。有研究发现,MOR与抑郁情绪相关,并且与许多情绪相关的神经递质和大脑网络联系密切,彼此相互作用,共同对情绪调控产生作用。该文就MOR与抑郁症的相关性及研究进展予以综述。     

μ型阿片受体参与CFA大鼠慢性炎性痛的外周调控

目的观察大鼠慢性炎性痛时背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)μ型阿片受体(mu opioid receptor,MOR)表达的变化及炎症局部注射MOR激动剂和拮抗剂对痛阈的干预作用,探讨MOR在慢性炎性疼痛中的作用。方法足底注射弗氏完全佐剂(complete freund’s adjuvant,CFA)制备大鼠慢性炎性痛模型,采用免疫组化法检测DRG MOR阳性细胞的表达;经大鼠足跖背部分别注射MOR激动剂、拮抗剂,采用辐射热法检测给药前后大鼠痛阈的变化。结果足底注射CFA诱导出大鼠慢性炎性痛,在造模后第18天,痛阈依然低于正常对照组;免疫组化结果表明,与正常对照组相比,CFA大鼠DRG MOR阳性细胞表达增多(P<0.01);足跖背部注射MOR激动剂减轻CFA大鼠的疼痛,对正常大鼠痛阈无影响;足跖背部注射MOR拮抗剂加重CFA大鼠的疼痛,对正常大鼠痛阈无影响。结论 DRG神经元MOR在慢性炎性痛时表达上调,参与慢性炎性痛的外周调控,可能有助于防止慢性痛的进一步加重。     

μ型阿片受体和催产素受体二聚化的研究

目的 探讨μ型阿片受体（MOR）和催产素受体（OTR）可否形成异源性受体二聚体。方法 采用免疫共沉淀（IP）和荧光共振能量转移（FRET）方法,检测在MOR和OTR质粒共转染中国仓鼠卵巢（CHO）细胞和大鼠脑组织中是否存在MOR和OTR异源二聚体。结果 IP方法检测显示,在MOR和OTR质粒共转染CHO细胞及大鼠脑组织中可见MOR和OTR蛋白条带。MOR和OTR共转染CHO细胞FRET方法检测信号为阳性（FRET率均值为2.01）。结论 在MOR和OTR质粒共转染CHO细胞及大鼠脑组织中存在异源性MOR和OTR二聚体。     

μ型阿片受体的克隆及序列分析

目的为实现人μ型阿片受体在哺乳动物细胞中的表达以及研究其生物学特性、下游基因表达及功能研究，克隆了人全长μ型受体cDNA。方法从人脑组织中提取总RNA，通过逆转录巢式PCR，扩增μ受体全长cDNA。克隆至pMD18-T载体中，并进行了酶切、PCR鉴定及测序分析。结果获得大小1229bp大小的肛受体全长cDNA基因，并构建到载体中，为研究受体信号转导下游基因的表达奠定理论基础。结论利用巢式RT-PCR法成功克隆了的μ受体全长cDNA序列，构建了pT-MD／hμR质粒。     

胍丁胺-I1咪唑啉受体对μ-阿片受体内吞的影响及机制探讨

[目的]观察胍丁胺通过激活I1咪唑啉受体（I1R）对阿片预处理引起的μ-阿片受体（MOR）内吞的影响及可能的分子基础。[方法]以CHO-μ和cno-μ/IRAS（imidazoline receptor antisera-selected protein）细胞作为研究对象,用[^3H]diprenorphine结合实验方法,确定胍丁胺．I1R作用系统对MOR内吞的影响以及可能产生的分子基础。[结果]在正常CHO-μ和CHO-μ/mAS细胞中,DAMGO（[D-Ala2,N-Me-Phe4,Gly5-ol]-enkephalin,1μmol／L）预处理两细胞30min后,MOR均发生内吞。胍丁胺（1nM～1μM）和DAMGO共同预处理两细胞30min,胍丁胺能浓度依赖性地抑制由DAMGO预处理引起的CHO-μ/IRAS细胞中MOR的内吞,而相同浓度胍丁胺对CHO-μ细胞中由DAMGO预处理引起的MOR的内吞无显著影响,且这一作用能被依法克生所阻断,提示胍丁胺通过激活I1R对DAMGO预处理引起的MOR内吞具有显著的抑制作用。Se^375磷酸化是影响MOR内吞的重要因素之一,而胍丁胺（10nM～1μM）和DAMGO共同预处理CHO-μ/IRAS和CHO-μ细胞30min,对两细胞中MOR Se^375磷酸化作用均无显著性影响,提示胍丁胺-I1R作用系统并不是通过抑制MORSe严磷酸化作用而抑制MOR内吞的。[结论]胍丁胺通过激活I1R可抑制DAMGO处理所致的μ-阿片受体内吞,此作用可能与胍丁胺抑制阿片依赖有关,但其分子机制并不是通过抑制MORSe严磷酸化作用而抑制MOR内吞。     

放射配基法测定大鼠海马μ-阿片受体的方法总结及优化

目的 建立一套安全、经济、可靠的实验条件.为检测大鼠海马μ阿片受体奠定方法学基础.方法 从膜蛋白提取、结合反应体系、孵育温度、孵育时间等方面,对放射配基结合分析的实验条件进行摸索;并从环保、经济的角度考虑,对实验进行了优化.结果 发现当蛋白浓度为1 mg/mL、[3H]DAMGO 0.5～8.0 nmol/L5个浓度点、非标记配基DAMGO浓度为5 μmol/L、4℃孵育过夜的条件下,结果稳定、可靠.结论 该方法经济、可靠、重复性好,且易于掌握、污染少.     

海洛因依赖与μ阿片受体基因多态性的关联研究

目的探讨海洛因依赖和μ阿片受体基因多态性的关系.方法应用聚合酶链反应技术检测313例海洛因依赖者和214名正常对照μ阿片受体基因.结果海洛因依赖者和对照组之间的上述的基因型和等位基因频率的差异无显著性(P>0.05).结论μ阿片受体基因多态性与海洛因依赖无关联.     

阿片受体μ-Myc-pIRES2-EGFP的构建及其在CHO细胞中的表达

目的:构建带Myc标签的大鼠μ型阿片受体的pIRES2-EGFP表达质粒(μ-Myc-pIRES2-EGFP),并实现其在CHO细胞中的表达。方法:以含大鼠全长μ阿片受体基因的μ-pMD20T载体为模板,通过引物设计和扩增,在μ基因C端引入Myc标签,AT克隆至pMD20-T载体中,测序鉴定,经酶切连接克隆入pIRES2-EGFP中,将获得的μ-Myc-pIRES2-EGFP转染入CHO细胞中,应用荧光显微镜观察EGFP表达情况,并用细胞免疫荧光和蛋白印迹检测μ-Myc的表达。结果:测序及酶切结果表明获得带Myc标签的μ基因,构建入pIRES2-EGFP表达质粒中,在荧光显微镜下,转染细胞可以观察到绿色荧光,应用免疫荧光和蛋白印迹观察到目的基因表达。结论:成功构建了μ-Myc-pIRES2-EGFP表达质粒,并在CHO细胞中实现了高效表达。     

侧脑室注射μ-阿片受体反义寡聚核苷酸对小鼠甲基苯丙胺行为敏化反应的影响

目的探讨μ-阿片受体(μ-opioid receptor,MOR)在小鼠甲基苯丙胺行为敏化中的作用。方法人工合成反义及错配反义MOR基因片断,通过对小鼠自主活动行为的检测,观测侧脑室注射MOR反义寡聚核苷酸(Antisense oligodeoxynucleotide,ASODN)对急性甲基苯丙胺活动增强效应及慢性甲基苯丙胺诱导的小鼠行为敏化形成的影响。结果MOR ASODN可显著降低甲基苯丙胺的急性高活动效应,并可阻断甲基苯丙胺诱导小鼠行为敏化的形成。结论MOR ASODN对中枢神经系统功能具有抑制作用,可抑制甲基苯丙胺诱导小鼠行为敏化的形成过程,提示MOR介导对甲基苯丙胺的成瘾行为的调控作用。     

新合成的阿片受体配基对稳定转染μ阿片受体的CHO细胞的受体结合特性

目的：研究新合成的阿片受体配基对稳定表达于CHO细胞的μ阿片受体的结合特性。方法：采用细胞生物学和放射性配基结合的方法,以能稳定表达μ阿片受体的CHO细胞为模型,检测阿片受体配基[^3H]diprenorphine(^3H-dip)与μ阿片受体的饱和性结合特征及一系列新合成阿片配基的竞争性结合特征。结果：(^3H-dip)结合μ阿片受体的平衡解离常数Kd值为1.06nmol/L;受体最大容量Bmax为930fmol/mg蛋白。竞争性结合实验表明3^#和12^#配基对μ阿片受体的亲和力高于BAMGO和吗啡。2^#、6^#、8^#和9^#配基对μ受体的亲和力低于BAMGO和吗啡。结论：新配基3^#和12^#对μ亚型的阿片受体有良好的亲和力。2^#、6^#、8^#和9^#配基对μ受体的亲和力较低。     

糖皮质激素对吗啡依赖大鼠脑区阿片μ受体的影响

目的:观察吗啡成瘾大鼠脑区内阿片μ受体的定位分布,研究糖皮质激素(地塞米松)控制阿片戒断症状的分子机制.方法:剂量递增腹腔注射吗啡建立大鼠成瘾模型,给予地塞米松干预,纳洛酮促瘾后观察戒断症状,采用免疫组化实验观察成瘾后阿片μ受体的分布定位变化.结果:吗啡依赖大鼠经地塞米松干预后,由纳洛酮催促戒断症状评分明显低于未经地塞米松处理组;吗啡成瘾后的阿片μ受体在各脑区的表达下调,尤以蓝斑、伏隔核、下丘脑、腹侧被盖区、海马等脑区明显.结论:吗啡成瘾后阿片μ受体在奖赏中枢和海马的表达下降.地塞米松能抑制吗啡依赖大鼠戒断症状及脑区阿片μ受体的表达.     

慢病毒介导的大鼠μ阿片受体在PC12细胞的稳定表达和功能

目的 建立具有神经元特性的稳定表达大鼠μ阿片受体（rat mu-opioid receptor,rMOR）的PC12细胞模型.方法 构建慢病毒表达载体pBPLV-rMOR-eGFP,包装病毒,并将包装好的慢病毒感染PC12细胞,流式细胞分选术结合有限稀释法筛选稳定表达rMOR的PC12细胞.以放射性配体受体结合实验检测表达受体的亲和力及表达水平,用cAMP超射分析在PC12细胞中表达的rMOR的功能特征及胍丁胺抗吗啡依赖的检测.结果 病毒感染细胞后,可见明显的荧光蛋白表达.单克隆扩大培养后,细胞生长正常.3 H-二丙诺啡与PC12-rMOR细胞中的rMOR蛋白有较好的亲和力,Kd值为（0.51±0.07）nmol/L,Bmax值为（1.58 ±0.15） pmol/mg;吗啡20 μmol/L慢性处理24h,纳洛酮10 μmol/L急性催促15 min引起cAMP升高（255 ±25.2）％,这一效应能被外源性胍丁胺剂量依赖性逆转.结论 成功建立了无α2肾上腺受体干扰、具有神经元特征、MOR与Ⅰ型咪唑啉受体稳定共表达的细胞模型,为吗啡成瘾神经分子机制及胍丁胺激活Ⅰ型咪唑啉受体抗阿片成瘾的神经分子机制研究提供良好的体外细胞研究模型.     

μ阿片受体外显子7在大鼠EM-1镇痛中的作用

目的:研究μ阿片受体外显子-7在EM-1镇痛中的作用。方法:取大鼠鞘内置管成功造模,随机分为3组,对照组,N-siRNA组及E-siRNA组,每组8只,每组分别经鞘内给予生理盐水30μl,阴性siRNA20μl质粒(NsiRNA组),或阳性siRNA 20μl质粒(E-siRNA组),连续处理3d,每天一次,于第4天检测机械痛觉,在基础机械痛阈检测后1h注射药物,大鼠分别于鞘内注射10μg的EM-1,于药物注射后5min,20min,40min及60min时间点检测机械性缩足反射痛阈值。E-siRNA组在上述实验结束6h后给予EM-1,10μg加10μg的纳洛酮,重复5min,20min,40min时间点检测痛阈值。结果:各组间的基础机械痛阈无差别;E-siRNA组EM-1的镇痛效能未降低(P>0.05),但表现延迟现象,在20min时达到最大;E-siRNA组在EM-1加纳洛酮未显示镇痛作用。结论:鞘内注射的靶向μ阿片受体外显子-7的阳性siRNA,对基础机械痛阈无影响;对EM-1的镇痛作用有延迟作用但未降低其镇痛效能。     

μ阿片受体参与吗啡耐受的角色初探

吗啡作为一种阿片受体激动剂,广泛用于治疗临床上出现的重度疼痛,但是长期应用会产生吗啡耐受,大大降低了其作用效率。μ阿片受体(Mu-opioid receptor,MOR)是吗啡的主要作用受体,属于G蛋白偶联受体家族,在镇痛中发挥了重要作用,同时MOR也具有该类受体家族的"失敏-内吞-复敏"特性。长期大量应用吗啡后,MOR磷酸化和失敏会加速吗啡耐受的出现,而MOR的内吞作为一种保护机制,能够拮抗吗啡耐受的形成。本文就MOR参与吗啡耐受的角色作一初步探讨。     

高浓度葡萄糖对人树突状细胞CD83、CD86、CD36、CCR7和μ-阿片受体的影响

目的：观察高浓度葡萄糖对人树突状细胞（DC）受体CD83、CD86、CD36、CCR7和μ-阿片受体（MOR）表达的影响,探讨高血糖在动脉粥样硬化免疫炎症反应中的作用。方法：从人外周血中提取和分离单个核细胞,在含重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子和重组人白介素4的RPMI1640完全培养基中培养。7d后未成熟DC分3组,分别在含有D-葡萄糖5mmol／L（NG组）、10mmol／L（TG组）和25mmool／L（HG组）的RPMI1640完全培养基中继续培养48h后,采用流式细胞术检测DC表面CD83、CD86、CD36、MOR和CCR7的变化。结果：TG组和HG组DC表面分子CD36、CCR7、CD83和CD86的阳性率均高于NG组（P〈0．05-P〈0．01）,HG组DC表面分子MOR的阳性率高于NG组（P〈0．05）,而HG组CD36、CD83和CD86的阳性率亦均明显高于TG组（P〈0．01）。结论：高浓度葡萄糖能促进DC表面分子CD36、CD86、CD83和CCR7的表达。