转化生长因子-β_1在小鼠内耳感觉上皮发育中表达的研究(摘要)

运用免疫组织化学技术(LSAB法)对转化生长因子-β_1(TGF-β_1)在昆明种小白鼠内耳感觉上皮发育中的表达进行研究,结果显示在小鼠胚胎发育的第15天至19天,TGF-β_1在耳蜗Corti's器始基感觉上皮中有较强的阳性表达;在胚胎发育的第15天至第18天,TGF-β_1在前庭囊斑及壶腹嵴的感觉上皮中也呈阳性     

Smad4 条件基因敲除小鼠前庭终器形态学研究

目的研究Smad4条件基因敲除小鼠前庭终器形忿改变，探讨Smad4基因对于前庭发育的作用。方法利用建立的Smad4条件基测敲除小鼠模型．通过光镜观察Smad4（＋／＋）、Smad4（＋／-）与Smad4（-／-）三种基因型小鼠（0．5、1．5月龄）的球囊及囊斑、椭圆囊及囊斑、半规管及壶腹嵴、前庭神经节、内淋巴管与囊的形态结构、毛细胞的形态及排列缺失情况。通过扫描电镜观察球囊斑、椭圆囊斑和壶腹嵴的形态结构、毛细胞及纤毛的排列缺失情况。结果Smad4（-／-）小鼠个体及内耳明显小于Smad4（＋／＋）和Smad4（＋／-），而后面二者区别不大。所有小鼠的球囊及囊斑、椭圆囊及囊斑、半规管、前庭神经节、内淋巴管与囊的大小和结构正常，淋巴囊腔饱满，囊斑处的感觉上皮、耳石、毛细胞及纤毛排列整齐，没有发现明显的病变．三个基因型间没有差异。Smad4（-／-）小鼠壶腹嵴囊性变多且严重、后半规管壶腹嵴出现明显的副嵴、偶尔可见壶腹嵴感觉上皮空泡样变。壶腹嵴的毛细胞和支持细胞排列整齐，形态无明显改变，未见缺失。扫描电镜示球囊斑、椭圆囊斑、后、外、上半规管壶腹嵴正常，三个基因型之间没有差异。结论Smad4（-／-）小鼠的前庭终器有轻微病理改变，Smad4（＋／＋）与Smad4（＋／-）小鼠的前庭终器形态结构基本正常．表明Smad4对于前庭终器的发育影响可能不明显。     

斑马鱼内耳感觉上皮分离术

目的 探索斑马鱼内耳感觉上皮的分离方法,为采用斑马鱼作为内耳发育及疾病研究的动物模型提供技术手段.方法 取4个月龄斑马鱼进行内耳组织冰冻切片,HE染色确定内耳感觉囊斑部位,并行免疫荧光染色观察毛细胞纤毛.在解剖显微镜下将斑马鱼内耳椭圆囊、球囊及听壶完整分离,取出内耳感觉囊斑平铺于载玻片中,进行免疫荧光染色,观察内耳感觉囊斑铺片的形态结构.结果 冰冻切片证实斑马鱼内耳感觉上皮位于囊斑内,并与耳石相对应.以耳石为标志分离出完整的内耳感觉囊斑组织,铺片免疫荧光染色后可观察到内耳感觉上皮形态结构完整,毛细胞纤毛显示清晰.结论 通过内耳感觉囊斑铺片技术可以完整分离出斑马鱼的内耳感觉上皮组织.     

小鼠内耳发育的分子生物学研究进展

听基板至听泡再发育成成熟内耳的过程是一个极其复杂的过程,包括外胚层上皮的引导,听囊的初步形成和改建,感觉上皮、非感觉上皮及神经元细胞的分化等过程,最终形成精细的迷路。其间多种基因的时间、空间表达精细、准确地控制调节着这一过程。这些基因通过编码转录因子、生长因子、分泌因子或受体蛋白等重要的生物分子,以不同的机制对内耳发育起重要作用。本文综述了近年来对小鼠内耳发育的分子生物学研究状况,从内耳发育的不同阶段阐述了目前较为公认的调节小鼠内耳发育的分子生物学机制。1听基板的形成及其相关基因图1听基板的形成过程1.1…     

内耳超微结构(续十三)

某些因素引起的内耳结构变化一、氨基糖苷类抗生素引起的内耳结构改变:(一)Harada 曾观察了氨基糖苷类抗生素药物对内耳前庭器官形态结构的损害。其结果,前庭器官感觉上皮受损严重。半规管壶腹嵴,特别是其中央部分感觉上皮变性,数月后减少。感觉毛融合直至消失,少数动物整个嵴上感觉毛可完全消失。椭圆囊斑可以出现同样的变化。鼓室内注射庆大霉素后二个月,嵴的感觉毛全部消失,嵴呈现皱缩。仅在嵴周缘部分感觉毛的表面有小泡样变化,纤毛的改变从变性到消失。在椭圆囊斑也有同样变化。腹膜腔内注射硫酸链霉素后其感觉毛的变化不及鼓室内注射快,二周组仅出现感觉毛稍微变化。4周组则壶腹嵴中央部分改变,感觉毛融合,     

小鼠内耳前庭发育研究进展

从听板到听囊到前庭发育成熟是一个复杂的过程,包括外形形成、上皮分化等。听囊是前庭发育的关键阶段,是各前庭器官、前庭感觉上皮的共同起源。多基因在时间、空间上精细、准确的差异表达决定了各器官、感觉上皮的分化发育方向。约有几十种基因参与分化发育的调控,但具体的分子机制尚不清楚。本文就各前庭感觉器官、感觉上皮的发育和涉及的相关...     

内耳转基因表达的实验研究

目的 了解内耳转基因表达的可行性。方法 将人复制缺陷重组腺病毒基因(Adenoviruses，Ad，含大肠杆菌β-半乳糖苷酶基因LacZ基因，Ad5．LacZ)经豚鼠耳蜗蜗窗接种到鼓阶外淋巴后，观察在不同时间、不同内耳组织中LacZ基因的表达(X-Gal染色)及Ad对豚鼠声反应(听性脑干反应)、听毛细胞(扫描电镜)的影响。结果 Ad介导的LacZ基因在内耳组织中的表达至少可持续4周，其中在螺旋神经节细胞表达稳定，Corti器、前庭囊斑、壶腹嵴的毛细胞等也有较强的表达。Ad未对豚鼠声反应(≤8000Hz)造成明显的损伤，除耳蜗底回外，其余各回未见明显的毛细胞缺失。结论 腺病毒载体可成功地将LacZ基因转导致豚鼠内耳组织中，并且未对豚鼠声反应(低、中频)及听毛细胞造成明显损伤，这对未来的内耳基因治疗研究可能具有重要的参考价值。     

Smad4条件基因敲除小鼠内耳前庭的组织学变化

目的 观察Smad4条件基因敲除小鼠内耳前庭的组织学变化,探讨Smad4基因在内耳前庭发育中的作用.方法 应用冰冻切片、免疫荧光化学、激光扫描共聚焦显微镜、扫描电镜、透射电镜等技术,观察软骨组织Smad4条件基因敲除小鼠内耳前庭组织形态的变化.结果 Smad4 -/-小鼠内耳软骨囊Smad4免疫反应阴性,Smad4+/-小鼠阳性,Smad4+/+小鼠强阳性,而在前庭感觉上皮——壶腹嵴和囊斑里Smad4免疫反应均呈阳性,三个基因型间没有差别;通过扫描电镜和透射电镜以及神经丝免疫荧光染色观察,三个基因型小鼠内耳前庭均未发现病变.结论 Smad4条件基因敲除小鼠的内耳软骨囊里Smad4基因被有效剔除,但其对内耳前庭的组织结构和形态影响有限.     

脊椎动物内耳发育的基因调控

基因的精细调控是细胞正常发育的关键，内耳毛细胞的再生也可能是内耳发育的重演。因此了解内耳发育，特别是听泡发育及内耳感觉前体细胞定向分化及嵌合体形成的基因表达及调控机制，对内耳毛细胞再生的研究及感音神经性耳聋的治疗都有指导意义。     

内耳转基因表达的实验研究

目的　了解内耳转基因表达的可行性。方法　将人复制缺陷重组腺病毒基因(Adenoviruses ,Ad ,含大肠杆菌 β 半乳糖苷酶基因LacZ基因 ,Ad5 LacZ)经豚鼠耳蜗蜗窗接种到鼓阶外淋巴后 ,观察在不同时间、不同内耳组织中LacZ基因的表达 (X Gal染色 )及Ad对豚鼠声反应 (听性脑干反应 )、听毛细胞 (扫描电镜 )的影响。结果　Ad介导的LacZ基因在内耳组织中的表达至少可持续 4周 ,其中在螺旋神经节细胞表达稳定 ,Corti器、前庭囊斑、壶腹嵴的毛细胞等也有较强的表达。Ad未对豚鼠声反应 (≤ 80 0 0Hz)造成明显的损伤 ,除耳蜗底回外 ,其余各回未见明显的毛细胞缺失。结论　腺病毒载体可成功地将LacZ基因转导致豚鼠内耳组织中 ,并且未对豚鼠声反应 (低、中频 )及听毛细胞造成明显损伤 ,这对未来的内耳基因治疗研究可能具有重要的参考价值。     

前庭毛细胞的反相激活模式

分布在内耳前庭各个终器的感觉毛细胞可分为两种类型,它们分别是I型毛细胞和II型毛细胞。这两种毛细胞无论是在静纤毛的长度,还是毛细胞细胞体的形状,或者神经末梢的连接方式以及与之相联系的前庭神经元都不一样。前庭毛细胞感受重力或体位改变刺激的机制是由于其插入到覆盖在其上方耳石膜或终帽内的纤毛随着这些辅助结构的惯性位移而发生弯曲,纤毛的弯曲引起毛细胞膜电位发生去极化或超极化改变,从而促使毛细胞的神经冲动信号发放增强或减弱。静纤毛朝着动纤毛的方向弯曲形成对毛细胞的兴奋性刺激,而静纤毛朝着背离动纤毛的方向弯曲则构成对毛细胞的抑制。球囊斑和椭圆囊斑都被从其中心穿越的一条狭窄的细胞带划分为两个区域,这条狭窄的细胞带被称之为微纹区,在椭圆囊斑微纹区两侧周边区毛细胞的动纤毛都排列在朝向微纹区的位置,而球囊斑微纹区两侧周边区毛细胞的动纤毛都排列在背离微纹区的位置,由此可见,每一个囊斑微纹区两侧毛细胞的极性正好完全相反。当机体沿着一个囊斑的平面从垂直于微纹区的方向产生一个加速运动时,该囊斑一侧周边区的毛细胞会因为静纤毛朝着动纤毛的方向弯曲使该侧毛细胞发生去极化而处于兴奋状态,而另一侧周边区的毛细胞却因静纤毛朝着离开动纤毛的方向弯曲使该侧毛细胞发生超极化而处于抑制状态。三个壶腹嵴上毛细胞的动纤毛都是朝着或背离椭圆囊的统一方向,其中外半规管壶腹嵴上每个毛细胞的动纤毛都是统一朝着椭圆囊,而上半规管和后半规管壶腹嵴上的每个毛细胞的动纤毛都是统一朝着半规管的方向。壶腹嵴是一个位于壶腹腔内的横位的马鞍形隆起,当其上方覆盖的胶状质终帽随着内淋巴液的流动发生相对位置移动时,壶腹嵴一侧的毛细胞纤毛必然会随着终帽顶部的偏移而发生方向一致的弯曲,从而使这半侧壶腹嵴毛细胞产生同步的去极化或超极化反应,然而壶腹嵴另外一侧毛细胞的纤毛却会因为内淋巴液在壶腹嵴上方推动终帽时在被壶腹嵴遮挡一侧的底部形成一个反方向的漩涡式回流使壶腹嵴另外一侧毛细胞的纤毛发生方向相反的弯曲,从而使壶腹嵴两侧毛细胞处于一侧兴奋而另一侧抑制的截然相反的不平衡状态。这意味着同样的加速运动方向对与之相对应的前庭终器两侧感觉上皮产生的是截然不同的刺激信号,从而造成该前庭终器两侧感觉上皮输入信号的不平衡。这种不平衡刺激模式经前庭周边神经元传入到前庭中枢神经系统,使整个从周边到中枢的前庭系统都是以这种不平衡刺激方式传递和感知机体的平衡状态。     

333脊椎动物内耳发育的基因调控

基因的精细调控是细胞正常发育的关键,内耳毛细胞的再生也可能是内耳发育的重演.因此了解内耳发育,特别是听泡发育及内耳感觉前体细胞定向分化及嵌合体形成的基因表达及调控机制,对内耳毛细胞再生的研究及感音神经性耳聋的治疗都有指导意义.     

内耳发育基因调控概述

了解并掌握内耳发育的基因调控,对研究内耳毛细胞的再生至关重要.本文综述内耳发育期间,由耳基板发育为耳囊、耳囊向听觉结构和前庭器演化、感觉前体细胞区建立、耳蜗螺旋器形成等各个期间已发现的主要相关基因,总结基因间形成的调控网络,并将重点放在耳蜗发育方面.     

Notch信号途径与哺乳动物的内耳感觉上皮发育

Notch途径作为动物发育中重要的信号转导途径，参与了胚胎发育中多种细胞系定向分化的调控。最近研究认为Notch信号传导途径参与哺乳动物内耳感觉前体细胞定向分化为毛细胞和支持细胞及嵌合体形成。本就Notch信号途径在哺乳动物内耳感觉上皮发育中的研究进展进行综述。     

胚胎小鼠耳蜗感觉上皮的形态发生

目的了解胚胎小鼠耳蜗感觉上皮发育的形态学特征及规律。方法利用光镜、扫描电镜、透射电镜观察从胚胎第8天到刚出生期间C57BL/6小鼠耳蜗感觉上皮发育过程中的形态变化。结果C57BL/6小鼠胚胎第10.5天耳蜗开始发育,感觉上皮由高柱状上皮细胞组成,到胚胎第14天才开始分化为原始的毛细胞;胚胎第16天耳蜗底转Corti器原基形成,毛细胞和支持细胞初具雏形;到出生时,耳蜗形态基本成熟,但底转Corti器仅趋向成熟,蜗尖才形成Corti器原基。结论小鼠耳蜗感觉上皮发育的形态变化在胚胎第13天到出生时最明显,感觉细胞都来源于一种高柱状上皮细胞,到胚胎第14天开始分化为毛细胞;而Corti器的分化成熟是从底转向顶转进行的,出生时尚未完全发育成熟。     

SOX10基因与综合征型耳聋的研究进展北大核心CSCD

SOX10参与神经嵴细胞的发育过程,在调控神经嵴细胞生存和保持多向分化潜能等方面起重要作用,研究表明SOX10基因在人体多个组织与器官中表达。感音神经性耳聋是由于螺旋器、听神经和各级听觉中枢的病变导致声音的感受和神经冲动传导发生障碍引起的耳聋。研究发现SOX10基因与先天性感音神经性耳聋关系密切,尤以综合征型聋为主,该基因影响内耳感觉上皮祖细胞分化及调控相关耳聋基因的表达,针对SOX10基因及蛋白与综合征型耳聋的研究有利于揭示耳聋的分子病因。     

小鼠前庭器官的形态发生

目的了解小鼠前庭器官发育的形态学特征及演变规律.方法利用光镜、扫描电镜、透射电镜观察C57BL/6小鼠从胚胎第8天到刚出生期间前庭器官发育过程中的形态变化.结果 C57BL/6小鼠的前庭器官在胚胎第10.5天开始发育,胚胎第11.5天形成上、后半规管始基,到胚胎第12天水平半规管始基才逐渐形成,椭圆囊已出现许多原始的感觉纤毛,而到胚胎第13天,球囊才开始发育;到胚胎第15天,椭圆囊、球囊、壶腹嵴初具成熟形态,毛细胞和支持细胞也初具雏形,到出生时,前庭器官已基本发育成熟.结论 C57BL/6小鼠前庭感觉细胞在胚胎第12天开始分化,感觉上皮的形态从胚胎第12天至第18天变化最明显.椭圆囊、壶腹嵴的发生较早,随后才形成球囊,到出生时前庭感觉器官已基本发育成熟.     

角蛋白、波形蛋白、神经细丝蛋白在人胎内耳的定位表达

本文对合法引产9～32周胎龄的人内耳中角蛋白、波形蛋白、神经细丝蛋白的表达进行了免疫组织化学定位研究。结果发现增殖期的前庭器和Corti器始基细胞均有这三种中间纤维的表达。随着内耳分化的进行，用蛋白表达部位限于表皮板、网板、支持细胞、血管纹和前庭壁细胞。波形蛋白的表达部位分布在Corti器始基细胞、一些支持细胞、环绕的结缔组织、软骨细胞、骨组织、血管纹缘细胞、螺旋神经节细胞和神经纤维，前庭感觉上度表达反应弱。神经细丝蛋白除了在神经细胞和神经纤维表达阳性外，在Corti器站基细胞上部、血管纹原始细胞表达明显，软骨细胞和骨组织表达弱。内耳发育成熟期，这三种中间纤维蛋白在感觉毛细胞和听毛细胞的内部都无阳性表达。研究结果提示：这三种中间纤维参与人内耳的发育，可能与人内耳功能的发生有关。     

实验性头外伤后前庭迷路的组织病理变化

用无依托式头外伤装置，造成豚鼠轻型头外伤模型。痛觉恢复后立即处死６只（Ⅰ组），存活１５天处死５只（Ⅱ组）。颞骨火棉胶包埋，切片光镜观察，见两囊斑病变为大片耳石脱落、斑松解、剥离及感觉上皮空泡化、纤毛区大量球形体。１耳球囊斑脱落耳石靠近连合管。壶腹嵴病变为感觉上皮空泡化，上皮紊乱、松解，纤毛区大量球形体及嵴周嗜碱性颗粒附着。嵴周嗜碱性颗粒附着与嵴顶结石症病理变化一致。表明在头外伤后前庭病变，尤其是两囊斑的损害明显。其继发性病变，如嵴顶结石，连合管堵塞，可能是部分头外伤后听及前庭功能障碍的病理基础。     

212Notch信号途径与哺乳动物的内耳感觉上皮发育

Notch途径作为动物发育中重要的信号转导途径,参与了胚胎发育中多种细胞系定向分化的调控.最近研究认为Notch信号传导途径参与哺乳动物内耳感觉前体细胞定向分化为毛细胞和支持细胞及嵌合体形成.本文就Notch信号途径在哺乳动物内耳感觉上皮发育中的研究进展进行综述.