白色念珠菌的耐药性和随机扩增DNA多态性分型研究

采用Etest药敏试验方法检测 30株临床分离白色念珠菌对 5种抗真菌药物的敏感性 ,并用随机扩增DNA多态性 (RAPD)分型方法对这些菌株进行基因分型。结果发现有两株对氟康唑耐药 ,且它们的RAPD带型有着高度相似性 ,提示RAPD带型可能与耐氟康唑基因有关。     

应用M13引物PCR指纹法分析假丝酵母菌氟康唑耐药性

目的探讨M13微卫星引物PCR指纹法用于假丝酵母菌氟康唑耐药性基因分型的可行性。方法采用纸片扩散法分析假丝酵母菌氟康唑耐药性,并进一步对41株假丝酵母菌进行M13引物PCR指纹分析,采用RAPD200软件邻接法(neighbour joining,NJ)聚类分析电泳带型模式。结果41例主要从痰液和阴道分泌物中分离的假丝酵母菌标本中中,氟康唑药物敏感11株(26.8%),依赖8例(19.5%),耐药22例(53.7%),PCR指纹分析至少可检测到12种不同的条带,条带数目从2条到12条不等,电泳带型模式与感染部位和氟康唑药物反应性有关。结论假丝酵母菌氟康唑耐药性菌珠所占比例较大,M13微卫星引物PCR指纹法可用于假丝酵母菌的分子流行病学调查和氟康唑耐药性基因分型。     

金黄色葡萄球菌随机扩增DNA多态性分型研究

目的:建立金黄色葡萄球菌随机扩增DNA多态性(RAPD)分型技术,以应用于临床菌种鉴定及流行病学调查。方法:对临床分离的15株金黄色葡萄球菌,酚氯仿法提取其DNA后行RAPD分型,同时进行噬菌体分型。结果:15株临床分离株大多数产生独特而稳定的RAPD带型,可分成5个噬菌体型和14个RAPD谱型。采用同一反应体系,产肠毒素金黄色葡萄球菌未出现RAPD谱型。结论:RAPD基因分型技术不需己知核酸序列,分型率高,分辩力强,简便快捷,可为金黄色葡萄球菌临床分离株提供分型标志,是分子流行病学研究的有效方法。     

应用M13引物PCR指纹法分析假丝酵母菌氟康唑耐药性

目的 探讨M13微卫星引物PCR指纹法用于假丝酵母菌氟康唑耐药性基因分型的可行性。方法 采用纸片扩散法分析假丝酵母菌氟康唑耐药性，并进一步对41株假丝酵母菌进行M13引物PCR指纹分析，采用RAPD200软件邻接法(neighbour joining，NJ)聚类分析电泳带型模式。结果 41例主要从痰液和阴道分泌物中分离的假丝酵母菌标本中中，氟康唑药物敏感11株(26.8％)，依赖8例(19.5％)，耐药22例(53．7％)，PCR指纹分析至少可检测到12种不同的条带，条带数目从2条到12条不等，电泳带型模式与感染部位和氟康唑药物反应性有关。结论 假丝酵母菌氟康唑耐药性菌珠所占比例较大，M13微卫星引物PCR指纹法可用于假丝酵母菌的分子流行病学调查和氟康唑耐药性基因分型。     

马拉色菌属种内基因多态性机制的分析

目的分析RAPD法对马拉色菌属分型的可靠性,并探讨马拉色菌属种内基因多态性的机制。方法分别用RAPD法和传统的生化法对74株马拉色菌临床株进行分型鉴定,比较两者结果的异同。扩增7株糠秕马拉色菌ITS1区,并进行SSCP分析。结果大部分马拉色菌的RAPD分型结果与生化结果是符合的,但也有9株马拉色菌被归入别的种。同时即便被归入同一类的菌株也存在多态性的RAPD带型。对糠秕马拉色菌的ITS1区进行SSCP分析可看到明显的单链构象差异,而且其差异程度在RAPD分型中得到了印证。结论由此推断种内基因多态性会干扰马拉色菌的分子分型,而ITS1的序列是种内基因多态性的敏感指标。     

肺炎克雷伯菌基因分型与药敏结果分析

目的对肺炎克雷伯菌各型菌株的耐药现状进行流行病学研究。方法采用改进的随机引物扩增多态性DNA分型法(RAPD)基因分型技术,对分离自门诊和住院患者的48株肺炎克雷伯菌进行基因分型,同时对菌株进行12种抗生素敏感试验。结果48株肺炎克雷伯菌41株有稳定的RAPD带型,共分16型,同型菌株药敏结果基本相同。结论该院呼吸科R ICU存在肺炎克雷伯菌的小流行;合理使用抗生素,加强重点病区的消毒隔离措施,是控制医院感染流行的重要措施。     

申克孢子丝菌的随机扩增DNA指纹分型

目的：对申克孢子丝菌进行基因分型研究,探索申克孢子丝菌的基因分型标准。方法：用光镜对2株标准株,4株环境分离株和24株临床分离菌株进行形态特征观察,再用随机扩增DNA指纹方法(RAPD)对DNA进行PCR扩增,根据扩增产物的电泳带型来分析DNA多态性。结果：30株菌株镜下可见2种形态结构;30株申克孢子丝菌的DNA指纹带型不同;多引物聚类分析表明,3条引物可将30株不同地区来源申克孢子丝菌分作11个型。结论：(1)在我国申克孢子丝菌中存在2种不同的形态结构。(2)申克孢子丝菌中存在不同的基因型。(3)RAPD法用于申克孢子丝菌菌株鉴定是一种快速、方便、可行的方法。     

肠球菌随机扩增多态性DNA分型及应用研究

目的建立随机扩增多态性DNA(random amplified polymorphic DNA，RAPD)分型技术，对肠球菌进行基因分型，探讨RAPD在分子流行病学中的应用，并探讨肠球菌的基因分型及其与耐药性的关系。方法对医院临床标本中分离的64株肠球菌进行RAPD基因分型，并分析基因型与耐药性的关系。结果RAPD分型结果显示，经优化的RAPD分型技术能有效地对肠球菌进行基因分型，分型率为100％。64株肠球菌根据扩增片段的差异分为8种基因型。以Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅶ型为主，共占81．4％。Ⅰ、Ⅷ型具有对β内酰胺类抗生素和高水平氨基糖苷类抗生素耐药。Ⅳ型具有对β-内酰胺类抗生素耐药。Ⅲ、Ⅶ具有对高水平氨基糖苷类抗生素耐药。Ⅱ、Ⅴ、Ⅵ型具有对β-内酰胺类抗生素、高水平氨基糖苷类抗生素、糖肽类抗生素敏感。结论RAPD分型技术是一种特异、敏感、简便快速、分辨力强、分型率高、重复性好的分型方法。可有效地对肠球菌进行基因分型，并且肠球菌的RAPD分型与其耐药性有一定关系。     

口腔念珠菌的PCR ITS1-ITS2和RAPD基因分型

目的探讨对口腔念珠菌准确可靠的基因分型方法.方法 9株临床菌株经YBC Test Kit鉴定为7株白色念珠菌(简称白念),1株热带念珠菌,1株光滑念珠菌.分别采用PCR ITS1-ITS2和RAPD两种基因分型方法对其进行基因分型,并比较其结果.结果 PCR ITS1-ITS2方法将7株白念分为2型,将2株非白念准确鉴定为热带念珠菌和光滑念珠菌;用RAPD方法将7株白念分为6型,推测另外2株为非白念.结论两种分型方法对白念种内的分型结果不完全一致.PCR ITS1-ITS2分型法能准确地区分非白念.     

口腔念珠菌的PCR ITS1-ITS2和RAPD基因分型

目的探讨对口腔念珠菌准确可靠的基因分型方法。方法9株临床菌株经YBC Test Kit鉴定为7株白色念珠菌(简称白念)，1株热带念珠菌，1株光滑念珠菌。分别采用PCR ITS1-ITS2和RAPD两种基因分型方法对其进行基因分型，并比较其结果。结果PCR ITS1-ITS2方法将7株白念分为2型，将2株非白念准确鉴定为热带念珠菌和光滑念珠菌；用RAPD方法将7株白念分为6型，推测另外2株为非白念。结论两种分型方法对白念种内的分型结果不完全一致。PCR ITS1-ITS2分型法能准确地区分非白念。     

口腔扁平苔藓患者白色念珠菌分离株的基因型分析

目的 研究健康人和口腔扁平苔藓(oral lichen planus,OLP)患者口腔白色念珠菌分离株的基因型分布特征．方法 应用随机扩增片段多态性分析法(randomly amplified polymorphic DNA,RAPD),对来自于健康人(26株)、糜烂型OLP患者(62株)以及非糜烂型OLP患者(24株)共112株白色念珠菌菌株做基因型分型,比较OLP患者与健康对照组白色念珠菌分离株的基因型分布差异．结果 本研究采用的RAPD分析法可大致将所有白色念珠菌分离株分为A、B、C、D四种基因型;健康对照组、糜烂型OLP和非糜烂型OLP患者组的白色念珠菌分离株的基因型构成具有差异,其中,健康对照组以B、D型为主,糜烂型OLP患者组以A、C型为主,非糜烂型OLP患者组以A、D型为主。结论 某些具有特定基因型的白色念珠菌与OLP的发生发展可能相关。     

白念珠菌基因多态性与耐药性关系

 【目的】探讨耐氟康唑白念珠菌基因多态性与其耐药性是否相关。【方法】收集48株敏感白念珠菌和10株耐氟康唑白念珠菌,其中包括2株体外诱导的耐氟康唑白念珠菌。选择1个随机引物(引物1251),采用任意引物PCR方法基因分型,将电泳图谱扫描入计算机后采用Labwork4.0软件转化为数值图表,利用SPSS11.5进行聚类分析。【结果】引物1251的PCR指纹图带型稳定,多态性丰富,可以作为分型引物。聚类分析结果提示8株临床耐药菌的PCR指纹图相似系数为71.7%,而其中7株的耐药菌相似系数高达86.7%,远高于58株菌的平均相似系数(47.3%)。2株体外诱导的耐药菌诱导前后基因型未发生变化。【结论】基因分型的结果未提示耐氟康唑白念珠菌存在一定的特殊电泳条带,但提示了特定的PCR指纹图可能与耐药性有一定相关性。     

ICU患者肺部感染病原性真菌的分布及白色念珠菌基因分型

目的 旨在了解梅州地区ICU患者侵袭性肺部真菌感染（IPFI）的物种分布、药物敏感及白色念珠菌RAPD-PCR指纹图谱特征和不同基因型菌株耐药性差异。方法 收集ICU中149例IPFI患者的呼吸道标本,采用法国梅里埃VITEK 2-Compact和API鉴定系统进行菌株鉴定和药敏试验,运用RAPD 技术对分离的62 株白色念珠菌进行分析。结果 该地区IPFI的物种以白色念珠菌占比最高为38.51%（62/161）,其次为热带念珠菌、近平滑念珠菌、光滑念珠菌、克柔念珠菌和季也蒙念珠菌等非白念珠菌,非白念珠菌整体占比为48.45%（78/161）;它们对常用抗真菌药物具有较好的敏感性,但是出现了近平滑念珠菌对卡泊芬净的耐药菌株和光滑念珠菌对唑类药物敏感性相对较低的情况;白色念珠菌P2 随机引物扩增条带数量1~5条,条带大小在300 bp~1.8 kb ,以300 bp、400 bp 和600 bp 3 个主条带为主;利用聚类分析将这些菌株分为A~D 4个基因群, 其中A基因群11株,B基因群42株,C基因群7株和D基因群2株;不同基因型白色念珠菌对各药物敏感性的差异无统计学意义。结论 白色念珠菌、热带念珠菌和近平滑念珠菌等念珠菌属是广东梅州地区ICU患者 IPFI的最常见病原体,白色念珠菌存在丰富的基因多态性,RAPD 技术对于白色念珠菌的基因型鉴定具有重要意义。     

假丝酵母性阴道炎的病原菌检测及RAPD分析

目的：探讨女性假丝酵母性阴道炎的病原菌种类,分析其随机扩增DNA多态性（RAPD）,为该病的临床诊断及流行病学监测提供依据。方法：刮取106例疑似假丝酵母性阴道炎患者道分泌物,分离培养并鉴定病原菌;利用10种随机引物（RAPD 1~10）对分离病原菌进行RAPD分析。结果：①分离获得假丝酵母72株,其中白假丝酵母56株（77.78%）,非白假丝酵母16株（22.22%）,包括光滑假丝酵母6 株（8.33%）、热带假丝酵母4 株（5.56%）、克柔假丝酵母1 株（1.39%）及其他假丝酵母5 株（6.94%）;②RAPD分析表明：有2种引物（RAPD2和RAPD5）可以获得较清晰、稳定的特异性带型,具有较明显的种间遗传变异性和种内遗传相似性。结论：假丝酵母性阴道炎病原菌以白假丝酵母为主。随机引物RAPD2和RAPD5比较适于白假丝酵母和热带假丝酵母的分型、鉴定。     

致病念珠菌的临床药敏分析与基因分型探讨

目的调查阴道念珠菌感染致病菌种及对常用抗真菌药物的耐药谱;探讨念珠菌基因型检测方法的临床及流行病学价值,为临床念珠菌病的防治提供临床与实验依据.方法采用酵母菌鉴定板及ATB真菌药敏试剂条对临床589例再发性念珠菌阴道炎患者的分离株作菌种鉴定及药敏分析;ERIC-PCR指纹方法比较147株白色念珠菌咪康唑敏感株及60株咪康唑耐药株的基因型.结果白色念珠菌仍是优势致病菌株,占82.7%,非白色念珠菌中光滑念珠菌感染率高达12.7%;非白色念珠菌对酮康唑、咪康唑与益康唑的耐药率高(P＜0.01),白色念珠菌则对5-氟胞嘧啶较多耐药(P＜0.01);念珠菌对常用唑类药物益康唑、酮康唑、咪康唑存在较高的交叉耐药率;念珠菌对制霉菌素耐药率极低;白色念珠菌咪康唑敏感株及耐药株ERIC-PCR指纹一致.结论菌株的基因型可作为流行病学调查的稳定标记,但念珠菌阴道炎治疗的临床用药应以菌种鉴定及药敏分析为基础;唑类药物使用要慎防各唑类药物之间的交叉耐药;制霉菌素在无耐药检测条件下可作为部分顽固病例的经验用药.     

DNA-based subtypes and antimicrobial susceptibility profiles of Haemophilus influenzae and Haemophilus parainfluenzae isolated from different tonsillar sites of children undergoing tonsillectomy and/or adenoidectomy

We did a comparative analysis between DNA-based subtypes and antimicrobial susceptibility profiles on Haemophilus influenzae and Haemophilus parainfluenzae, isolated from multiple tonsillar sites per individual from patients with chronic recurrent tonsillitis and/or tonsillar idiopathic hypertrophy and undergoing tonsillectomy and/or adenoidectomy. A total of eighty-eight Haemophilus isolates were obtained aseptically from the surface and core of tonsils and/or adenoids of 32 out of 60 patients and identified at the species level by the X and V factors and the API NH Kit. The H. influenzae and H. parainfluenzae isolates as well as ATCC strains were tested for antimicrobial susceptibility using a panel of antimicrobial agents. Random amplified polymorphic DNA (RAPD) was done on extracted DNA from all Haemophilus isolates and ATCC strains, using one 10 mer and one 18 mer primers to subtype the two species. Antimicrobial susceptibility testing data have shown a variation in generated susceptibility patterns to tested antimicrobial agents among H. influenzae and H. parainfluenzae isolates. This variation was demonstrated too among isolates obtained from different tonsillar sites (core and surface) in a single patient. RAPD analysis identified 58/88 (66%) different RAPD patterns. Variations in RAPD patterns among H. influenzae and H. parainfluenzae were also observed in isolates obtained from different tonsillar sites of the same individual. A correlation between RAPD patterns and antimicrobial susceptibility data, have shown: 1) the predominance of one strain (RAPD pattern) of either Haemophilus species among isolated organisms per patient, and exhibiting different antimicrobial susceptibility profiles or 2) the existence of multiple strains (RAPD patterns) of either Haemophilis species per patient, and showing either a single or multiple antimicrobial susceptibility profile(s). These observations question the validity of swab cultures obtained from a single tonsillar site per patient, for detection, identification and determination of antimicrobial profiles of the etiology of tonsillitis, since swab specimens taken from only one site may or may not reflect the etiology of infection.     

临床常见念珠菌对抗真菌药物体外敏感性的研究

目的:研究念珠菌对6种抗真菌药物的敏感情况。方法:念珠菌收集2004年7月~2005年4月临床患者提供的标本,测定从临床血液、尿液、痰等标本中分离的300株常见念珠菌对两性霉素B、制霉菌素、氟康唑、咪康唑、克霉唑、酮康唑的敏感性。结果:白色念珠菌最常见占64.0%,其次为热带念珠菌占19.7%,光滑球拟酵母菌占11.7%,近平滑念珠菌占2.3%,其他念珠菌占2.3%。临床常见念珠菌对两性霉素B、制霉菌素、氟康唑敏感性最高,对唑类药物存在不同程度的耐药性。结论:应加强对念珠菌药物敏感性的检测,以指导临床抗感染治疗合理选择药物。