人血浆抗凝血酶Ⅲ放射免疫分析及初步应用

抗凝血酶 Ⅲ (ａｎｔｉｔｈｒｏｍｂｉｎ Ⅲ ,ＡＴ Ⅲ )是一种重要的抗凝血物质 ,占人体总抗凝血能力的 75 %。血浆中ＡＴ Ⅲ浓度降低可影响凝血 抗凝血平衡而出现高凝血症。临床上血栓形成性疾病如先天性ＡＴ Ⅲ缺乏、慢性肝脏损害[1 ] 、大手术后深静脉栓塞、弥漫性血管内凝血(ＤＩＣ) [2 ] 及妊娠中晚期等常有ＡＴ Ⅲ水平降低。故测定血浆中ＡＴ Ⅲ的含量可判断血栓形成性疾病的病因 ,并有助于选择治疗方法和评价疗效。国内以往检测ＡＴ Ⅲ水平主要靠火箭免疫电泳法等 ,这些方法灵敏度低 ,耗时长。我们采用经改进的Ａｎｄｅｒｓｓｏｎ方…     

蛋白S放射免疫分析

蛋白Ｓ放射免疫分析王博诚金坚陶永辉张荣军血浆中的蛋白Ｓ（ＰＳ）有两种形式，游离ＰＳ（ＦＰＳ）及与补体第一途径的调节蛋白Ｃ４ｂ结合蛋白（Ｃ４ｂＰ）结合的ＰＳ（ＢＰＳ）。ＦＰＳ参与抗凝〔１〕，ＢＰＳ则参与补体系统激活的调控〔２〕。ＰＳ家族性缺乏已查明为常...     

视黄醇结合蛋白的放射免疫分析

视黄醇结合蛋白的放射免疫分析范列英，沈新义，耿培兰，徐庆文，王志凌视黄醇结合蛋白（ｒｅｔｉｎｏｌ－ｂｉｎｄｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎ，ＲＢＰ）为血液中视黄醇转运蛋白［１］，是反映近端肾小管功能和肝功能损害程度的敏感指标［２，３］．我们用本室制备的ＲＢＰ纯品...     

人血浆甘丙素的放射免疫测定及初步临床应用

人血浆甘丙素的放射免疫测定及初步临床应用１０００３７海军总医院赵云涛，石湘芸，周正谋，张昭馥，李钟孝，丁殿勋，李继达，汤健，唐朝枢，张肇康摘要应用人甘丙素及其抗血清建立了人血浆甘丙素的放射免疫测定法。其精密度、准确度、灵敏度、稳定性及特异性经验证均达...     

急性冠脉综合征血浆C—反应蛋白的变化

炎症反应是否是参与冠状动脉血栓形成及痉挛的始动因素 ,正引起人们的重视。作为反映体内炎症反应程度的Ｃ 反应蛋白 (Ｃ ｒｅａｃｔｉｖｅｐｒｏｔｅｉｎ ,Ｃ ＲＰ)血浆浓度变化与冠心病的严重程度及急性冠脉事件发生是否相关联 ,是医学界研究的重点课题。作者通过血浆Ｃ 反应蛋白测定 ,探讨Ｃ ＲＰ与急性冠脉事件发生的关系。1　对象和方法1 1　对象　随机选择住院的冠心病 6 0例 ,诊断符合国际心脏病学会和世界卫生组织缺血性心脏病的诊断和命名标准。男 37例 ,女 2 3例 ;年龄 59±12 6岁。其中急性心肌梗死 (ＡＭＩ) 15例 ,不稳定型心…     

妊高征孕妇血浆尾加压素Ⅱ与血清C反应蛋白检测的临床意义

目的探讨妊娠高血压综合征孕妇血浆尾加压素Ⅱ（UⅡ）与血清C反应蛋白（CRP）检测的临床意义。方法采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测30例妊娠高血压综合征（PIH）组、30例正常孕妇和30例非妊娠健康妇女血浆UⅡ与CRP的水平变化。结果 PIH组血浆UⅡ与CRP水平均明显高于正常孕妇和非妊娠健康妇女（P〈0.01）。直线相关分析表明,PIH组孕妇的血浆UⅡ与CRP具有显著相关性（r=0.893,P〈0.01）。结论测定PIH孕妇血浆UⅡ和CRP,能够及时了解血管内皮细胞损伤和炎症反应程度,利于本病预防及早期治疗。     

心肌肌凝蛋白轻链放射免疫分析及临床初步应用

为提供急性心肌梗塞（ＡＭＩ）早期血清学诊断法，用改进后的Ｓｃｈｏβ法提取狗肌凝蛋白轻链（ＣＭ－ＬＣ），免疫兔获得抗血清。氯胺Ｔ法标记抗原，建立血清ＣＭ－ＬＣ ＲＩＡ。结果：该方法标准曲线测量范围１－１００μｇ／Ｌ，批内、批间（ＣＶ分别是３．２％和９．１％，平均回收率９５．３％。正常人３０例血清ＣＭ－ＬＣ为３．５±１．５μｇ／Ｌ，２０例ＡＭＩ患 者血清ＣＭ＝ＬＣ为２０．２±８．６μｇ／Ｌ，两组间差异     

高原性蛋白尿的定量分析

目的：探讨高原性蛋白尿的类型及肾脏损害的程度。方法：对青海高原地区入伍１２０ 天战士２０ 人份蛋白尿阳性标本进行尿蛋白组份的测定。结果：ＡＬＢ（血清白蛋白）（０．１５６５±０．１３８５）ｇ／Ｌ,ＴＨＢ（Ｔａｍ ｍ － Ｈｏｒｓｆａｌｌ蛋白）（０．０００８７±０．０００４７）ｇ／Ｌ,ＩｇＧ（免疫球蛋白Ｇ）（０．０１０９±０．００４９）ｇ／Ｌ,β２ － ＭＧ（β２—微球蛋白）（２．８１８±２．６４５）ｇ／Ｌ,α１－ＭＧ（α１—微球蛋白）（４８．８９±２７．２１）ｇ／Ｌ。结论：蛋白尿蛋白组份测定可准确判断高原性蛋白尿的类型,并可作为判断肾脏损害,尤其是肾脏早期损害的灵敏指标。     

醛缩酶A放射免疫测定对原发性肝癌的诊断价值

醛缩酶A含有三种同工酶成份。本文报道从人新鲜肌肉中提取肌肉型醛缩酶(ALD-A),纯化后制备抗ALD-A抗体以及兔抗鸡第二抗体。经~(125)I标记抗原,建立放射免疫测定法。56例正常人平均128.5±81.5ng/ml,原发性肝癌平均490.8±417.5ng/ml,肝硬化185.0±179.7ng/ml,原发性肝癌与正常人及与肝硬化相比,均有显著差异(P<0.001)。非癌性肝病中ALD-A虽然也有升高,但与肝癌相比,升高幅度不同,>800ng/ml以上者均为肝癌。AFP阳性的肝癌中ALD-A之阳性率54.2％,AFP阴性的肝癌中阳性率73.6％。因此ALD-A放免测定对原发性肝癌的诊断有一定的帮助。     

肿瘤坏死因子α放射免疫分析及临床应用

了解肿瘤坏死因子α（ＴＮＦ-α）在人体疾病发生中的作用．方法：建立了ＴＮＦ-α的双抗体放射免疫分析法（ＲＩＡ）．结果：方法的批内及批间ＣＶ分别为５．７６％±１．７３％和６．０８％±１．９１％．灵敏度为５．４ｐｍｏｌ／Ｌ．临床应用结果显示，癌症、细菌感染及脑血管病病人的血清ＴＮＦ-α值显著高于正常人（Ｐ＜０．０１），败血症、脑缺氧症新生儿的血清ＴＮＦ-α值显著高于正常新生儿（Ｐ＜０．０１）．结论：测定血清ＴＮＦ-α值有助于临床疾病的诊断及治疗．     

HCV包膜蛋白E2的表达及其抗原性的检测

为研究丙型肝炎病毒（HCV）包膜蛋白E2在原核细胞和真核细胞中的表达，并对表达蛋白的抗原性进行检测。将HCV E2区N端的一段基因分别克隆入原核表达载体pQE30和真核表达载体pEF1/HisC中进行E2蛋白的表达，采用ELISA和WB对表达蛋白的抗原性进行检测。结果在原核细胞和真核细胞中均表达了预期大小的蛋白，能同HCV感染者血清发生特异性反应。提示该段E2基因在原核表达系统和真核表达系统均能表达出具有抗原活性的蛋白，其中真核细胞表达的蛋白可被糖基化。     

丙型肝炎病毒非结构蛋白5B结合蛋白的酵母双杂交筛选研究

目前认为丙型肝炎病毒 (HCV)的非结构蛋白 5B(NS5B)是病毒复制酶 ,但是对其生物学特性还不十分清楚 ,我们应用酵母双杂交系统 3,构建NS5B诱饵质粒 ,转化酵母AH10 9,与含人肝细胞cDNA文库质粒的酵母Y187进行配合 ,于涂有X α gal营养缺陷型培养基(SD/ Trp Leu His Ade)上筛选生长。挑选蓝色克隆 ,筛选出 33个与NS5B特异性相互作用的克隆 ,其中有 31个已知功能基因及 2个未知功能基因。所克隆到的基因对以后研究NS5B的功能有一定的提示作用 ,并为研究这些能与NS5B相互作用的基因在肝细胞中的生理功能奠定了基础。     

筛选与克隆丙型肝炎病毒NS5A蛋白结合蛋白的基因

细胞内蛋白－蛋白的结合是丙型肝炎病毒（HCV）与宿主肝细胞相互作用的分子生物学基础。HCV的非结构蛋白5A（NS5A）被认为是一种HCV基因组编码的重要调节蛋白因子，参与HCV的复制、转录和信号传导等过程，但是它在HCV的致病及耐药等方面的作用还存有争议。为了进一步阐明这个多功能蛋白质与宿主蛋白的关系，作者采用酵母双杂交系统3，在酵母细胞融合蛋白表达型人肝cDNA文库中进行筛选，得到35个与NS5A特异性结合的阳性克隆，包括载脂蛋白、线粒体单体型基因，磷脂酸酸性磷酸酶等11种已知功能蛋白质基因和3个未知功能基因。本研究结果为阐明NS5A在HCV致病中的作用提供了重要研究线索。     

丙型肝炎病毒核心蛋白可溶性单链可变区抗体在大肠杆菌中的表达

利用分子生物学技术,构建表达丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）核心蛋白的人源单链可变区抗体（ＳｃＦｖ）的原核表达载体,并在大肠杆菌ＪＭ１０９中表达可溶性的ＨＣＶ－ｃｏｒｅ－ＳｃＦｖ。以重组的ＨＣＶ核心蛋白为包被抗原,利用噬菌体抗体库的表面展示技术,筛选到含有ＨＣＶ－ｃｏｒｅ－ＳｃＦｖ基因的噬菌体克隆。从噬菌体抗体阳性克隆中提取质粒,经ＮｃｏⅠ／Ｎｏｔ Ⅰ酶切鉴定,该ＳｃＦｖ基因由７５０ｂｐ组成。将其亚克隆到ｐＣＡＮＴＡＢ５Ｅ表达载体中,转化大肠杆菌ＪＭ１０９,提取质粒进行ＤＮＡ序列测定,符合ＳｃＦｖ的重链可变区和轻链可变区基因结构特点。ＩＰＴＧ诱导转化的大肠杆菌ＪＭ１０９,在其培养上清中获得了可溶性ＨＣＶ－ｃｏｒｅ－ＳｃＦｖ的表达。酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）证实表达的ＨＣＶ－ｃｏｒｅ－ＳｃＦｖ进行聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＰＡ     

人血清TRH放射免疫分析及临床应用研究

探讨外周血中促甲状腺激素释放激素（ＴＲＨ）浓度与下丘脑-垂体-甲状腺轴功能生理、病理变化的关系，尤其是各种甲状腺疾病时血中ＴＲＨ浓度变化的特点及临床意义．方法：采用自制的抗ＴＲＨ抗血清及１２５Ｉ-ＴＲＨ，建立了高度灵敏、特异的血清ＴＲＨＲＩＡ直接测定法．血样品采集后用硫酸８-羟基喹琳、吐温-２０和ＥＤＴＡ混合物抗灭活．结果：方法灵敏度为８．３ｐｍｏｌ／Ｌ，批内及批间ＣＶ分别为２．５％～４．９％和８．９％～１０．０％，回收率为９２％～１０５％．测定４０４例正常人及垂体、甲状腺疾病患者的血清ＴＲＨ值，甲亢患者显著下降，原发性甲低患者明显升高，结节性甲状腺肿、冷结节、生长激素缺乏症及垂体瘤患者血清ＴＲＨ值与正常人差异无显著性．结论：血清ＴＲＨ浓度的变化与甲状腺功能状态密切相关，外周血ＴＲＨ水平的测定对研究下丘脑-垂体-甲状腺轴功能生理、病理状态有重要意义．