pcDNA3-hbFGF转染角朊细胞对真皮成纤维细胞增殖的生物学效应

目的：观察含外源性人碱性成纤维细胞生长因子（ｈｂＦＧＦ）基因的角朊细胞（ＨＫ）,对真皮成纤维细胞（ＨＤＦｉｂ）增殖的影响;探讨转ｈｂＦＧＦ基因ＨＫ对创面愈合的生物学效应及作用机理,为这种转基因ＨＫ细胞用于创面基因治疗的可行性提供实验依据。方法：收集含真核表达质粒ｐｃＤＮＡ３－ｈｂＦＧＦ的ＨＫ细胞培养上清,加入培养的ＨＤＦｉｂ细胞内;ＭＴＴ法测定细胞的增殖率、＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入法测定细胞ＤＮＡ合成率     

用IL－2／LAK细胞对中晚期癌症病人细胞免疫的影响

为了探讨ＩＬ－２／ＬＡＫ细胞对中晚期癌症病人细胞免疫的影响,用３Ｈ－ＴｄＲ掺入ＤＮＡ法测定了１７例中晚期癌症病人在ＩＬ－２／ＬＡＫ细胞治疗前后外周血加ＰＨＡ或不加ＰＨＡ淋巴细胞体外增殖试验,结果显示无论空白对照（１１／１６）还是ＰＨＡ诱导的Ｔ淋巴细胞增殖试验（１２／１６）,ｃｐｍ值较治疗前均有明显的提高（Ｐ＜０．０５,Ｐ＜０．０１）;在Ｔ细胞亚群的测定中,ＩＬ－２／ＬＡＫ细胞治疗前后比较,ＣＤ３＋和Ｃ８＋细胞都未发现明显的差异,只有Ｃ４＋细胞较治疗前（１３／１７）有了显著提高（Ｐ＜０．０１）;ＮＫ细胞虽未达到正常水平,但也显示较治疗前有显著增高的倾向;结果表明,ＩＬ－２／ＬＡＫ细胞疗法既对肿瘤细胞有直接杀伤作用,也对细胞免疫起了明显的促进作用。     

协同刺激信号α—CD28单抗增强肿瘤特异性CTL体内外的杀瘤活性

目的 采用α－ＣＤ２８单抗增强α－ＣＤ３单抗刺激的肿瘤特异性Ｔ细胞的杀瘤活性。方法 采用２种方案培养ＦＢＬ－３免疫的小鼠脾细胞。（１）使用α－ＣＤ３单抗４８ｈ后,加入α－ＣＤ２８单抗同时使用４８ｈ后,加入α－ＣＤ３单抗、α－ＣＤ２８单抗和２０Ｕ／ｍｌ ｒＩＬ－２（α－ＣＤ３＋α－ＣＤ２８＋ＩＬ－２组）。＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入法检测两组效应细胞的增殖水平。标准４ｈ－＾５１Ｃｒ释放法检测两组效应细胞的杀伤     

用IL—2／LAK细胞对中晚期癌症病人细胞免疫的影响

为了探讨ＩＬ－２／ＬＡＫ细胞对中晚期癌症病人细胞免疫的影响，用＾２Ｈ－ＴｄＲ掺入ＤＮＡ法测定了１７例中晚期癌闰病人在ＩＬ－２／ＬＡＫ细胞治疗前后外周血加ＰＨＡ或不加ＰＨＡ淋巴细胞外增殖试验，结果显示无论空白对照（１１／１６）还是ＰＨＡ诱Ｔ淋巴细胞增殖试验（１２／１６），ｃｐｍ值较治疗前均事明显的提高（Ｐ〈０．０５，Ｐ〈０．０１）；在 Ｔ细胞亚群的测定中，ＩＬ－２／ＬＡＫ细胞治疗前后比较，ＣＤ＾＋和     

急性髓细胞白血病细胞IL—2受体基因的研究

为研究髓细胞白血病（ＡＭＬ）细胞白介素－２受体（ＩＬ－２Ｒ）基因及ＩＬ－２在ＡＭＬ中的作用，用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）对４１例ＡＭＬ患者化疗前白血病细胞ＩＬ－２Ｒα ｍＲＮＡ和ＩＬ－２ＲβｍＲＮＡ进行检测，并对部分ＩＬ－２Ｒ基因阳性表达细胞用＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入法测定其对重组人ＩＬ－２（ｒＨＩＬ－２）的反应。结果显示，ＡＭＬ组织ＩＬ－２Ｒα和ＩＬ－２β基因表达是一普遍现象，４１例中白血病     

肺癌常用化疗药物对IL－2诱导LAK细胞活性的影响

选用３Ｈ－ＴｄＲ释放法及掺入法分别检测ＬＡＫ细胞活性、ＬＡＫ细胞增殖功能及９种临床常用肺癌化疗药物对ＬＡＫ细胞抗肿瘤活性的影响。结果显示，不同化疗药物对ＩＬ－２诱导ＬＡＫ细胞活性的影响不同，同种化疗药物不同浓度间的影响也有差异。卡铂（Ｃａｒｂｏ）、足叶乙甙（ＶＰ１６）、５－氟尿嘧啶（５－Ｆｕ）有增强作用；环磷酰胺（ＣＴＸ）、顺铂（ＣＤＤＰ）、长春新碱（ＶＣＲ）、甲氨喋呤（ＭＴＸ）对ＩＬ－２诱导ＬＡＫ细胞活性无明显影响；阿霉素（ＡＤＭ）、丝裂霉素（ＭＭＣ）在较高浓度时，抑制ＬＡＫ细胞活性产生。除ＣＴＸ外的８种药物均显著抑制ＬＡＫ细胞增殖功能。实验表明：常规剂量的化疗不会抑制ＬＡＫ细胞活性的产生，５－Ｆｕ、Ｃａｒｂｏ、ＶＰ１６与ＩＬ－２结合抗癌可望产生协同疗效．ＩＬ－２先于化疗给药并维持至化疗后一定时间，其联合抗癌效果可能更佳。     

柯萨奇B组病毒感染患儿细胞免疫状态及对干扰素疗效的影响

系统探讨柯萨奇病毒Ｂ感染血症的机体免疫特征及干扰素应用的评价。采用ＥＬＩＳＡ法测定ＣＶＢ－Ａｇ和ＣＶＢ－ＩｇＭ，采用单克隆抗体标记的间接ＡＢＣ免疫组化法测定Ｔ细胞亚群；＾３Ｈ－ＴｄＲ标记法测定，ＮＫ细胞和ＬＡＫ细胞活性。结果：１．ＣＶＢ感染机体ＮＫ细胞活性。ＬＡＫ细胞活性和ＣＤ４／ＣＤ８比值明显低于对照组；２．机体ＮＫ和ＬＡＫ细胞活性轻中度降低，ＣＶＢ－Ａｇ可自然清除或应用α干扰素清除．若ＮＫ和Ｌ     

尾加压素在大鼠气道平滑肌细胞增殖中的作用及其机制

目的 观察近年新发现的活性肽尾加压素（Ｕｒｏｔｅｎｓｉｎ Ⅱ,ＵⅡ）在大鼠气道平滑肌细胞增殖中的作用及其机制。方法 （１）采用＾３Ｈ－胸腺嘧啶（＾３Ｈ－ＴｄＲ）掺入法测定ＵⅡ对原代培养的大鼠气道平滑肌细胞（ＡＳＭＣ）ＤＮＡ合成的影响,应用不同阻断剂观察ＵⅡ诱导细胞ＤＮＡ合成的信号转导通路。（２）采用Ｆｕｒａ－２／ＡＭ荧光探针,测定ＵⅡ对胞浆游离钙浓度的影响。结果 （１）ＵⅡ呈浓度（１０＾－１０～１０＾－６ｍｏｌ／Ｌ）依赖性刺激ＡＳＭＣ＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入,１０＾－６ｍｏｌ／Ｌ时,为对照组的７倍（Ｐ〈０．０１）;（２）蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）阻断剂Ｈ７、丝裂素活化蛋白激酶（ＭＡＰＫ）阻断剂ＰＤ９８０５９及钙通道阻断剂尼卡的平均能抑制ＵⅡ刺激的ＡＳＭＣ＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入,其抑制率分别为２９％（Ｐ〈０．０５）,４５％（Ｐ〈     

猪肺动脉缺氧内皮细胞条件培养液和DDPH对肺动脉平滑肌细…

用＾３Ｈ－胸腺嘧啶核苷和＾３Ｈ－尿嘧啶核苷掺入法及流式细胞术。观察猪肺动脉缺氧仙皮细胞条件培养液（ＨＥＣＣＭ）和１－（２，６－二甲基苯氧基）－２－（３，４－二氧基苯乙氨基）丙烷盐酸盐（ＤＤＰＨ）对猪肺动脉平滑肌细胞（ＰＡＳＭＣｓ）ＤＮＡ、蛋白合成及细胞周期的影响。     

急性髓细胞白血病细胞IL-2受体基因的研究

为研究髓细胞白血病（ＡＭＬ）细胞白介素－２受体（ＩＬ－２Ｒ）基因及ＩＬ－２在ＡＭＬ中的作用，用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）对４１例ＡＭＬ患者化疗前白血病细胞ＩＬ－２ＲαｍＲＮＡ和ＩＬ－２ＲβｍＲＮＡ进行检测，并对部分ＩＬ－２Ｒ基因阳性表达细胞用３Ｈ－ＴｄＲ掺入法测定其对重组人ＩＬ－２（ｒｈＩＬ－２）的反应。结果显示，ＡＭＬ细胞ＩＬ－２Ｒα和ＩＬ－２β基因表达是一普遍现象，４１例中白血病细胞有ＩＬ－２ＲαｍＲＮＡ和ＩＬ－２ＲβｍＲＮＡ表达分别为２８例（６８．３％）和３２例（７８．０％），ＩＬ－２ＲαｍＲＮＡ和ＩＬ－２ＲβｍＲＮＡ同时表达者２１例（５１．２％）。ＩＬ－２Ｒ基因阳性表达细胞对ｒｈＩＬ－２的体外反应呈不均一性，表现为细胞增殖、受抑或不反应，８例中仅１例Ｍ５型患者细胞呈增殖反应。本研究表明ＡＭＬ细胞ＩＬ－２Ｒ基因表达是一普遍现象，这些细胞在体外对ｒｈＩＬ－２的反应呈不均一性，大多表现为无反应或受抑。     

肝细胞生长因子对多囊肾病囊肿衬里上皮细胞增殖及细胞外基质合成的影响

目的：研究重组人肝细胞生长因子（rhHGF）对常染色体显性遗传型多囊肾病（ADPKD）囊肿衬里上皮细胞增殖及细胞外基质合成的影响。方法：用^3H-TdR掺入法测定不同浓度（0．5、1、2．5、5ng/ml)rhHGF作用48h以及最适浓度的rhHGF分别作用24、48、72h ADPKD囊肿衬里上皮细胞系细胞的增殖情况;并分别用^3H-脯氨酸掺入法和放免法测定最适浓度rhHGF作用最佳时间后ADPKD囊肿衬里上皮细胞系细胞胶原及层粘连蛋白的合成情况。结果：rhHGF促进了ADPKD囊肿衬里上皮细胞增殖及胶原和层粘连蛋白的合成,以1ng/ml持续作用48h最为显。结论：rhHGF对体外培养的ADPKD囊肿衬里上皮细胞增殖及细胞外基质合成有明显的促进作用。     

肝癌细胞在Ⅳ型胶原裱衬表面的粘附特性

定量描述肝癌细胞和肝细胞在Ⅳ型胶原裱衬表面的粘附特性,探讨细胞粘附力与Ⅳ型胶原裱衬浓度及Ⅳ型胶原与层粘连蛋白复裱衬时ＬＮ复合浓度的相关关系。方法采用分步裱衬的方法制作 有关裱衬表面,即依次在玻璃表面裱衬多聚赖氨酸和Ⅳ型胶原／ＬＮ,最后以牛血清白蛋白作用阻断非特异性粘附。细胞粘附力采用微管吸吮技术进行测定。     

去甲斑蝥素对高糖刺激的HK-2 细胞FN,Col IV 和TGF-β1 mRNA 及蛋白表达的影响

目的:观察去甲斑蝥素(NCTD) 对高糖刺激的HK-2 细胞外基质和TGF-β1 表达的影响。方法:常规培养HK-2 细胞,无血清DMEM 培养基同步培养24 h,细胞分为正常葡萄糖组(C,D-glucose 5.5 mmol/L)、甘露醇对照组(M,5.5 mmol/L D-glucose+24.5 mmol/L mannitol)、高糖组(HG,30 mmol/L D-glucose)、高糖+NCTD 干预组(30 mmol/L D-glucose+0.5~40 mg/L NCTD)。台盼蓝排斥实验检测NCTD 对高糖刺激的细胞毒性。MTT 法检测NCTD 对高糖刺激的细胞增殖的影响。收集培养6,24,48 h 后细胞总RNA 及蛋白,用RT-PCR 检测细胞FN,Col Ⅳ和TGF-β1 mRNA 的表达,采用Western 印迹检测FN,Col Ⅳ和TGF-β1 蛋白的表达。结果:不同浓度NCTD 作用72 h 后,浓度超过5 mg/L 的NCTD 对高糖环境下的HK-2 细胞有明显的毒性。RT-PCR 和Western 印迹结果显示: 30 mmol/L D- 葡萄糖可引起HK-2 细胞FN,Col Ⅳ和TGF-β1 mRNA 及蛋白水平的升高(P<0.05),而5 mg/L NCTD 可抑制高糖刺激的FN,Col Ⅳ和TGF-β1 的表达(P<0.05)。相同渗透浓度的D- 甘露醇组对上述指标均无影响(P>0.05)。结论:NCTD 能下调HK-2 细胞FN,Col Ⅳ及TGF-β1 的表达。     

吡哆胺对血管紧张素Ⅱ诱导的人肾小管上皮细胞增殖的影响

目的研究吡哆胺对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的人近端肾小管上皮细胞株HK-2细胞增殖的影响,并通过与替米沙坦的比较探讨其作用机制。方法以吡哆胺和替米沙坦分别干预经过AngⅡ诱导的HK-2细胞,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,流式细胞术分析细胞内活性氧簇(ROS)水平,实时荧光定量PCR及Western Blot分别检测糖基化终末产物受体(RAGE)、转化生长因子-β1(TGF-β1)的mRNA及蛋白表达水平。结果与对照组比较,AngⅡ可抑制HK-2细胞的增殖,使细胞内ROS生成增加并上调RAGE、TGF-β1的mRNA和蛋白表达水平(均为P<0.01);0.1,1mmol/L的吡哆胺均能明显减轻AngⅡ对HK-2细胞增殖的抑制作用,同时减少ROS生成,并下调RAGE、TGF-β1的mRNA和蛋白表达水平(均为P<0.01);0.1,1mmol/L浓度吡哆胺的作用均优于替米沙坦。结论吡哆胺能减轻AngⅡ对HK-2细胞增殖的抑制作用。这一效应可能与吡哆胺减轻氧化应激、抑制AGEs-RAGE及下调纤维化因子TGF-β1的表达有关。     

高尿酸通过TLR4/NF-κB信号通路诱导肾小管上皮细胞上皮-间充质转化的作用研究

目的 探讨尿酸诱导肾小管上皮细胞上皮-间充质细胞转化(epithelia-mesenchymal transition,EMT)的作用及机制.方法 采用不同质量浓度的尿酸预孵育肾小管上皮细胞(HK-2)48 h,通过倒置显微镜观察尿酸对HK-2细胞形态的影响,Western blot检测Fibronectin、α-SMA和E-cadherin蛋白表达变化.Real-time PCR检测炎症因子IL-1 β、IL-6以及TNF-α mRNA的表达变化,免疫荧光检测上皮细胞标志物cytokeratin和间充质细胞标志物vimentin的表达变化.结果 与正常组相比,15 mg/dL的尿酸处理HK-2细胞48 h后,HK-2细胞间隙增大,呈长梭形改变.间充质细胞标志物Fibronectin、α-SMA表达明显升高,而上皮细胞标志物E-cadherin的表达明显下降(P＜0.05).同时,高浓度尿酸诱导了HK-2细胞炎症因子IL-1β、TNF-α的表达升高(P＜0.05),TLR4/NF-κB信号通路活化,而靶向抑制NF-κB信号通路活化可以显著抑制尿酸诱导的EMT.结论 高尿酸可以通过活化TLR4/NF-κB信号通路诱导肾小管上皮细胞EMT的发生,靶向干预NF-κB信号通路可以显著抑制尿酸诱导的肾间质纤维化.     

尿毒血清对HK-2细胞增殖和胶原蛋白分泌的影响

目的探讨尿毒血清对人肾上管上皮细胞侏（HK-2）增殖和胶原蛋白分泌的影响。方法在HK-2细胞培养液中加入正常人血清及不同浓度的尿毒血清，采用四氮甲基唑蓝（MTT）比色法和流式细胞术测定HK-2细胞增殖活性的变化；采用消化法检测细胞培养上清中羟脯氨酸的含量，换算成总胶原分泌量。结果5％-20％浓度尿毒血清组A490值均高于正常对照组，10％-20％浓度尿毒血清组G1期细胞均低于正常对照组，P1指数均高于正常对照组，但不同浓度尿毒血清组组间差异无统计意义；各浓度尿毒血清组羟脯氨酸和胶原蛋白含量较正常对照组增高，且随着尿毒血清浓度的升高而增高。结论慢性肾衰竭患者体内蓄积的尿毒症素可能通过促进肾小管上皮细胞增殖，促进细胞外基质的分泌，从而加速肾小管一间质纤维化进程，导致肾功能进行性恶化。     

原发性肾病综合征患儿的免疫细胞对肾小球固有细胞生物活性的直接影响

目的 探讨原发性肾病综合征（简称肾病）患儿的免疫细胞对肾小球固有细胞的直接作用。方法 肾病患儿２８例，健康体检儿１５例，分为未治组、激素组、阴转组及正常对照组。制备外周血单个核细胞条件液（ＰＢＭＣ－ＣＭ），运用肾小球细胞体外培养技术、同位素掺入技术、放射免疫竞争性抑制法，检测ＰＢＭＣ－ＣＭ刺激后的大鼠肾小球上皮细胞合成层粘连蛋白（ＬＮ）、总胶原、Ⅲ型前胶原、Ⅳ型胶原等基质成分的含量；ＰＢＭＣ－ＣＭ对大鼠的肾小球系膜细胞＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入指数的影响。结果 ４组的ＬＮ抑制指数分别为０．９５，１．０２，１．０１，１．０３；＾３Ｈ－羟脯氨酸的掺入指数为０．９３，１．２４，１．２３，１．１１；Ⅲ型前胶原的抑制指数为０．９６，１．００，０．９９，１．０１；Ⅳ型胶原抑制指数为１．０４，１．０５，１．０４，１．０８。未治组患儿     

Palbociclib可诱导人肾小管上皮细胞周期阻滞及衰老

目的 探讨Palbociclib药物对肾小管上皮细胞周期进展及细胞增殖的影响。方法 体外培养肾小管上皮细胞HK-2分别给予不同浓度（0、1、5、10、20 μmol/L）的Palbociclib进行处理，通过细胞计数和CCK8法检测不同浓度及时间下Palbociclib对HK-2细胞增殖及细胞活力的影响。EDU染色检测不同浓度下Palbiciclib对HK-2细胞作用5 d后的细胞增殖情况。流式分析检测Palbociclib对HK-2细胞生长周期分布的影响。采用SA-β-Gal、C12FDG等衰老染色技术检测不同浓度下Palbociclib作用于HK-2细胞5 d后其对衰老表型的诱导情况。RT-PCR检测P16、P21、P53及衰老相关分泌表型的mRNA相对表达水平，Western blot检测P16、P21和P53的蛋白表达情况。结果 Palbociclib抑制HK-2细胞增殖并诱导细胞周期阻滞于G1期。相比于对照组而言，高剂量（10 μmol/L）的 Palbociclib 可明显抑制 HK-2 细胞增殖活性，且在第 5 天时增殖抑制效果最为明显（P<0.01）。Palbociclib诱导HK-2细胞生长周期主要阻滞于G1期，而进入S期的细胞数相比于对照组来说明显减少（P<0.01）。Palbociclib可诱导HK-2细胞发生衰老，通过SA-β-Gal和C12FDG衰老染色检测，结果表明在Palbociclib作用下，HK-2细胞的胞内衰老相关半乳糖苷酶活性明显升高。RT-PCR及Western blot结果显示Palbociclib可明显上调HK-2细胞中P16、P21、P53等衰老相关因子的基因和蛋白表达水平（P<0.01）。与对照组相比，RT-PCR检测Palbociclib作用下的HK-2细胞中衰老相关分泌因子的基因表达水平也升高（P<0.01）。结论 Palbociclib可通过抑制HK-2细胞生长并阻滞其细胞周期进程进而诱导HK-2细胞发生衰老。     

肝细胞生长因子和血管紧张素Ⅱ对肾小管上皮细胞转分化的影响及其作用机制

目的: 探讨肝细胞生长因子(HGF)和血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对肾小管上皮-肌成纤维细胞转分化(TEMT)的影响,并阐明其作用机制。方法: 体外培养人近曲小管上皮HK-2细胞,取Ⅳ期细胞分为对照组、AngⅡ(1×10^-6mol·L^-1)组、HGF(8 μg·L^-1)组和AngⅡ(1×10^-6mol·L^-1)+HGF(8 μg·L^-1)组。采用CCK8法检测HK-2细胞增殖情况,RT-PCR法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA表达水平,Western blotting法检测α-SMA的蛋白表达水平。结果: 与对照组比较,AngⅡ组HK-2细胞增殖活性降低(P<0.01),HGF组HK-2细胞增殖活性升高(P<0.05),AngⅡ+HGF组HK-2细胞增殖活性降低(P<0.05)。与对照组比较,AngⅡ组 HK-2细胞中α-SMA mRNA及蛋白表达水平升高(P<0.05或P<0.01),HGF组HK-2细胞中α-SMA mRNA及蛋白表达水平降低(P<0.05或P<0.01), AngⅡ+HGF组HK-2细胞α-SMA mRNA及蛋白表达水平降低(P<0.05); 与AngⅡ 组比较,AngⅡ+HGF组细胞增殖活性升高(P<0.05),α-SMA mRNA及蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论: AngⅡ抑制肾小管上皮细胞增生而促进TEMT, HGF促进肾小管上皮细胞增生而抑制TEMT,HGF可能介导AngⅡ抑制HK-2细胞增生及促进TEMT的作用。     

阿魏酸钠对大鼠贮脂细胞株HSC-T6增殖及胶原合成的影响

目的：研究阿魏酸钠对大鼠贮脂细胞株ＨＳＣ－Ｔ６增殖及胶原合成的影响。方法：采用肝贮脂细胞株,以细胞增殖抑制率为指标,用噻唑蓝（ＭＴＴ）法测定药物对大鼠贮脂细胞株ＨＳＣ－Ｔ６增殖的影响;通过＾３Ｈ－脯氨酸掺入法测定药物对ＨＳＣ－Ｔ６胶原合成的影响。结果：阿魏酸钠对大鼠贮脂细胞株ＨＳＣ－Ｔ６增殖及胶原合成的抑制率随药物浓度增加（２８．９～４６２．６ｎｍｏｌ／Ｌ）而升高,呈药物浓度依赖关系。结论：阿魏酸