空间辨别性学习记忆活动对大鼠额叶SDF-1免疫阳性细胞的影响

目的讨大鼠空间辨别性学习记忆活动对额叶基质细胞衍生因子-1(SDF-1)免疫阳性细胞的影响。方法用水迷宫训练SD大鼠建立空间辨别性学习记忆模型,用免疫组化方法和图像分析技术检测大鼠额叶SDF-1免疫阳性细胞的形态变化。结果对照组大鼠额叶可见少量圆形或椭圆形SDF-1免疫阳性细胞分布在外颗粒层、外锥体层、内颗粒层和内锥体细胞层,分子层和和多形层少见阳性细胞。阳性细胞的胞浆淡黄色,颗粒状免疫反应产物附于细胞膜内面。游水组大鼠额叶皮质SDF-1免疫阳性细胞不论分布还是形态均未见与对照组的有明显差异;模型组训练7d的大鼠额叶SDF-1免疫阳性细胞的形态和分布与对照组的比未见明显差异。训练14d和21d的再细胞形态上以锥体形或三角形为主,在分布上,额叶II区较I区的密集,在SDF-1表达上训练21d的比训练7d和14d的明显增多。结论大鼠额叶内SDF-1免疫阳性细胞可能参与空间辨别性学习记忆活动引致的形态学可塑。     

大鼠空间辨别性学习记忆活动对海马结构Ephrin-A3表达的影响

为了探讨大鼠获得空间辨别性学习记忆活动对导向分子ephrin-A3表达的影响,本研究采用免疫组织化学染色和Western blot方法对模型组、游水组和对照组大鼠海马内ephrin-A3的表达部位和表达量进行对比研究。免疫组织化学染色结果显示模型组、游水组和对照组海马结构内各亚区和各层内均可见ephrin-A3样免疫阳性产物分布,模型组大鼠海马CA3区辐射层和腔隙层尤为明显;Western blot方法检测模型组大鼠海马结构内ephrin-A3阳性产物平均积分光密度值明显高于游水组和对照组。模型组内训练14d的大鼠海马结构内ephrin-A3阳性产物平均积分光密度值高于训练7d和21d。以上研究结果提示eph-rin-A3的表达与大鼠空间辨别性学习记忆活动有密切关系。     

大鼠海马结构在空间辨别性学习记忆时突触素表达的变化

目的:探讨空间辨别性学习记忆活动与突触可塑性的关系。方法:用免疫组织化学方法对具有空间辨别性学习记忆功能的模型大鼠与对照组大鼠海马结构内突触素I的表达进行对比研究。结果:(1)对照组大鼠海马结构内未见明显的突触素颗粒产物;在模型组,经水迷宫训练1周的大鼠海马切片上见到齿状回、CA4和CA3区出现深染的颗粒分布,CA2和CA1区颗粒较少;训练2周的大鼠海马结构内的染色显示颗粒与训练1周的比较无明显差异,但染色加深;(2)模型组大鼠的突触素反应产物的光密度值明显大于对照组(P＜0.05);模型组大鼠海马结构内突触素光密度值在训练的1~2周内随训练时间增加而增加,训练2~3周则增加不明显;模型组大鼠海马结构CA3、CA4区和齿状回突触素反应产物的光密度值较CA1和CA2区的大,差异有显著(P＜0.05)。结论:(1)大鼠经水迷宫训练获得空间辨别性学习记忆功能时在海马结构内有新突触形成;(2)海马结构的CA3、CA4区和齿状回与空间辨别性学习记忆的关系密切。     

基质细胞衍生因子免疫阳性细胞在正常成年大鼠脑中的分布

目的观察SDF-1免疫阳性细胞在正常SD大鼠脑中的分布,为开展SDF-1研究提供基础资料。方法对10只正常雄性SD大鼠脑进行免疫组织化学染色,显示SDF-1免疫阳性细胞的形态和分布。结果SDF-1免疫阳性细胞见于大脑皮质、海马、扣带、穹窿、缰内侧核、菱形核、弓状核、丘脑后正中核、中央内侧核、丘脑外侧后核、丘脑外侧背核等处,细胞形态以中等大小圆形为主。结论SDF-1免疫阳性细胞在成年SD大鼠脑内分布广泛,它们可能参与中枢神经系统中的多种生理功能。     

大鼠海结构在空间辨别性学习记忆时突触表达的变化

目的：探讨空间辨别性学习记忆活动与突触可塑性的关系。方法：用免疫组织化学方法对具有空间辨别性学习记忆功能的模型大鼠与对照组大鼠海马结构内毒素１的表达进行对比研究。结果：（１）对照组大鼠海马结构现俨未见明显的突触素颗粒产物,在模型组,经水迷宫训练１周的大鼠海马切片上见到齿状回、ＣＡ４和ＣＡ３区出现深染的颗粒分布,ＣＡ２和ＣＡ１区颗粒较少,训练２周的大鼠海马结构内的染色显示颗粒与训练１周的比较无明显差     

p38促进尼古丁诱导的大鼠血管平滑肌细胞的细胞外基质表达

目的 探讨尼古丁对大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞(VSMCs)的细胞外基质(ECM)表达的影响及可能的机制.方法 用终浓度为100μmol/L的尼古丁作用于体外培养的大鼠VSMCs 24 h,以不加尼古丁的细胞为对照组,采用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)、免疫印迹(Western blotting)方法检测ECM包括Ⅰ型胶原、纤维黏连蛋白和膜受体整合素表达的差异,以及可能参与信号转导的蛋白激酶p38的活性变化.结果 与对照组相比,尼古丁刺激组细胞的两种细胞外基质包括I型胶原和纤维黏连蛋白及膜受体整合素β1的表达均升高,分别为对照组的1.8倍、1.7倍和1.6倍,差异显著(P<0.05);尼古丁刺激组的蛋白激酶p38的活性比对照组高1.95倍,差异极其显著(P<0.01);p38的活性被特异抑制剂SB202190抑制后,尼古丁诱导的I型胶原的表达也随之下降.结论 p38参与尼古丁诱导的细胞外基质的高表达.     

大鼠海马结构在学习记忆活动时的细胞动态学可塑性研究

用Ｔｉｍｍ染色方法显示了空间辨别性学习记忆模型组,游水组和对照组大鼠海马结构内含重金属的神经成份的分布差异,来反映非处理因素相同的情况下,由空间辨别性学习记忆训练为处理因素所产生的实验效应。探讨正常的生理活动是否可以引致有关的神经结构发生形态学可塑性变化。结果：（１）模型组大鼠海马结构的Ｔｉｍｍ染色结,１５只大鼠中有,１３只（８６．６７％）在海马ＣＡ３区多形层出现片带状的银颗粒沉积,即出芽反应。     

大鼠海马结构在空间辨别性学习记忆时的突触形态学观察

目的：探讨学习记忆活动是否可以引起大鼠海马结构发生突触可塑变化。方法：电子显微镜下对模型大鼠和对照大鼠的海马结构内突触复合体的形态进行了对比观察。结果：(1)模型大鼠海马CJ43区多形层内多为神经纤维，其中无髓纤维占多数，有髓纤维很少。在无髓纤维间见到形状不规则的轴突终末与周围的树突和树突棘分别形成轴—树突触和轴棘突触，后者多见。突触前膨大内充满圆形清亮、无核心的突触小泡和线粒体。突触后成分多为树突棘并在多处与突触前膜形成活性区，树突棘内见到棘器。(2)对照大鼠海马CA3区多形层内含有大量无髓纤维并见到较少的轴—树突触。该突触形状规则且活性带面积较小，突触后成分多为一个，突触小泡清亮、圆形无核心，偶见线粒体。(3)经Timm染色的两组大鼠海马CA3区多形层的超微结构特点是银颗粒仅沉积在苔藓纤维的髓鞘内和苔藓纤维的大终扣内，线粒体、树突干和树突棘内均无银颗粒。结论：正常生理活动和空间辨别性学习记忆活动均可引致大鼠海马CA3区多形层突触可塑性变化，但两者在形态上有所不同。     

胶质细胞源性神经营养因子基因修饰的骨髓基质干细胞移植抑制大鼠脑出血后神经细胞的凋亡

Objective To explore the effects of bone marrow stromal cells (BMSCs) transplantation modified by glial cell line-derived neurotrophic factor (GDNF) gene on neuronal apoptosis and the expression of apoptosis-related genes in rats with intracerebral hemorrhage. Methods Forty-eight rats were used to establish the model of intracerebral hemorrhage by injecting with collagenase and heparin into caudate nucleus through stereotaxic apparatus.The rats were randomly divided into BMSCs group, GDNF/BMSCs group and saline group, and were stereotaxically grafed with BMSCs, GDNF/BMSCs and saline respectively at the 3rd day after operation. Each group was subdivided into two subgroups according to different refeeding time (1 week, 2 weeks). Neurological function and area of brain injury were assessed by neurological deficits score and HE staining respectively. Expression of GDNF mRNA was observed by RT-PCR. The number of neuronal apoptosis and the expressions of Bax and Bcl-xl in the margin of the hemorrhagic focus were observed by TUNEL and immunohistochemistry. Results Significant recovery of neurological function and increase of GDNF mRNA expression were found in the GDNF/BMSCs group compared with BMSCs and saline group. Both rate of brain injury area and the number of neuronal apoptosis in the GDNF/BMSCs group were significantly less than other groups. As compared with the BMSCs and saline group, the number of Bcl-xl positive cells increased in the GDNF/BMSCs group, while the number of Bax positive cells decreased. Conclusion The transplantation BMSCs modified by GDNF gene provides better neuroprotection than native BMSCs. The underlying mechanisms may be due to partly inhibited apoptosis, and the expression of up-regulated Bcl-xl and down-regulated Bax protein.     

大鼠海马结构在学习记忆活动时的细胞形态学可塑性研究

用 Timm染色方法显示了空间辨别性学习记忆模型组、游水组和对照组大鼠海马结构内含重金属的神经成份的分布差异 ,来反映非处理因素相同的情况下 ,由空间辨别性学习记忆训练为处理因素所产生的实验效应。探讨正常的生理活动是否可以引致有关的神经结构发生形态学可塑性变化。结果 :( 1)模型组大鼠海马结构的 Timm染色结 ,15只大鼠中有 ,13只 ( 86.67% )在海马 CA3区多形层出现片带状的银颗粒沉积 ,即出芽反应。该银颗粒的量与训练的时间存在相关性 ,即训练 7d的比 14d的的少 ,而训练 2 1d的也比 14d的少。 ( 2 )游水组大鼠海马结构的染色结果 ,9只大鼠中 7只与对照组的染色结果一致 ,2只出现了一级出芽反应 ;( 3)对照组大鼠海马结构的染色结果 ,9只大鼠在海马 CA3区多形层内均未见有银颗粒沉积。据此 ,作者认为在海马 CA3区多形层内含重金属的神经成份是由空间辨别性学习记忆活动引起的形态学可塑性变化 -神经纤维出芽     

Meynert核毁损后大鼠海马结构内生长抑素阳性神经元的变化

目的 观察Meynert核毁损后大鼠海马结构内生长抑素(SS)阳性神经元变化,探讨SS参与学习记忆的机制.方法以海人酸(1μg/每侧)毁损双侧Meynert(NBM)核建立学习记忆障碍模型,用避暗回避实验进行行为学检测,免疫组织化学染色后光镜下观察并计数海马结构内SS阳性神经元.结果 1.NBM受损后大鼠记忆力明显下降,与正常组比较具有显著性差异;2.NBM受损后各组海马结构内SS阳性神经元数量明显减少,与正常组比较具有高度显著性差异.细胞形态的改变主要表现为胞质着色减弱,阳性突起变短.结论 NBM损毁后大鼠海马结构内SS阳性神经元数量显著减少,此过程参与了NBM毁损导致的大鼠学习记忆障碍.     

大鼠海马结构在空间辨别性学习记忆时的突触形态可塑性的定量研究

目的　观察由空间辩别性学习记忆活动引致的大鼠海马结构的突触可塑性变化。方法　本研究继电子显微镜下 ,对空间辨别性学习记忆模型大鼠和对照大鼠海马结构内突触形态学的对比性观察之后 ,又对两组大鼠海马结构内突触复合体进行了体视学指标的测算。结果　模型组大鼠海马CA3区多形层内突触数密度 (77 81± 16 0 0 )个 / μm3、突触活性点膜面积 (0 0 37± 0 0 0 8) μm2 / μm3、突触小泡的数量 (16 9946 86± 195 92 5 8)个 / μm3、线粒体的体积 (1 70± 0 86 ) %和数密度 (8777 5 4± 2 0 2 0 32 )个 / μm3 均比对照组大鼠的大或多 ,对照组大鼠以上指标分别为 :(2 8 35± 1 31)个 / μm3、(0 0 15± 0 0 0 2 ) μm2 /μm3、(6 4380 2 7± 872 8 6 6 )个 / μm2 、(0 5 8± 0 35 ) %、(2 2 82 46± 72 7 6 9)个 / μm3,其差异有高度显著性 (P <0 0 1)。结论　正常生理活动也可引致神经发生突触可塑性变化 ;突触可塑性变化的形式不仅包括突触复合体各结构的增大同时包括突触数量增多 ;突触活性点膜面积增大 ;突触小泡的数量增多和体积增大 ;突触前膨大内线粒体数量增多和体积增大。     

间歇性饥饿对亚硝酸钠所致大鼠海马神经细丝过度磷酸化及空间学习记忆损伤的改善作用

目的探讨间歇性饥饿对亚硝酸钠诱导的大鼠海马神经细丝(NF)过度磷酸化及空间学习记忆的影响。方法 36只大鼠随机分为对照组、亚硝酸钠组、饥饿+亚硝酸钠组,每组12只。亚硝酸钠组大鼠饮亚硝酸钠水[水中溶入亚硝酸钠粉剂100 mg/(kg·d)],正常喂食;饥饿+亚硝酸钠组大鼠饮亚硝酸钠水,采取饥饿2d,恢复喂食3d的喂食方法,喂养60 d后通过Morris水迷宫实验检测各组大鼠的空间学习记忆能力,免疫印迹和免疫组织化学方法检测大鼠海马NF磷酸化水平与分布。结果与对照组相比,亚硝酸钠组大鼠第2天至第7天的潜伏期[(53.34±5.28)s,(35.15±10.29)s,(23.52±9.50)s,(14.49±8.70)s,(16.87±8.77)s,(12.31±7.12)s]明显大于对照组[(31.24±8.53)s,(12.41±6.54)s,(10.49±6.43)s,(8.61±2.56)s,(7.25±2.12)s,(6.03±1.92)s](P0.01或P0.05),跨越平台的次数(1.18±0.82)明显小于对照组(3.96±0.54,P0.05);饥饿+亚硝酸钠组只有大鼠第2天至第3天的潜伏期[(43.61±1.76)s,(25.25±7.49)s]大于对照组(P0.05),第4天至第7天的潜伏期[(19.47±8.30)s,(10.77±6.28)s,(12.05±7.49)s,(10.29±7.52)s]与对照组相比差异无统计学意义(P0.05)。免疫印迹和免疫组织化学结果显示,亚硝酸钠导致海马NF的磷酸化水平升高,而饥饿+亚硝酸钠组与对照组相比无明显变化。结论饥饿处理可改善亚硝酸钠导致的大鼠海马神经细丝过度磷酸化及空间学习记忆损伤。     

内皮素-1在烫伤大鼠脑血管损伤中的表达

目的 探讨内皮素-1（ET-1）在烫（烧）伤大鼠脑血管损伤的表达及其作用。方法应用组织学方法观察8只烫伤大鼠脑基底动脉组织结构的变化;应用RT-PCR测定48只烫伤大鼠脑基底动脉ET-1 mRNA的表达;应用Western blotting分析48只烫伤大鼠脑基底动脉ET-1的表达;应用放射免疫分析检测48只烫伤大鼠脑基底动脉ET-1 水平的变化。结果 烫伤大鼠脑基底动脉呈现病理学组织结构变化;烫伤后3h大鼠脑基底动脉ET-1 mRNA表达较正常对照组开始升高,6h 达高峰;烫伤后6h大鼠脑基底动脉ET-1 表达较正常对照组增强,12h 达高峰;烫伤后各组大鼠脑基底动脉ET-1水平较正常对照组明显升高,6h 达高峰。结论 烫（烧）伤可诱发大鼠脑血管ET-1表达增加,增加表达的ET-1可能与烫（烧）伤大鼠脑血管损伤的病理发生有关。     

大鼠海马和颞叶一氧化氮合酶阳性神经元在学习记忆时的表达

目的　对获得空间辨别性学习记忆大鼠的海马结构和颞叶皮质内一氧化氮合酶 (NOS)免疫阳性神经元系统的观察 ,为一氧化氮 (NO)在学习记忆活动中的作用提供形态学依据。方法　以经水迷宫训练获得空间辨别性学习记忆的大鼠为模型组 ,建立游水对照组和空白对照组。用免疫组化的方法观察 3组大鼠海马和颞叶的NOS阳性神经元的形态学特征及测定免疫反应阳性产物的光密度值 (OD )。结果　 (1)NOS阳性神经元在 3组大鼠海马和颞叶呈散在分布。在海马CA1、CA2、CA3、CA4及龄状回 (DG)都有少量分布 ,颞叶以Ⅱ、Ⅲ、Ⅴ、Ⅵ层分布为主。神经元胞体形态有锥体形 ,圆形或椭圆形 ,梭形3种。 (2 )模型组大鼠海马和颞叶皮质NOS阳性神经元较对照组明显增多。 (3)其免疫反应阳性产物的OD值也较对照组明显增大。结论　NOS阳性神经元形态发生了可塑性变化 ,参与了学习记忆     

Nerve growth factor improves spatial learning and restores hippocampal cholinergic fibers in rats withdrawn from chronic treatment with ethanol

The cholinergic septohippocampal pathway has long been known to be important for learning and memory. Prolonged intake of ethanol causes enduring memory deficits, which are paralleled by partial depletion of hippocampal cholinergic afferents. We hypothesized that exogenous supply of nerve growth factor (NGF), known to serve as a trophic substance for septal cholinergic neurons, can revert the ethanol-induced changes in the septohippocampal cholinergic system. Adult rats were given a 20% ethanol solution as their only source of fluid for 6 months. During the first 4 weeks after the animals were withdrawn from ethanol, they were intraventricularly infused with either NGF or vehicle alone via implanted osmotic minipumps. The vehicle-infused withdrawn animals showed impaired performance on a spatial reference memory version of the Morris water maze task, both during the task acquisition and on the retention test. In contrast, NGF-treated withdrawn rats were able to learn the task as well as controls, and significantly outperformed the vehicle-infused withdrawn rats. The histological analysis revealed that, in the latter group, the length density of fibers immunoreactive to choline acetyltransferase was reduced relative to control values by approximately 25%, as measured in the dentate gyrus and regio superior of the hippocampal formation. However, in NGF-treated withdrawn rats, the length density of these fibers was identical to that of control rats. These data provide support to the notion that NGF is capable of ameliorating memory deficits and restoring septohippocampal cholinergic projections following chronic treatment with ethanol. Electronic Publication     

新生大鼠缺氧缺血脑白质损伤模型学习记忆能力的变化

目的通过缺氧、缺血法建立新生大鼠脑白质损伤(WMI)模型,评价大鼠各个生长时期的学习记忆能力及髓鞘碱性蛋白(MBP)表达变化。方法新生4日龄SD大鼠100只随机分为对照组和缺氧、缺血WMI组,应用HE染色法观察脑组织病理学改变。于术后4周、8周与12周分别观察大鼠神经行为学和学习记忆能力改变,并应用免疫荧光染色法和Western blotting法观察MBP在大鼠脑内的定位定量表达变化。结果 HE染色显示,WMI组大鼠出现缺氧、缺血脑白质损伤病理改变。WMI组大鼠神经行为学及学习记忆能力较对照组减弱,差异具有统计学意义(P0.01)。WMI组各时间点的MBP表达量较对照组降低,差异具有统计学意义(P0.01)。结论新生4日龄SD大鼠发生缺氧、缺血脑白质损伤后,各个生长时期的学习记忆能力均减弱,MBP蛋白表达均减少,推测学习记忆能力减弱可能与MBP蛋白表达减少有关。     

自噬相关蛋白LC-3和Beclin-1在大鼠硅沉着病发生中的表达及意义

目的 观察自噬相关蛋白LC-3和Beclin-1在大鼠硅沉着病模型中的表达及意义,并探讨其机制;从细胞自噬角度研究硅沉着病形成的分
子机制。方法 将90只健康SD雄性大鼠随机分为对照组、模型组和自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤（3-MA）组,每组30只。采用非暴露式气管插管一次
性灌注二氧化硅粉尘混悬液法建立大鼠硅沉着病模型,并给予3-MA干预,各组分别于造模后第1、3、7、14及28 天分批处死6只大鼠。留取肺组织,
HE和Masson染色观察肺组织形态变化; 免疫组织化学染色检测LC-3、Beclin-1的表达及分布;免疫印迹法检测LC-3、Beclin-1的蛋白表达量。结果
与对照组相比,模型组有显著的肺泡炎改变、明显的矽结节形成及大量胶原沉积。LC-3、Beclin-1在各时间点的表达均上调（P＜0.05）,并随
时间呈现动态变化趋势,SiO2 注入后1 d表达有升高趋势,14d达高峰（P＜0.05）,28 d回落,但仍高于基础表达。与模型组相比,3-MA组肺泡
炎减轻,矽结节减小,胶原沉积减少,LC-3、Beclin-1在各时间点的表达均下调（P＜0.05）,各时间点的变化趋势无显著性改变。结论 细胞自
噬参与大鼠硅沉着病的病理进程,并在硅沉着病的发生与发展过程中起重要作用。