外周血甲胎蛋白mRNA和黑色素瘤抗原-1 mRNA联合表达与肝细胞癌术后复发转移的关系

目的 探讨外周血甲胎蛋白（AFP）mRNA和黑色素瘤抗原-1（MAGE-1）mRNA联合表达在早期发现肝细胞癌患者术后复发或转移的意义。方法 应用巢式逆转录聚合酶链反应技术分别在术前、术后1周和2个月检测142例行根治性切除的肝细胞癌患者外周血中AFPmRNA和MAGE-1mRNA的表达，随访时间从术后至22个月，中位随访时间为15．5个月。结果 外周血中MAGE-1mRNA和／或AFPmRNA的阳性率和肿瘤的病理分期呈正相关：肿瘤病期越晚，外周血中肝癌细胞的检出率越高（χ^2=17．873，P〈0．01）。AFPmRNA和Mage-1mRNA阳性率均与癌结节数目、门静脉癌栓、肝内、外转移等临床参数显著相关（χ^2=11．510，χ^2=15、149，χ^2=11．653，χ^2=6．805，均P〈0.01），而与肝癌分化程度、肿瘤直径等无相关性（χ^2=1．513，χ^2=1．343，均P〉0．05）。术后55例患者出现复发或转移，其中38例患者外周血MAGE-1mRNA和／或AFPmRNA持续阳性，14例由术前阴性转为阳性。而62例由术前阳性转为术后阴性者，随访中未见复发或转移。术后外周血AFPmRNA和／或MAGE-1mRNA阳性组中，有88．1％（52／59）的患者出现复发或转移，而阴性组中复发或转移者仅占3．6％（3／83），两组比较，差异有统计学意义（χ^22=103．817，P=0．000）。结论 联合检测外周血MAGE-1和AFPmRNA的表达可能早期发现肝细胞癌术后复发或转移，可以作为评估预后的指标。     

射频热毁损治疗肝癌前后血液中AFPmRNA变化及意义

目的探讨肝癌射频热毁损(RFA)治疗前后血液中AFP-mRNA变化及其意义。方法应用RT-PCR检测技术对术前术后48小时,72小时,1周及术后2周肝癌患者周围静脉血液中AFPmRNA,并观察变化。结果183例术前血液中AFPmRNA阴性的肝癌患者中有62例术后72小时转为阳性,但术后1周时复转阴性;而129例术前血液中AFPmRNA阳性的肝癌患者112例术后2w转为阴性;其中17例术后2周仍为阳性,术后证实有病灶残留。结论射频热毁损治疗肝癌可引起血液AFPmRNA一过性升高;血液AFPmRNA可成为判断RFA术后复发或残留的客观性指标之一。     

荧光定量PCR法扩增MAGE-1、MAGE-3及AFP基因联合检测肝癌病人外周血微小转移

目的探讨MAGE-1、MAGE-3和AFP mRNA联合检测肝癌病人外周血中微小转移的临床意义。方法应用荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）检测86例原发性肝癌病人肝癌组织和外周血中MAGE-1、MAGE-3和AFP mRNA的表达。结果86例原发性肝癌病人肝癌组织中MAGE-1、MAGE-3和AFP mRNA的阳性率分别为34．9％（30／86）、60．5％（52／86）和69．8％（60／86）；所有病人肝癌组织至少表达其中一种mRNA。外周血中阳性率分别为14．0％（12／86）、20．1％（18／86）和33．7％（29／86）。52．3％（45／86）的病人外周血至少检测到一种mRNA，较单一AFP mRNA检测阳性率明显提高（P〈0．05）。25例肝炎肝硬化病人及28例健康志愿者中未见阳性。阳性率与肿瘤TNM分期、门脉瘤栓、远处转移有关（P〈0．05）。与肿瘤大小、数目、分化程度、血清AFP水平无关（P〉0．05）。结论MAGE-1、MAGE-3结合AFP mRNA联合检测肝癌血行微小转移较单一AFP mRNA检测灵敏度高。     

原发性小肝癌微波消融治疗前后外周血播散癌细胞及免疫功能变化

目的研究微波消融治疗原发性小肝癌（≤5cm）对外周血播散癌细胞及细胞免疫功能影响。方法微波消融治疗19例小肝癌病人，手术切除治疗21例。于术前、术后30min、1d及7d采外周静脉血，巢式RT—PCR检测AFP mRNA，监测CD3、CD4、CD8及CD4／CD8。结果巢式RT—PCR检测外周血AFP mRNA，两组40例病人术前阳性率为40％（16／40）；微波组和手术组均有3例病人治疗前AFP mRNA阴性，术后30min转为阳性，两组之间比较无差异；微波组术后7d内外周血细胞免疫功能无明显变化，手术组降低。随访1～16个月，4例肝内复发或远处转移病人治疗前后AFP mRNA均阳性。结论与手术切除相比，微波消融治疗原发性小肝癌也可同样程度地造成癌细胞脱落人血，对外周血细胞免疫功能（7d内）无明显影响，有其自身特点；治疗前后外周血AFP mRNA均呈阳性表达（7d内）者，复发／转移的可能性增大。     

肝癌细胞血行播散对术后复发及远处转移的影响

目的 对照研究周围静脉血液中甲胎蛋白(AFP)mRNA阳性及阴性肝癌患者术后肿瘤复发和远处转移情况.方法 应用巢式RT-PCR检测术后24、48 h及1周、4周肝癌患者周围静脉血液中AFP mRNA水平,并术后随访1、2、3年.结果 12例术前及术后1周内血液AFP mRNA持续(+)的肝癌患者中,有7例在术后1年内产生了复发或转移性病灶(7/12,58.3%);所有患者在术后2年内均发生了肝癌复发和远处转移(12/12,2年复发率为100%).而在随访的19例血液AFPmRNA(-)肝癌患者中,有5例(5/19,26.3%)在术后1年内复发,4例在术后第2年复发(9/19,2年复发率为47.3%),1例术后第3年复发(10/19,3年复发率为52.6%),未出现肝外远处器官转移.术后1、2,3年复发率与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01).结论 术后血液AFP mRNA持续(+)的肝癌患者较AFP mRNA阴性肝癌患者更容易产生复发或转移.     

围手术期检测肝细胞癌病人外周血AFP mRNA的临床意义

目的　检测围手术期肝细胞癌病人外周血AFPmRNA ,通过随访评估其预后价值。方法　通过巢式RT PCR的方法 ,在围手术期检测了 4 5例肝细胞癌病人外周血中AFPmRNA的表达 ,并进行了 1～ 2 0个月不等的随访。结果　在 4 5例肝细胞癌病人外周血中 ,AFPmRNA的检出率分别是术前 5 1.1% ,术后 7d 2 4 .4 % ,术后 2 8d 2 2 .2 %。多因素统计分析提示 ,术后 2 8d外周血检出AFPmRNA是提示病人复发的独立预后因素。结论　采用巢式RT PCR的方法检测肝细胞癌病人术后 2 8d外周血AFPmRNA有助于预测肝癌转移复发     

肝癌组织、外周血淋巴细胞和癌旁组织MRP1的表达对评估原发性肝癌预后的价值比较

目的 探讨检测肝癌组织、外周血淋巴细胞及癌旁组织的MRP1(多药耐药基因1相关糖蛋白)表达水平在评估以手术为主辅以化疗的原发性肝癌患者复发或转移及生存期中的临床应用价值.方法 用流式细胞术同时检测26例初诊原发性肝癌患者外周血淋巴细胞、癌组织和癌旁组织MRP1表达水平,术后对患者进行追踪随访,了解其复发或转移及生存情况,分析三者MRP1的表达与复发或转移及生存期生存率间的关系.结果 初次就诊的原发性肝癌患者中,MRP1阳性率分别是肝癌组织61.5%,其次是外周血淋巴细胞53.8%、癌旁组织50.0%,但三者间并差异无统计学意义(P>0.05).外周血淋巴细胞和癌组织的MRP1阴性组和阳性组二者复发或转移率均差异无统计学意义(P>0.05),癌旁组织的MRP1阴性组和阳性组间复发或转移率差异有统计学意义(P<0.05).外周血淋巴细胞、肝癌组织及癌旁组织MRP1阴性表达组的中位生存期均明显长于MRP1阳性表达组、生存率均明显高于阳性组.结论 检测癌旁组织MRP1对于评估肿瘤转移复发具有重要临床意义;外周血淋巴细胞、肝癌组织及癌旁组织MRP1表达的检测可以用于评估肝癌术后生存期、生存率;外周血淋巴细胞MRP1表达的检测具有推广应用价值.     

外周血谷氨酰转肽酶mRNA-H亚型与AFP检测对评估原发性肝细胞肝癌病人术后预后价值的比较

目的深入探讨原发性肝细胞肝癌（HCC）病人外周血谷氨酰转肽酶（GGT）mRNA—H亚型表达与肝癌术后预后指标的关系，并与AFP比较，寻找评估肝癌预后更可靠的新指标。方法对78例HCC病人外周血应用逆转录聚合酶链反应方法检测GGTmRNA—H亚型；并运用放射免疫测定法检测AFP水平。对49例无门脉和（或）肝外转移的HCC病人进行随访研究。结果有肝内转移、门静脉癌栓及远处转移组其外周血GGT mRNA—H亚型阳性率显著高于对照组（P〈0．05）；在随访期内外周血GGTmRNA—H阳性组门脉及肝外转移的发生率比例明显高于阴性组（P〈0．05），而AFP阳性及阴性组的转移发生率相似。结论HCC病人外周血细胞GGTmRNAH亚型表达阳性者，术后出现转移的可能性高、预后差；GGTmRNAH亚型与AFP相比，有望成为评估肝癌预后更可靠的新指标。     

肝癌射频消融治疗前后外周血微转移变化的研究

目的: 探讨射频消融(RFA)治疗是否促进原发性肝癌（PHC）患者的血源性转移。方法:应用RT-PCR检测32例PHC患者RFA治疗前后外周静脉血AFPmRNA的表达。结果:32例PHC患者RFA治疗前外周血AFPmRNA表达阳性18例(56.3%),阴性14例(43.7%);治疗后阳性12例(37.5%),阴性20例(62.5%)。RFA治疗前后PHC患者外周血AFPmRNA阳性率无显着性差异(P>0.05)。结论:RFA治疗肝癌不会促进肿瘤的血源性转移。     

树突状细胞诱导的抗肿瘤免疫抑制肝癌病人术后复发和转移

目的 研究肿瘤抗原激活的树突状细胞（DC0在肝癌病人体内诱导的抗肿瘤免疫能否抑制肝癌术后复发和转移。方法 分离肝癌根治性切除术后病人外周血DC,以人肝癌细胞系HepG2细胞粗提物激活DC,以粒（巨噬）细胞集落刺激因子（GM－CSF）和白介素－4（IL－4）联合刺激DC,DC回输病人,检测肝癌病人外周血AFP mRNA。结果 在AFP mRNA阳性组织中,治疗组11例中仅1例AFP mRNA仍为阳性,而对照组11例中9例AFP mRNA仍为阳性;在AFP mRNA阴性组中,治疗组13例AFP mRNA仍全部为阴性,而对照组13例中4例AFP mRNA为阴性。结论 肿瘤抗原激活的DC在肝癌病人体诱导的抗肿瘤免疫能够抑制术后肝癌复发和转移。     

肝癌病人手术期间不同部位血液AFP mRNA定量检测及其意义探讨

目的 研究肝细胞性肝癌(HCC)病人手术期间不同部位血液甲胎蛋白信使核糖核酸(AFP mRNA)的水平变化，分析其与临床病理学特征和复发转移的关系。方法 18例HCC和6例非HCC肝肿瘤病人，于切除肿瘤前后抽取门静脉、肝静脉和外周静脉血各5m1，肝炎、肝硬化病人各10例取外周血5m1。应用TaqMan实时定量逆转录—聚合酶链反应(RT—PCR)检测AFP mRNA水平。结果 术前外周血AFP mRNA相对HCC的灵敏度为72．2％，特异性为76.9％，准确率为75．0％。HCC病人术后各部位血液AFP mRNA水平明显高于术前相应部位水平。血液AFP mRNA水平与肿瘤大小、分化程度、有无肝内播散、包膜完整性以及血清AFP浓度均无关，而有门静脉癌栓的病人术后肝静脉血AFP mRNA水平明显高于无癌栓者。术后2个月内复发者，术后门静脉和外周静脉血AFP mRNA水平明显高于末复发者。结论 TaqMan实时定量RT—PCR法检测HCC病人血液AFP mRNA有较高的敏感性和特异性。手术可能促进部分HCC细胞和肝细胞脱落入血。动态监测外周血AFP mRNA水平对术后早期复发有预测价值。     

荧光定量检测肝癌、癌旁组织及外周血AFP mRNA

目的　探讨肝癌、癌旁组织及外周血AFPmRNA的表达意义。方法　应用荧光定量聚合酶链反应 (FQ -PCR)定量检测 30例原发性肝癌术前外周血、肝癌组织、癌旁组织AFPmRNA。结果　肝癌组织AFPmRNA的基因拷贝数与组织的分化程度、有无肝内浸润和 (或 )转移及血清AFP明显相关 ;而与外周血的AFPmRNA的表达相关无显著性 ;肝癌组织与癌旁组织AFPmRNA的表达量差异有显著性。结论　定量检测AFPmRNA表达情况可能判断肝癌组织的分化程度及早期诊断微小肝癌、肝癌的复发和转移 ,并指导治疗 ,判断预后。     

hTERT mRNA和MDR mRNA在人肝癌中的表达及其意义

目的　探讨hTRTmRNA及MDRmRNA在人肝细胞肝癌 (HCC )组织中的表达及其意义。方法　检测 5 8例HCC患者癌组织及癌旁组织中hTERTmRNA和MDRmRNA的表达情况。结果　在 5 8例肝癌患者癌组织及其癌旁组织中 ,hTERTmRNA阳性率分别为 44 .83 % ( 2 6/5 8)和 5 .17% ( 3 /5 8) ,差异有显著性 (P <0 .0 1) ;MDRmRNA阳性率分别为 60 .3 4% ( 3 5 /5 8)和 3 2 .76% ( 19/5 8) ,差异有显著性 (P <0 .0 1)。hTRTmRNA ,MDRmRNA在人肝癌组织中的检出率与临床分期、肝外转移、术后复发、肿瘤大小等明显相关 (均P <0 .0 5 ) ,而与肿瘤数目、血清AFP水平等无明显相关 (P >0 .0 5 )。MDRmRNA检出率与术前化疗明显相关 (P <0 .0 1) ,但与门静脉癌栓无关 (P >0 .0 5 ) ;而hTERTmRNA与术前化疗无相关 (P >0 .0 5 ) ,但与门静脉癌栓有关 (P <0 .0 5 )。结论　hTERTmRNA和MDRmRNA可能与肝细胞的恶性转化及术后复发有关 ,故可望作为预测肝癌复发、转移的参考指标和肝癌治疗的靶基因     

联合检测肝细胞癌患者外周血甲胎蛋白和黑色素瘤抗原-1 mRNA的临床意义

目的　探讨甲胎蛋白 (α FP)mRNA和黑色素瘤抗原 1(MAGE 1)mRNA联合检测肝细胞癌患者外周血微转移的可行性。方法　采用巢式逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)技术检测 6 5例原发性肝细胞癌、2 2例肝炎和肝硬化、12例继发性肝癌、12例肝血管瘤患者、2 0例健康献血员外周血α FPmRNA和MAGE 1mRNA水平。结果　肝细胞癌患者外周血中 ,α FPmRNA和MAGE 1mRNA的检出率为分别是 5 4 % (35 /6 5 )和 4 2 % (2 7/6 5 ) ,6 5 % (42 /6 5 )的患者至少一种标志物阳性。α FPmRNA和MAGE 1mRNA的检出率和肝癌结节数目、门静脉癌栓、肿瘤直径、TNM分期等临床参数密切相关 (χ2 值分别为 8 0 2 3与 8 4 4 0 ,9 6 73与 5 132 ,6 777与 7 0 99,11 0 37与 8 5 4 7,P <0 0 5 )。α FPmRNA在肝炎肝硬化患者外周血中的检出率为 14 % (3/2 2 ) ,继发性肝癌、肝血管瘤患者及健康献血员中均未检出。MAGE 1mRNA在继发性肝癌患者外周血中的检出率为 33% (4/12 ) ,肝炎肝硬化、肝血管瘤患者及健康献血员中均未检出。结论　以α FPmRNA和MAGE 1mRNA为指标 ,采用巢式RT PCR技术检测肝细胞癌患者外周血微转移可行 ,两者联合检测可能有助于提高肝细胞癌外周血微转移检测的敏感性和特异性     

MAGE-1基因在肝细胞肝癌中的表达及临床意义

目的:研究MAGE-1基因在肝细胞肝癌组织中的表达,结合临床资料分析,探讨MAGE-1基因与肝细胞肝癌(HCC)患者临床指标及转移与复发的关系,为MAGE-1基因编码蛋白用于HCC患者免疫治疗提供依据。方法:用RT-PCR的方法对31例HCC患者癌组织及相应癌旁组织MAGE-1基因表达进行检测,随机对6例RT-PCR扩增产物中目的基因片段进行DNA测序以证实其为MAGE-1基因,所有患者均测定并统计AFP、AFU、抗HCV、HBsAAg、AFPmRNA、肿瘤直径等临床指标。结果:31例HCC患者肝癌组织中MAGE-1基因表达的阳性率64.5％(20/31)明显高于癌旁组织2％(1/31),P<0.01。HCC患者肝癌组织中MAGE-1基因表达的阳性率与患者AFP、AFU、抗HCV、乙肝标志物、AFPmRNA、肿瘤直径等临床指标均无关,P>0.05。结论:MAGE-1基因在HCC患者肝癌组织中特异高表达,HCC患者肝癌组织中MAGE-1基因表达的阳性率与HCC患者AFP、AFU、AFPmRNA肿瘤转移、复发均无关。     

以黑色素瘤抗原基因mRNA为标记检测胃癌患者外周血肿瘤细胞

目的以黑色素瘤抗原基因（MAGE）-1和MAGE-3mRNA作为特异性肿瘤标记物,建立用RT-PCR检测胃癌患者外周血中肿瘤细胞的有效方法。方法采集40例胃癌患者及20名健康志愿者的外周血,用RT—PCR方法检测其外周血单核细胞（PBMC）中MAGE-1和MAGE-3mRNA表达。同时用RT—PCR方法检测胃癌患者肿瘤组织中上述MAGE-1和MAGE-3的表达。结果40例胃癌患者中,分别有19例（47．5％）和10例（25．0％）PBMC中可检测到MAGE-1和MAGE-3 mRNA表达：在25例（62．5％）的胃癌患者PBMC中,至少可以检测到一种MAGEmRNA的表达。胃癌组织中MAGE-1和MAGE-3的表达率分别为62．5％和30％;胃癌组织中不表达MAGE-1和（或）MAGE-3基因的患者．其外周血中也检测不到相应的MAGE中mRNA;20例健康志愿者的PBMC中均未测出MAGE基因mRNA。胃癌患者PBMC中MAGE-1和（或）MAGE-3 mRNA的检出率与淋巴结转移和TNM分期密切相关（P〈0．05）。此外,外周血PBMC中CEA mRNA的检出率为32．5％．MAGE-1、MAGE-3和CEA互者在胃癌中联合检测的检出率为72．5％。结论MAGE—1和MAGE-3 mRNA可作为相对特异性标记物用于检测胃癌患者外周血肿瘤细胞．联合CEA可以提高其敏感性;MAGE mRNA的检测结果有助于对胃癌患者的预后进行判断。     

AFP mRNA detected in bone marrow by real-time quantitative RT-PCR analysis predicts survival and recurrence after curative hepatectomy for hepatocellular carcinoma

OBJECTIVE: To determine whether detection of hepatocellular carcinoma (HCC) cells by real-time quantitative RT-PCR targeting of alpha-fetoprotein mRNA (AFP mRNA) before or after curative hepatectomy predicts HCC recurrence and patient survival. SUMMARY BACKGROUND DATA: The presence of cancer cells in peripheral blood and/or bone marrow in patients with malignant disease has been reported to correlate with outcome. METHODS: Between July 2000 and June 2005, 136 consecutive HCC patients underwent primary curative hepatectomy. Bone marrow aspirated preoperatively, and peripheral blood samples collected before and after operation were subjected to real-time quantitative RT-PCR analysis using AFP mRNA as a target molecule. Median follow-up was 23 months (range, 6-54 months). Patient survival (PS), disease-free survival (DFS), and clinicopathologic features were compared between patients with positive and negative AFP mRNA. RESULTS: Twenty-four patients died (22 from HCC). HCC recurred in 66 patients (hepatic in 37 [56.1%]; hepatic and remote in 17 [25.8%], and remote alone in 12 [18.2%]). Bone marrow was positive for AFP mRNA in 38 patients (27.9%) and negative in 98 (72.1%). One- and 3-year PS was 96.6% and 91.4%, respectively, with negative AFP mRNA versus 86.2% and 55.5%, respectively, with positive AFP mRNA (P < 0.0001). One- and 3-year DFS were 73.2% and 44.8%, respectively, with negative AFP mRNA versus 54.5% and 25.8%, respectively, with positive AFP mRNA (P = 0.0399). Portal vascular invasion, tumor size, multiple tumors, and tumor differentiation correlated with inferior PS and DFS on univariate analysis. On multivariate analysis, positive AFP mRNA was the most important risk factor for PS (P = 0.001) and DFS (P = 0.0165). In addition, positive AFP mRNA in peripheral blood after operation tended to predict reduced DFS. CONCLUSION: AFP mRNA in the bone marrow and systemic circulation during the perioperative period predicts patient survival and recurrence after curative hepatic resection for HCC.