He-Ne激光照射引起离体小鼠胸腺细胞凋亡的超微结构观察

目的探讨低强度激光照射治疗的作用机制。方法以功率１１３ｍＷ、能量密度１０３６Ｊ／ｃｍ２的ＨｅＮｅ激光照射离体小鼠胸腺细胞１２０ｍｉｎ后,用透射电镜对细胞作超微结构观察,用流式细胞仪对ＡｎｎｅｘｉｎＶＦＩＴＣ／ｐｒｏｐｉｄｉｕｍｉｏｄｉｄｅ（ＰＩ）和Ｒｈｏｄａｍｉｎｅ１２３／ＰＩ荧光双标记的胸腺细胞作双参数定量检测。结果透射电镜观察发现在同一标本中正常、早期凋亡、晚期凋亡和坏死细胞的超微结构形态特征并存;流式细胞计分析则显示胸腺细胞可分活细胞、早期凋亡细胞和坏死细胞三群。结论两种检测技术均证实低功率ＨｅＮｅ激光照射可引起细胞凋亡,这可能是激光治疗作用的基础     

510nm激光诱导血管平滑肌细胞凋亡的初步研究

为了探讨用激光防治血管成形术后再狭窄的可能性，以５１０ｎｍ激光照射体外培养的血管平滑肌细胞，以ＤＮＡ片断末端标记法观察细胞凋亡现象。结果显示，５０和７５Ｊ／ｃｍ２照射后４小时ＳＭＣ出现凋亡现象，２４小时凋亡最为显著，凋亡率分别为９．４％和６．１％。表明激光直接照射能引起平滑肌细胞凋亡。这可能有益于减轻血管内膜的增厚程度     

510.6nm激光诱导兔在体血管平滑肌细胞凋亡的研究

目的　观察510-6 nm 波长激光对兔在体血管平滑肌细胞(SMC) 凋亡的诱导作用。方法　日本大耳白兔36 只,由股动脉导入柱状光纤至腹主动脉,对腹主动脉血管壁进行分段激光照射,功率密度分别为50 、100 、200 或300 m W/cm2 ,照射500 或1 000 s 。于照射后4 、8 、12 、24 或72 h 处死动物,取照射段腹主动脉,光镜观察SMC 形态改变,DNA 末端标记法确定细胞凋亡率。结果　兔腹主动脉经100 m W/cm2 及以上功率密度的激光照射后24 h,SMC 可出现变性、凋亡和坏死三种损伤性改变,而血管内皮细胞无明显变化。激光诱导下SMC 呈现典型的细胞凋亡形态特征:细胞明显固缩,细胞质着色加深,染色质固缩深染,并沿核膜着边排列。DNA 末端标记显示,SMC 凋亡与激光照射剂量有关。在100 m W/cm2 照射1000 s 和200 m W/cm2 照射500 s组( 能量密度均为100 J/cm2) ,细胞凋亡的发生率最高。结论　510 .6 nm 激光以能量密度100 J/cm2 照射,能使兔在体腹主动脉SMC 发生细胞凋亡,且发生率较高。     

线粒体在血卟啉单甲醚-PDT诱导HeLa细胞凋亡中的作用

目的探讨线粒体在血卟啉单甲醚(HMME)-PDT诱导HeLa细胞凋亡中的作用。方法膜联蛋白(annexin)V-PI双染法检测HMME-PDT处理后6hHeLa细胞的凋亡率和坏死率。Rh123染色法检测PDT后2h内HeLa细胞的线粒体膜电位(△Ψm)变化。Western杂交法检测PDT后6h内细胞质内细胞色素C(CytC)的含量变化。结果HMME-PDT后6hHeLa细胞的凋亡率和坏死率分别为11.48%±3.42%和17.68%±1.05%。PDT后2h内△Ψm无显著改变。PDT后即刻(0h)细胞质内未检测到CytC,而在PDT后2、4和6h均可检测到CytC,且含量有增高的趋势。结论线粒体内的CytC转位于细胞质,是HMME-PDT导致HeLa细胞凋亡的机制之一。     

电磁辐射诱导的生物氧化应激效应

电磁辐射的生物学效应是当前研究的热点问题之一。本文从氧化应激的角度,回顾了近年来国内外有关电磁辐射对活性氧、抗氧化酶和抗氧化剂、一氧化氮合酶、以及与氧化应激相关的细胞信号转导的研究进展。     

模拟失重对大鼠心肌细胞凋亡影响的实验研究

目的 探讨模拟失重对大鼠心肌细胞凋亡的影响.方法 将20只SD大鼠随机分为正常对照组及尾吊组,每组各10只.正常对照组常规饲养3周,尾吊组悬吊3周.结束后同时取2组大鼠心肌组织,用TUNEL法、流式细胞仪法检测心肌细胞凋亡.同时检测心肌组织Caspase-3活性.结果 与对照组比较,尾吊组大鼠心肌细胞凋亡明显增加(P<0.01),Caspase-3活性明显增高(P<0.05).结论 模拟失重导致尾吊组大鼠心肌组织细胞凋亡增加.这可能是模拟失重条件下心脏重量减轻、功能减低的细胞学基础之一.     

RhoA蛋白参与调节白介素8诱导的血管内皮细胞迁移

目的研究RhoA蛋白在内皮细胞迁移过程中的作用。方法采用脂质体包绕法将RhoA野生型（RhoAwt）、稳定表达持续活化型（RhoA63L）、主导抑制型（RhoA188A）突变质粒转染进入血管内皮细胞,获得稳定表达的EA.hy926-RhoAwt、EA.hy926-RhoA63L和EA.hy926-RhoA188A细胞。然后,利用Westernblot检测细胞中活性RhoA蛋白含量。最后,利用化学趋化因子IL-8（100ng/ml）分别刺激这3组细胞和对照组细胞,观察细胞迁移情况,并分析细胞迁移与活性RhoA之间的关系。结果1）各组细胞活性RhoA含量较对照组均有变化,EA.hy926-RhoAwt组稍稍升高,EA.hy926-RhoA63L组明显升高,而EA.hy926-RhoA188A组明显降低;2）在IL-8刺激下,EA.hy926-RhoAwt组细胞迁移能力稍高于对照组,EA.hy926-RhoA63L组细胞迁移能力远高于对照组,而EA.hy926-RhoA188A组细胞迁移能力则被明显抑制。因此,在IL-8刺激下,各组细胞迁移能力与细胞活性RhoA蛋白含量正相关。结论RhoA蛋白是IL-8诱导内皮细胞迁移过程中的关键分子,这有助于我们进一步探讨IL-8诱导内皮细胞迁移的理论机制和临床应用。     

仙鹤草诱导肝癌BEL-7402细胞凋亡的研究

目的：探讨仙鹤草丙酮提取物正丁醇萃取层对肝癌BEL-7402细胞的增殖抑制作用及其作用机制。方法：以不同浓度的仙鹤草丙酮提取物正丁醇萃取层作用于体外培养的BEL-7402细胞,MTT法检测细胞生长抑制率,应用流式细胞仪检测细胞凋亡率。应用Fluo-3/AM荧光探针观察细胞内钙离子浓度的变化,并用流式细胞仪检测细胞内活性氧的变化。结果：仙鹤草丙酮提取物正丁醇萃取层可显著抑制BEL-7402细胞的生长,诱导细胞发生凋亡,其IC50为107.54μg/mL。仙鹤草丙酮提取物正丁醇萃取层在作用48h后BEL-7402细胞数量明显的减少,在Fluo-3/AM荧光探针的作用下有较强的绿色荧光,同时检测出细胞内ROS有较明显的增加。结论：仙鹤草丙酮提取物正丁醇萃取层能抑制BEL-7402细胞的生长,诱导细胞发生凋亡;细胞内钙离子的释放和细胞内ROS的增加可能是其作用机制。     

光动力学作用诱导肿瘤细胞凋亡的机制

一、引言 　　肿瘤是一种细胞凋亡异常的疾病,本该发生凋亡的细胞未发生凋亡是肿瘤发生的机制之一,诱导细胞凋亡为人类攻克恶性肿瘤提供了一条新途径[1].……     

铜蒸气激光照射下三种光敏剂杀伤效应的研究

目的 测定血卟啉衍生物(HpD)和竹红菌素A(HA)、竹红菌素B(HB)在铜蒸气激光照射下的半数杀伤浓度和半数杀伤光剂量，了解HA、HB与HpD杀伤特性的差异。方法 将小鼠肺血管内皮细胞接种于96孔培养板，然后加入用DMEM(低糖)培养基配制的光敏剂，4h后应用铜蒸气激光510．6nm和578.2nm单色光分别照射，24h后用四唑蓝比色法测定细胞存活率。结果 在510.6nm和578.2nm波长饱和光剂量条件下HpD的半数杀伤浓度分别是HA的63、51和70.96倍，是HB的27．08和25．03倍。在饱和光敏剂剂量条件下510.6nm和578．2nm的半数杀伤光剂量HA分别是HpD的6．77和6．59倍，HB则分别是HpD的5．45和4．91倍。结论 HA、HB在510.6nm和578．2nm波长的杀伤效应都较HpD强并和光剂量、波长密切相关。     

NADH对X射线诱导的细胞凋亡信号传递的影响

目的　研究NADH抗辐射诱导的细胞凋亡及其作用机制。方法　通过MTT法和流式细胞仪检测L 0 2细胞受照后加和不加NADH(4 0 0 μg·ml-1)条件下细胞活性、细胞凋亡率和凋亡相关蛋白p5 3、p2 1、p16、bcl 2阳性细胞表达率。结果　细胞活性随X射线辐射剂量增大而减少 ,细胞凋亡率增加 ,NADH能增加肝细胞受照后细胞活性和减少细胞凋亡率。与假照射组相比 ,L 0 2细胞离子辐射后p5 3、p2 1和p16阳性表达率上升 ,bcl 2下降 ;加入NADH后 ,明显上调受照后肝细胞bcl 2蛋白表达和下调p5 3、p2 1和p16表达 ,差异非常显著 (P <0 .0 5 )。结论　X射线诱导正常肝细胞L 0 2凋亡及NADH抗辐射作用可能与p5 3信号传递途径有关     

Chromosomal Aberrations Induced in Mice Bone Marrow by Treating with Cisplatin and Irradiation

Background: The aim of this study was to quantify the combined effect of cisplatin and radiation on chromosomal damage with emphasis on the time interval between cisplatin and radiation. Methods and Materials: Bone marrow of female NMRI-nu(+) mice was taken as a model system for a highly proliferative tissue irradiated with cobalt-60 (1 to 4 Gy). Cisplatin was injected intraperitoneally (ip) at 1.1 to 36 mg/kg. Cisplatin was given at various time intervals before and after radiation. Bone marrow and metaphases were prepared according to standard procedures. Results: The percentage of aberrant metaphases after radiation or cisplatin alone increased in a dose-dependent manner (sigmoidal dose-response curve). Combining both modalities led to additive values at all time points for the percentage of aberrant metaphases. Borderline significant (p < 0.05) supraadditive effects were found 2 hours before or 1 hour after irradiation. However, a supraadditive percentage of aberrant chromosomes was found only at 2 or 1.5 hours with cisplatin before irradiation indicating the dependence of supraadditivity on the chosen parameter. Conclusion: It is doubtful to expect a true supraadditive or "radiosensitizing" effect, e. g. in the clinical setting from combined treatment with cisplatin and radiation. Rather, cisplatin might act as an independent cytotoxic agent. Hintergrund: Bestimmung des chromosomalen Schadens nach kombinierter Therapie mit Cisplatin und Bestrahlung unter besonderer Berücksichtigung des Zeitintervalls zwischen Cisplatingabe und Bestrahlung. Material und Methoden:Knochenmark weiblicher NMRI-nu(+)-Mäuse wurde als Modellsystem für ein stark proliferierendes Gewebe benutzt. Bestrahlungen erfolgten mit Cobalt-60 (1 bis 4 Gy). Cisplatin wurde intraperitoneal in Konzentrationen von 1,1 bis 36 mg/kg injiziert. Cisplatin wurde zu verschiedenen Zeiten vor und nach Bestrahlung appliziert. Knochenmark und Metaphasen wurden nach Standardprotokollen aufgearbeitet. Ergebnisse: Der Anteil aberranter Metaphasen nahm nach Bestrahlung oder Cisplatingabe dosisabhängig zu (sigmoide Dosis-Wirkungs-Beziehung). In der Kombination von Bestrahlung und Cisplatin fanden sich additive Werte für aberrante Metaphasen zu allen Zeitpunkten. Supraadditive Werte wurden bei Cisplatinapplikation zwei Stunden vor und eine Stunde nach Bestrahlung beobachtet (grenzwertig signifikant, p < 0,05). Für aberrante Chromosomen hingegen wurden supraadditive Werte nur nach Cisplatinapplikation zwei und anderthalb Stunden vor Bestrahlung bestimmt. Dies zeigt, dass Supraadditivität von dem gewählten Parameter abhängig ist. Schlussfolgerung: Es ist zweifelhaft, ob durch die kombinierte Behandlung mit Cisplatin und Bestrahlung tatsächlich supraadditive Werte oder ein "strahlensensibilisierender" Effekt durch Cisplatin zum Beispiel in der klinischen Anwendung zu erwarten ist. Cisplatin wirkt vermutlich eher als unabhängige zytotoxische Substanz.     

Chromosomal Aberrations Induced in Mice Bone Marrow by Treating with Cisplatin and Irradiation

BACKGROUND: The aim of this study was to quantify the combined effect of cisplatin and radiation on chromosomal damage with emphasis on the time interval between cisplatin and radiation. METHODS AND MATERIALS: Bone marrow of female NMRI-nu(+) mice was taken as a model system for a highly proliferative tissue irradiated with cobalt-60 (1 to 4 Gy). Cisplatin was injected intraperitoneally (i.p.) at 1.1 to 36 mg/kg. Cisplatin was given at various time intervals before and after radiation. Bone marrow and metaphases were prepared according to standard procedures. RESULTS: The percentage of aberrant metaphases after radiation or cisplatin alone increased in a dose-dependent manner (sigmoidal dose-response curve). Combining both modalities led to additive values at all time points for the percentage of aberrant metaphases. Borderline significant (p < 0.05) supraadditive effects were found 2 hours before or 1 hour after irradiation. However, a supraadditive percentage of aberrant chromosomes was found only at 2 or 1.5 hours with cisplatin before irradiation indicating the dependence of supraadditivity on the chosen parameter. CONCLUSION: It is doubtful to expect a true supraadditive or "radiosensitizing" effect, e.g. in the clinical setting from combined treatment with cisplatin and radiation. Rather, cisplatin might act as an independent cytotoxic agent.     

应用荧光探针H2DCF-DA检测光照致细胞内活性氧产生的初步研究

目的应用荧光显微镜及新型荧光探针H2DCF-DA检测在光源照射过程中人脐静脉血管内皮细胞(ECV304)内活性氧的产生情况。方法将ECV304细胞接种于35mm培养皿中,24h后加入H2DCF-DA,使其终浓度为10μmol/L,孵育30min。利用荧光显微镜的激发光源作为照射光源,在采集荧光图像的同时完成光源照射,光源输出波长范围为460～490nm,功率密度约为100mW/cm2。连续采集DCF的荧光图,观察细胞内DCF荧光的变化情况,采用计算机图像处理和分析技术,求得细胞内不同照射时间点DCF平均荧光强度,进而得到平均荧光强度-时间曲线。另外,使用线粒体特异标记探针MitoFluorRed589与H2DCF-DA共同孵育细胞,分别采集同一细胞的DCF的荧光图和MitoFluorRed589的荧光图,并利用像素-荧光强度分析方法来确定DCF荧光在细胞内的分布位置。结果在光源照射的开始阶段,ECV304细胞内的DCF荧光强度迅速增加,在第10s时便上升至第2s时的2.2倍,但是随着照射时间逐渐延长,荧光强度增幅逐渐变小,到第60s时上升至第2s时的4.7倍。观察时间进一步延长,DCF的荧光强度的变化似乎进入平台期,继而开始出现下降。考察DCF荧光在ECV304细胞内的分布位置主要通过比较细胞内不同区域的I1/I2值,通过图像分析与计算得到线粒体区、细胞核区以及细胞质非线粒体区内I1/I2值分     

运动性心肌微损伤发生中凋亡基因表达谱研究

目的:对一次力竭运动后不同时间心肌凋亡基因表达谱进行研究,探讨其在运动性心肌微损伤发生中的可能作用与功能意义。方法:健康雄性SD大鼠50只,分为一次力竭游泳运动组(n=40)和对照组(n=10),一次力竭运动后,分不同时相取材,采用基因芯片技术对相关凋亡基因表达谱的进行分析。结果:一次力竭游泳运动后心肌细胞凋亡基因主要包括诱导凋亡基因(Bok、Bnip3)和调控凋亡的转录因子(Nfkbia、Sphk1、ATF-3以及Casp2)等两类凋亡基因的表达。其中,Bok、Nfkbia、Sphk1、ATF-3在一次性力竭运动后即刻出现显著性上调表达,且Bok在12小时又出现显著性上调表达。心肌促凋亡基因(Bnip3、Casp2)在运动后即刻出现显著性下调表达,且Bnip3在12小时又出现显著性下调表达。结论:(1)一次性力竭运动后,心肌促凋亡基因Bok、转录因子Nfkbia显著性上调表达,加速运动性心肌细胞凋亡的发生,可能参与运动性心肌微损伤发生过程的调节,构成了运动性心肌微损伤发生的重要机制。(2)一次性力竭运动后,心肌促凋亡基因Bnip3、Casp2显著性下调表达,细胞凋亡调控基因Atf3、Sphk1显著性上调表达,抑制心肌细胞凋亡的发生与发展,可能对运动心肌有保护作用,防止严重性心肌损伤的发生。     

钩藤酸E通过线粒体途径诱导HepG2细胞凋亡

目的研究钩藤酸E诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的机制。方法采用MTT法分析确定钩藤酸E对肿瘤细胞及对小鼠骨髓体外增殖抑制作用,显微镜观察分析细胞凋亡的形态学变化,乳酸脱氢酶测定分析细胞死亡机制,免疫印迹实验检测线粒体相关蛋白的表达。结果钩藤酸E可明显地抑制HepG2细胞生长,且呈明显的量效关系和时效关系,而对小鼠骨髓细胞无抑制作用。Hoechst33258荧光染色可见凋亡小体产生,乳酸脱氢酶分析证明钩藤酸E引起细胞死亡为凋亡和坏死同时进行。免疫印迹结果显示上调的Bax和下调的Bcl-2和Bcl-xL表达证实了钩藤酸E诱导的HepG2细胞凋亡是通过线粒体途径发挥作用,并导致细胞色素C的释放。结论钩藤酸E可明显地诱导HepG2细胞凋亡,并经历了线粒体信号转导途径。     

血卟啉甲醚-PDT诱导C6胶质瘤细胞凋亡机制的研究

目的探讨血卟啉甲醚-光动力学疗法（PDT）诱导C6胶质瘤细胞的凋亡机制。 方法常规传代培养C6胶质瘤细胞系,取处于对数生长期细胞按实验要求分组接种于96孔培养板上,应用光敏剂血卟啉甲醚,以不同照光剂量（40、80、120、160、200、240、280和320J/cm^2）处理C6胶质瘤细胞。MTT法检测不同照光剂量的细胞死亡率;电镜观察PDT后C6细胞形态学变化;以Fluo-3/AM为细胞内钙离子荧光指示剂,激光共聚焦显微镜测定不同照光剂量作用后C6胶质瘤细胞内[Ca^2＋]i。 结果PDT组对C6胶质瘤细胞死亡率影响显著,照光剂量与细胞死亡率正相关,随照光剂量增加,细胞死亡率逐渐增大,当达到能量密度大于200J/cm^2时,细胞死亡率不再明显增加。PDT作用后早期出现一定数量凋亡的C6胶质瘤细胞和多数线粒体、内质网等亚细胞结构肿胀。PDT作用晚期可见大量坏死细胞和部分凋亡细胞。PDT作用后C6胶质瘤细胞内游离钙明显升高。 结论血卟啉甲醚-PDT诱导C6胶质瘤细胞坏死和凋亡,钙超载在广泛超微结构损伤中起重要作用。     

白花蛇舌草多糖诱导人胃癌细胞凋亡作用的研究

目的研究白花蛇舌草多糖对体外培养人胃癌7901细胞增殖抑制的影响及其作用机理。方法采用MTT法测定不同浓度白花蛇舌草多糖对人胃癌7901细胞增殖的影响;流式细胞技术检测药物作用后的细胞周期和凋亡率;RT-PCR方法检测药物对人胃癌7901细胞P53和Bcl-2基因表达的影响。结果白花蛇舌草多糖能明显抑制人胃癌7901细胞的增殖,其作用48 h的IC50约为116.52 mg·L-1;流式细胞检测显示40 mg·L-1白花蛇舌草多糖联合5.0 mg·L-1顺铂组总凋亡率为69.42%,明显优于顺铂组的50.85%（P〈0.01）和40 mg·L-1白花蛇舌草多糖组的26.41%（P〈0.01）;PCR结果显示高、中浓度白花蛇舌草多糖可使人胃癌7901细胞的bcl-2 mRNA表达量降低,P53 mRNA表达量增加。结论白花蛇舌草多糖能明显诱导人胃癌7901细胞的凋亡,与顺铂联合可产生协同作用,其作用机制可能与降低细胞bcl-2和增加P53基因表达量有关。     

Nd:YAG激光组织间照射血管瘤后即刻瘤腔内血液学变化

目的:研究Nd:YAG激光组织间照射血管瘤后即刻瘤腔内血液学的变化.方法:收集适合Nd:YAG激光组织间照射治疗且照射前后可自瘤腔内各抽取10 ml血液的血管瘤病人6例,以Nd:YAG激光行血管瘤组织间照射,照射功率密度为5.31×103 W/cm2,能量密度为7.97×104 J/cm2.激光照射前及照射后即刻取血进行血液细胞学、生化学、酶学、免疫学、流变学等共24项指标检测.结果:激光照射后即刻瘤腔内血液红细胞、白细胞、血小板数及血红蛋白含量下降(均P＜0.05),丙氨酸转氨酶、天冬氨酸转氨酶、乳酸脱氢酶、全血粘度(切变率190/s、46/s、5.75/s)、血浆粘度、红细胞比积、红细胞刚性指数、红细胞聚集指数、血液还原粘度、低切变率下血液相对粘度升高(均P＜0.05),血液生化学、免疫学各指标无明显变化.结论:激光组织间照射后血液粘滞度升高,因此要注意防止血栓的形成.     

Ultraviolet B Irradiation of Human Leukaemia HL-60 Cells in Vitro Induces Apoptosis

Summary

UV radiation is known to be a potent agent for the induction of programmed cell death (apoptosis) in human skin. However, the mechanistic aspects of UV-induced apoptosis remain ill-defined. In this study the effects of varying periods of UV-irradiation on the human leukaemia HL-60 cell line and on five other human cell lines were investigated. HL-60 cells were found to rapidly undergo apoptosis en masse after short periods of UV-irradiation, whereas prolonged exposure of these cells to this form of radiation induced a more rapid form of cell death which was suggestive of necrosis, the pathological mode of cell death. Similar effects were observed on the U937 (myelomonocytic), Molt-4 (T-lymphoblastoid), and Molt-3 (T-lymphoblastoid) cell lines, whereas the K562 (pre-erythroid) and Daudi (B-lymphoblastoid) cell lines proved to be relatively resistant to the death-inducing properties of UV-irradiation by comparison. UV-induced apoptosis in cell lines was characterized by morphological changes as well as DNA fragmentation into unit multiples of ～200 bp, which was indicative of endogenous endonuclease activation. This DNA fragmentation pattern was not detected in cells immediately after UV-irradiation, and was therefore not the result of direct UV-induced DNA damage. UV-induced apoptosis of the HL-60 cell line was found to require extracellular calcium and to be inhibited in a dose-dependent way by zinc added to the culture medium.