大鼠腹腔肥大细胞与RBL-2H3细胞脱颗粒方法的 建立及其在中药注射剂安全性评价上的应用

目的:建立大鼠体外肥大细胞以及RBL-2H3细胞脱颗粒试验的方法,评估2种细胞脱颗粒方法对中药注射剂(traditional Chinese medicine injections,TCMI)引起脱颗粒的可行性。方法:提取大鼠腹腔肥大细胞(rat peritoneal mast cell,RPMC),优化实验条件,用阳性药物C48/80和各种TCMI等与其共培养,通过甲苯胺蓝染色法计数腹腔MC脱颗粒率;通过RBL-2H3细胞与TCMI共同培养,底物显色法检测β-氨基己糖苷酶释放率。结果:阳性对照品C48/80的浓度与RPMC脱颗粒有一定的量效关系;参麦、冠心宁、痰热清、清开灵和生脉5种TCMI能显著引起细胞脱颗粒,并与药物浓度有一定的正相关性;RBL-2H3细胞脱颗粒方法中参麦、黄芪、银杏、痰热清、丹香冠心、清开灵和生脉7种TCMI能是β-氨基己糖苷酶释放率升高。结论:一些TCMI能引起体外RPMC和RBL-2H3细胞脱颗粒,2种细胞脱颗粒方法在评价一些TCMI可能引起类过敏反应方面具有一定的互补性与可行性。     

脉络宁针剂致敏RBL-2H3细胞的实验研究

目的:通过研究临床含有绿原酸的中药注射剂脉络宁针剂对RBL-2H3细胞(大鼠嗜碱性白血病细胞系)脱颗粒、释放介质的影响,探讨绿原酸与中药注射剂发生严重过敏反应的关系,为临床安全用药提供依据.方法:以含有绿原酸的中药针剂脉络宁为研究对象,以不含绿原酸的葛根素针剂为阴性对照,以绿原酸对照品为阳性对照,通过对体外培养RBL-2H3细胞模型的作用,观察该细胞模型发生脱颗粒反应和细胞形态变化,检测β-己糖胺酶释放量.结果:脉络宁、绿原酸组可显著引起RBL-2H3细胞释放β-己糖胺酶(P＜0.05);葛根素注射液组能不同程度促进β-己糖胺酶的释放.结论:脉络宁组可显著引起RBL-2H3细胞释放β-己糖胺酶,提示绿原酸与中药注射剂脉络宁发生严重过敏反应有密切关系.     

双黄连注射液对致敏RBL-2H3细胞组胺释放的影响

目的：建立致敏RBL-2H3细胞模型,观察双黄连注射液对其组胺释放的影响,探讨该模型用于体外评价中药注射剂致敏性的可行性。方法：双黄连注射液联合弗氏佐剂免疫Wistar大鼠,收集致敏后大鼠血清,将其与体外培养RBL-2H3细胞孵育12h,建立致敏RBL-2H3细胞模型,双黄连注射液与致敏RBL-2H3细胞共培养1.5h,ELISA法检测培养上清中组胺含量。结果：双黄连注射液致敏大鼠血清IgE水平明显升高,与对照组相比P〈0.05,差异有统计学意义。组胺实验结果显示,双黄连注射液可显著引起致敏RBL-2H3细胞组胺释放,与对照组相比P〈0.05,差异有统计学意义。结论：双黄连注射液可促进致敏RBL-2H3细胞释放组胺,提示RBL-2H3细胞模型具有评价中药注射液所致过敏反应的潜在应用价值     

绿原酸对RBL-2H3细胞脱颗粒作用的研究

目的:通过比较绿原酸和绿原酸完全抗原对未致敏和致敏RBL-2H3细胞脱颗粒的影响,探讨绿原酸的致敏性及其作用机制,为进一步正确评价绿原酸在中药注射剂不良反应中地位和临床合理用药提供一定的参考.方法:采用未致敏RBL-2H3细胞和致敏RBL-2H3细胞模型,观察绿原酸和绿原酸完全抗原对肥大细胞脱颗粒的影响.比色法检测过敏介质组胺和β-氨基己糖苷酶的释放,中性红染色法进行形态学观察,流式细胞法检测 Annexin V阳性细胞率.结果:绿原酸和绿原酸完全抗原直接刺激RBL-2H3细胞并未引起肥大细胞发生脱颗粒反应;将RBL-2H3细胞与绿原酸或双黄连致敏血清共孵育致敏后,绿原酸完全抗原再次作用于细胞,可引起细胞组胺释放率、β-氨基己糖苷酶释放率、Annexin V阳性细胞率和中性红染色脱颗粒细胞率均明显增加.结论:绿原酸作为小分子物质,以半抗原形式存在,本身不具有致敏性,但它能与血清蛋白结合形成复合物而产生免疫原性,从而引起过敏反应.绿原酸作为双黄连注射剂的一种有效成分,同时也是双黄连注射剂引起变态反应的一种致敏原.     

致敏RBL-2H3细胞在清开灵、痰热清中药注射剂过敏性评价中的应用

目的探索采用血清抗体致敏的RBL-2H3细胞对清开灵、痰热清2种中药注射剂过敏性进行初步评价。方法以阳性药卵白蛋白(OVA)、清开灵注射液、痰热清注射液分别与Al(OH)3凝胶佐剂混合作为致敏源,Wistar大鼠sc致敏源制备抗体血清,采用放免法检测血清总Ig E水平。取抗体血清致敏RBL-2H3细胞,48 h后再以药物激发致敏细胞,检测细胞脱颗粒后上清液中β-氨基己糖苷酶释放率。另取大鼠进行被动皮肤过敏(PCA)实验,观察动物皮肤蓝斑阳性反应率。结果与对照组相比,OVA、清开灵、痰热清组大鼠抗体血清总Ig E水平著显升高(P0.05、0.01)。致敏细胞脱颗粒结果显示:采用OVA和清开灵、痰热清注射液抗体血清致敏细胞,再经药物激发后RBL-2H3细胞上清液中β-氨基己糖苷酶释放率明显增加(P0.05、0.01),与对照组比较,最大的相对释放倍数分别为3.7、1.53、1.98。大鼠PCA实验结果显示,各给药组大鼠蓝斑阳性反应最高百分率分别为100%、100%、86%。RBL-2H3细胞实验与PCA实验结果具有较好的一致性。结论血清抗体致敏RBL-2H3细胞模型可以用于对中药注射剂过敏性的初筛或评价。     

双黄连注射液中8种主要成分对RBL-2H3细胞的影响

目的以双黄连注射液为研究对象,探讨其中8种主要成分的致敏性。方法采用RBL-2H3细胞模型,分别用双黄连注射液、黄芩苷、黄芩素、连翘苷、连翘酯苷A、绿原酸、新绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸处理细胞,测定细胞脱颗粒率以及β-氨基己糖苷酶和5-羟色胺的释放率。结果双黄连注射液、绿原酸及隐绿原酸能直接引起RBL-2H3细胞脱颗粒,并能显著提高细胞内β-氨基己糖苷酶和5-羟色胺的释放,其他成分无显著的致敏性。结论双黄连注射液的致敏性可能是由绿原酸和隐绿原酸引起的。     

RBL-2H3和P815细胞用于建立体外肥大细胞脱颗粒模型的比较研究(英文)

目的:通过比较两种肥大细胞模型RBL-2H3和P815细胞激活后脱颗粒反应的差异,寻找早期、稳定、敏感的肥大细胞脱颗粒体外检测模型,为进一步建立基于细胞水平的过敏原和抗过敏药物的体外筛选模型提供一定的参考。方法:10μg.mL-1C48/80激活细胞15-60min,比色法检测组胺、β-氨基己糖苷酶及类胰蛋白酶等过敏介质的释放,中性红染色法进行形态学观察,流式细胞法检测AnnexinV阳性细胞率。结果:C48/80刺激P815、RBL-2H3细胞15-60min后组胺释放率均明显增加,并且相同刺激条件下,两种细胞模型的组胺释放率基本相当。C48/80刺激P815细胞15min以上,β-氨基己糖苷酶释放率、类胰蛋白酶释放率、Annexin V阳性细胞率和中性红染色脱颗粒细胞率均明显增加;但相同浓度的C48/80需刺激RBL-2H3细胞30-45min以上,上述指标才出现显著增加。在相同的刺激条件下,P815细胞过敏介质释放率、AnnexinV阳性率和脱颗粒率均高于RBL-2H3细胞。结论:同RBL-2H3相比,在相同刺激条件下,P815细胞活化后脱颗粒时间出现更早、程度更高。提示除RBL-2H3细胞,P815细...     

177 云南茜草中抑制NO产生和RBL-2H3细胞脱颗粒的生物活性成分

云南茜草(Rubia yunnanensis)有“小红参”之称,用于治疗眩晕、失眠、风湿、结核、月经失调、挫伤、呕血。曾报道从该植物根中分离得到5个arborinane型三萜rubianol-a～-e(6、7、10～12)、1个arborinane型三萜苷rubianosides Ⅰ(15)。本次又从中分离出3个新的arborinane型三萜苷(1～3)、1个新的arborinane型三萜(4)、1个新的蒽醌(5)以及7个已知化合物(16～18、20、24、25、28)。     

钙离子变化应用于中药注射剂类过敏性评价的可行性研究

目的:研究通过检测RBL-2H3细胞内钙离子变化评价中药注射剂类过敏性的可行性。方法:不同浓度的C48/80作用RBL-2H3细胞后,Flex Station检测RBL-2H3细胞内钙离子变化,显色法检测β-氨基己糖苷酶释放率,比较钙离子变化与β-氨基己糖苷酶释放率的一致性。选择6种临床常用中药注射液:参麦注射液、注射用血塞通、脉络宁注射液、舒血宁注射液、痰热清注射液及热毒宁注射液,检测各中药注射液对RBL-2H3细胞内钙离子浓度及β-氨基己糖苷酶释放率的影响。结果:与对照组相比,加入200、400、600μg/ml的C48/80后,钙离子浓度和β-氨基己糖苷酶释放率均随C48/80浓度的升高而明显增大,钙离子变化与β-氨基己糖苷酶释放率变化趋势一致。各中药注射液中,26.66 ml/L的参麦注射液显著升高RBL-2H3细胞内钙离子浓度,但对β-氨基己糖苷酶释放率无明显影响,其余中药注射液对RBL-2H3细胞β-氨基己糖苷酶释放率及胞内钙离子浓度均无明显变化。结论:以细胞内钙离子浓度变化作为检测药物类过敏的方法,有可能在早期更便捷、迅速的对药物进行安全性筛查,但是在对药物的安全性进行整体评价时,仍需要对应传统的检测方法,以便评价结果的真实可靠。     

双黄连注射液及其中间品对RBL-2H3细胞增殖的影响

目的:探讨双黄连注射液(SHLI)及其中间品(金银花连翘提取物、黄芩提取物)不同浓度对白血病细胞株RBL-2H3增殖和形态的影响,为类过敏细胞模型的建立及药品质量的监控提供实验依据。方法:将双黄连注射液以体积比1∶16为初始浓度,按2倍梯度稀释至1∶4 096,中间品分别以体积比1∶8为初始浓度,按2倍梯度稀释至1∶2 048,作为受试样品。以各受试样品分别孵育RBL-2H3细胞,观察细胞形态变化。应用噻唑蓝(MTT)比色法测定各组RBL-2H3细胞增殖活力,并计算细胞增殖的半数抑制浓度(IC50)。根据IC50设置不同给药浓度,观察SHLI对RBL-2H3细胞凋亡的影响。结果:随着给药浓度的升高,SHLI及其中间品对细胞增殖的抑制作用逐渐增强,细胞存活力明显降低。给药后随着药物浓度的升高,细胞损伤逐渐加重,形态发生明显变化。高浓度SHLI可引起RBL-2H3细胞凋亡。结论:SHLI可抑制RBL-2H3细胞增殖活力,为SHLI类过敏细胞模型的建立,评价SHLI及中间品的安全性及药物质量控制提供依据。     

清开灵、血塞通注射液类过敏反应研究

目的用RBL-2H3细胞初步评价清开灵、血塞通注射液类过敏反应,为完善中药注射剂类过敏反应的筛选提供实验依据。方法 MTT法测定2种药物对细胞生长的IC50;采用不同浓度药物、C48/80或培养液分别刺激细胞30 min,检测上清液中组胺、β-氨基己糖苷酶释放率;另取刺激后的细胞,观察其脱颗粒率及超微结构变化。取ICR小鼠进行类过敏试验,以含伊文思蓝的药物或生理盐水单次尾静脉注射30 min,记录每组耳廓蓝染的动物数、蓝染总耳数及耳廓伊文思蓝渗出量。结果离体实验显示,清开灵、血塞通注射液的IC50均为12.5μL/mL;2种药物在较高浓度均能促进细胞释放组胺和β-氨基己糖苷酶(P0.05,P0.01),呈一定剂量依赖性;形态上可见细胞表面绒毛减少,内部空泡状结构增加。小鼠类过敏试验显示,2种药物对动物耳蓝染率均为100%、伊文思蓝渗出量明显增多(P0.01)。离体与整体实验结果一致。结论清开灵、血塞通注射液具有潜在的致类过敏反应性,RBL-2H3细胞模型用于中药注射剂类过敏性评价具有一定的参考应用价值。     

基于市场状况的抗肿瘤中药注射剂分析

中药注射剂是中药的重要剂型之一,在抗肿瘤、心血管保护和抗病毒等方面发挥了重要作用。本文针对目前我国抗肿瘤中药注射剂的市场进行分析,深入了解康艾注射液、参芪扶正注射液、艾迪注射液、香菇多糖注射液和复方苦参注射液5大抗肿瘤中药注射剂的市场竞争状况。结合目前中药注射剂的技术进展,分析了这些抗肿瘤中药注射剂的技术特点及临床应用情况,并围绕我国相关政策法规对抗肿瘤中药注射剂未来的发展趋势及存在问题进行了评述和展望。     

中药注射剂治疗心脑血管系统疾病用药分析

中药注射剂是指在中医理论指导下,采用现代科学技术与方法,从中药、天然药物的单方或复方中提取有效物质制成的可供注入人体灭菌制剂,包括肌肉、穴位、皮内、皮下、静脉注射以及其他组织或器官注射用的灭菌制剂以及供临床前配制溶液的无菌粉末或浓缩液。主要有中药溶液型注射剂（含水针和静脉注射剂）、注射用粉针和冻干制品、注射用混悬剂和注射用乳剂。目前,中药注射剂品种的研发主要集中在治疗心脑血管、呼吸系统和肿瘤等疾病上,显示出其独特的优势。本文对用于治疗心脑血管系统疾病的中药注射剂进行分析和探讨。     

中药注射剂治疗呼吸系统疾病用药分析

在对呼吸系统中药注射剂品种分类的基础上,主要从处方药物组成情况、主治疾病、中医证型以及安全性评价等方面,对用于治疗呼吸系统疾病的中药注射剂品种进行分析和探讨。     

常用中药注射剂致敏性研究

目的：研究中药注射剂的过敏反应,测定致敏动物血清免疫球蛋白（IgE）抗体含量,观察其与过敏反应是否具有相关性,为提高过敏反应实验预测的准确性提供实验依据。方法：选用多种中药注射剂进行被动皮肤过敏实验（PCA）实验和类过敏反应研究,用ELISA 法对致敏动物血清进行血清IgE 水平检测。结果：双黄连注射液（SHL）、清开灵注射液（QKL）、鱼腥草注射液（YXC）、血塞通注射液（XST）、葛根素注射液（GGS）、穿琥宁注射液（CHN）的PCA 实验结果均为阴性,刺五加注射液（CWJ）的PCA 实验结果为阳性。SHL、QKL、YXC、XST、GGS、CHN、CWJ 注射液组血清总IgE 水平与生理盐水组无明显差异;SHL、QKL、YXC、XST、GGS、CHN、CWJ 注射液均引起了豚鼠的类过敏症状。结论：SHL、QKL、YXC、XST、GGS、CHN、CWJ 均能引起豚鼠的类过敏反应,其过敏反应的发生与血清IgE 抗体水平无相关性。     

中药注射剂不良反应报告分析

目的了解我院使用中药注射剂引起药物ADR的特点和规律,为临床安全用药提供参考。方法采用回顾性调查分析方法,对我院2005年至2012年9月收集的27例中药注射剂所致ADR报告进行统计分析。结果 27例ADR涉及5种中药注射剂,累及7个系统/器官;男15例（57.3%）,女12例（42.7%）;ADR多发于35-59岁年龄组共19例（70.3%）;大部分ADR发生在用药30min内（87.5%）;临床表现以皮肤及其附件损害多见,其次为全身性损害及用药部位损害,较严重的有呼吸困难、过敏性休克等;严重ADR发生的比例较高（21.9%）。结论医院应高度重视中药注射剂ADR的报告和监测工作,严格遵循中药注射剂临床使用基本原则,保障患者用药安全,促进临床合理用药。