甘露消毒丹及其拆方对感染肠道病毒71型细胞miR-146a和Toll样受体4mRNA表达的影响

目的探讨甘露消毒丹及其拆方对肠道病毒71型(EV71)感染后免疫及炎症反应的调节作用。方法运用细胞培养技术,设甘露消毒丹组(甘全方组)、清残方组、利残方组、病毒唑组、正常组、模型组,进行病毒毒力和药物细胞毒性测定后,以药物作用于EV71感染后的RD细胞,24 h后RT-PCR检测各组细胞miR-146a、Toll样受体4(TLR4)mRNA表达。结果与正常组比较,模型组miR-146a mRNA表达降低,TLR4 mRNA表达升高;与模型组比较,甘全方组、清残方组、利残方组miR-146a mRNA表达升高、TLR4 mRNA表达降低,病毒唑组与模型组比较差异不明显;与甘全方组比较,清残方组miR-146a、TLR4 mRNA表达降低,利残方组miR-146a mRNA表达升高、TLR4 mRNA表达降低;与清残方组比较,利残方组miR-146a mRNA表达升高,TLR4 mRNA表达无明显差异。结论甘露消毒丹可能通过调节miR-146a、TLR4 mRNA表达从而影响EV71感染所致免疫反应,其中清残方与利残方可能存在互相拮抗效应。     

甘露消毒丹对感染肠道病毒71型细胞miRNA-155表达的影响

目的观察甘露消毒丹及其残方对肠道病毒71型(EV71)感染后的RD细胞miRNA-155表达的影响。方法运用细胞培养技术,设甘全方组、清残方组、利残方组、利巴韦林组、正常细胞对照组、模型对照组,将药物作用于EV71感染后的RD细胞,24 h后RT-PCR法检测各组细胞miR-155表达。结果 1)模型对照组、甘全方组、清残方组、利巴韦林组miR-155表达均比正常细胞对照组低,利残方组比正常细胞对照组升高(P0.05或P0.01);甘全方组、清残方组、利残方组miR-155的表达比模型对照组高(P0.05或P0.01),利巴韦林组与模型对照组差异不明显(P0.05);甘全方组、清残方组、利残方组miR-155表达比利巴韦林组升高(P0.05或P0.01),清残方组、利残方组的表达比甘全方组升高(P0.05或P0.01),利残方组最高。结论 EV71感染RD细胞后miR-155表达降低,与文献报道趋势不同,提示其表达可能具有细胞特异性;甘全方、清残方、利残方均能上调EV71感染后miR-155的表达从而调控免疫反应;利残方与清残方之间可能存在相互拮抗关系。     

甘露消毒丹抗肠道病毒71型作用的体外实验研究

目的：探讨甘露消毒丹体外抗肠道病毒71型（EV71）的作用。方法以病毒唑为对照药,运用细胞培养技术,通过直接抑毒实验、治疗性抑毒实验、预防性抑毒实验、预防＋治疗性抑毒实验4组实验观察甘露消毒丹体外抗EV71的病毒抑制率。结果在直接抑毒实验、治疗性抑毒实验、预防＋治疗性抑毒实验中,甘露消毒丹的EV71病毒抑制率高于病毒唑;在预防性抑毒实验中,甘露消毒丹与病毒唑的EV71病毒抑制率几乎为零。结论甘露消毒丹抗EV71作用强于病毒唑,且其抗EV71效应体现在影响EV71复制的多个环节。     

甘露消毒丹对柯萨奇病毒体外抑制作用的实验研究

目的：观察甘露消毒丹全方、残方及加味方对柯萨奇病毒的体外抑制作用。方法：采用组织培养技术，在培养细胞中观察甘露消毒丹全方、残方及加味方水煎液分别对培养细胞的最高无毒浓度、对柯萨奇病毒增殖产量的影响以及在不同时间内抑毒效果。结果：甘露消毒丹全方、残方及加味方对细胞的最高无毒浓度均为１：４０（即２５ｇ／Ｌ），该浓度对柯萨奇病毒Ｂ２、Ｂ３、Ｂ４株在培养细胞内的增殖有明显的抑制作用，抑制指数均〉２；全方对     

甘露消毒丹对CoxA16小鼠模型的影响

目的:探讨甘露消毒丹对柯萨奇病毒A16型(CoxA16)小鼠模型的影响。方法:7日龄ICR小鼠150只,随机分为正常组、模型组、阿昔洛韦组、甘露消毒丹组,每组25只;除正常组外,其余各组每只小鼠腹腔内注射20ul 107TCID50的CoxA16标准株原液进行造模,造模后的第5天,除正常组和模型组外,其余4组使用相应的药物干预治疗。观察小鼠临床表现;在光镜下观察肌肉组织形态学变化;用细胞增殖与毒性检测试剂盒(CCK-8)检测肌肉匀浆液对Hela细胞存活率的变化;电镜观察肌肉组织病毒颗粒的变化,采用ELISA法检测肌肉组织IL-6、IL-10、INF-γ的浓度。结果:与模型组比较,发现阿昔洛韦及甘露消毒丹(24.4g/kg、12.2g/kg、6.1g/kg)均可提高小鼠的生存率并使体重恢复到正常情况。HE染色和电镜结构表明甘露消毒丹(24.4g/kg、12.2g/kg、6.1g/kg)和阿昔洛韦均可减轻CoxA16病毒对肌肉的损伤,并减少肌肉内病毒的颗粒。通过肌肉组织匀浆液对Hela细胞存活率的变化表明甘露消毒丹能抑制病毒在肌肉内的生长。ELISA检测结果发现阿昔洛韦与甘露消毒丹均能减少IL-6的浓度,并提高IL-10、INF-γ的表达。结论:甘露消毒丹对CoxA16感染的小鼠有保护作用,能够抑制并杀死体内的CoxA16病毒。     

甘露消毒丹及其拆方对柯萨奇病毒A16小鼠模型P-选凝素糖蛋白配体1和促炎因子的影响

目的观察甘露消毒丹及其拆方对柯萨奇病毒A16型(Cox A16)小鼠模型P-选凝素糖蛋白配体1(PSGL-1)和促炎因子的影响,探讨其抗病毒的作用机制。方法 7日龄ICR小鼠150只,随机分为正常组、模型组、全方组、芳残方组、清残方组和利残方组,每组25只。除正常组外,其余各组小鼠腹腔注射20μL107TCID50的Cox A16标准株原液进行造模。除正常组和模型组外,其余各组给予相应药物干预。于给药后第10日取材,检测PSGL-1、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-4的表达,并进行病理组织观察。结果除正常组外,其余各组小鼠肌肉组织内存在大量Cox A16,表明造模成功;HE染色结果显示,甘露消毒丹及其拆方可减轻Cox A16对肌肉的损伤。与正常组比较,模型组PSGL-1蛋白表达明显升高(P0.01);与模型组比较,全方组、芳残方组、清残方组和利残方组不同程度抑制PSGL-1蛋白的表达,减少致炎因子TNF-α、IL-1β、IL-4的产生(P0.01)。结论甘露消毒丹及其拆方具有抗炎作用,其中以全方组效果最明显。     

甘露消毒丹对CAV16、EV71感染小鼠肠道微生物的影响

目的:研究甘露消毒丹对CAV16、EV71感染小鼠肠道微生物的影响。方法:将33只小鼠随机分为3组,每组各11只。正常组灌胃蒸馏水;实验1组先灌胃甘露消毒丹,再腹腔注射CAV16;实验2组先灌胃甘露消毒丹,再腹腔灌射EV71。取小鼠肠道微生物进行分析。结果:与正常组比较,实验1组、实验2组细菌总数、双歧杆菌总数、乳酸杆菌总数、大肠杆菌总数均有所提高,其中双歧杆菌、乳酸杆菌、大肠杆菌总数差异有统计学意义(P0.01,P0.05)。结论:甘露消毒丹能促进肠道益生菌的生长,改善肠道微生态平衡,预防病毒CAV16、EV71对机体的损害。     

甘露消毒丹及其拆方对CoxA16感染小鼠炎症因子及NF-κB信号通路的影响

目的:观察甘露消毒丹及其拆方对柯萨奇16病毒(Cox A16)感染模型小鼠脾组织IL-10、TGF-α含量及脑组织NF-κB蛋白的影响,探讨甘露消毒丹及其清残方、芳残方抗炎的可能机制。方法:ICR纯种小白鼠40只,随机分为5组,即空白组、模型组、全方组、芳残方组(甘露消毒丹中芳香化湿药物组成)、清残方组(甘露消毒丹中清热解毒药物组成),予单次腹腔注射Cox A16制备感染模型,采用ELISA法检测各组小鼠脾组织中的IL-10、TGF-α的表达,用Western blot法测定脑组织中NF-κB蛋白的含量变化。结果:与空白组比较,模型组脾组织IL-10、TGF-α含量升高,脑组织NF-κB相对表达量上调(P0.05或P0.01);与模型组比较,全方组脾组织IL-10、TGF-α含量显著升高,脑组织NF-κB相对表达量明显下调(P0.05或P0.01);与芳残方组比较,全方组脾组织IL-10含量增加、脑组织NF-κB相对表达量下调(P0.05);与清残方组比较,全方组脾组织TGF-α含量增加、脑组织NF-κB相对表达量下调(P0.05)。结论:甘露消毒丹及其拆方对Cox A16感染模型小鼠抗炎作用机制可能与增加脾组织IL-10、TGF-α含量,下调脑组织NF-κB相对表达量有关。     

用古法而不拘用古方—从阳明发黄三方到甘露消毒丹

通过因机证治四个方面，对比分析甘露消毒丹与阳明发黄三方之异同。甘露消毒丹为叶天士传承阳明发黄三方之理，以开上、畅中、渗下诸法分消三焦、祛湿清热，两方方虽不同而法理相通。甘露消毒丹方对阳明发黄三方的继承发展，为现代中医在用古法而不拘于古方上提供了有益的借鉴。     

热毒宁注射液组分抗CoxA16和EV71病毒活性研究

目的:明确热毒宁注射液组分抗柯萨奇病毒A16(coxsackievirus A16,Cox A16)和肠道病毒71(enterovirus 71,EV71)病毒的活性。方法:考察热毒宁注射液1~19号组分(RND1~19)对非洲绿猴肾细胞(Vero)的毒性,明确半数中毒浓度(TC50);进一步利用病毒感染的Vero细胞模型研究各组分的抗病毒活性及量效关系。采用50倍半数组织培养感染量(TCID50)Cox A16和EV71病毒分别感染Vero细胞(1万个/孔),热毒宁注射液组分(15.625~500 mg·L-1)给药3 d后,考察抗Cox A16和EV71病毒活性(n=3)。活性组分(最佳浓度)给药8 h后,检测病毒载量。结果:热毒宁注射液各组分的Vero细胞毒性,TC50从1 000 mg·L-1到221 mg·L-1不等;抗病毒活性及量效关系研究表明,RDN7和RDN18具有较好的抗Cox A16活性,半数有效浓度(EC50)分别为460,92 mg·L-1,治疗指数(TI)分别为1.44,2.40;RDN6和RDN17具有较好的抗EV71活性,EC50分别为395,378 mg·L-1,TI分别为2.22,1.10;病毒载量研究表明,RDN7极显著降低Vero细胞中Cox A16病毒载量(P0.01),RDN6,RDN17极显著地降低Vero细胞中EV71病毒载量(P0.01),而RDN18则没有上述活性。结论:明确了热毒宁注射液组分的抗Cox A16和EV71病毒活性。     

白藜芦醇对常见肠道病毒抑制作用的实验研究

目的:观察白藜芦醇体外对多种肠道病毒的抑制药效,为进一步探讨其抗肠道病毒谱提供依据。方法:采用细胞病变抑制法（Cytopathic effect inhibition Assay,CPE）和四甲基偶氮唑蓝（MTT）法,通过计算病毒抑制率、药物半数有效浓度(IC50)及选择指数（selection index,SI）,研究白藜芦醇体外对抗多种肠道病毒的作用效果。结果:肠道病毒属（EV）11、EV71、EV84、柯萨奇病毒（COX）B3和COX A10等5种病毒的TCID50分别为:2.13×10-4,1×10-4,2.13×10-6,1×10-5及4.67×10-4。白藜芦醇在Vero E6细胞的半数毒性浓度TC50为50μg/mL。白藜芦醇最大无毒浓度为25μg/mL,以此为抗病毒活性检测的起始浓度。在最大无毒浓度下,白藜芦醇与阳性对照药对5种肠道病毒均有抑制作用。除EV84病毒外,白藜芦醇的抑制率均高于阳性药物利巴韦林。结论:白藜芦醇体外具有抗多种肠道病毒作用,对于病毒性肠道传染病防治具有一定应用前景。     

甘露消毒丹治疗61例咳嗽患者证候特点分析

目的探讨甘露消毒丹治疗湿热咳嗽的病因病机、临床证候、发病特点及处方药物加减。方法按照设计的《甘露消毒丹方证调查表》对门诊患者进行问卷调查;观察患者应用甘露消毒丹治疗前及用药7天后的症状变化。结果湿热咳嗽病位在肺脾,发病既有外感因素,又有内伤因素;女性多于男性;平均年龄43.57岁,30~39岁患者发病率最高(39.3%)。甘露消毒丹一年四季均有应用,以12月份和6月份多见。甘露消毒丹治疗咳嗽的主症为:久咳,晚间较重,常因气温变化及劳累加重,咳痰量少色白或色黄或黄白相间,质黏,不易咳出。结论甘露消毒丹治疗湿热咳嗽的病因病机及主、兼症、舌脉等特点,为临床治疗湿热咳嗽提供参考。     

热毒宁注射液对EV71病毒感染Vero细胞和乳鼠的作用及其机制研究

目的考察热毒宁注射液对EV71病毒感染Vero细胞及乳鼠致手足口病模型的治疗作用及其机制。方法体外模型采用33 TCID50和25 TCID50 EV71感染Vero细胞,建立细胞感染病毒模型;采用乳鼠ip EV71病毒100μL/只的方法制备体内模型,攻毒2 h后各组分别ip给予相应药物,观察热毒宁注射液(2.60、1.30、0.65 g/kg)和阳性对照药利巴韦林(10 mg/kg)对乳鼠体质量、临床评分和肌肉组织中白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)水平及腿部肌肉病理改变的影响。结果体外结果显示,在Vero细胞模型上,热毒宁注射液(生药5.0 mg/m L)显著抑制33 TCID50和25 TCID50 EV71引起的细胞病变;体内实验结果显示,与模型组比较,高、中剂量热毒宁注射液可降低病毒感染乳鼠的临床评分,提高乳鼠体质量,改善乳鼠生存状态,降低乳鼠肌肉组织中细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α、MCP-1水平(P0.05、0.01);与模型组比较,热毒宁注射液可显著改善肌肉组织病理学病变。结论热毒宁注射液能够抑制EV71病毒导致的乳鼠死亡,明显延长乳鼠的存活时间,能够减轻病毒引起的临床症状,缓解病毒引发的乳鼠生长抑制,抑制IL-1β、IL-6、TNF-α、MCP-1水平可能是其治疗手足口病的重要机制。     

一清片的体外抗病毒作用

目的：观察一清片的体外抗病毒作用。方法：不同浓度的药物与100TCID50的Adv3、Adv7及Rsv病毒等容量混合，室温作用1小时，取此混合液0.2ml接种于Z－H16^c细胞管中吸附45分钟后，加足2％小牛血清Eagles维持液，37℃温孵培养24小时，移33－35℃旋转培养器培养，逐日观察细胞病变而判断药物抗病毒作用。结果：一清片2.55mg(生药）/ml浓度可抑制Adv3、Rsv病毒所致细胞病变，但此浓度仅部分抑制Adv7病毒所致细胞病变。结论：一清片对Adv3、Rsv、Adv7病毒具有一定的抑制作用。     

石岐外感茶抗肠道病毒EV71的药效作用研究

目的:研究石岐外感茶体外抗肠道病毒EV71的作用。方法:以利巴韦林为阳性对照药,观察药物对细胞的病变作用(CPE)影响,采用MTT法确定病毒感染后、病毒感染前和病毒、药物同时加入3种不同给药方法的50%细胞毒性浓度(TC50)、半数有效浓度(IC50)和治疗指数(TI)。结果:病毒感染后给药和病毒、药物同时加入法的IC50分别为0.77、0.33 mg/m L,TI为29.35、68.48,预防给药法未见明显的抑制病毒作用。结论:石岐外感茶在体外对肠道病毒EV71有抑制作用。     

病炎清I号抗甲型流感病毒的体外实验

目的:观察病炎清I号在体外抗甲型流感病毒的作用。方法:以MDCK细胞为病毒宿主,测定病炎清I号抑制甲型流感病毒引起MDCK细胞的病变程度。并设中药对照组清开灵注射液和西药对照组病毒唑。结果:病炎清I号在1:108(相当于生药15.0 mg/ml)稀释度时达到TD50,在1:324(相当于生药5.0 mg/ml)稀释度时达到TD0和IC50,SI=3.0。清开灵注射液在1:20.78稀释度时达到TD50,在1∶36稀释度时达到TD0;在1∶47.6稀释度时达到IC50,SI=2.29。病毒唑对甲型流感病毒的半数抑制浓度IC50=6.2μg/ml。结论:病炎清I号对甲型流感病毒所致的细胞病变有一定的抑制作用,远比中药对照组清开灵注射液好,但效果不及西药对照组病毒唑。     

清气解毒方含药血清干预呼吸道合胞病毒感染人喉癌上皮细胞Hep-2的体外实验研究

目的探讨清气解毒方抗呼吸道合胞病毒(RSV)感染的作用及可能机制。方法 3只新西兰白兔分为空白血清组、利巴韦林组和清气解毒方组,每组1只。清气解毒方组灌胃量为36. 32 mg/(kg·d),利巴韦林组给药量为18. 24 mg/(kg·d),空白血清组给予50 ml生理盐水灌胃,均连续灌胃3天后制备含药血清。检测RSV半数感染量(TCID50)并筛选清气解毒方、利巴韦林药物最大无毒浓度用于后续实验。Hep-2细胞以1×10~5/ml种于96孔板中,分为细胞组、病毒组、利巴韦林组和清气解毒方组,每组设6个复孔。利巴韦林组加入利巴韦林血清,清气解毒方组加入清气解毒方血清,细胞组和病毒组加入细胞维持液。分别培养48、72、96 h后检测各组细胞病毒抑制情况,96 h后观察各组细胞周期及凋亡率。结果呼吸道合胞病毒A亚型(Long株) TCID50为10-4. 581/100μl。最终筛选出浓度为40%的清气解毒方含药血清作为其最大细胞无毒浓度,即0. 363 g/ml;浓度为50%的利巴韦林含药血清作为其最大细胞无毒浓度,即0. 228 mg/ml。与细胞组比较,感染后48、72、96 h病毒组OD值明显降低(P <0. 01);与病毒组比较,利巴韦林组和清气解毒方组在48、72、96 h时OD值均明显升高(P <0. 05或P <0. 01)。清气解毒方组在48、72、96 h病毒抑制率分别为42. 1%、57. 0%、66. 6%,低于同时间利巴韦林组的51. 2%、69. 6%、77. 3%。与细胞组比较,病毒组G1期明显升高,S期明显降低,凋亡率亦升高(P <0. 05或P <0. 01);与病毒组比较,利巴韦林组与清气解毒方组G1期明显降低,S期和G2期明显升高,凋亡率亦降低(P <0. 05或P <0. 01)。结论清气解毒方具有一定的体外抗RSV作用,效果略差于利巴韦林。     

苇茎五虎颗粒冲剂抗呼吸道合胞病毒作用的实验研究

1 材料 苇茎五虎颗粒剂批号910803,用三蒸水溶解配成每ml含主药1g的浓度,以此为100％浓度,G_6抽滤除菌。4℃冰箱保存备用。取Hela细胞用1640(GIBCO)USA进口分装)加10％灭活小牛血清常规培养,待细胞长满单层后,选形态良好的细胞供实验用。呼吸道合胞病毒(RSV)(NJ3165)首都儿童医院病毒研究所提供。将RSV在Hela细胞中增殖、传代,测定其滴度,置-30℃冰箱保存。实验用病毒浓度为100TCID50/0.1ml。病毒唑:湖北天门制药厂生产的注射液,100mg/ml,批号:910603。实验时用细胞维持液稀释成50μg/ml。2 方法 RSV滴度测定 按文献方法。细胞对药物的最大     

痰热清注射液抗甲型流感病毒的实验研究

目的:观察痰热清注射液的体外抗甲型流感病毒作用.方法:以MDCK细胞为病毒宿主,测定痰热清注射液对甲型流感病毒引起MDCK细胞的病变程度的抑制作用,并设病毒唑对照组.结果:在甲型A/粤防/243/72(H3N2)中痰热清注射液和对照组病毒唑的TD50、TD0、IC50、SI分别是1∶19.3、1∶36.4、1∶90.8、4.07.在甲型A/京防/262/95(H1N1)中痰热清注射液和对照组病毒唑的TD50、TD0、IC50、SI分别是1∶20.1、1∶38.9、1∶74.1、3.69.结论:痰热清注射液对甲型流感病毒所致的细胞病变有较好的抑制作用,效果与对照组病毒唑相近.     

裸花紫珠颗粒体外抗肠道病毒71型及幽门螺杆菌的活性研究

目的:研究裸花紫珠颗粒体外抗肠道病毒71型(EV71)和幽门螺杆菌(Hp)的活性。方法:以人肌肉横纹瘤细胞(RD)作为受试细胞,用EV71病毒感染RD细胞,噻唑蓝(MTT)比色法检测裸花紫珠颗粒抗EV71病毒的作用;采用幽门螺杆菌ATCC43504国际标准菌株,将100、50、25、12.5、6.25 mg/mL不同浓度的裸花紫珠颗粒药液进行琼脂打孔法试验,测定不同浓度药物产生的抑菌圈直径大小。结果:裸花紫珠颗粒可抵抗EV71病毒对细胞的感染,治疗指数为35.26;裸花紫珠颗粒对Hp具有一定的抗菌活性,100 mg/mL和50 mg/mL浓度的抑菌圈直径分别为(19.7±0.45) mm和(10.8±0.26) mm。结论:裸花紫珠颗粒有较好的体外抗EV71病毒作用,对防治EV71病毒感染导致的小儿手足口病有一定临床意义;裸花紫珠颗粒对Hp具有良好的抑菌作用,有望用于治疗Hp感染引起的慢性胃炎、胃溃疡。