六味地黄丸对大鼠前脂肪细胞增殖与分化的影响

目的探讨六味地黄丸对大鼠前脂肪细胞增殖与分化的影响。方法原代培养大鼠前脂肪细胞,用四甲基偶氮唑盐(MTT)方法检测六味地黄丸含药血清对前脂肪细胞的增殖情况,以酶组织化学法检测其对前脂肪细胞分化过程中的磷酸甘油脱氢酶(GPDH)的影响,油红O染色方法测定其对细胞内脂肪积聚的影响。结果10%以内六味地黄丸含药血清对大鼠前脂肪细胞的增殖有促进作用,对分化过程中的GPDH升高有抑制作用,而对于分化过程中的脂肪积聚则有促进分解的作用。结论六味地黄丸能促进大鼠前脂肪细胞的增殖,抑制大鼠前脂肪细胞的分化。     

马钱苷对大鼠前脂肪细胞增殖与分化的影响

目的探讨马钱苷对大鼠前脂肪细胞增殖与分化的影响。方法原代培养大鼠前脂肪细胞,以四甲基偶氮唑盐(MTT)方法检测马钱苷对大鼠前脂肪细胞增殖的影响;以酶组织化学提取法检测其对大鼠前脂肪细胞分化过程中磷酸甘油脱氢酶(GPDH)的影响;以油红O染色方法检测其对大鼠前脂肪细胞分化过程中细胞内脂肪积聚的影响。结果8,16,32μmol/L的马钱苷能够促进大鼠前脂肪细胞的增殖,抑制其分化过程中GPDH的升高和脂肪积聚,作用呈明显量效关系。结论马钱苷具有促进大鼠前脂肪细胞增殖,抑制大鼠前脂肪细胞分化的作用。     

中药复方益糖康对3T3-L1前脂肪细胞增殖和分化的影响

目的：探讨中药复方益糖康对3T3-L1前脂肪细胞增殖和分化的影响。方法：培养3T3-L1前脂肪细胞;以四甲基偶氮唑盐（MTT）的方法检测益糖康对3T3-L1前脂肪细胞增殖的影响,通过流式细胞仪检测细胞增殖的周期;以油红O染色异丙醇萃取的方法检测益糖康对3T3-L1前脂肪细胞分化过程中脂肪积聚的影响。结果：10%含益糖康的大鼠血清,对3T3-L1前脂肪细胞的增殖影响最佳,细胞增殖在S、G2期与对照组比较增多;5%含益糖康大鼠血清抑制分化过程中的脂肪积聚最佳。结论：中药复方益糖康具有促进3T3-L1前脂肪细胞增殖,抑制3T3-L1前脂肪细胞分化的作用。     

六味地黄丸含药血清对大鼠前脂肪细胞内cAMP的影响

目的:探索六味地黄丸大鼠含药血清对大鼠前脂肪细胞内cAMP的影响,阐明该方对cAMP的作用机制.方法:培养大鼠前脂肪细胞,在其生长旺盛时加入六味地黄丸含药血清培养液,或加入含有肾上腺素的六味地黄丸含药血清培养液,继续培养48 h,以放射免疫法测定细胞内cAMP的含量.结果:六味地黄丸含药血清各浓度对大鼠前脂肪细胞内cAMP水平有降低的作用;且该方能抑制肾上腺素升高该细胞内cAMP水平的作用.结论:六味地黄丸能降低大鼠前脂肪细胞内cAMP的含量,拮抗肾上腺素引起的大鼠前脂肪细胞内cAMP水平的升高,其作用机制可能是通过阻断细胞膜表面β受体所致.     

豆茶决明冲剂含药血清对3T3-L1前脂肪细胞分化的抑制作用

目的:探讨豆茶决明冲剂含药血清对前脂肪细胞增殖和分化的影响及其机制。方法:制备豆茶决明冲剂含药血清,培养3T3-L1前脂肪细胞,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测豆茶决明冲剂含药血清(5%、10%、20%)对3T3-L1前脂肪细胞增殖过程的影响;采用油红O脂肪染色观察及评价细胞分化情况;异丙醇萃取法、甘油三酯(TG)试剂盒检测分析不同浓度豆茶决明冲剂含药血清对3T3-L1前脂肪细胞分化过程中脂质合成的影响;采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测关键转录因子CCAAT增强子结合蛋白(C/EBPβ、C/EBPα)、过氧化物酶体增殖物活化受体γ(PPARγ)mRNA表达水平;采用Western blot法检测关键转录因子C/EBPβ、C/EBPα、PPARγ蛋白表达水平。结果:与对照组(Control)相比,0.9g/kg豆茶决明冲剂含药血清(5%、10%、20%)对3T3-L1前脂肪细胞增殖无显著性影响;采用"鸡尾酒法"成功诱导前脂肪细胞成脂分化为成熟脂肪细胞,豆茶决明冲剂含药血清(5%、10%、20%)干预前脂肪细胞,分化后胞浆中脂滴数量显著性降低。脂滴中TG含量显著性下降,C/EBPβ、C/EBPα、PPARγmRNA和蛋白表达显著性降低。结论:豆茶决明冲剂含药血清对3T3-L1前脂肪细胞分化有抑制作用,其分子机制可能与下调PPARγ、C/EBPα和C/EBPβmRNA和蛋白表达相关。     

小青龙汤超微饮片与传统饮片药理作用对比研究

目的:比较小青龙汤超微饮片与传统饮片药理作用强度的差异.方法:对比研究小青龙汤超微饮片与传统饮片含药血清对离体支气管平滑肌收缩的影响及平喘、止咳作用.结果:小青龙汤超微饮片含药血清对抗组织胺引起豚鼠气管平滑肌收缩的EC50为传统饮片血清EC50的52.9%.小青龙汤超微饮片与传统饮片均具有平喘、止咳作用,同剂量的超微饮片作用略优.结论:小青龙汤超微饮片可以代替传统饮片,且用量少于传统饮片.     

中药复方益糖康对3T3-L1前脂肪细胞分化过程中凋亡的影响

目的：探讨中药复方益糖康对3T3-L1前脂肪细胞凋亡的影响。方法：以分化的3T3-L1前脂肪细胞为研究对象,给予含益糖康的大鼠血清,应用AO/EB染色的方法,确定对凋亡影响的含药血清浓度;用Western检测凋亡相关蛋白Bax/Bcl-2的表达,并用t检验进行统计分析;用电镜观察细胞凋亡的形态。结果：含益糖康的大鼠血清,对3T3-L1前脂肪细胞的凋亡有促进作用,其中5%含药大鼠血清作用4天效果最佳;含药血清组与正常组比较,凋亡相关蛋白Bax/Bcl-2的表达有差异（P〈0.05）;含药血清组电镜观察有线粒体溶解、细胞核固缩、伪足减少。结论：中药复方益糖康具有促进3T3-L1前脂肪细胞分化过程中的凋亡的作用。     

二至丸含药血清对成骨细胞增殖、分化及矿化的影响

目的 研究二至丸含药血清对体外培养大鼠成骨细胞(Osteoporosis,OP)增殖、分化及矿化的影响.方法 二至丸(9,4.5,2.25 g/kg/d)给大鼠连续灌胃7d,每天2次,于第8天灌胃后1～2 h眼眶取血制备含药血清,采用多次酶消化法获得大鼠原代成骨细胞,将含药血清加入成骨细胞培养液中,采用MTT比色法、碱性磷酸酶(ALP)染色法、茜素红染色法研究其对细胞增殖及功能的影响.结果 二至丸含药血清能不同程度地促进大鼠原代成骨细胞的增殖,二至丸中剂量在24,48,72 h均能显著促进大鼠原代成骨细胞的增殖(P＜0.05);二至丸中、小剂量能显著增加大鼠原代成骨细胞ALP活性(P＜0.05)和矿化结节的数量(P＜0.05),其中二至丸中剂量效果最为显著(P＜0.01).结论 二至丸含药血清具有良好的促进成骨细胞增殖、分化、矿化的作用,其中二至丸中剂量组作用效果尤为显著.     

麻黄超微饮片与传统饮片血清药理学作用比较研究

目的:比较麻黄超微饮片与传统饮片作用强度的差异.方法:对比研究麻黄超微饮片与传统饮片含药血清对抗组织胺引起豚鼠气管平滑肌收缩作用.结果:麻黄超微饮片含药血清对抗组织胺引起豚鼠气管平滑肌收缩的EC50(1/2最大松弛比时的药物浓度)为传统饮片血清EC50的82.4%.结论:麻黄超微饮片可以代替传统饮片,且用量少于传统饮片.     

超微六味地黄汤对孕期被动吸烟胎鼠脑抗氧化能力的影响

目的研究六味地黄汤超微和传统饮片对胎鼠脑发育不全的干预作用,并从抗氧化角度探讨其机制。方法采用孕鼠被动吸烟造成胎鼠脑发育不全,分别给予六味地黄汤超微和传统饮片进行治疗。脑组织匀浆后采用黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶（SOD）,硫代巴比妥酸法测定丙二醛（MDA）。结果 SOD：与正常组比较,模型组胎鼠脑SOD下降不明显（P〉0.05）,治疗后超微六味地黄汤全量组较模型组、传统六味地黄汤组明显升高（P〈0.05）。MDA：与正常组比较,模型组胎鼠脑MDA明显升高（P〈0.05）,治疗后各组MDA均有所下降,超微六味地黄汤全量组MDA明显低于模型组和超微六味地黄汤1/3量组（P〈0.05）。结论孕期被动吸烟可以导致胎鼠脑组织MDA活性升高,SOD活性降低。六味地黄汤可降低此模型胎鼠脑组织MDA活性,升高SOD活性,超微饮片对上述指标的效果优于传统饮片。     

便可通超微饮片与传统饮片药理作用对比研究

目的:比较便可通超微饮片与传统饮片的药理作用强度.方法:对比研究便可通超微饮片与传统饮片含药血清对抗阿托品抑制离体豚鼠回肠收缩作用及对小鼠肠推进、兔在体肠蠕动的影响.结果:便可通超微饮片含药血清对抗阿托品抑制离体豚鼠回肠收缩的EC50为传统饮片血清EC50的55.4%.便可通超微饮片与传统饮片均具有促进小鼠小肠推进、增强家兔在体肠蠕动强度的作用,但同剂量超微饮片作用强于传统饮片.结论:便可通超微饮片可以代替传统饮片,且用量可少于传统饮片.     

大黄酸对大鼠前体脂肪细胞增殖与分化的影响

 目的研究大黄酸(rhein,Rh)对大鼠前体脂肪细胞增殖与分化的影响。方法采用噻唑蓝(MTT)比色法和流式细胞术测定RH对大鼠前体脂肪细胞增殖的影响。采用油红O染色提取法,检测脂肪细胞内甘油三酯积聚量的变化;采用形态学观察,检测前体脂肪细胞充脂率、充脂程度及形态变化。结果RH在5～160μmol·L^-1内,对前体脂肪细胞增殖与分化的抑制作用呈剂量和时间依赖性变化,并可在一定程度上诱发脂肪细胞凋亡。结论Rh可抑制前体脂肪细胞的增殖与分化,具有潜在的减肥降脂作用。     

大黄素对大鼠前体脂肪细胞增殖与分化的影响

目的：研究大黄素(emodin,EMO)对大鼠前体脂肪细胞增殖与分化的影响。方法：分离培养大鼠前体脂肪细胞,按照EMO添加剂量不同,把培养板中接种细胞的培养孔随机分为0,5,10,20,40,80,160 μmol·L^-1 处理组；采用MTT比色法和流式细胞术测定EMO对大鼠前体脂肪细胞增殖的影响；采用油红O染色提取法,检测脂肪细胞内甘油三酯积聚量的变化；采用形态学观察,检测前体脂肪细胞分化的形态学变化。结果：20～160 μmol·L^-1 的EMO对大鼠前体脂肪细胞的增殖与分化呈剂量和时间依赖性地抑制作用,并可在一定程度上诱发前体脂肪细胞凋亡。结论：EMO具有潜在的减肥降脂作用。     

六味地黄方体外对人正常黑素细胞中褪黑素合成限速酶ANNAT、HIOMT活性的影响

目的观察六味地黄方对体外培养的人正常黑素细胞中ANNAT、HIOMT活性的影响。方法体外培养人正常黑素细胞,CCK-8法测药物法测定不同浓度的六味地黄方含药血清对黑素细胞增殖的影响,实时荧光PCR定量法测定不同浓度的六味地黄方含药血清对黑素细胞中ANNAT、HIOMT活性的影响。结果六味地黄方对于黑素细胞的增殖药物剂量的增加先促进了黑素细胞的增殖,在中剂量达到最高(P0.05),继而高剂量组药物抑制其生长(P0.05)。AANAT活性在低剂量组及中剂量组表达下调,与低中剂量促进黑素细胞增殖情况一致。分析结果表明,六味地黄方体外对黑素细胞增殖与AANAT活性存在相关性,且差异有统计学意义(P0.05)。但六味地黄方含药血清对黑素细胞各用药剂量组HIOMT的mRNA含量无明显变化。结论 AANAT的活性在六味地黄方体外对黑素细胞影响的过程中可能起到限制性调节作用。     

健脾化痰法对前脂肪细胞分泌功能影响的研究

目的:通过检测用含药大鼠血清培养前脂肪细胞分化过程中瘦素、瘦素受体m RNA的表达和脂联素含量,探讨健脾化痰法对脂肪细胞分泌功能的影响。方法:对SD大鼠分别给予健脾化痰方、健脾方、化痰方、维甲酸及生理盐水灌胃7天后,分离血清以培养并诱导前脂肪细胞分化,检测试验指标。结果:健脾化痰法可明显提高脂肪细胞的瘦素分泌,效果优于单纯健脾法或单纯化痰法(P0.05,P0.01),时间因素对瘦素分泌的影响较大。健脾化痰法可明显提高脂肪细胞瘦素受体m RNA的分泌,总体趋势为:健脾化痰组化痰组维甲酸组健脾组空白血清组完全空白组。健脾化痰法可明显提高脂肪细胞脂联素的含量,在所有时间段效果均优于其他各组(P0.05,P0.01)。结论:健脾化痰法可明显提高脂肪细胞的瘦素、瘦素受体m RNA和脂联素的分泌,效果优于单纯健脾法或单纯化痰法。     

消渴丸主要化学成分对胰岛素抵抗脂肪细胞糖脂代谢的影响

目的:观察消渴丸主要化学成分对3T3-L1前脂肪细胞增殖与分化及对胰岛素抵抗脂肪细胞葡萄糖消耗、游离脂肪酸的影响。方法:培养3T3-L1前脂肪细胞,药物干预48 h后,采用MTT法检测消渴丸主要化学成分对其增殖的影响,采用油红O染色法观察对其分化的影响。取分化成熟的脂肪细胞,建立胰岛素抵抗模型,采用葡萄糖氧化酶法(GOD-POD)检测培养液中葡萄糖消耗量;比色法检测游离脂肪酸浓度。结果:与溶媒对照组比较,部分消渴丸主要化学成分能显著促进前脂肪细胞增殖及分化(P0.05或P0.01);与溶媒对照组比较,大多数消渴丸主要化学成分能明显促进胰岛素抵抗细胞的葡萄糖消耗、抑制游离脂肪酸的产生(P0.05或P0.01)。结论:部分消渴丸的提取物能够促进前脂肪细胞增殖以及分化,多数消渴丸的提取物能够改善胰岛素抵抗。     

平目方及其拆方含药血清对Graves眼病眼眶前脂肪细胞Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9蛋白表达的影响

目的:研究平目方及其拆方含药血清对Graves眼病眼眶前脂肪细胞Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9蛋白表达的影响,探讨其可能的作用机制。方法:体外培养Graves眼病患者眼眶前脂肪细胞,鉴定并传代。诱导前脂肪细胞分化,油红O染色鉴定成熟脂肪细胞。将平目方拆方为益气组、温阳组、化痰祛瘀组、益气+温阳组、益气+化痰祛瘀组、温阳+化痰祛瘀组,制备全方组及各拆方组含药血清。MTT法观察平目方及其拆方含药血清对前脂肪细胞增殖活性的影响。Western blot检测平目方及其拆方对Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9蛋白表达的影响。结果:1原代培养细胞呈梭形,间接免疫荧光检测鉴定培养细胞为前脂肪细胞,细胞可分化为成熟脂肪细胞。2MTT结果显示,平目方及各拆方组均可降低前脂肪细胞增殖活性,其中平目方(全方)组最为显著,益气+温阳组其次,地塞米松组与空白对照组相比差异无统计学意义。平目方(全方)组、化痰祛瘀组、益气+温阳组、益气+化痰祛瘀组、温阳+化痰祛瘀组作用12 d后OD值出现明显差异(P0.05),作用16 d后更为显著(P0.01),地塞米松组差异无统计学意义。3Western blot结果显示,与空白对照组相比,各治疗组除化痰祛瘀组外Caspase-3蛋白表达均上调,差异有统计学意义(P0.01),其中平目汤(全方)组最为显著,益气+温阳组其次;各治疗组Caspase-8蛋白表达均上调,差异有统计学意义(P0.05),其中平目汤(全方)组最为显著,益气+温阳组其次;各治疗组Caspase-9蛋白表达均上调,差异有统计学意义(P0.01)。其中平目汤(全方)组最为显著,益气+化痰祛瘀组其次。结论:平目方可能通过抑制前脂肪细胞增殖,诱导Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9活化,促进脂肪细胞凋亡,减少眼眶脂肪细胞积聚,发挥治疗Graves眼病的作用。     

降脂平肝汤含药血清对大鼠3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗的影响

目的观察降脂平肝汤含药血清对大鼠3T3-L1脂肪细胞胰岛素受体底物1(IRS-1)mRNA和过氧化物酶增殖体激活受体(PPAR)-γmRNA表达的影响,探讨其对脂肪细胞胰岛素抵抗影响的可能机制。方法选择Wistar大鼠16只,诱导分化3T3-L1脂肪前体细胞为成熟的脂肪细胞并以肿瘤坏死因子α(TNFα)诱导建立脂肪细胞的胰岛素抵抗模型,取诱导成功的胰岛素抵抗模型细胞分为对照组(基础培养液加入20%大鼠空白血清)、模型组(基础培养液加入20%大鼠空白血清和20ng/mlTNF-α)、罗格列酮组(基础培养液加入20%大鼠含药血清和20ng/mlTNF-α)、降脂平肝汤组(基础培养液加入20%大鼠含药血清和20ng/mlTNF-α)每组4只,培养48h,观察细胞IRS-1mRNA和PPAR-γmRNA表达水平的变化。结果模型组IRS-1mRNA和PPAR-γmRNA表达明显降低,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);罗格列酮组与降脂平肝汤组IRS-1mRNA和PPAR-γmRNA表达均明显增高,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论降脂平肝汤可能通过增强大鼠IRS-1、PPAR-γ基因的表达起到抑制脂肪细胞胰岛素抵抗的作用。     

清血消脂方含药血清调控自噬干预油酸诱导的脂肪细胞代谢性炎症反应

目的研究清血消脂方通过调控自噬干预油酸诱导的脂肪细胞代谢性炎症反应。方法将3T3-L1前脂肪细胞诱导分化为成熟的脂肪细胞,用油酸刺激脂肪细胞构建代谢性炎症模型。采用清血消脂方水煎剂灌胃大鼠制备含药血清,将不同浓度含药血清作用于脂肪细胞代谢性炎症模型24 h。采用CCK-8法检测脂肪细胞活性;CBA法检测细胞分泌炎症因子;免疫细胞荧光法检测细胞自噬相关蛋白LC3表达;Real-time PCR法检测细胞内自噬基因和炎症通路基因表达。结果与同浓度的空白血清比较,清血消脂方含药血清对脂肪细胞活性无影响;清血消脂方含药血清能显著降低细胞培养上清中IL-6、G-CSF、MCP-1及GM-CSF含量(P0.05,P0.01),10%清血消脂方含药血清能显著降低细胞IL-6、NF-κB mRNA的表达(P0.05);10%的清血消脂方含药血清可显著促进自噬相关基因Atg5、Beclin1 mRNA的表达(P0.05)。结论清血消脂方可抑制油酸诱导的脂肪细胞代谢性炎症反应,其抑制作用是通过激活细胞自噬活性和抑制NF-κB基因表达实现的。     

仙鹿活骨丸对成骨细胞生物学功能的影响

目的探讨仙鹿活骨丸含药血清对大鼠成骨细胞生物学功能的影响。方法采用仙鹿活骨丸含药血清体外培养大鼠成骨细胞,测定成骨细胞增殖、周期、ALP表达、细胞凋亡,以及基因Bax、Bcl-2的mRNA表达。结果与对照组相比,实验组成骨细胞的增殖能力增强,处于S期的成骨细胞数量增多,ALP表达升高,成骨细胞凋亡数量减少,Bax基因表达降低、Bcl-2表达升高。结论仙鹿活骨丸可以促进成骨细胞增殖,促进成骨细胞周期由G0/G1期进入S期,增强ALP的表达,促进成骨细胞分化成熟,抑制成骨细胞凋亡,抑制成骨细胞Bax基因的表达、增强Bcl-2基因的表达。