卵巢移植及移植卵巢的保存

目的:结卵巢移植的研究现状及卵巢组织的冷冻解冻方法。资料来源:应用计算机检索Medline1996-01/2006-12与卵巢移植相关的文章,检索词为“ovary transplantation,auto-ovary transplantation,heterologous transplantation,cryopreservation,vitrification,hysterocarcinoma”,限定文献语种为“English”;同时检索万方数据库2000-01/2006-12相关文章,检索词为“卵巢移植,自体移植,异种移植,低温保存,玻璃化冷冻”,限定文献语种为中文。资料选择:共检索到相关文献280余条,选择卵巢移植及卵巢组织的冷冻解冻方法相关文章,无论观察对象是人还是动物均纳入,筛除明显重复文献。资料提炼:将筛选的文献进一步查找全文,纳入35条文献进行综述。其中26篇论述卵巢的自体移植、异体移植及异种移植的研究进展,另外9篇是介绍卵巢组织的冷冻解冻方法以及各种方法的差异。资料综合:目前卵巢的移植可以分为自体移植、异体移植、异种移植:①目前人类卵巢组织的自体移植无论是异位还是原位移植有效性和实用性尚不完全清晰。理论上自体原位移植在卵泡的发育和恢复生育功能上更具有优势,但是,在实际观测临床应用中,卵巢组织自体异位移植仍然是最佳首选。②目前同种异体移植面临的最大难题就是免疫排斥反应,其次是受体提供者的问题;另外胚胎卵巢组织作为移植物所具有的优越性越来越受到关注,但是在应用于临床中除了有伦理道德等社会问题,还存在潜在的检测不出的基因的异常表达等技术检测问题需要解决。③异种移植仅处于实验室研究阶段,迄今为止绵羊、猪、猫、猴和人等卵巢组织已经作为材料用于实验室异种移植中。在卵巢组织的移植过程中,卵巢组织的冷冻方法有慢速冷冻法、快速冷冻法和玻璃化冷法;大多数冻存的卵巢组织应用快速复温法解冻。结论:随着免疫移植学、卵巢组织冻存技术的发展,卵巢组织的移植技术将成为解决女性生殖及内分泌的最佳有效途径。但是就目前发展状况来看,还存在许多亟待解决的问题。     

卵巢组织冷冻保存及移植技术进展

背景:生育力保存技术可以为因肿瘤或肿瘤治疗相关原因失去卵巢功能的女性患者提供恢复内分泌功能和生殖功能的机会。目的:阐述了卵巢组织玻璃化冷冻以及冻融卵巢组织自体移植等技术在重建卵巢功能方面取得的进展和存在的问题。方法:应用计算机检索CNKI和Pubmed数据库中1999-01/2011-12关于卵巢早衰的文章,在标题和摘要中以"卵巢早衰,玻璃化冷冻,卵巢移植"或"premature ovarian failure,vitrification freeze,ovary transplantation"为检索词进行检索。最终选择关于卵巢玻璃化冷冻和自体移植的40篇文献进行综述。结果与结论:对于重建肿瘤相关性卵巢早衰患者卵巢功能,卵巢组织玻璃化冷冻保存和自体原位移植具有广泛临床应用前景。不仅能够恢复自然生育力、生殖功能及内分泌功能,而且不存在免疫排斥,也没有伦理学争议,安全方便。可以相信,随着医学技术的发展和进步,卵巢组织冷冻移植技术将越发成熟,为更多的女性肿瘤患者保存生育力和内分泌功能带来福音。     

卵巢组织冷冻移植在肿瘤生殖学中的应用前景及存在问题

随着年轻肿瘤患者发病率和治愈率的提高,患者保存生殖能力的要求越来越迫切。卵巢组织冷冻移植作为女性生殖力保存的一种方法,具有生育力储备大、不受生理周期影响、适用于青春期前的年轻女性患者以及无法进行促排卵治疗的肿瘤患者等优于卵子冷冻和胚胎冷冻的独特优势,在肿瘤生殖学中具有重要的应用前景。但是,目前卵巢冷冻移植在技术和应用上还存在一些客观问题,本文综述了卵巢组织冷冻移中的冷冻复苏、存活检测、肿瘤残留检测、体外培养诱导卵泡发育、体内移植及受精发育等众多技术环节,论述了每一环节的具体技术方法、进展以及影响成败的关键因素和存在的问题。本文为广大医务和科研工作者全面了解卵巢组织冷冻移植在肿瘤生殖学中的应用和进展提供了理论参考。     

卵巢组织玻璃化冷冻保存和移植的研究进展

背景:卵巢组织玻璃化冷冻技术作为一种快速、简便、经济的冷冻方式被逐渐应用于卵巢组织的保存。目的:综述国内外关于卵巢组织玻璃化冷冻保存及移植的研究进展。方法:由第一作者检索1995/2011PubMed数据库及清华同方数据库有关卵巢组织玻璃化冷冻保存以及卵巢组织移植技术等方面的文献。结果与结论:玻璃化冷冻是一个超高速的冷冻过程,形成高黏度的"玻璃样凝固状态",可以避免由于冰晶形成所造成的细胞损伤。但至今玻璃化冷冻仍缺乏统一的标准化程序。影响卵巢组织玻璃化冷冻保存效果的主要因素有卵巢组织块的大小、冷冻保护剂的种类、渗透平衡的时间和温度、冷冻载体等。随着低温生物学的发展和卵巢组织冷冻保存效果的提高,卵巢组织的移植已经具备了一定的临床应用可行性。到目前为止,全世界已有一系列关于冻存卵巢组织移植后成功妊娠及分娩的报道,移植成功的关键在于减少缺血再灌注损伤和促进新生血管的形成。     

新型玻璃化冷冻法对人卵巢组织超微结构保存的研究

目的探讨新型玻璃化冷冻法对人卵巢组织超微结构的保存效果,尤其是对卵巢间质细胞的保存效果。方法收集2007年6月-2009年1月在我院行妇科手术的患者卵巢组织共8例,使用新型玻璃化冷冻法和慢速冷冻法保存,比较两种冷冻方法对于始基卯泡卵母细胞、颗粒细胞、卵泡周围间质细胞超微结构保存效果。结果对于始基卵泡卵母细胞和颗粒细胞,发现两种冷冻方法之间无显著差异（P〉0．05）;在间质细胞保存中,新型玻璃化冷冻法号慢速冷冻法相比较,正常间质细胞百分率增加（P〈0．05）。结论新型玻璃化冷冻法与慢速冷冻法相比能更好地保存卵泡周围间质细胞,在深低温保存人卵巢组织中具有较广阔的应用前景。     

不同冷冻方案保存人类卵巢组织的活性比较

背景：卵巢组织冷冻保存被认为是保存女性生殖内分泌功能安全、有效的方法,但目前尚无统一确定的方案。 目的：探讨3种冷冻方案对人类卵巢组织保存冷冻效果及卵泡活性的影响。方法：采用丙二醇慢速程序冷冻法、二甲基亚砜玻璃化冷冻法、液氮直投法对20例人类卵巢组织进行冷冻保存,复苏后采用细胞存活/死亡荧光分析法计数有活性的细胞,体外培养测定培养液雌二醇浓度及各级卵泡计数,判断3种不同冷冻方案对人类卵巢组织活性的影响。结果与结论：不同冷冻方案冻融后卵巢组织块的活性卵泡率均低于新鲜卵巢组（P 〈 0.05）,二甲基亚砜组最低,液氮直投法组与慢速程序冷冻法组差异无显著性意义。体外培养各冷冻组分泌的雌二醇水平比较,第4天时二甲基亚砜组低于液氮直投法组和慢速程序冷冻法组（P 〈 0.05）,至第8天时各冷冻组雌二醇水平与新鲜卵巢组一致。培养14 d组织学观察,各组卵巢组织内生长期卵泡比例增多,始基卵泡仍然占最主要的。新鲜卵巢组织正常卵泡的总数高于冷冻组（P 〈 0.05）,二甲基亚砜组的正常卵泡数低于液氮直投法组和慢速程序冷冻法组（P 〈 0.05）。提示冷冻保存对卵巢组织卵泡有一定的损伤,但仍能保存大部分始基卵泡的活性,经体外培养后可进一步发育并具有分泌功能,在3种冷冻方案中,慢速程序冷冻法和液氮直投法的冷冻效果优于二甲基亚砜玻璃化冷冻法,液氮直投法操作简便,冷冻效果稳定。     

大鼠卵巢组织的冷冻移植

背景:玻璃化冷冻是应用高浓度的冷冻保护液结合极快的制冷速度,使细胞快速冷冻,避免细胞内外冰晶形成对细胞的破坏作用,是一种比较新的冷冻方法,具有操作简单、冷冻效率高等特点.目的:采用玻璃化冷冻技术冷冻大鼠卵巢组织,比较4种冷冻保护剂对大鼠卵巢组织学和功能的影响.方法:将大鼠随机数字表法分为6组,每组6只:二甲基亚砜+乙二醇组、二甲基亚砜+乙二醇+蔗糖组、二甲基亚砜+乙二醇+蔗糖+乙酰胺组、乙二醇+蔗糖+乙酰胺组、去势组、正常对照组.4冷冻组摘除卵巢后应用相应的冷冻保护液冻存,去势组仅摘除卵巢不冻存、不移植,正常对照组不作处理.冻存2周后解冻复苏行同体异位移植,将卵巢组织植入大鼠后肢大腿内侧.移植后30 d,观察阴道上皮类型及动情周期;移植后3个月,经腹主动脉采血检测血清雌二醇水平;回收卵巢组织做组织学检查.结果与结论:4冷冻组均可见卵巢组织结构受损表现,原始卵泡的形态正常率分别为67.9%,71.6%,80.5%,59.4%,初级卵泡形态正常率分别是41.6%,52.3%,55.9%,36.7%.二甲基亚砜+乙二醇+蔗糖+乙酰胺组卵泡正常率较二甲基亚砜+乙二醇组、乙二醇+蔗糖+乙酰胺组高(P<0.05);不同发育阶段卵泡构成比差异无显著性意义,均未见典型的次级卵泡.受损的卵细胞主要表现为体积变小、胞浆内出现空泡、核皱缩等.4冷冻组未出现典型动情周期的细胞类型.移植物自周围组织获得可见的血管供应,将卵巢组织块连接形成网络.移植物内毛细血管丰富,皮质中可见成群的原始卵泡,初级卵泡、次级卵泡所占比例低于原始卵泡,形态与正常者相似.4种冷冻方法冻存卵巢组织血清雌二醇水平较正常对照组明显降低(P<0.01),二甲基亚砜+乙二醇+蔗糖+乙酰胺组高于其他冷冻组(P<0.05).结果提示4种冷冻方法均对大鼠卵巢组织有一定程度破坏,初级卵泡的损伤大于原始卵泡.冻存复苏后,卵巢功能恢复,但并不完全,二甲基亚砜+乙二醇+蔗糖+乙酰胺组效果优于另外3组,但移植后动物没有出现规律的动情周期,提示冷冻方法尚需进一步完善.     

不同冷冻方法对人卵巢组织血管内皮生长因子表达及血管生成的影响

背景:人卵巢组织冷冻已成为一种保存生育能力的手段,卵巢组织移植后必须经过血管重建过程才能恢复血供,冷冻保存和复苏技术是影响移植后卵巢组织血管重建的关键.目的:比较新型玻璃化冷冻和慢速冷冻后人卵巢组织血管内皮生长因子表达情况及微血管密度,探讨不同冷冻方法对人卵巢组织血管重建的影响.方法:8份卵巢组织标本取自子宫内膜癌患者手术切除的正常卵巢组织,将每份卵巢皮质切成1.5 mm×1.5 mm×1.0 mm大小的组织块共12块后,随机数字表法分为3组:对照组(新鲜组)、新型玻璃化冷冻组和慢速冷冻组.将新型玻璃化冷冻组卵巢组织块依次在含体积分数7.5%乙二醇+体积分数7.5%二甲基亚砜+体积分数20%胎牛血清的TCM-199培养液和含体积分数15%乙二醇+体积分数15%二甲基亚砜+0.5 mol/L蔗糖的TCM-199培养液中平衡脱水,然后直接浸入液氮并装入冷冻管保存,解冻时按浓度梯度1.0,0.5,0.25 mol/L蔗糖和含体积分数20%牛血清的TCM-199培养液依次洗脱冷冻保护剂.将慢速冷冻组人卵巢组织块放入盛有1 mL冷冻液(含1.5 mol/L二甲基亚砜+体积分数20%牛血清+0.1mol/L蔗糖的TCM-199培养液)的1.8 mL冷冻管内平衡,然后放入程序冷冻仪中按设定程序进行冷冻.解冻时按浓度梯度1.0 mol/L二甲基亚砜+0.1 mol/L蔗糖、0.5 mol/L二甲基亚砜+0.1 mol/L蔗糖、0.25 mol/L二甲基亚砜+0.1 mol/L蔗糖和0.1 mol/L蔗糖依次洗脱冷冻保护剂.冻融组及对照组均进行体外培养.免疫组织化学观察培养0,2,4,6 d各组人卵巢组织血管内皮生长因子和CD34表达情况,并进行微血管计数.结果与结论:3组人卵巢组织培养前后间质细胞中均见血管内皮生长因子成斑片状弱表达,培养2 d血管内皮生长因子表达均增加并达到峰值,培养4 d均开始减弱,6 d时进一步减弱;与慢速冷冻组相比,新型玻璃化冷冻组血管内皮生长因子表达更接近对照组.3组人卵巢组织培养2 d微血管密度均增加并达到峰值,对照组和新型玻璃化冷冻组明显高于慢速冷冻组(P<0.05):慢速冷冻组培养4 d时微血管密度较培养2 d时显著下降(P<0.05);3组培养6 d时微血管密度较培养2 d时显著下降(P<0.05).与慢速冷冻法相比,新型玻璃化冷冻法能更好地保存人卵巢组织间质细胞和细胞外基质,对卵巢组织血管内皮生长因子表达及微血管生成的影响更少.     

大鼠胚胎卯巢冷冻保存和异体无血管皮下移植的生长

背景：胚胎卵巢组织免疫原性低，不易引起宿主的免疫排斥反应，是卵巢异体移植的理想供体。但由于获取胎儿卵巢的不随意性和来源限制。标本的冷冻显得至关重要，成功的冷冻保存和复苏技术是建立胎儿卵巢库的关键。 目的：通过对大鼠新鲜或冻融胚胎卵巢组织异体无血管移植后的组织形态和功能的观察，探讨胚胎卵巢组织异体移植和超速冷冻保存的可行性。 设计、时间及地点：随机对照动物实验，于2006—03／05在云南省第一人民医院生殖遗传科进行课题设计，于2006—05／2007-02在云南大学单克隆抗体研究中心完成实验。 材料：卵巢来源于孕龄为18—20dSD大鼠胚胎。取阴道脱落细胞涂片证实有正常动情周期未交配过的SD成年雌性大鼠作为移植对象，分4组：正常对照组（n=10）、去势对照组（n=-10）、新鲜胚胎卵巢移植组（n=25）、冷冻胚胎卵巢移植组（n=25）。 方法：正常对照组仅行皮肤筋膜肌肉切开缝合术，去势对照组切除双侧卵巢组织。将孕龄为18-20d的新鲜或经超速冷冻法冷冻复苏的大鼠胚胎卵巢植入去势后4周的大鼠颈部皮下作为实验组，分别为新鲜移植组和冷冻移植组。 主要观察指标：通过阴道脱落细胞的观察和血清雌二醇、孕酮的测定了解大鼠内分泌恢复情况，并对移植卵巢进行组织学观察。 结果：新鲜移植组和冷冻移植组分别有52．17％和38．01％大鼠恢复了动情周期，两组血清雌二醇和孕酮在分别在35和49d恢复到正常，且动情周期天数与正常对照组比较，差异无显著性意义。冷冻移植组大鼠恢复动情周期虽稍短于新鲜移植组，但差异并无统计学意义。63d后取出移植物观察，见移植物色泽红润，表面有丰富的血管形成，镜下见卵巢内有大量的小动脉和小静脉：移植物组织学检查发现卵泡的发育，光镜下可见不同发育阶段的卵泡，有成熟卵泡和黄体形成，形态与正常卵巢无明显差别。 结论：大鼠胚胎卵巢异体异位无血管皮下移植后能存活、生长发育并具有与正常卵巢相似的内分泌功能；超速冷冻法能较好的保存胚胎卵巢的活性，复苏后与新鲜胚胎卵巢组织具有相同的生理活性。     

卵巢移植在宫颈癌治疗中的临床应用价值

目的:探讨卵巢移植在宫颈癌患者中应用的可行性、临床价值、并发症及其预防。方法:应用计算机检索中国全文期刊数据库1985/2006卵巢移植相关的文献,检索词为“卵巢移植、宫颈癌”,限定语言种类为中文,同时检索Pubmed数据库1995/2006有关宫颈癌卵巢移植的文献,检索词为“cervical cancer,ovarian transplantation”,限定语言种类为“English”,共收集51篇文献,进行归纳总结。结果:①对于年轻的宫颈鳞癌患者,保留卵巢并行自体异位移植手术是安全的,也是必要的。②宫颈癌患者卵巢自体移植的方法有卵巢组织移植术、带蒂卵巢器官移植术(卵巢移位术)、游离卵巢器官移植术等术式。③移位术后卵巢的功能较原位卵巢下降,卵巢器官移植术后较移位术后下降显著,辅以放疗后进一步加重卵巢功能的损伤。④卵巢移植术后常见的并发症有移植部位结节和包块、症状性卵巢囊肿、移植部位疼痛和卵巢功能衰退,但是可以预防的。结论:卵巢移植术使年轻宫颈癌患者的卵巢得以保留,但由于移植后卵巢功能减退及术后辅助放疗对卵巢的影响、移植后宫颈癌卵巢转移等问题限制了临床应用,如能对上述问题加以预防和治疗,卵巢移植术在宫颈癌患者中会有广阔的应用前景。     

枸杞多糖对胎儿卵巢组织冷冻保存的影响

背景：抗氧化剂的应用对于提高卵巢组织冻存后的活力起着很重要的作用。目的：通过观察冷冻保存的胎儿卵巢组织异种移植到裸鼠肾被膜下的发育情况,探索枸杞多糖在卵巢组织冷冻保存中的作用。方法：实验分为4组。①新鲜移植组：取材后的新鲜胎儿卵巢组织直接进行移植。②冻存对照组：冷冻保护液为基液。③β-巯基乙醇组：冷冻保护液为基液添加100μmol/Lβ-巯基乙醇。④枸杞多糖组：冷冻保护液为基液添加400mg/L枸杞多糖。对冷冻复温后的胎儿卵巢皮质块进行祼鼠的肾被膜下移植,并于移植后12周取材。结果与结论：各组在移植物的存活率上差异无显著性意义（P〉0.05）。在卵泡计数上冷冻对照组最低（P〈0.05）。在卵泡的存活率上,各组间差异均有显著性意义,其中以冷冻对照组最低,枸杞多糖组最高。β-巯基乙醇组和枸杞多糖组卵巢超微结构较冷冻对照组保存的好。提示400mg/L的枸杞多糖和100μmol/L的β-巯基乙醇有利于卵巢组织的冷冻保存,并可显著提高冷冻卵巢组织移植后的存活率。     

不同组织冻存体系对牙周膜干细胞体外扩增的影响

背景：冻存是保证干细胞移植治疗的关键步骤之一。传统的冻存是将细胞直接置于冻存液中进行保存,然而冻存液中二甲基亚砜虽能减少细胞复苏过程中冰晶对细胞膜产生的机械性损伤,但同时又对细胞具有毒性作用,直接影响细胞生存状态,不利于临床移植治疗。目的：寻找适宜牙周膜干细胞体外扩增的牙周周组织冻存的最佳方案。方法：收集健康人牙,刮取牙周组织后将其平均分为3等份,随机分为新鲜组、5%二甲基亚砜组和10%二甲基亚砜组,后2组分别以体积分数5%和10%二甲基亚砜添加冻存1个月后提取牙周膜干细胞。新鲜组直接提取牙周膜干细胞。结果与结论：5%二甲基亚砜组原代细胞游出组织团块所需时间和细胞收获量虽不及新鲜培养组,但却明显优于10%二甲基亚砜组（P〈0.05）。新鲜组、5%二甲基亚砜组和10%二甲基亚砜组第1代牙周膜干细胞克隆形成率、活细胞比率、第3代牙周膜干细胞BrdU细胞增殖能力、MTT细胞生长曲线和牙周膜干细胞表面标志物表达差异没有显著性意义（P〉0.05）。提示5%二甲基亚砜添加冻存体系不仅能比10%二甲基亚砜添加的普通冻存体系明显缩短牙周膜干细胞体外扩增所需时间,增加细胞收获量同时还能保持细胞基本生物学特性,降低二甲基亚砜的总体用量和其在反复冻存复苏细胞过程中对细胞造成的直接损伤,为未来更加安全的实施临床移植治疗提供了保障,是供体组织储存新的选择。     

组织深低温冻存中保护剂的应用

背景：深低温冻存可以使离体组织的活性及功能最大限度的保留,对医学研究、临床治疗起到巨大能动作用。但在复合组织深低温冻存中,保护剂及应用还存在着很多问题有待解决。目的：综述近年国内外深低温冻存中保护剂应用的研究进展。方法：第一作者应用计算机检索2003年1月至2012年12月PubMed数据库、中国期刊全文数据』万方数据库相关文章,英文检索词为“cryopreservation,cryoprotectant,compositetissues,vitrificatiion,transplantation”;中文检索词为“深低温保存,保护剂,复合组织,玻璃化,移植”。共检索到1篇相关文献,67篇文献符合纳入标准。结果与结论：自上世纪开始国内外许多学者经过大量动物细胞和组织的基础实验研究,不断探寻各科胞组织的冻存方法,采用了多种多样的冻存技术,使用的保护剂种类繁多,取得一定的研究成果,发保护剂的应用在深低温组织冻存中起到了至关重要的作用,深低温冻存在组织工程、生殖医学、移植领域已有广泛的应用。但目前复合组织深低温冻存保护剂的应用尚处于研究阶段,保护剂的种类、浓以及导入洗脱方法均直接影响最终组织保存的成败。     

A new possibility in fertility preservation: The artificial ovary

Conventional fertility preservation methods such as oocyte or embryo cryopreservation are currently insufficient to treat including those patients with prepubertal cancer and premature ovarian failure. Ovarian tissue cryopreservation presents as an alternative but has limitations with a potential risk of reintroducing malignant cells in patients who recover from cancer, those of chemotherapy prior to tissue cryopreservation. The so called “artificial ovary” aims to resolve this issue by transplanting isolated follicles with or without a biological scaffold. The artificial ovary may also offer an effective alternative option for those who cannot benefit from traditional assisted reproductive techniques such as in vitro fertilisation. To date, in animal studies and human trial, the artificial ovary restored endocrine function, achieved in vivo follicular development, and resulted in successful pregnancies. However, development of a technique for higher follicular recovery rate and a more optimised design of delivery scaffold, better transplantation techniques to prevent postsurgical ischemia, and consideration for genetic safety are required for safer and consistent human clinical applications. Ideas from different transplantation surgeries (e.g., entire ovary, ovarian cortex, and transplantation with tissue‐engineered products) can be applied to enhance the efficacy of artificial ovarian transplantation. For the better application of artificial ovary, a deeper understanding of mechanical and biochemical properties of the ovary and folliculogenesis after cryopreservation, transplantation with or without scaffold, and development of sophisticated in vivo imaging techniques of transplanted artificial ovary need to precede its efficient clinical application.     

Children born after autotransplantation of cryopreserved ovarian tissue. a review of 13 live births

INTRODUCTION. Premature ovarian failure (POF) can occur naturally at an early age or be due to iatrogenic agents. Indeed, ovaries are very sensitive to cytotoxic treatment, especially to radiation and alkylating agents. METHODS. Several options are currently available to preserve fertility in cancer patients and allow them to conceive when they have overcome their disease: embryo cryopreservation, oocyte cryopreservation, and ovarian tissue cryopreservation. Cryopreservation of ovarian tissue is the only option available for pre-pubertal girls and women who cannot delay the start of chemotherapy. FINDINGS. Since the first live birth after autotransplantation of cryopreserved ovarian tissue in humans was reported in 2004, orthotopic reimplantation has led to the birth of 13 healthy babies. Restoration of ovarian activity and prognostic factors are evaluated by comparison with 7 cases of fresh ovarian tissue transplantation. We report 13 live births after orthotopic transplantation of frozen-thawed ovarian tissue in cancer patients (n = 8) and in patients treated with high doses of chemotherapy for benign diseases (n = 2) (microscopic polyangiitis, sickle cell anemia). INTERPRETATION. Based on our review, we believe that ovarian cortex cryopreservation, associated or not with cryopreservation of immature oocytes, should be offered before gonadotoxic chemotherapy in all cases where there is a high risk of POF and where emergency IVF is not possible.     

冷冻保存异体软骨移植免疫排斥反应的研究状况

背景：目前多采用冷冻保存方法来降低异体软骨移植免疫排斥反应,但有关异体软骨的取材、冷冻保存方法、冷冻保存条件仍然需要深入的研究探讨。目的：对于冷冻保存异体软骨移植后免疫排斥反应机制的研究进行回顾分析,并对不同保存方法的特点进行比较分析。方法：由第一作者检索1990/2008 PubMed数据及万方数据库有关异体软骨移植后免疫排斥反应及冷冻保存方法对软骨移植影响等方面的相关文献。结果与结论：异体软骨组织移植治疗关节软骨缺损治疗效果明显优于其他治疗方法。冷冻保存异体关节软骨保持了软骨组织的性状和生物学活性,而且可择期完成关节重建,并且有充裕的时间完成多项指标检测,防止供体携带细菌病毒和传染性疾病的传播,并且降低了软骨组织的抗原性,具有较大的临床应用价值。但冷冻保存的各个环节,如：低温保护剂的应用、降温和复温速度等方面还存在诸多问题,软骨移植后仍然会出现软骨吸收、退变等现象。随着冷冻生物学的不断进步,冷冻损伤机制的不断揭示,这些问题终将会解决,软骨组织冷冻保存技术会得到进一步的完善。     

超低温冰箱转液氮阶梯降温法与传统程序降温法保存造血干细胞的比较

背景：在造血干细胞整个冷冻保存过程中,受到降温速率、储存温度深浅、冷冻保护剂组合等因素影响,各国学者在提倡选择何种保存方法上面存在不同的主张。目的：比较-80℃低温冰箱转液氮阶梯降温法与传统程序降温法保存外周造血干细胞的效果。方法：将采集的造血干细胞分两组,第一组细胞浓度为1×1011L-1,加入10%二甲基亚砜,放入程序冷冻仪内程序设置为室温至-4℃按1℃/min的速率降温,按35℃/min快速降至-45℃,再以15℃/min升至-21℃,然后以5℃/min降至-90℃,取出冷冻管置-196℃液氮罐内。第二组细胞浓度为1×1011L-1,加入5%二甲基亚砜、3%羟乙基淀粉、4%人血白蛋白,将冷冻管置-80℃冰箱过夜后取出,置-196℃液氮罐内的气相,再过夜后置液氮罐液相内。结果与结论：两组冷冻方法保存细胞的锥虫蓝拒染率、回收率、凋亡率和死亡率差异无显著性意义（P〉0.05）。结果显示用5%二甲基亚砜、4%白蛋白、3%羟乙基淀粉组成的冷冻保护剂,通过-80℃低温冰箱转液氮阶梯降温法冷冻保存造血干细胞与传统10%二甲基亚砜作为冷冻保护剂用程序降温的方法取得一样效果,操作简便易于临床应用。