异硫氰酸苄酯对脑胶质瘤U-87MG细胞周期的影响及其机制

目的观察异硫氰酸苄酯（BITC）对人脑胶质瘤细胞系U一87MG细胞周期的阻滞作用,并探讨其机制。方法取对数期u．87MG细胞分别以2、5Ixmol／L的BITC处理,应用流式细胞仪检测细胞周期分布,Westernblot—ting法检测细胞周期相关蛋白CyclinB1、Cdc2、p21、Cdc25C及磷酸化Akt（p-Akt）蛋白表达,RT—PCR法检测CyclinB1、Cdc2、p21和Cdc25C的mRNA表达,报告基因技术检测NF—KB、缺氧诱导因子（HIF）和真核细胞翻译起始因子4E（eIF4E）的转录活性。结果BITC作用24h后,u一87MG细胞周期G2／M期比例显著升高,CyclinB1、Cdc2、Cdc25C、p-Akt蛋白表达下调,p21蛋白表达上升,CyclinB1、Cdc2、Cdc25C、p21mRNA表达均显著下降,NF—KB、HIF、elF4E转录活性均显著下降（P均〈0．05）。结论BITC对U．87MG细胞周期有阻滞作用,机制可能与抑制Akt／NF-KB信号转导路径,进而调节细胞周期相关基因表达有关;此为胶质瘤的细胞周期靶点治疗提供了新思路。     

宫颈癌组织中Cyclin B_1和CDC25B的表达及意义

应用免疫组化方法，检测10例正常宫颈组织、25例宫颈癌前病变、61例宫颈癌中Cyelln B1和CDC25B表达情况，并结合患者年龄和肿瘤组织类型、组织病理分级、临床分期、淋巴结转移情况对其表达进行分析。结果显示，Cyelin B1在宫颈癌前病变及宫颈癌组织中的表达率分别为64％（16／25）、88％（54／61），明显高于正常宫颈组织的20％（2／10，P〈0.05）。其表达率随患者年龄、细胞分化程度降低而增高（均P〈0.05），与肿瘤临床分期、淋巴结转移和组织类型无明显相关性（P〉0.05）。CDC25B在宫颈癌前病变及宫颈癌组织中的表达率分别为40％（10／25）、43％（26／61），在正常宫颈组织为阴性表达（P〈0.05）。其表达随患者年龄、肿瘤临床分期增加而升高（P〈0.05），伴有淋巴结转移者，表达增高（P〈0.05），但与肿瘤组织分级无明显相关性（P〉0.05）。认为Cyelin B1和CDC25B在宫颈癌前病变及宫颈癌组织中表达呈正相关；Cyelin B1和CDC25B有望成为宫颈癌前病变及宫颈癌诊治的新靶向指标。     

COX-2、MMP-9、VEGF在甲状腺肿瘤中的表达

目的 探讨COX-2、MMP-9、VEGF在甲状腺肿瘤中的表达及其临床意义.方法 免疫组化法检测COX-2、MMP-9、VEGF在甲状腺癌、甲状腺瘤、结节性甲状腺肿及正常甲状腺组织中的表达情况,对临床病理特征及其相关性进行对比分析.结果 COX-2、MMP-9、VEGF在甲状腺恶性肿瘤组织中的蛋白表达均明显高于甲状腺良性病变,并且在甲状腺癌中与年龄、包膜完整性、肿瘤大小、临床分期显著相关(P<0.05),COX-2的表达与淋巴结转移之间有显著意义(P<0.05),均与性别无明显关系(P>0.05).COX-2、MMP-9在甲状腺瘤中的表达高于结节性甲状腺肿及正常组织(P<0.05).结论 COX-2、MMP-9和VEGF可作为甲状腺癌重要的生物学参考指标,联合检测有利于提高早期甲状腺癌的诊断率.     

砷对人胶质瘤细胞周期调控相关基因表达的影响

目的比较三氧化二砷（As2O3）对两种不同p53表型胶质瘤细胞U87MG、T98G细胞周期调控相关基因表达的影响。方法应用功能分类细胞周期基因芯片技术，筛选出As2O3作用于两种胶质瘤细胞U87MG、T98G后与细胞周期调控表达有差异的基因，并对3条有共性表达的基因进行Western印迹分析；四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞生长抑制率；流式细胞仪分析细胞周期改变。结果MTT分析表明：As2O2对2个细胞系的生长有抑制作用，且抑制率具有浓度和时间的依赖性，砷作用72h后，U87MG和T98G细胞系的生长抑制率为50％（IC50）时，其浓度分别为1．78、3．55μmol／L。As2O3可以将U87MG和T98G细胞周期阻滞于G0／G1和G2／M期。U87MG细胞在加入As2O3后，差异表达2倍以上的基因共11条，表达上调的有5条，下调的有6条。T98G细胞在加入As2O3后，差异表达的基因共13条，表达上调的有9条，下调的有4条。Western分析显示，As2O3能上调2个胶质瘤细胞系的P53蛋白水平，同时降低细胞周期蛋白B1、D1表达。结论As2O3通过将细胞周期阻滞于G0／G1和G2／M期来抑制U87MG和T98G细胞的增殖；p53、CyclinB、CylinD等基因表达与As2O3诱导胶质瘤细胞周期阻滞的发生有关。     

α2巨球蛋白在老年肺结核患者外周血中的表达及临床意义

目的探讨α2巨球蛋白(α2MG)在老年肺结核患者外周血浆中的表达水平及其对临床诊断与治疗的指导意义。方法收集60岁以上住院肺结核患者34例在抗结核治疗前后的外周血,并收集18例健康对照的外周血,酶联免疫吸附(ELISA)法检测血浆中α2MG和C反应蛋白(CRP)的浓度,并检测血沉时间。结果老年结合患者外周血中α2MG的水平明显高于健康老年人(P<0.01),α2MG浓度为1.61 mg/L,可作为诊断老年肺结核的切点(cut-off)值,其敏感性和特异性分别为85.3%和77.8%。经规律抗结核治疗后老年肺结核患者的血浆α2MG表达水平明显升高(P<0.05),且其表达与血浆CRP水平和血沉呈负相关。结论患肺结核后老年人外周血中α2MG表达上调,并可作为诊断和检测结合治疗的生物学标志物。     

半乳糖凝集素3表达在良恶性甲状腺肿瘤鉴别中的意义

目的　探讨半乳糖凝集素3表达对鉴别良恶性甲状腺肿瘤的临床价值。方法　采用免疫化学染色法(SP法)观察72例手术切除的甲状腺肿瘤标本半乳糖凝集素3的表达。结果　半乳糖凝集素3在恶性肿瘤的细针抽吸(FNA)细胞涂片与组织切片中均高水平表达,在良性肿瘤中不表达或低表达。良性与恶性甲状腺肿瘤在FNA细胞涂片或组织切片中半乳糖凝集素3的表达差异有统计学意义(χ2 =43. 73,χ2 =48. 16,均P<0. 01)。相同性质的甲状腺肿瘤FNA细胞涂片与组织切片的半乳糖凝集素3表达一致,两者之间差异无统计学意义(χ2 =0. 04,χ2 =0. 19,均P>0. 05)。结论　半乳糖凝集素3在良恶性甲状腺肿瘤中表达不同,恶性肿瘤中表达显著增高,是鉴别良恶性甲状腺肿瘤可靠的分子标记物,可用于FNA涂片标本及组织标本检测。     

卵巢癌患者癌组织、外周血VCAM-1的表达及意义

采用免疫组化法检测61例卵巢癌、56例良性卵巢瘤及40例正常卵巢组织中的血管细胞黏附分子-1（VCAM-1）,酶联免疫吸附试验检测56例良性卵巢-肿瘤患者及61例卵巢癌患者术前、术后1周外周血中的可溶性VCAM-1（sVCAM-1）。结果显示,VCAM-1在卵巢癌细胞膜上呈高表达,其表达强度、阳性表达率与卵巢癌的临床分期、组织学分级及淋巴结转移有关。卵巢癌患者术前外周血sVCAM-1水平高于良性卵巢瘤患者（P〈0.01）,且与肿瘤临床分期、组织学分级有关,术后sVCAM-1的水平显著下降（P〈0.01）。认为VCAM-1在卵巢癌的发生、转移中可能起重要作用,外周血sVCAM-1水平可作为卵巢癌的早期诊断及复发判断指标。     

端粒酶在胃良恶性病变患者组织和外周血中的表达及其临床意义

目的测定胃癌、胃良性病变患者及正常人的胃组织、外周血中的端粒酶活性,以探讨端粒酶活性的表达及其在临床应用七的意义。方法应用TRAP-PCR-ELISA方法检测36例胃癌患者胃癌组织、外周血,30例胃良性病变患者胃黏膜、外周血,20例正常人胃黏膜、外周血中端粒酶的活性。结果胃癌组肿瘤组织和外周血中端粒酶阳性率分别为80．6％（29／36）、50％（18／36）。胃良性病变组胃黏膜组织和外周血中端粒酶阳性率分别为10％（3／30）、3％（1／30）。正常人胃黏膜组织和外周血中均未检测到端粒酶阳性。胃癌组中端粒酶活性与患者的性别、年龄、肿瘤大小、浸润深度、分化程度、淋巴转移和TNM分期等临床病理参数无明显相关性（P〉0．05）。结论端粒酶活性是判断良恶性肿瘤的一个重要指标,检测外周血中端粒酶活性有助于胃癌的早期诊断．对预后监控及治疗也有重要意义。     

重症肌无力合并甲状腺功能亢进外周血T淋巴细胞Fas表达研究

目的探讨Fas介导的细胞凋亡与重症肌无力(MG)合并甲状腺功能亢进(甲亢)机制的关系。方法对2007年10月至2009年12月中山大学附属第五医院收治的17例MG患者及13名健康对照者进行研究,采用流式细胞技术检测外周血T淋巴细胞表面CD4、CD8及Fas的表达。结果合并甲亢的MG患者(5例)中眼肌型MG比例高于无合并甲亢MG组(40.0%对16.7%),胸腺增生及胸腺瘤的发生率均比无合并甲亢MG组低(前者20%对50%;后者0对25%),但差异无统计学意义。合并甲亢MG组患者外周血T淋巴细胞中CD4+CD8-细胞比例比对照组高(P=0.034)。合并甲亢MG组外周血T淋巴细胞中CD4+Fas+、CD4+CD8+Fas+细胞比例比对照组高,CD4+CD8+Fas+细胞比例比无合并甲亢MG组高,差异有统计学意义(均P<0.05)。结论甲亢在MG中发生率较高;合并甲亢的MG患者外周血CD4+T淋巴细胞中Fas的表达升高,可能与MG合并甲亢的发病机制有关。     

S期激酶相关蛋白2及细胞周期抑制蛋白p27在老年甲状腺癌患者癌组织中的表达及临床意义

目的研究S期激酶相关蛋白(Skp)2和细胞周期抑制蛋白p27在甲状腺癌癌组织中的表达及临床意义。方法首次就诊的老年甲状腺癌患者85例、甲状腺腺瘤老年患者40例和结节性甲状腺肿老年患者40例,采用免疫组织化学法检测甲状腺癌、甲状腺腺瘤和甲状腺肿组织中Skp2和p27蛋白的表达情况。结果 (1)甲状腺癌组织Skp2蛋白阳性表达率显著高于甲状腺腺瘤组织和甲状腺肿组织(P<0.001),甲状腺腺瘤组织和甲状腺肿组织Skp2蛋白阳性表达率差异无统计学意义(P>0.05);(2)甲状腺癌组织p27蛋白阳性表达率显著低于甲状腺腺瘤组织和甲状腺肿组织(P<0.001),甲状腺腺瘤组织和甲状腺肿组织p27蛋白阳性表达率差异无统计学意义(P>0.05);(3)Skp2蛋白的表达与肿瘤分期、周围组织侵犯情况及淋巴结转移有关(P<0.05或P<0.01),而与性别和肿瘤大小无关(P>0.05);(4)p27蛋白的表达与肿瘤分期、周围组织侵犯情况及淋巴结转移有关(P<0.05或P<0.01),而与性别和肿瘤大小无关(P>0.05);(5)甲状腺癌组织中Skp2与p27蛋白表达评分呈负相关(r=-0.657,P=0.016)。结论 Skp2和p27蛋白分别在甲状腺癌组织的表达呈负相关,两者参与了甲状腺癌的发生和发展。     

重症肌无力伴发甲状腺异常的临床分析

目的 分析重症肌无力(MG)合并甲状腺异常患者的临床特点.方法 回顾性分析2008年7月-2009年9月同期住院的300例MG患者临床资料,比较260例甲状腺正常及40例伴甲状腺异常的MG患者临床特点,血清甲状腺抗体与乙酰胆碱受体抗体水平的相关性及外周血T淋巴细胞亚群百分比情况.结果 (1)合并甲状腺异常的MG占13.3%,MG伴甲状腺异常以出现甲状腺抗体阳性为多见(30例,占10.0%);(2)甲状腺正常与异常的MG患者在发病性别构成、年龄分布、病程、临床分型及胸腺病理上差异均无统计学意义;(3)伴有甲状腺抗体阳性MG患者血突触后膜乙酰胆碱受体水平(1.15±0.11)显著高于甲状腺抗体阴性者(1.01±0.11);(4)甲状腺异常组CD8+T淋巴细胞百分比(21.63±5.17)%明显低于甲状腺正常组(24.28±5.79)%,P＜0.05,CD4+/CD8+比值甲状腺异常组明显高于正常组(2.10±0.67比1.81±0.61,P＜0.05).结论 MG合并甲状腺异常以甲状腺抗体阳性多见,伴有甲状腺抗体阳性MG患者血突触后膜乙酰胆碱受体水平显著升高;MG合并甲状腺异常者其外周血T淋巴细胞亚群紊乱更为明显.     

老年重症肌无力患者Treg、APO-1、RyR-Ab、干扰素-αAb、AchR-Ab的水平变化及意义

目的探讨老年重症肌无力(MG)患者外周血Treg、APO-1、RyR-Ab、干扰素(IFN)-αAb、AchR-Ab的表达及意义。方法采用流式细胞术和酶联免疫吸附法(ELISA)测定MG患者和健康者Treg、APO-1、RyR-Ab、IFN-αAb、AchR-Ab的表达情况。结果老年组外周血Treg明显低于非老年组(P<0.05)。老年组外周血APO-1、RyR-Ab、IFN-αAb明显高于非老年组和健康对照组(P<0.05)。老年组外周血AchR-Ab明显高于健康对照组(P<0.05),与非老年组无统计学差异(P>0.05)。MG患者RyR-Ab、IFN-αAb与年龄呈正相关,RyR-Ab与Oosterhuis评分呈正相关。结论老年MG患者与非老年患者免疫机制存在差异,检测老年MG患者免疫指标对临床判断病情有指导意义。     

非小细胞肺癌患者hnRNPA2／B1检测的临床意义

目的本研究的目的是通过非小细胞肺癌肿瘤组织和外周血hnRNPA2／B1的检测探讨临床预后。方法采用实时荧光定量RT-PCR方法分别对30例NSCLC患者肿瘤组织和外周血及8例非恶性肿瘤患者的正常肺组织进行hnRNPA2／B1检测。随访一年后对无复发患者外周血hnRNPA2／B,复查。结果30例NSCLC患者经过一年随访复查,死亡和复发组的肿瘤组织hnRNPA2／B1与正常肺组织组和无瘤生存组比较有显著差异（P〈0．05）,而外周血在死亡和复发组与无瘤生存组间无差异（P〉0．05）,同样TNM临床分期之间也无差异（P〉0．05）。但一年后复查无瘤生存组外周血hnRNPA2／B1明显降低,与死亡和复发组以及无瘤生存组手术前的血hnRNPA2／B1比较有显著差异（P〈0．05）。结论NSCLC患者肿瘤组织的hnRNPA2／B1明显增高,显著增高预示预后极差,但外科手术治疗后预后好的患者外周血hnRNPA2／B1则明显降低,因此NSCLC患者的肿瘤组织和外周血hnRNPA2／B1检测可以用来指导术后的进一步治疗和判断预后。     

CD26及半乳糖凝集素3免疫组织化学染色在甲状腺癌诊断中的应用

目的探讨CD26／DPPⅣ、半乳糖凝集素3免疫组织化学染色及其联合检测在甲状腺癌诊断中的应用价值。方法采用免疫组织化学EnVision二步法检测了114例良恶性甲状腺肿瘤组织中CD26／DPPⅣ及半乳糖凝集素3的表达。结果CD26／DPPⅣ及半乳糖凝集素3在正常甲状腺组织中无表达，在甲状腺腺瘤及滤泡癌中少有表达，在大多数甲状腺乳头状癌中呈不同程度的阳性表达。相对于甲状腺腺瘤而言，CD26／DPPⅣ诊断乳头状癌的敏感性、特异性、诊断准确率、阳性预测值、阴性预测值及kappa值分别为86．8％、97．2％、90．4％、98．3％．79．5％及0．80，半乳糖凝集素3分别为97．1％、91．7％、95．2％、95．7％、94．3％及0．89。结论CD26／DPPⅣ及半乳糖凝集素3均是甲状腺乳头状癌较为可靠的标志物，可以辅助常规的病理检查进行乳头状癌与腺瘤的鉴别诊断，它们在甲状腺滤泡癌诊断中的应用价值尚有待于进一步的研究。     

Galectin-3蛋白在甲状腺肿瘤中的表达及其意义

用免疫组化ABC法检测甲状腺良恶性肿瘤组织中Galectin3蛋白的表达,发现甲状腺癌组织的表达率明显高于癌旁组织、结节性甲状腺肿和甲状腺腺瘤组织的表达率,提示Galectin3蛋白是甲状腺癌,尤其是滤泡上皮起源的甲状腺癌的良好的肿瘤指标,有一定的临床应用价值。     

甲状腺肿瘤细胞增殖细胞核抗原、bcl-2及c-myc的表达和DNA倍体

目的研究增殖细胞核抗原(PCNA)、bcl2及cmyc在甲状腺肿瘤细胞中的表达,并探讨DNA倍体数在甲状腺恶性肿瘤中的诊断价值。方法应用免疫组化技术检测36例甲状腺腺瘤和37例甲状腺腺癌标本PCNA、bcl2及cmyc的表达;并用图像分析技术测定8例甲状腺腺瘤和17例甲状腺腺癌标本的DNA倍体。结果甲状腺腺癌中PCNA阳性率为(43.02±31.16)%,cmyc的阳性表达率为89.2%,均显著高于甲状腺腺瘤(16.15±9.28)%和50.0%(均P<0.05)。而甲状腺腺癌bcl2阳性表达率为64.9%,显著低于甲状腺腺瘤88.9%(P<0.05)。甲状腺腺癌转移的淋巴结中PCNA高于其原发灶,且无bcl2表达。PCNA与bcl2及cmyc在甲状腺肿瘤中无显著相关性。甲状腺腺癌的5倍体细胞百分比显著高于甲状腺腺瘤(P<0.01)。结论bcl2及cmyc可能共同参与甲状腺腺癌的发生发展;PCNA与bcl2的异常表达可能对甲状腺肿瘤的生物学行为及预后的判断有一定参考意义。5倍体细胞大于8%可作为判断甲状腺肿瘤良恶性的参考指标。     

Cyr61、VEGF在结肠癌中的表达及临床意义

目的 研究cyr61、VEGF在结肠癌肿瘤组织及癌旁正常组织中的差异表达及意义.方法 应用免疫组织化学S-P法,检测40例结肠癌肿瘤组织及15例癌旁正常组织中Cyr61、VEGF蛋白的表达.结果 (1)Cyr61在癌组织中的表达率95%(38/40)明显高于正常对照组织中的40%(6/15),P＜0.001;(2)Cyr61的表达与结肠癌的分化程度、Duke's分期、淋巴结转移有关(P=0.048,P=0.019,P=0.001);(3)VEGF在癌组织中的表达率67.5%(27/40)明显高于正常对照组织中的20%(3/15),二者之间差异具有统计学意义(P＜0.01);(4)经X2检验,结肠癌中Cyr61与VEGF表达有关(X2=5.507,P＜0.05).结论 (1)Cyr61在结肠癌中高表达,且标记癌组织的敏感性高,有望成为一种新颖的结肠癌标记物;Cyr61的表达与结肠癌的分化程度、Duke's分期、淋巴结转移有关,提示它可能参与结肠癌的演进,或许可作为结肠癌生物治疗作用的新靶点;(2)cyr61与VEGF表达相关,表明两者在调控血管生成的过程中存在协同效应,提示Cyr61通过调节VEGF表达的途径影响肿瘤血管生成.     

外周血CK20 mRNA表达与结直肠癌临床病理和预后的关系

目的:探讨外周静脉血中CK20 mRNA表达及其与结直肠癌临床病理及预后的关系.方法:选取结直肠癌术前患者61例、健康志愿者20例和结直肠息肉患者10例,采用RT-PCR法检测其外周静脉血中CK20 mRNA的表达,并结合其临床病理特点和随访资料进行综合分析.结果:61例结直肠癌患者术前外周血CK20 mRNA阳性率为41.0%(25/61);其表达与肿瘤TNM分期、浸润深度、远处转移和区域淋巴结转移有关(P<0.05).20例健康志愿者和10例结直肠息肉患者外周血均无CK20 mRNA表达.在61例结直肠癌患者中,术后46mo完整随访的有37例,其中有17例死亡,有10例外周血CK20 mRNA表达阳性.结论:外周静脉血中CK20 mRNA的表达与结直肠癌患者的肿瘤分期和浸润转移有关.血液中CK20是反映结直肠癌患者发生肿瘤微转移较为特异的肿瘤标志物,外周血液中CK20 mRNA的表达可作为评估患者预后的指标.     

黏附分子CD44变异剪接体6在甲状腺肿瘤中的表达及其临床意义

目的　探讨CD44变异剪接体 6(CD44V6 )在甲状腺肿瘤组织的表达情况及其与肿瘤发生、发展、浸润和转移的关系。方法　采用免疫组织化学S P法检测 2 0例癌旁甲状腺组织 ,2 4例甲状腺腺瘤和 64例甲状腺癌的石蜡标本CD44V6 表达水平。结果　CD44V6 在甲状腺腺癌的表达率 ( 92 19%)显著高于甲状腺腺瘤者 ( 5 8 3 3 %,P <0 0 1) ,癌旁甲状腺组织未见表达。甲状腺中不同组织来源的滤泡细胞癌和髓样癌的CD44V6 表达差异具有显著性 ,总阳性率分别为 96 5 5 %及 5 0 0 %(P <0 0 1)。但CD44V6 表达水平在乳头状腺癌和滤泡型腺癌间差别无显著性 (P >0 0 5 )。同时发现 2例未分化癌CD44V6 表达均呈强阳性。CD44V6 的表达水平与甲状腺癌的包膜浸润和淋巴结转移有关 ,CD44V6 表达水平在包膜浸润组和未浸润组之间 ,在淋巴结转移组和非转移组之间差别有显著性 (P <0 0 1)。CD44V6 表达与患者年龄、性别、肿瘤的大小无关 (P >0 0 5 )。结论　CD44V6 的表达与甲状腺肿瘤的分化和浸润、转移显著相关 ,检测CD44V6 有助于甲状腺癌的诊断、判断预后并可能为甲状腺癌的手术和术后综合治疗决策提供新的分子生物学指标。