靛玉红对膀胱癌ScaBer细胞株增殖的影响及机制

体外持续传代培养膀胱癌ScaBer细胞株,MTT法测定不同浓度、不同作用时间靛玉红对细胞株的生长抑制作用,采用RT-PCR法及琼脂糖凝胶电泳检测不同浓度的靛玉红作用于ScaBer细胞株时,对Oct-4、Sox-2、Nanog基因表达的影响.发现1、5、10μmol/L的靛玉红均能抑制ScaBer细胞株生长,并呈明显的量效关系和时间依赖性;靛玉红能够抑制Oct-4、Sox-2、Nanog基因的表达.认为靛玉红能够明显抑制膀胱癌ScaBer细胞株增殖,其机制可能与Oct-4、Sox-2、Nanog基因表达下调有关.     

靛玉红对溃疡性结肠炎小鼠肠黏膜细胞因子含量的影响

[目的]探讨中药青黛有效成分靛玉红对溃疡性结肠炎(UC)小鼠肠黏膜细胞因子含量的影响.[方法]采用5％葡聚糖硫酸钠(DSS)建立UC小鼠模型,将小鼠随机分为靛玉红高、低剂量组,美沙拉嗪组,模型1、2组和正常组,每组10只.其中模型组于造模7d时处死,其余各组于第7d开始灌胃给药,连续给药7d时处死.ELISA法检测结肠...     

小檗碱、吴茱萸碱和靛玉红对人胃癌细胞的作用比较

目的:探讨加味左金丸三种组成中药的主要单体成分小檗碱、吴茱萸碱和靛玉红对人胃癌细胞生长抑制、诱导凋亡和细胞周期的影响.方法:人胃癌细胞株为低分化黏液腺癌MGC803细胞;小檗碱、吴茱萸碱和靛玉红购自中国药品与生物制品检定所.苔盼蓝染色细胞计数法测定细胞存活率和凋亡率,流式细胞技术进行细胞周期、凋亡百分比分析,甲基绿-派诺宁联合染色法观测凋亡形态,琼脂糖凝胶电泳分析DNA损伤情况.结果:96 h内小檗碱、吴茱萸碱各组细胞存活率不断下降,其中48 h存活率对照组为100.0±7.9%,小檗碱4 mg/L和8 mg/L组分别为72.9±6.2%(t=4.67,P＜0.01)和17.4±4.8%(t=15.48,P＜0.001),吴茱萸碱1 mg/L和5 mg/L组分别为37.8±5.7%(t=11.06,P＜0.001)和10.7±11.1%(t=11.35,P＜0.001);各组均与对照组比较(n=3);对生长的抑制作用呈时间、药物浓度依赖性.甲基绿-派诺宁原位染色,细胞表现出凋亡特征.小檗碱与吴茱萸碱组脱落的悬浮死细胞中有较高比例胞膜完整、抗拒苔盼蓝和酚红染色的凋亡细胞,其中48 h凋亡率对照组为0.3±0.0%,小檗碱8 mg/L组为65.2±9.5%(t=11.83,P＜0.001);吴茱萸碱1 mg/L组为58.9±11.4%(t=8.90,P＜0.001),而阿霉素组脱落死细胞不能抗拒苔盼蓝和酚红染色.流式细胞仪检测表明小檗碱与吴茱萸碱组均出现亚二倍体凋亡峰;细胞周期分别阻滞于G0-G1、G2期;凋亡百分比与对照组11.8±2.5比较,小檗碱4 mg/L组48 h为18.9±2.7(t=3.34,P＜0.05),72 h为23.9±3.3(t=5.06,P＜0.01),吴茱萸碱1 mg/L组72 h为16.6±1.6(t=2.80,P＜0.05).琼脂糖凝胶电泳表明,小檗碱组DNA裂成大片段,吴茱萸碱组和阿霉素组DNA断裂呈涂抹状.靛玉红各组对细胞生长、凋亡无影响,DNA无损伤.结论:小檗碱与吴茱萸碱均能诱导人胃癌细胞凋亡,且作用较阿霉素温和;靛玉红对胃癌细胞的体外作用不明显.     

苦参素对膀胱癌T24细胞影响的研究

将苦参素作用于体外培养的膀胱癌T24细胞，光镜、电镜下观察其形态学变化，检测p53蛋白的表达。结果0．625-10mg／ml的苦参素对T24细胞的抑制率为13．75-91．03％；T24细胞核质比缩小，形成多个凋亡小体；p53阳性率由76．25％降至25．75％。提示苦参素对T24细胞生长有抑制作用并可诱导其凋亡，其机制可能为下调p53蛋白表达。     

氧化苦参碱对体外培养人膀胱癌T24细胞生长的抑制作用及其机制

目的 探讨氧化苦参碱对体外培养人膀胱癌T24细胞生长的抑制作用及其机制.方法 体外培养人膀胱癌T24细胞,选择对数生长期细胞用于实验.根据氧化苦参碱浓度梯度(0.625、1.25、2.5、5、10 mg/mL)分组,同时设立阳性对照组、阴性对照组、空白对照组、溶剂对照组.采用MTT法、流式细胞术(FCM)、光镜及电镜观察不同浓度氧化苦参碱作用不同时间(24、48、72 h)对人膀胱癌T24细胞的抑制作用,免疫印迹法检测细胞内Survivin、Caspase-3的表达.结果 随着氧化苦参碱浓度的增高、作用时间的延长,对人膀胱癌T24细胞的抑制率逐渐增强;1.25 mg/mL氧化苦参碱对人膀胱癌T24细胞的抑制率明显高于阴性对照组、溶剂对照组、0.625 mg/mL氧化苦参碱组(P均＜0.05),≥2.5 mg/mL氧化苦参碱各组对人膀胱癌T24细胞的抑制率比较差异无统计学意义.1.25mg/mL氧化苦参碱作用人膀胱癌T24细胞后,在光镜、电镜下均可见到典型的调亡形态,FCM可见癌细胞株出现调亡峰.0.625、1.25、2.5 mg/mL氧化苦参碱均能明显抑制Survivin的表达(P均＜0.05),上调Caspase-3表达(P均＜0.05).结论 氧化苦参碱对体外培养人膀胱癌T24细胞生长有强烈的抑制作用,其机制可能与抑制Survivin表达、上调Caspase-3表达等诱导细胞凋亡有关.     

靛红对血胆固醇水平影响的基础研究

目的：研究新型天然海洋药物靛红对血胆固酵的影响。方法：测定靛红100mg/kg对正常大鼠血胆固酵水平的影响，分别与空白对照组和降脂药进行比较；建立小鼠高胆固酵血症模型，测定靛红100mg/kg和150mg/kg对血胆固酵水平的影响，分别与正常对照组和降脂药进行比较。结果：靛红对正常大鼠和高胆固酵血症小鼠均有明显降低血胆固酵水平的作用(P分别＜0．01，＜0．05)。结论：靛红有降低血胆固酵水平的作用。     

冬凌草甲素对人膀胱癌细胞株BIU-87的生长抑制作用及机制探讨

目的 观察冬凌草甲素(ORI)对膀胱癌细胞BIU-87的生长抑制作用并探讨其作用机制.方法 用MTT法检测ORI作用后BIU-87的生长抑制情况;用光学显微镜和电子显微镜观察细胞形态;用流式细胞仪检测细胞凋亡;分光光度法检测BIU-87中Caspase-3的活性变化;用端粒酶重复扩增(TRAP)-PCR-银染法检测其端粒酶活性的变化.结果 ORI对BIU-87有明显的生长抑制作用,呈时间-效应关系和浓度-效应关系.随着ORI作用时间延长,BIU-87凋亡增加,BIU-87内的Caspase-3活性增加,端粒酶活性逐渐降低.结论 ORI对BIU-87有明显的生长抑制作用;其机制可能是通过活化细胞内的Caspase-3和抑制端粒酶活性诱发BIU-87细胞凋亡的.     

甲异靛治疗慢性粒细胞白血病临床及疗效机制的研究

目的　观察甲异靛治疗慢性粒细胞白血病 (CGL)疗效并探讨甲异靛治疗慢性粒细胞白血病的机制。方法　回顾性地分析 2 33例CGL患者的治疗情况 ,观察甲异靛单独或联合羟基脲或马利兰对CGL患者慢性期持续时间、生存期以及疾病进展情况的影响 ;采用台盼蓝拒染法、MTT比色法观察甲异靛对CGL原代细胞增殖抑制作用 ,采用形态学、TUNEL标记观察甲异靛对CGL原代细胞凋亡诱导作用。结果　甲异靛治疗组中位慢性期、生存期略优于马利兰治疗组 ,进展为加速期或急变期的比率显著低于马利兰治疗组 ,与羟基脲治疗组相比无明显差异 ;甲异靛联合羟基脲可明显延长慢性期及生存期 ,6 0、10 0月进展为加速期或急变期的比率低于单独用药组 ,10～40 μmol/L的甲异靛抑制CGL原代细胞的生长 ,40 μmol/L的甲异靛作用 6小时诱导CGL原代细胞的凋亡。 结论　甲异靛治疗CGL的中位慢性期、生存期优于马利兰 ,与羟基脲相似 ,甲异靛与羟基脲具有协同作用 ;甲异靛可能通过抑制白血病细胞增殖并诱导其凋亡而发挥治疗作用。     

RNA干扰沉默Twist基因对人膀胱癌T24细胞增殖的影响

目的 研究RNA干扰沉默Twist基因对人膀胱癌T24细胞周期和增殖的影响.方法 体外构建Twist基因的shBNA表达载体,Li-pefectamin 2000介导转染膀胱癌T24细胞,采用RT-PCR和Western印迹方法检测特异性shRNA对Twist基因沉默效果,转染后采用MTT法检测shR-NA对细胞增殖的作用;应用PI单染流式细胞术分析细胞周期的改变.结果 Twist基因的shRNA表达载体有效下调Twist基因表达(P<0.05).与对照组比较,细胞增殖明显抑制(P<0.05);同时引起细胞G1期阻滞,RNA干扰后,G1期细胞从(48.17±1.62)%增加到(74.34±3.24)%(P<0.05),s期细胞从(33.71±3.54)%减少到(11.58±1.02)%(P<0.05).结论 Twist-shRNA表达载体可以特异高效地抑制膀胱癌T24细胞Twist基因的表达,从而调控肿瘤细胞周期,抑制肿瘤细胞增殖.     

甲异靛对Jurkat细胞AKT信号通路的影响及其在细胞凋亡中作用的研究

目的:探讨甲异靛对Jurkat细胞AKT信号通路的影响及其在甲异靛诱导Jurkat细胞凋亡中的作用.方法:采用XTT法检测甲异靛对Jurkat细胞的生长抑制作用,应用流式细胞术以及DNA片段分析检测甲异靛诱导Jurkat细胞凋亡的情况.应用Western Blot检测CASPASE家族成员及AKT信号通路相关蛋白在甲异靛作用前后的表达或磷酸化情况.通过电转染方法使Jurkat细胞高表达外源性活化AKT,并进一步分析其对甲异靛诱导细胞凋亡作用的影响.结果:甲异靛抑制Jurkat细胞增殖,随着药物浓度增加抑制作用增强,IC50为10.2 μmol/L;5～20 μmol/L甲异靛诱导Jurkat细胞凋亡且凋亡效应具有浓度依赖性;甲异靛诱导细胞凋亡过程中伴随CASPASE 2,3,8,9的活化,50 μmol/L CASPASE抑制剂z-VAD-fmk 可阻断甲异靛诱导的Jurkat细胞凋亡 .甲异靛降低Jurkat细胞AKT信号通路中AKT,RAF,PDK1,以及ERK1/2 的磷酸化水平;15 μmol/L LY294002)(PI3K-AKT抑制剂)可显著提高甲异靛诱导Jurkat细胞凋亡的作用.甲异靛同样诱导高表达外源性活化AKT的 Jurkat细胞凋亡,但LY294002不能增强甲异靛对高表达外源性活化AKT的 Jurkat细胞的凋亡诱导效应. 结论:甲异靛显著抑制Jurkat细胞增殖,通过活化CASPASE途径诱导Jurkat细胞的凋亡. 甲异靛诱导细胞凋亡过程中伴AKT磷酸化水平的降低,AKT活性的降低并非甲异靛诱导凋亡的惟一因素,但参与甲异靛与PI3K-AKT抑制剂协同诱导Jurkat细胞的凋亡的过程.     

姜黄素对膀胱癌T24细胞生物学行为的影响及其机制

目的观察姜黄素对人膀胱癌T24细胞增殖、凋亡及细胞内核因子κB(NF-κB)蛋白表达的影响。方法将对数生长期T24细胞分为两组,实验组加入10、20、50、100μmol/L姜黄素,对照组加入完全培养液。培养24、48、72 h时采用MTT比色法检测两组细胞增殖抑制率;培养24 h采用流式细胞术检测细胞凋亡率、Western blot法检测细胞内NF-κB蛋白表达情况。结果实验组细胞增殖抑制率明显高于对照组,且呈时间—剂量依赖性,P均<0.05;实验组24 h细胞凋亡率明显高于、NF-κB蛋白表达水平明显低于对照组,且呈剂量依赖性,P均<0.05。结论姜黄素能有效抑制人膀胱癌T24细胞增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能与下调NF-κB表达有关。     

紫杉醇对耐阿霉素膀胱癌细胞株T24/ADM增殖的影响及机制

目的观察紫杉醇对耐阿霉素（ADM）人膀胱癌细胞株（T24/ADM）增殖的影响,并探讨其机制。方法用阿霉素浓度梯度递增法诱导培养人膀胱癌T24/ADM多药耐药细胞。用1、10、102、103nmol/L紫杉醇培养T24/ADM细胞12、24、48、72 h,用MTT法测算T24/ADM细胞增殖抑制率,用流式细胞仪PI单染法测定培养24、48 h时T24/ADM细胞凋亡率,并进行形态学观察。结果紫杉醇可抑制T24/ADM细胞生长,且在一定剂量范围内具有时间和浓度依赖性。实验组细胞凋亡率较对照组高,且随作用时间的延长,细胞凋亡率明显增高。紫杉醇组T24/ADM细胞镜下可见凋亡。结论紫杉醇可抑制膀胱癌T24/ADM细胞株生长,这种作用呈浓度时间依赖性,其机制可能与紫杉醇诱导T24/ADM细胞凋亡有关。     

生肌玉红膏胶原海绵对创面胶原塑形的影响及机制

目的观察生肌玉红膏胶原海绵对创面胶原塑形的影响,探讨其改善创面愈合瘢痕形成的作用机理。方法将全层皮肤缺损模型大鼠随机分为凡士林组、胶原海绵组、玉红膏组、玉红膏海绵组,分别将凡士林、修饰后胶原海绵、生肌玉红膏、生肌玉红膏胶原海绵敷于其创面。于干预后3、7、14d测定各组创面肉芽组织中Ⅰ／Ⅲ型胶原比例及TGF-β1阳性细胞数。结果各组肉芽组织中Ⅰ／Ⅲ型胶原比例均呈现先上升后下降的动态趋势,第7天最高,玉红膏海绵组升高最明显;第14天均有不同程度下降,玉红膏海绵组降低最明显。造模后各组TGF-β1含量均呈逐渐上升趋势,第7天最明显,且以玉红膏海绵组升高最为显著;第14天时各组TGF—β1阳性细胞数均有不同程度下降,以玉红膏海绵组下降最明显。结论生肌玉红膏胶原海绵可减轻创面瘢痕形成;其机制为良性调节Ⅰ／Ⅲ型胶原比例及TGF—β1含量。     

shRNA抑制EZH2基因表达对膀胱癌细胞增殖的影响

目的探讨RNA干扰（RNAi）技术下调EZH2基因表达对膀胧癌细胞增殖的影响。方法设计、合成EZH2基因小发夹RNA（shRNA）表达载体,用脂质体包裹并转染膀胱癌EJ细胞。RT-PCR和免疫组化法检测基因沉默效果,细胞克隆形成检测细胞生长情况,流式细胞仪测定细胞周期。结果EZH2的shRNA表达载体能有效下调EJ细胞的EZH2基因表达,并显著抑制EJ细胞生长,EJ细胞周期发生G1期阻滞。结论RNAi技术可显著下调EJ细胞的EZH2基因表达,阻止EJ细胞进入S期并抑制其增殖。     

卡托普利抑制胃癌细胞生长的体外研究

背景:胃癌是我国常见的恶性肿瘤之一,血管紧张素转换酶抑制剂卡托普利对多种肿瘤具有抑制作用,但在胃癌中尚无研究。目的:探讨卡托普利对胃癌细胞增殖、凋亡和侵袭力的影响。方法:以不同浓度卡托普利作用于人胃癌细胞株AGS。采用CCK-8法检测细胞增殖率;采用DAPI染色法检测细胞凋亡表现;采用Annexin V-FITC/PI双染法、TUNEL法检测细胞凋亡率;采用Transwell法检测细胞侵袭力。结果:卡托普利作用后,AGS细胞增殖抑制,凋亡增加,细胞侵袭力降低,均呈浓度和(或)时间依赖性(P0.05)。结论:卡托普利可抑制胃癌细胞株AGS增殖,诱导细胞凋亡,降低细胞侵袭力,效应呈浓度和(或)时间依赖性。     

生肌玉红膏对血栓性脉管炎大鼠血管平滑肌细胞凋亡、炎性因子表达的影响及机制

目的 探究生肌玉红膏对血栓性脉管炎大鼠血管平滑肌细胞凋亡、炎性因子表达的影响及机制。方法取40只大鼠,随机分为正常组、模型组、血管内皮祖细胞(EPC)干预组、生肌玉红膏组,每组10只,除正常组外,均建立血栓性脉管炎模型,正常组与模型组尾静脉每天1次输注1 mL生理盐水,EPC干预组输注数量为5×10⁵个EPC细胞后创面外敷生肌玉红膏,生肌玉红膏组创面外敷生肌玉红膏。将EPC细胞培养后观察细胞形态,检测IL-6、IL-8、TNF-α、TGF-β₁表达,采用免疫荧光法检测CD34、CD133,TUNEL法检测平滑肌细胞凋亡率,免疫印迹法检测内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)蛋白表达。结果 模型组大鼠血清中IL-6、IL-8、TNF-α、TGF-β₁水平及平滑肌细胞数高于正常组(P均<0.05),EPC干预组以上指标均低于模型组(P均<0.05),生肌玉红膏组以上指标均高于EPC干预组(P均<0.05)。模型组大鼠血管组织中CD34、CD133及血管组织中VEGF、bFGF蛋白表达低...     

EGCG对人膀胱移行细胞癌T24细胞生长抑制作用观察及机制探讨

目的 探讨表没食子儿茶素没食子酯酸(EGCG)对人膀胱移行细胞癌T24细胞的生长抑制作用及其p16基因表达的影响. 方法 T24细胞加EGCG培养后,MTT法检测T24细胞抑制率,流式细胞仪DNA含量分析法检测T24细胞周期,巢式甲基特异性PCR法检测EGCG作用前后T24细胞p16基因甲基化状态,RT-PCR法检测T24细胞p16 mRNA. 结果 与对照组相比,不同浓度EGCG均能明显抑制T24细胞生长,G0-G1期细胞增加;EGCG作用48 h后T24细胞p16 mRNA表达增强,且甲基化程度减弱. 结论 EGCG可逆转124细胞p16基因高甲基化状态,显著上调其p16 mRNA表达,将细胞阻滞于G0～G1期.     

肺癌肿瘤抑制因子1对膀胱癌裸鼠移植瘤的抑制作用及机制

目的 观察肺癌肿瘤抑制因子1(TSLC1)对膀胱癌裸鼠移植瘤的抑制作用,并探讨其作用机制。方法将TSLC1过表达人膀胱癌T24细胞株(Ad-TSLC1-T24组)、空载体对照T24细胞株(Ad-T24组)及空白对照T24细胞株(T24组)种植于裸鼠皮下,绘制肿瘤生长曲线,种植细胞5周处死全部裸鼠留取肿瘤组织标本,测量肿瘤体积,称量瘤重,计算抑瘤率,光镜观察移植瘤组织病理变化,RT-PCR法检测移植瘤组织中TSLC1、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)mRNA表达,Western blotting法检测移植瘤组织中TSLC1、Bcl-2、Caspase-3蛋白表达。结果 肿瘤生长曲线显示Ad-TSLC1-T24组移植瘤生长明显慢于Ad-T24组及T24组,种植细胞5周Ad-TSLC1-T24组肿瘤体积及质量低于Ad-T24组及T24组(P均<0.05),抑瘤率高于Ad-T24组(P<0.05)。HE染色结果显示,Ad-TSLC1-T24组移植瘤细胞出现明显的核固缩、核碎裂等凋亡现象。与Ad-T24组、T24组比较,Ad-TSLC1-T24组移植瘤中TSLC1、Caspase-3 mRNA及蛋白相对表达量增加,Bcl-2 mRNA及蛋白相对表达量降低(P均<0.05)。结论 TSLC1过表达可抑制膀胱癌裸鼠移植瘤生长,其机制可能与上调Caspase-3表达和下调Bcl-2表达促进了肿瘤细胞凋亡有关。