扩增阻滞突变系统研究进展及其在中药鉴定中的应用

就近年来国内外对扩增阻滞突变系统（ARMS）的研究进行总结,阐述了ARMS技术的原理、特点和发展,着重介绍了其在中药鉴定中的应用。与其他分子标记相比,ARMS技术具有简单、高效、准确与省时等优点,为中药鉴定提供了一条新的途径。     

扩增阻滞突变系统在脊肌萎缩症快速诊断中的应用

儿童进行性脊髓肌肉萎缩症，简称脊肌萎缩症（spinal muscular atrophy，SMA），是一种以脊髓前角运动细胞变性为病理特征，临床上以近端肌无力、肌萎缩为主要表现的常染色体隐性遗传性疾病。根据SMA发病年龄和病程的不同将其分为三型：Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型。该病的致病基因称运动神经元生存基因，即SMN基因（survival motor neuron gene），它在染色体5q区域内存在2个同源拷贝，即位于端粒端的SMN1和位于着丝粒端的SMN2，两者在编码区内仅存在1个碱基的差异，即位于第7外显子上的840位碱基在SMN1为C，     

扩增阻滞突变系统快速检测H型高血压患者MTHFR C677T基因型的应用研究

目的 通过扩增阻滞突变系统-聚合酶链反应（ARMS-PCR）检测H型高血压患者5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR）C677T基因型,以期建立一种低成本、简单快速的MTHFR C677T基因分型方法。方法 基于湖南省H型高血压危险因素研究的大型流行病调查的人群基础,采用单纯随机方法,选取94例H型高血压患者作为研究对象。设计阻滞度递减的系列错配引物,采用ARMS-PCR对94例患者外周血样本的MTHFR C677T基因型进行鉴定,并抽取不同基因型进行测序验证。结果 ARMS-PCR产物电泳后条带清晰,易于判读MTHFR C677T基因型。94例H型高血压患者共检出CC基因型42例、CT基因型24例和TT基因型28例。ARMS-PCR与DNA测序结果一致。结论 ARMS-PCR经阻滞度递减的系列错配引物能有效对MTHFR C677T基因型进行鉴定,此法具有成本低、操作简单、用时短的优点。适用于各类基因的多态性分析。     

Sanger测序法和突变扩增阻滞系统法检测非小细胞肺癌EGFR基因19、21号外显子突变的临床价值比较

目的比较Sanger测序法和突变扩增阻滞系统（ARMS）法检测非小细胞肺癌（NSCLC）EGFR基因19、21号外显子突变的临床价值。方法收集经病理组织学确诊的NSCLC患者肺部原发或转移癌标本102例,其中石蜡包埋组织75例,病理活检标本27例;采用Sanger测序法和ARMS法检测上述标本EGFR基因19、21号外显子突变情况,分析其与患者临床病理学特征的关系。结果ARMS法突变检出率为48.0%（49/102）,高于Sanger测序法的32.3%（31/96）,两者比较差异有统计学意义（P＜0.05）。病理活检组织ARMS法突变检出率为57.1%（12/21）,明显高于Sanger测序法的23.8%（5/21）,差异有统计学意义（P＜0.05）;石蜡包埋组织ARMS法和Sanger测序法突变检出率分别为49.3%（37/75）和34.7%（26/75）,两者比较差异无统计学意义（P＞0.05）。女性患者EGFR基因突变检出率68.0%高于男性患者的28.8%,未吸烟患者突变检出率65.5%高于吸烟患者的27.7%,腺癌患者突变检出率62.3%高于鳞癌患者的26.8%,差异均有统计学意义（均P＜0.05）;但EGFR基因突变检出率和有无淋巴结转移及年龄比较差异均无统计学意义（均P＞0.05）。结论EGFR基因19、21号外显子突变好发于女性、未吸烟患者和腺癌患者,Sanger测序法对大组织样本及未知突变检测更有优势,ARMS法对病理活检、微小样本及要求灵敏度高的样本检测更为适合,结合2种方法检测结果更为全面可靠。     

组蛋白H4第20位赖氨酸突变阻滞细胞周期

目的 研究组蛋白H4第20位赖氨酸突变对细胞可能存在的影响并探究其分子机制,期望寻找作用于该位点的特异性蛋白,比如H4K20me3去甲基化酶。方法 建立能够表达羧基（C）末端带Flag-HA标签的组蛋白H4及其突变体H4K20M （赖氨酸突变为蛋氨酸）,H4K20A （赖氨酸突变为丙氨酸）的HeLa S3细胞系。通过病毒感染法获得能够表达目的蛋白的细胞,碘化丙啶（PI）染色后进行流式细胞（FACS）周期分析。制备单个核小体（mono nucleosome,mono-N）,通过免疫共沉淀的方法得到相互作用蛋白复合物成分,银染观察蛋白组分的差异,将差异蛋白条带切割后进行质谱分析。结果 在病毒感染大约72h过表达K20M的HeLa S3细胞表型异常,主要表现为细胞体积和细胞核体积明显增大,并停止生长,不再分裂。FACS结果显示过表达H4K20M的细胞被阻滞在G₂/M期,质谱结果表明在过表达K20M的细胞中RBBP4/7的表达量增高。结论 组蛋白H4第20位赖氨酸突变为蛋氨酸会阻滞细胞周期,而这种阻滞很可能由RBBP4/7所引起。     

四引物扩增受阻突变体系聚合酶链反应在SNP基因分型中的研究

目的 探讨四引物扩增受阻突变体系聚合酶链反应(tetra-primer amplification refractory mutation system-potymerase chain reaction,tetra-primer ARMS-PCR)在SNP基因分型中的应用. 方法 利用人EXO1基因第10外显子CA9T单核苷酸多态性为研究对象,以tetra-primer ARMS-PCR的原理设计四种引物进行扩增,从而对Mg2 浓度、dN浓度、Taq酶用量及内外引物浓度比例4个因素进行优化. 结果 当反应体系的退火温度为51℃,Mg2 浓度、dNTP浓度分别为2.0 nanol/L、0.1 mmol/L,Taq酶用量为0.5 U,内/外引物浓度为1/0.2μmol/L时,tetra-primer ARMS-PCR应用于该SNP位点的基因分型结果最佳. 结论 四引物扩增受阻突变体系聚合酶链反应是SNP基因分型的一种可行方法,但在应用时需对反应条件进行必要的优化.     

用PCR插入突变法扩增和克隆HIV－env282肽基因

用ＰＣＲ插入突变法扩增和克隆ＨＩＶ－ｅｎｖ２８２肽基因［项秉懿，李飚，王俊楼等．中华微生物学和免疫学杂志，１９９５；１５（４）：２５１～２５４］作者借助于微机分析设计并合成了２个引物，通过聚合酶链反应插入突变法扩增出含有４个功能区（Ｔ肽区，与ＮＬＫ部...     

荧光标记引物miniCTTA复合扩增系统的建立

目的建立扩增片段<130bp,包括CSF1PO、TH01和TPOX及性染色体amelogenin基因座的miniCTTA扩增系统。方法采用不同荧光染料标记引物,通过PCR扩增,利用ABI3100遗传分析仪进行片段长度分析,对100份无关个体血样,10个家系样本以及30份高度降解检材进行检测。结果miniCTTA系统DNA分型结果与AmpFLSTRIden-tifiler试剂盒完全一致。结论miniCTTA系统可以应用于个人识别和亲权鉴定,为降解DNA样本分型提供了新的方法。RR     

用PCR扩增16SrRNA基因鉴定甲型副伤寒沙门菌细胞壁缺陷突变株

目的: 探讨甲型副伤寒沙门菌细胞壁缺陷突变株的检测与鉴定方法.方法:提取甲型副伤寒沙门菌细胞壁缺陷突变株及其亲代细菌型的染色体DNA,根据甲型副伤寒沙门菌的16SrRNA基因保守序列设计引物,进行PCR扩增,对扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳与分析.结果:甲型副伤寒沙门菌细胞壁缺陷突变株16SrRNA基因的PCR扩增产物16SrDNA,在230 bp处出现与其亲代细菌型一致的DNA条带和图谱.结论:甲型副伤寒沙门菌的细胞壁缺陷突变株虽然丧失了常规细菌学方法可检测的绝大多数表型特征,但采用聚合酶链反应方法检测该序列,有利于检测和鉴定不能自发返祖的细胞壁缺陷甲型副伤寒沙门菌.     

星状神经节阻滞对心血管系统的影响

星状神经节阻滞（stellate ganglion block．SGB）作为一种传统的交感神经阻滞方法,近年来应用范围越来越广泛。SGB主要是交感神经阻滞．包括颈中神经节、椎动脉神经节、星状神经节及其节前节后等很大范围被阻滞．所有阻滞的总体效果才是SG。本文就SGB对心血管系统的影响进行综述．以期更清楚地认识SGB．     

突变与突变修复机制

脱氧核糖核酸作为生物体的一种遗传信息载体 ,其复制过程必须维持高度的稳定性。在生命进化的漫长岁月所形成的多种突变修复机制 ,对维持遗传的稳定性起着十分重要的作用。就突变本身而言 ,其同样具有特定的生物学意义 ,中性或有利突变是生物多样性与进化的物质基础 ,而有害突变则产生致病乃至致死效应。基因突变可由体内外物理、化学和生物等多种因素造成 ,其在单碱基水平表现为稀有碱基或错误碱基的掺入和正常碱基在DNA序列中的错配 ,比较典型的例子为DNA链中的C在脱氨酶的作用下脱氨基变为U ,以及DNA合成过程中U直接占据了T的序列…     

二氢叶酸还原酶扩增系统--一种高效稳定的哺乳动物细胞表达系统

基因工程的表达系统有原核表达系统和真核表达系统两大类。哺乳动物细胞的表达系统能识别和除去外源基因中的内含子，剪接加工成熟的mRNA，易被重组的DNA质粒转染，具有遗传的稳定性和可重复性，并且蛋白产品提纯工艺简单、成本低，应用前景广泛。稳定表达是指导入基因已被整合入受体细胞的基因组中，从而能长期进行表达，对这     

非小细胞肺癌患者EGFR突变和基因扩增对吉非替尼疗效的预测价值

1文献类型 治疗。 2证据水平 1b；杂志影响因子：9．835。 3文献来源 Bell DW, Lynch TJ, Haserlat SM, et al. Epidermal growth factor receptor mutations and gene amplification in non-small-cell lung cancer： molecular analysis of the IDEAL/INTACT gefitinib trials [J]. J Clin Oncol, 2005, 23（31） ： 8081-8092.     

恶性肿瘤的基因扩增

肿瘤发生是一多步骤的过程。一种新的达尔文观点将注意力集中在肿瘤发展的两个关键要素上:瘤细胞群体内变异体的产生和选择性环境的存在。复杂的生物抑制因素在病人体内提供了这样的环境,借助癌疗法提供的新的、选择性的抑制作用,抑制细胞的异常生长。细胞变异的基础是什么?多数证据表明,突变使     

基因扩增技术

用 DNA 探针技术分析特异的核苷酸序列来诊断传染病和遗传病,使诊断的灵敏度有了很大的提高,但由于特异的靶序列含量极微,一般情况下即使用 DNA 杂交技术也难以测出,常需将嵌有靶基因的载体导入细菌细胞中,细菌快速繁殖,靶基因得到扩增后再进行检测。此法费时、费事,难于实际应用。1985年 Saiki 和1987年 Mullis 分别建立了多聚酶链反应(polymerase chaim reaction,PCR),又称特异性 DNA 序列引物定向酶促扩增技术,能选择性扩增、浓集一个特异性 DNA 序