华蟾素注射液对人肝癌肿瘤细胞HepG_2增殖抑制作用观察及其作用机制研究

目的探讨华蟾素注射液对人肝癌肿瘤细胞Hep G2增殖抑制作用观察及其作用机制研究。方法 MTT法测定华蟾素注射液对Hep G2细胞增殖抑制作用,高内涵活细胞成像系统检测华蟾素注射液对Hep G2细胞周期和细胞凋亡的影响,Western blot蛋白印迹法检测华蟾素注射液凋亡相关蛋白的表达。结果华蟾素注射液不同浓度作用于24h和48h抑制率均明显高于阴性对照组(P0.05),且随着浓度的增加,抑制率越为明显;华蟾素注射液不同浓度作用于48h抑制率明显高于24h抑制率(P0.05);华蟾素注射液不同浓度G0/G1期百分率高于阴性对照组(P0.05),S期细胞百分率低于阴性对照组(P0.05);华蟾素注射液不同浓度凋亡率高于阴性对照组(P0.05);随着华蟾素注射液浓度增加细胞凋亡率增加;随着华蟾素注射液浓度的减少,Bcl-2蛋白表达不断增加,而Bax蛋白表达不断下降。结论华蟾素注射液可明显抑制人肝癌肿瘤细胞Hep G2增殖,阻滞细胞于G0/G1期,可能通过上调bax蛋白表达、下调Bcl-2蛋白表达相关。     

黄连素对胰腺癌细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨黄连素对胰腺癌细胞增殖及凋亡的影响。方法:用浓度分别为0μmol/L,25μmol/L,50μmol/L,100μmol/L,200μmol/L的黄连素与人胰腺癌Panc-1细胞共同培养,MTT法检测胰腺癌细胞的增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,免疫组化检测细胞中的Caspase-3蛋白的表达。结果:黄连素对人胰腺癌Panc-1细胞增殖抑制率随药物浓度和作用时间的增加而增强;黄连素作用48 h后人胰腺癌Panc-1细胞凋亡率明显增加,且随药物浓度的增加而升高;黄连素作用48 h后人胰腺癌Panc-1细胞的Caspase-3蛋白表达增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:黄连素能抑制胰腺癌Panc-1细胞的增殖,而且可能通过增加Caspase-3蛋白的表达来增强胰腺癌细胞的凋亡。     

黄连素对肝癌细胞生长的影响以及机理

目的:观察黄连素对肝癌细胞株3B生长的影响,并且探讨其作用的机理。为阐明黄连素作为一种新的治疗肝癌的药物提供理论依据以及实验室的结果。方法:应用不同浓度的黄连素作用于肝癌细胞后,通过细胞免疫组化SP法检测细胞膜表面的Caspase-3蛋白的表达,用流式细胞仪和荧光显微镜观察癌细胞凋亡的情况,并应用RT-PCR法检测Caspase-3 mRNA的含量。结果:黄连素对肝癌细胞株3B的生长有明显抑制作用,并有浓度依赖性。在时间相同内,药物处理组的Caspase-3蛋白和mRNA的表达与空白对照组相比较均有显著性差异(P<0.01);流式细胞仪分析存在G2/M阻滞,在G1峰前有明显的凋亡峰;荧光显微镜观察显示细胞形态发生凋亡特征性的改变:细胞膜完整,染色质浓缩,核碎裂,凋亡小体的形成。结论:黄连素能够有效地抑制肝癌细胞的生长,其机理是诱导细胞凋亡;而凋亡的机制可能是通过Caspase-3起作用。     

斑蝥酸钠抑制人肝癌HepG2细胞增殖及其机制的研究

目的:探讨斑蝥酸钠对肝癌HepG2细胞增殖的作用及其机制.方法:肝癌HepG2细胞在不同浓度斑蝥酸钠干预后分别采用MTT法、流式细胞术、免疫细胞化学法、比色法等检测细胞增殖抑制率、细胞周期变化、Survivin蛋白表达和Caspase-3活性.结果:斑蝥素能明显抑制肝癌HepG2细胞增殖.药物干预后,细胞出现G2/M期阻滞,Survivin蛋白表达抑制,Caspase-3活性增强.结论:斑蝥酸钠可能通过其G2/M期特异性阻滞,下调Survivin表达和激Caspase-3来抑制HepG2细胞增殖.     

人参皂苷代谢产物衍生物对HepG2细胞凋亡及相关蛋白表达的影响

目的 探讨人参皂苷代谢产物衍生物对HepG2细胞凋亡的影响及机制.方法 MTT法检测不同浓度人参皂苷代谢产物衍生物对HepG2细胞增殖的作用;流式细胞仪分析肿瘤细胞凋亡周期及细胞凋亡率;Western Blot法测定药物对HepG2细胞凋亡相关蛋白表达的影响.结果 人参皂苷代谢产物衍生物抑制肝癌HepG2细胞生长,呈浓度依赖关系.用50mg/L和100mg/L人参皂苷代谢产物衍生物处理细胞24h后,凋亡率与对照组比明显升高.流式细胞术分析显示S期和G2/M期细胞周期阻滞.Western Blot结果显示,人参皂苷代谢产物衍生物使细胞中Bax、Caspase-3蛋白表达增强,Bcl-2蛋白表达降低.结论 人参皂苷代谢产物衍生物促进肝癌HepG2细胞凋亡,可能与下调Bcl-2蛋白表达,上调Bax、Caspase-3蛋白表达有关.     

泰山照山白金丝桃苷诱导人乳腺癌细胞的细胞周期阻和凋亡的机制研究

目的 观察泰山照山白金丝桃苷（Hyperin）对人乳腺癌细胞株MCF-7细胞周期及凋亡影响及其机制.方法 体外培养人乳腺癌细胞MCF-7,加入不同金丝桃苷浓度处理,运用MTT法检测细胞生长、流式细胞术PI染色检测细胞周期,western blot检测细胞周期蛋白依赖性激酶2（cyclin-dependent kinase 2,CDK2）、细胞周期蛋白A （Cyclin A）及caspase3的表达.结果 与对照组相比,经金丝桃苷处理后细胞生长呈时间及浓度依赖性抑制;MCF-7细胞周期阻滞在G2/M期,该期细胞比例增多;CDK2、Cyclin A蛋白水平的表达与对照组相比明显下降而caspase3蛋白水平的表达明显升高.结论 通过细胞周期的G2/M期阻滞诱导细胞凋亡可能是金丝桃苷发挥抗肿瘤作用的可能机制之一.     

黄连素对结肠癌细胞生长的影响及其机制的研究

目的 观察黄连素对结肠癌细胞株生长的影响,探讨其作用机制.方法 应用不同浓度的黄连素作用于结肠癌细胞后,通过细胞免疫组化SP法检测细胞膜表面的cox-2蛋白的表达,用流式细胞仪观察癌细胞凋亡的情况,并应用RT-PCR法检测cox-2 mRNA的含量.结果 黄连素对结肠癌的生长有明显抑制作用,并有浓度依赖性.在相同时间内,药物处理组的cox-2蛋白和mRNA的表达与空白对照组相比较均有显著性差异(P<0.01);流式细胞仪分析存在G2/M阻滞,在G1峰前有明显的凋亡峰.结论 黄连素能够有效地抑制结肠癌细胞的生长,其机制可能是通过cox-2诱导细胞凋亡.     

苦参碱通过线粒体通路诱导HepG2细胞凋亡的机制研究

目的探讨苦参碱通过线粒体通路诱导Hep G2发生凋亡的机制。方法分别采用MTT法、PI染色法、流式细胞术检测苦参碱对肝癌Hep G2细胞的增殖抑制、周期调控、诱导凋亡作用;采用Western Blot检测苦参碱诱导肝癌Hep G2细胞抑凋亡蛋白Bid、Bcl-2的表达量。结果苦参碱可抑制Hep G2细胞的增殖作用和诱导凋亡,呈时间和剂量依赖性,并可将Hep G2细胞周期阻滞在G0/G1期。苦参碱可引起线粒体膜电位崩溃,同时诱导Bid、Bcl-2表达下调,Bax表达上调。结论苦参碱通过调节细胞内Bid、Bcl-2和Bax蛋白的表达,经线粒体信号转导途径诱导人肝癌细胞系Hep G2发生凋亡。     

德氮吡格对人肝癌细胞株增殖抑制的体外研究

目的:观察德氮吡格(TNBG)对人肝癌细胞株SMMC-7721和HepG2增殖的影响,探讨其抗肿瘤作用机制.方法:运用MTT法检测德氮吡格对肿瘤细胞增殖的影响,流式细胞仪观察细胞周期分布情况,Western blot分析cyclinB1和p34cdc2的变化.结果:德氮吡格作用SMMC-7721和HepG2细胞72h后,能抑制细胞增殖,呈剂量依赖性.流式细胞仪检测到两株细胞均有S期和G2/M期细胞增加,并且德氮吡格还能诱导HepG2细胞发生凋亡.Western blot发现CyclinB1表达在药物处理组明显降低,而p34cdc2则无明显改变.结论:德氮吡格能抑制肿瘤细胞增殖,可能通过调控CyclinB1表达将肿瘤细胞阻滞于G2/M期,从而达到抗肿瘤的效应.     

沉默Chk2基因对DADS阻滞人胃癌BGC823细胞G2/M期的影响

细胞周期检测点激酶1/2(Chk1/2)在参与G2/M期起着重要作用,本研究探讨沉默Chk2基因对二烯丙基二硫(DADS)诱导人胃癌BGC823细胞G2/M期阻滞的影响。采用RNAi 技术沉默BGC823细胞Chk2基因,q-PCR与Western blot检测Chk2 mRNA与蛋白表达。流式细胞术检测DADS与Chk2沉默BGC823细胞周期分布情况。Western blot检测Cdc25C与cyclin B1表达。流式细胞术显示,DADS作用BGC823细胞后,G2/M期细胞呈时间依赖性增加 (P<0.05)。Chk2沉默BGC823细胞Chk2 mRNA与蛋白表达下调 (P<0.05)。Chk2沉默组G2/M期细胞较对照组差异无显著性 (P>0.05)。DADS处理Chk2沉默组与对照组后,两者G2/M期细胞差异无显著性(P>0.05),而较未处理前有明显差异 (P<0.05)。Chk2沉默后,CDC25C和CyclinB1表达较对照组无明显差异 (P>0.05)。但是, DADS处理对照组与Chk2沉默组后,CDC25C和CyclinB1表达较处理前明显降低 (P<0.05)。表明Chk2 沉默对DADS阻滞BGC823细胞G2/M作用没有影响,DADS阻滞G2/M的检查点可能不是Chk2。     

小檗碱通过ROS及caspase通路对肝癌HepG2细胞凋亡的作用

目的 探究小檗碱(BBR)对肝癌HepG2细胞的增殖抑制及作用机制.方法 采用噻唑蓝(MTT)法检测不同浓度(0、10、20、40、80 μmol/L) BBR对肝癌HepG2细胞的抑制作用;采用Hoechst 33342染色观察处理后HepG2细胞形态学变化;用流式细胞仪检测HepG2细胞凋亡率;间接荧光标记法检测BBR对细胞内活性氧簇(ROS)水平的影响;JC-1染色法检测细胞内线粒体膜电位的变化;应用Western blot法检测凋亡相关蛋白Bax、caspase-3、Cleaved-caspase-3的表达变化.结果 MTT法显示BBR可呈剂量、时间依赖性抑制肝癌HepG2细胞活力(P＜0.05);Hoechst 33342染色发现细胞形态发生明显变化,0μmol/L BBR处理的细胞呈淡蓝色,处理组细胞核固缩,形成凋亡小体,细胞凋亡率与药物浓度呈正相关(P＜0.05).流式细胞术发现BBR能使细胞内ROS升高,线粒体膜电位水平下降.Western blot法显示随着药物浓度升高,Bax、Cleaved-caspase-3、cleaved-聚腺苷二磷酸核糖聚合酶表达增强,Bcl-2蛋白表达降低,凋亡相关蛋白caspase-3表达下降.结论 BBR在体外可能通过增加ROS、提高促凋亡蛋白Bax并激活caspase-3表达抑制肝癌HepG2细胞增殖并诱导细胞凋亡.     

细胞分裂周期素25A影响放射线照射后HEp-2细胞的G_2/M期阻滞及凋亡

目的:研究放射线照射后HEp-2细胞的G2/M期阻滞与细胞分裂周期素(CDC)25A表达的相关性及过表达CDC25A蛋白对细胞周期及凋亡的影响。方法:通过流式细胞仪和Western blot方法检测4Gy X线照射后在不同时间点细胞周期及CDC25A蛋白含量;经脂质体转染pEGFP-N1-CDC25A质粒的HEp-2细胞为CDC25A组,转染pEGFP-N1质粒的为空载对照组,通过实时荧光定量PCR法检测这两组细胞中CDC25A的mRNA含量以鉴定转染效率;通过流式细胞仪检测CDC25A组和空载对照组细胞经4Gy放射线照射后细胞周期和细胞凋亡率;通过MTT法检测两组细胞的存活曲线。结果:放射线照射后G2/M期在细胞周期中的比例与CDC25A蛋白含量成正相关;CDC25A组细胞的CDC25A mRNA含量为空载对照组的15倍;过表达CDC25A联合4Gy放射线照射可废除G1/S关卡阻滞,促进G2/M期聚集和提前进入有丝分裂,可导致细胞凋亡增加和细胞存活率降低。结论:CDC25A的含量与G2/M期的比例正相关,调控CDC25A的表达可影响放射线照射后肿瘤细胞的细胞周期和凋亡水平。     

黄连素抑制人乳腺癌细胞MCF-7作用的研究

目的 研究黄连素对人乳腺癌细胞MCF-7的抑制作用.方法 用WST-1方法、流式细胞术和划痕实验分别检测黄连素对乳腺癌细胞MCF-7增殖、凋亡、细胞周期及迁移能力的影响.结果 不同浓度的黄连素可以抑制乳腺癌细胞MCF-7的增殖.黄连素作用于MCF-7细胞24 h可以使细胞周期阻滞在G1期,进入S期的细胞比例降低,同时MCF-7细胞凋亡明显增加.黄连素作用于MCF-7细胞24 h及48 h后,可以抑制MCF-7细胞的迁移能力.结论 黄连素可有效地抑制乳腺癌细胞的增殖与迁移能力,并诱导其凋亡,参与抗肿瘤作用.     

黄连素抑制人喉癌 Hep-2细胞增殖及机制研究

目的：探讨黄连素对人喉癌 Hep-2细胞增殖的抑制作用及其可能机制。方法体外培养 Hep-2细胞,使用不同浓度黄连素诱导不同时间,应用 MTT 法检测细胞增殖抑制率;流式细胞术测定细胞周期及凋亡;实时荧光定量 PCR 和蛋白质免疫印迹（Western blot）法分别检测细胞周期蛋白 D（CyclinD）、B 细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）、Bcl-2相关 X 蛋白（Bax）基因和蛋白表达水平。结果与0μmol/ L 黄连素对照组比较,2.5、5.0、10.0、20.0μmol/ L 黄连素作用 Hep-2细胞24、48 h,可明显抑制细胞增殖,且呈浓度时间依赖性（P ＜0.05）;2.5、5.0、10.0μmol/ L 黄连素作用 Hep-2细胞48 h,细胞早期凋亡率明显升高,呈浓度依赖性（P ＜0.05）;G0/ G1期细胞增多（P ＜0.05）,诱导细胞阻滞于 G0/ G1期;10μmol/ L 黄连素作用 Hep-2细胞48 h,Bax 基因和蛋白表达水平明显升高（P ＜0.05）,CyclinD、Bcl-2基因和蛋白表达水平明显下降（P ＜0.05）。结论黄连素能抑制喉癌细胞增殖,引起 G0/ G1期阻滞,并诱导其凋亡,其作用机制可能与 Bax 基因表达上调及 CyclinD、Bcl-2基因表达下调有关。     

塞来昔布对人肝癌细胞株HepG2的放射增敏作用研究

目的探讨COX-2抑制剂塞来昔布对体外培养的HepG2细胞放射增敏作用及其可能的机制,为提高肝癌的放疗效果提供实验依据。方法集落形成法绘制细胞存活曲线,计算增敏比;流式胞仪检测塞来昔布对细胞周期及凋亡的影响;免疫细胞化学染色法检测塞来昔布作用后HepG2细胞的Bcl-2、Casepase-3的表达情况。结果集落形成实验计算得单纯照射组D0=2.57Gy、Dq=2.62Gy,药物＋照射组D0=2.18Gy、Dq=1.89Gy,增敏比SER=1.18。塞来昔布作用48h后,流式细胞仪检测发现细胞周期时相分布发生明显变化,G0/G1期细胞比例增加,S期细胞减少,细胞凋亡率增加。免疫细胞化学染色法观察塞来昔布对凋亡蛋白Bcl-2、Caspase-3表达的影响,发现塞来昔布作用48h后Bcl-2的表达无明显变化,Caspase-3的表达增强。结论塞来昔布具有较强的放射增敏作用,作用机制可能与塞来昔布影响细胞周期的分布,促进细胞凋亡,抑制细胞亚致死性损伤修复有关。     

姜黄素联合紫杉醇对肺癌细胞PC9凋亡的影响

目的:研究姜黄素联合紫杉醇对人肺癌细胞PC9凋亡的影响。方法:将不同浓度梯度姜黄素和紫杉醇单用（单药组）和联合（联合组）作用于PC9细胞,MTT法测定其对PC9的增殖抑制作用,流式细胞术检测单药和双药联合对细胞周期分布和凋亡的影响,Western blot法检测凋亡相关蛋白表达的变化。结果:两药均以时间和剂量依赖方式抑制PC9细胞的增殖,联合组抑制作用大于单药组（P<0.01）。两药均能诱导PC9细胞发生凋亡和G₀/G₁期阻滞,联合组细胞凋亡和G₀/G₁期阻滞作用显著增强（P<0.01）。Western blot法检测显示,联合组Caspase-3蛋白、Bcl-2、Bax的改变显著大于单药组（P<0.01）。结论:姜黄素、紫杉醇可抑制人肺癌PC9细胞增殖,诱导其凋亡,阻滞细胞G₀/G₁期,伴随Caspase-3活性上调,且两者联合应用可显著促进细胞凋亡。     

白藜芦醇诱导肺癌细胞凋亡和细胞周期阻滞的分子机制

目的探讨白藜芦醇对肺癌细胞系A549和H1299细胞增殖与细胞周期阻滞及细胞凋亡之间的联系。方法采用MTT法检测白藜芦醇对A549和H1299细胞增殖的影响;用Western印迹法检测白藜芦醇作用后A549和H1299中凋亡相关蛋白cleaved-caspase-3、cleaved-caspase-7、cleaved-caspase-9、cleaved-PARP及细胞周期相关蛋白cyclin D1、cyclin D3和CDK2、CDK4、CDK6、p53、p18、p21、p27的表达情况;通过流式细胞仪技术检测白藜芦醇诱导A549和H1299细胞凋亡率以及细胞周期阻滞的影响。结果白藜芦醇对A549和H1299的生长均有抑制作用,呈浓度依赖性;经白藜芦醇处理后,A549和H1299的周期蛋白cyclin D1、cyclin D3和CDK2蛋白的表达水平上调,而周期蛋白CDK4、CDK6、p53、p18、p21、p27的表达水平下调;A549和H1299的凋亡相关蛋白cleaved-caspase-3、cleaved-caspase-7、cleaved-caspase-9、cleaved-PARP的表达水平上调;流式细胞仪检测A549和H1299的细胞凋亡率随白藜芦醇的浓度上升而增加,流式细胞仪检测细胞周期即可观察到随白藜芦醇的浓度的增加,细胞周期明显阻滞于G1/S期。结论白藜芦醇可能是通过促进caspases通路的活化,从而促进细胞凋亡;周期蛋白cyclin D1、cyclin D3和CDK2蛋白的表达水平的上调和CDK4、CDK6、p53、p18、p21、p27的表达水平的下调可能是白藜芦醇诱导人肺癌细胞发生G1/S期阻滞的关键机制。