聚合酶链反应鉴定乙型肝炎病人尿液的传染性

聚合酶链反应（PCR）检测乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸（HBV－DNA）敏感、快速，对HBeAg阳性病人血液HBV-DNA的检测阳性率高达100%）。我们选用乙型肝炎病人38例的尿液，并采用PCR法检测尿液HBV－DNA发现尿液HBV－DNA与血液HBV－DNA及血液HBeAg之间具有相关性。现将结果报告如下。对象与方法一、对家均为住院病人三．血清HBsAs－HBeAg和nscatr均阳性（以下简称血清nseag阳性病人）的病人16例。2．血清HBShg、HBCAb阳性，但HBeAg阴性（以下简称血清HBeAg阴性病人）的病人22例。二、方法1．血清HBsAgtHBcAb、HBeAg及…     

Hendra病毒的实时PCR检测方法的建立

目的：建立针对Hendra病毒的敏感、特异和快速的实时PCR法，为Hendra病的早期诊断提供依据。方法：采用常规PCR法和实时PCR法分别对构建的Hendra病毒全长G基因的重组质粒DNA进行扩增，并比较两种方法的敏感性。结果与结论：应用常规PCR方法可检测到100fg/μl的含Hendra病毒特异序列的重组质粒DNA，而实时PCR法则可检测到0．1fg/μl的DNA，后者的敏感性比常规PCR法的提高了1000倍，该方法不但操作上更加简便、快速，还可避免交叉污染，适于对Hendra病毒特异序列的检测。     

船上饮用水的消毒

船上饮用水的消毒［长谷川胜男．渔船机关，１９９２，（２）：８４（日文）］本文介绍了对船员健康有重大影响的各种船上饮用水消毒方法。如采用臭氧、氯处理、紫外线照射和银离子法等。文章详细介绍了Ｐｏｒｔａｃｅｌ公司制造的结构简单、安全性好的ＥＳＨ水消毒装置。...     

新基因LRP15参与紫外线诱导的DNA损伤的修复作用

目的探讨LRP15基因在K562细胞中对紫外线诱导的DNA损伤的修复作用，以进一步研究该基因的功能。方法利用真核表达质粒pcDNA3．1构建LRP15基因开放阅读框架（ORF）序列的正义及反义重组质粒；两种质粒经阳性脂质体介导法分别转染K562细胞，G418筛选阳性克隆；采用单细胞凝胶电泳（SCGE）技术观察两组细胞对紫外线诱导的DNA损伤的修复作用的差异。结果PCR鉴定证实，正义及反义重组质粒中LRP15基因ORF序列均按预定方向正确插入；SCGE实验表明，经紫外线照射后两组细胞的DNA基础损伤无明显差异（P=0.156）。但经45及90min修复后实验组细胞的DNA迁移长度明显小于对照细胞（P〈0．001）。结论成功构建LRP15基因的正义及反义真核表达质粒；LRP15基因对紫外线诱导的DNA损伤具有修复作用，可能是一个DNA修复基因。     

肝肾移植术后受者人巨细胞病毒两种检测方法的对比研究

目的:探讨巢式PCR(Nest PCR)检测器官移植术后受体人巨细胞病毒(HCMV)DNA,并与传统ELISA法作方法学对照。方法:巢式PCR针对HCMV AD169株IEA基因设计内外两对引物,对59例肝、肾移植术后受体(肝移植27例、肾移植32例)血、尿标本进行HCMV DNA检测。分离血清作EIASA检测IgG、IgM。结果:血液Nest PCR阳性率肝移植62.9％,肾移植46.8％;ELISA法阳性率:IgC35.5％,IgM27.1％,IgG+IgM18.6％,IgM阳性标本(16例)DNA检测皆为阳性,6例IgG、IgM皆阴性标本DNA检测仍为阳性。两法检测,P<0.05,证明两法存在显著差异,结论:巢式PCR是一种敏感特异、简便快速诊断HCMV感染的方法,灵敏度及特异性高于传统ELISA,能弥补ELISA的假阴性,更适用于临床检测器官移植术后HCMV感染。     

应用PCR检测4种消毒剂对HBV—DNA的灭活效果

我们应用聚合酶键反应（PCR）技术，检测碘伏、高锰酸钾、来苏尔和84消毒液对HBV－DNA的灭活效果。报告如下。材料与方法一、材料碘伏，南京大学消毒剂厂生产（批号19931204）。高锰酸钾，广东梅县锰化厂生产（批号19920201）。来苏尔，南昌医药比工厂生产（批号19921024）。84消毒液，南昌健宝防疫用品厂生产（批号19930720）。HBV－DNAPCR试剂盒，由南通宏达生物技术有限公司提供（批号19930509HBV－DNA强阳性血清，采集于住我院的慢性乙型肝炎患者。中和剂：碘伏用2．5％硫代硫酸钠，高锰酸钾用0．2％硫酸亚铁该，来苏尔用2％…     

产肠毒素性大肠杆菌质粒DNA测定其及耐药性研究

我们从单一受大肠杆菌所致腹泻粪便中分离入肠杆菌139珠菌，其中有些菌株耐药明显。为探讨其原因，我们对139株菌作了聚合酶链反应（PCR）检测，并检测了阳性菌质粒的脱氧核糖核酸（DNA），现报告如下。1材料和方法1．l菌株来源1990～1994年，在驻军某医院及部．队监测点的急性感染性腹泻患食粪便中，常规对各种病原体的培养及血清生化试验阳性菌株进行研究。1．2药物敏感试验采用Kirby－Baner（F称K－B法），药敏纸片系卜海医学化验所生产。1．3PCR检测引物由解放军率军总医院分了生物学实验室提供并检测。1．4质粒检测技birnboin法…     

石蜡包埋脱钙骨组织中结核杆菌DNA不同提取方法比较

目的 探讨石蜡包埋的10%硝酸脱钙骨组织中简易有效的结核杆菌DNA提取方法并进行验证.方法 以20例石蜡包埋、10%硝酸脱钙的坏死性肉芽肿炎疑为骨结核的组织标本为研究对象,常规法直接采用德国QIAGEN公司的QIAamp DNA FFPE Tissue Kit方法提取DNA,而改良法中加入QIAamp DNA Micro Kit试剂盒中的carrier RNA,以两种方法分别提取20例标本中结核杆菌DNA,通过荧光定量PCR,比较常规试剂盒提取法和改良提取法对结核杆菌检测结果的影响.结果 改良法提取的DNA[（35.32±3.48）ng/μl]比常规法[（6.68±3.72）ng/μl]提取的DNA显著增多（P＜0.05）,改良法提取的DNA经荧光定量PCR检测结核杆菌的阳性率（55%）明显高于常规法（15%,P＜0.01）.结论 改良法提取石蜡包埋脱钙骨组织中结核杆菌DNA具有高效简便的特点,是较为理想的方法,值得在puncture和极微小石蜡样本中推广.     

PreSlAg、HBeAg和HBV—DNA的对比检测与分析

目的：通过对比检测和分析739份血清中preS1蛋白、HmAg和HBV—DNA的检测阳性率，为临床正确选用实验室指标防治乙型肝炎提供依据。方法：应用ELISA法对739份血清进行PreSlAg和HBV血清标志物检测，并与实时荧光定量PCR检测HBV—DNA结果进行比较。结果：所有739份血清中，PmSlAg阳性率为34．6％（256／739），HmAg阳性率为觚7％（227／739），HBV—DNA阳性率为58.9％（435／739）。227份HBeAg阳性血清中，PreSlAg阳性率55．9％（127／227），HBV-DNA阳性率96．0％（218／227）；512份HBeAg阴性血清中，PreSlAg阳性率25．2％（129／512），HBV—DNA阳性率为42．4％（217／512）。HBeAg、HBV—DNA和PreSl的阳性率有显著差异（P〈0．05），阳性率高低依次为HBV—DNA〉PreSl〉HBeAg；HBeAg阳性血清中PreSlAg（55．9％）阳性率显著高于HmAg阴性血清PreSlAg（25．2％）阳性率（x^2=36．5，P〈0．01）；HBV—DNA阳性血清的PreSlAg检出率58．9％（256／435）显著高于HBV—DNA阴性血清的PreSlAg检出率1＆4％（56／304）（P〈0.01）；PreSl抗原与HBV—DNA阳性符合率为（200／256）7＆1％，阴性符合率为（248／483）51．3％。598份HBeAg阳性血清（阳性率为80．9%，598／739）中HBeAg、PreSl和HBV—DNA阳性数（率）分别是224（37．5%）、253（42．3oA）、417（69．7％）。结论：PreSlAg、HBV—DNA、HBeAg的阳性率有显著性差异（P〈0．05）。作为HBV感染和复制的指标，以检测HBV—DNA最为可靠，而PmSlAg可能较HBeAg更敏感。在HBV感染的不同时期，如何理解和使用上述指标对防治乙型肝炎有重要意义。     

荧光定量PCR快速检测金黄色葡萄球菌方法的建立

目的利用SmartCycler系统建立一种简便、快速的荧光定量PCR检测金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus,简称SAU）的方法。方法根据SAU特异nuc基因设计引物和探针,建立检测体系,并在体系中加入内质控IAC,通过另一个标记不同荧光基团的TaqMan探针来监测IAC。用SAU6538株污染饮用水和牛奶模拟实际样本,以评价体系的性能。结果以含nuc片段的线性质粒为模板,反应体系的灵敏度为5拷贝/μl;以6538株基因组DNA为模板,最低检测限为10fg/μl;用涂平板法计数并10倍梯度稀释的菌液提取DNA为模板,最低检测限为50cfu/ml。建立的定量标准曲线的循环域值（Ct）与模板拷贝数呈良好的线性关系（r2≥0.998）,PCR效率E≥96.7%。用SAU6538污染饮用水和牛奶模拟实际样本,灵敏度可达5×102cfu/25ml样本。结论所建立的nuc-IAC荧光定量PCR具有内质控IAC,既能定量检测食物是否被污染,又能监测PCR体系,防止假阴性发生或低估病原菌污染量。     

43例梅毒假阳性结果分析

梅毒是苍白螺旋体引起的一种性传播疾病。梅毒血清学检测一直是梅毒实验诊断的主要方法，目前常用的酶联免疫吸附试验（ELISA）和梅毒螺旋体抗体明胶凝集试验（TPPA）具有高特异性和敏感性的特点，但也存在假阳性的问题。本文旨在探讨引起梅毒特异性抗体检测的假阳性结果可能的原因。     

中药苍术烟熏法用于手术室空气消毒效果观察

中药苍术烟熏法用于手术室空气消毒效果观察武警广东总队医院手术室高秀兰王世心霍咏梅（广州５１０５０７）关键词苍术空气消毒效果评价手术室空气消毒是预防手术感染的重要措施之一,是医院质控管理的重点。而以往沿用的空气消毒方法如福尔马林或乳酸熏蒸法、紫外线照射...     

MR血管成像在诊断下肢深静脉血栓形成中的价值并与DSA对照研究

目的探讨下肢深静脉血栓形成MR血管成像（MRA）的临床价值。方法对30例怀疑下肢深静脉血栓形成的患者进行了MRA和DSA检查，MRA采用二维时间飞越法（2DTOF）。对MRA与DSA表现进行对照分析。结果下肢深静脉血栓形成的MRA表现有1静脉充盈缺损（14例）、静脉闭塞和中断（8例）、静脉再通（3例）、侧支循环形成（25例）。以DSA为标准，MRA诊断出所有病变，但有1例假阳性。结论MRA作为无创性检查，是诊断下肢深静脉血栓有效的检查方法之一。     

全数字化乳腺X线成像计算机辅助检测结果的初步临床评估

目的初步评估计算机辅助检测（CAD）技术在中国女性乳腺X线检查中的意义。方法沈阳地区某单位内40岁以上女职工934例接受了全数字化平板乳腺X线成像的检查，首先由放射科医师对乳腺图像给予影像学诊断，然后应用R2公司的计算机辅助诊断系统（Image Checker^TM）对所有图像予以辅助诊断的提示，对比分析两者的结果。结果CAD对于基本正常的1734个乳腺图像有799个阳性提示，假阳性提示率为46．1％。对存在结节及微钙化的图像提示符合率（正确率）较高（70．5％及75．0％），对于恶性肿瘤的正确提示率为100％。结论CAD对数字化乳腺X线图像的辅助提示具有较重要的临床应用价值，但仍存在一定的假阳性及假阴性结果。     

福尔马林固定的猴淋巴组织中HIV-1DNA的扩增

本文尝试从福尔马林固定的猴淋巴组织提取HIV-1CNA，并用PCR方法进行扩增和对扩增产物HIV-1DNA进行检测。结果认为，采取从福马林固定标本中提取PNA的方法是可行的。在提取DNA中，采用过量TE（ph9.0）长时间浸泡标本。并适当提高蛋白酶K（100μq/ml）和SDS（2%-3%）的浓度，可有助于DNA的提取，同时适当提高提取液的PH值（PH9.0），对DNA具有一定的保护作用。     

用Red介导的同源重组结合酶切改构质粒DNA

目的：用Red介导的单链寡核苷酸体内同源重组结合限制酶切方法对pBR322-Red质粒中的DNA序列进行精确的缺失突变。方法：用合成的单链寡核苷酸打靶分子电击转化W3110(pBR322-Red)宿主菌，利用Red提供的同源重组功能敲除从kil基因至Ⅳ基因长约2100bp的DNA序列，并用kil-N序列中含有的单一酶切位点Xho Ⅰ对混合质粒进行酶切，取酶切产物转化W3110感受态细胞，菌落PCR方法筛选重组阳性克隆。结果：在没有任何筛选标记的情况下，用菌落PCR方法从10个菌落中成功挑选出1个重组阳性克隆。结论：该方法操作简单、精确，能够避免引入新突变。为DNA序列的缺失突变提供了一种新方法。     

应用原位逆转录PCR 检测石蜡切片中HCV RNA

目的：检测石蜡包埋组织中的HCV RNA。方法：原位PCR是一种能够检测单拷贝、低拷贝（20bp）DNA或RNA序列的新技术，本研究应用原位逆转录PCR检测石蜡包埋人肝外胆管癌组织中的HCV RNA。结论和结论：（1）基因组DNA去除一定要彻底。（2）选择合适的逆转录酶。（3）用原位PCR仪专用的封片装置封好，以防扩增液流出。（4）无水乙醇后固定10min防止扩增产物扩散。（5）对于不同组织来源的DNA或RNA进行原位PCR扩增的次数不同，不是循环次数越多越好，次数增多有可能使扩增产物从细胞内溢出，增加非特异性。     

水通道蛋白1在肾癌介入治疗前后的表达及其意义

目的 探讨介入治疗对肾癌中水通道蛋白1（aquaporin1，AQP1）表达的影响及意义。方法 取术前行肾动脉化疗栓塞的肾癌标本15例，术前未行肾动脉化疗栓塞的肾癌标本12例及肾正常组织12例，分别应用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）、免疫印迹法（western blot）及免疫组织化学（简称免疫组化）法检测AQP1在不同组织中的表达。结果 AQP1表达于正常肾的肾小球毛细血管内皮细胞及近曲小管的上皮细胞，肾癌组织的癌细胞及毛细血管内皮细胞。与肾正常组织相比，未行肾动脉化疗栓塞肾癌组织中AQP1阳性表达量明显减少，RT—PCR法AQP1与β-肌动蛋白（β—actin）灰度比值中位数分别为0935及0855；免疫印迹法示AQP1阳性灰度值中位数分别为1258及1474；免疫组化示AQP1阳性指数分别为131及108，P值均〈0.01，差异有统计学意义。行肾动脉化疗栓塞的肾癌组织同未行肾动脉化疗栓塞的肾癌标本相比，AQP1的表达明显减少，RT—PCR示AQP1与β—actin阳性灰度比值中位数为0810；免疫印迹法示AQP1阳性灰度值为1597；免疫组化示AQP1阳性指数为082，P值均〈0.05，差异有统计学意义。结论 介入治疗可以降低AQP1在肾癌中的表达，抑制肾癌的生长和转移。     

PCR法检测慢性乙肝患者外周血单个核细胞中HBV-DNA

目的：了解慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞（PBMCs）HBV的感染情况及其与血清HBV的关系。方法：采用聚合酶链反应（PCR）检测55例慢性乙型肝炎患者PBMCs和血清中HBV。结果：PBMCsHBV－DNA检出率为69％（38例／55例），血清HBV－DNA检出蓄为36％（20例／55例），PBMCsHBV－DNA与血清HBV－DNA无一致性，P＜0．05，PCR法检测慢性乙型肝炎患者HBV－DNA、PBMCs检出率优于血清检出率，P＜0．05。结论：在慢性乙型肝炎患者中，PBMCs存在HBV－DNA。     

乙肝病毒前S1抗原、乙肝病毒血清标志物和HBV—DNA联合检测的临床应用

目的探讨乙肝病毒前S1抗原（PreS1）、乙肝病毒标志物（HBVM）与乙肝病毒DNA（HBV—DNA）检测三者之间的关系，判断乙肝病毒在体内的复制情况。方法对550例乙型肝炎患者血清，用ELISA方法检测PreS1、两对半标志物，用荧光定量PCR方法定量检测HBV—DNA并分析3者之间的关系。结果HBsAg（＋）、HBeAg（＋）、HBcAb（＋）的模式中，PreS1与HBV-DNA检出率分别为5213％与88．4％，HBsAg（＋）、HbeAb（＋）、HBcAb（＋）的模式中PreS1和HBV—DNA检出率分别为31．1％和47．5％，HBsAg（＋）、HBcAb（＋）的模式中PreS1和HBV-DNA检出率分别为47.3％和63．4％。结论PreS1能较好的反映HBV病毒感染及复制情况，可作为一种新的HBV血清标志物和监测指标，三者联合检测互相补充，更有助于临床疾病的诊治。