人骨形成蛋白-2诱导人脑胶质瘤细胞凋亡的实验研究

目的 探讨重组人骨形成蛋白－２（ｒｈＢＭＰ－２）对体内、外人脑胶质瘤ＳＨＧ４４细胞生物学特性的影响。方法 绘制ｒｈＢＭＰ－２作用前、后的ＳＨＧ４４细胞生长曲线,ＭＴＴ法测定ｒｈＢＭＰ－２对ＳＨＧ４４细胞增殖的作用;以流式细胞仪、电镜和琼脂糖凝胶电泳分别检测其细胞周期、超微结构和ＤＮＡ片段改变;观察局部注射ｒｈＢＭＰ－２对裸鼠皮下ＳＨＧ４４胶质瘤增长的影响。结果 流式细胞检测显示,ｒｈＢＭＰ－２可抑     

重组人骨形成蛋白-2

1　概　　述骨形成蛋白(bonemorphogeneticpro-tein,BMP)所具有的独特的诱导成骨活性,决定了它在修复骨质缺损和促进骨折愈合等方面可以发挥重要作用〔1〕。目前,人们已从多种动物如牛、猪、羊、兔、鼠、猴和人等的骨基质中分离出BMP〔2〕。不同动物来源的BMP有较高的同源性,具有跨种诱导成骨能力,从动物骨基质中提取的BMP也能在人体内诱导骨质生成,因而近年来已有一些将动物来源的BMP试用于临床的报道。但是,动物来源的BMP毕竟不是人类自身的蛋白质,尽管其免疫原性弱,在人体内还是会引起一定的免疫反应,而且它与人类自身的BMP在诱…     

99mTc-MDP放射性骨显像观察重组人骨形成蛋白-2与珊瑚人工骨修复牙槽骨缺损

目的：探讨应用^99mTc-MDP放射性骨显像观察重组人骨形成蛋白－2与珊瑚人工骨在牙槽骨缺损修复中成活和成骨效果的价值。方法：拔除12只成年狗两侧上颌第2及第3切牙，并去除牙槽窝之间的牙槽间隔，一侧随即植入复合骨，对侧植入珊瑚人工骨（珊瑚骨）作为对照。并与植入后4，8，12周取材，采用组织学观察、图像分析和^99mTc-MDP核素骨显像等方法比较两种植入材料在牙槽窝中的骨修复能力。结果：复合骨植入牙槽骨后，材料被逐渐降解吸收，新骨不断生成，12周后，植入材料完全被成熟的骨组织取代；图像分析结果显示不同时间复合骨组新骨形成的比值显著高于珊瑚骨组（P＜0．05）；4和8周复合骨组核素浓聚程度高于珊瑚骨组，12周两组核素浓聚程度差异不明显。结论：^99mTc-MDP放射性骨显像能早期判断移植骨的成活情况及成骨效果。     

人骨形成蛋白2，3成熟肽削短／突变体的表达及其诱骨活性

0　引言　骨形成蛋白 [1 ] (bone morphogenetic proteins,BMPs)是属于 TGF-β超家族的成员 ,目前已有 18个 h BMP基因被克隆 .除 BMP- 1外 ,其他 BMPs在胚胎时期骨组织分化发育、成年骨损伤修复、胚胎发育期中胚层的诱导和分化以及神经系统的发育和修复等方面都起着重要作用 [2 - 4 ] ,因而BMPs有十分乐观的临床应用前景 .利用 E.coli表达的不同的长于成熟肽的羧端肽经复性后均具有不同程度诱骨活性 [5 ,6 ] ,但对短于成熟肽的肽段及其氨基酸组成与其生物学活性的关系 ,尚未见报道 .在上述工作的基础上 ,本研究在大肠杆菌中表达削…     

抑制热休克蛋白70表达对人脑胶质瘤细胞生长的影响

目的：探讨抑制热休克蛋白７０（ＨＳＰ７０）表达对脑胶质瘤细胞增殖及凋亡的影响。方法利用细胞培养,电子显微镜及流式细胞仪的方法,观察民ＨＳＰ７０表达后对细胞生长的影响。结果体外培养脑胶质细胞株,经不同浓度槲皮素作用不同时间后,碘化丙碇染色荧光显微镜观察发现细胞核固缩、致密和碎裂现象;流式细胞检测发现亚二倍体峰,提示出现细胞凋亡。分析细胞周期,发现凋亡细胞主要出现在Ｇ０－Ｇ１期,随药物浓度的增加而增加     

重组人骨形成蛋白－2与异种骨复合移植的扫描电镜观察

目的：明确含有重组人骨形成蛋白－２（ｒｈＢＭＰ－２）的新型复合异种骨的骨修复能力。方法：将ｒｈＢＭＰ－２与经综合化学处理的新生小羊骨松质（ＣＢ）结合，制备成复合异种骨．将复合异种骨植人兔下颌骨缺损，并以单纯松质骨移植、自体骨移植作为对照组，术后２、４、８、１２周分别取材做扫描电镜观察。结果：复合异种骨移植后，植骨区有大量新骨形成，新骨的量随移植时间延长而逐渐增多。自体骨移植组扫描电镜下表现与复合异种骨组基本相同。而单纯骨松质载体移植后，植入区多为纤维结缔组织，新骨形成少．结论：ｒｈＢＭＰ－２可显著促进复合异种骨内的新骨形成。这种新型复合异种骨可能是一种较理想的植骨材料，可望用于人体植骨     

重组人骨形成蛋白-2和珊瑚复合移植的动物实验研究

目的 :评价重组人骨形成蛋白 - 2 ( rh BMP- 2 ) /珊瑚复合人工骨的骨诱导活性和骨修复能力。　 方法 :rh BMP- 2和珊瑚以一定的方式复合后 ,植入小鼠股部肌袋和兔颅骨标准大小缺损 ,以单纯珊瑚植入作对照。术后不同时间取材 ,通过组织学方法检测其骨诱导活性和骨修复能力。　结果 :复合人工骨植入小鼠肌袋 1周诱导软骨形成 ;3周形成编织骨 ;6周形成含骨髓的板层骨 ,同时珊瑚被部分降解吸收 ;复合人工骨植入兔颅骨缺损后 ,以引导成骨和诱导成骨双重机理完成骨修复过程。术后 12周 ,植入物完全被成熟的骨组织取代 ,其骨修复效果明显优于单纯的珊瑚。　 结论 :此复合人工骨具有骨传导和骨诱导活性 ,骨修复能力较强 ,是一种比较理想的新型生物性植骨材料     

人骨形成蛋白-2和透明质酸对脑胶质细胞瘤侵袭性的影响

目的 探讨人骨形成蛋白-2(rhBMP-2)和透明质酸(HA)对C6胶质细胞瘤体内侵袭的影响。方法 将携带增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的pEGFP-N3质粒体外转染C6胶质瘤细胞,将C6阳性克隆以立体定向法植入SD大鼠脑实质内,建立大鼠胶质瘤移植模型。移植瘤区给予不同剂量的rhBMP-2和HA,用病理检查、流式细胞计数、荧光显微镜及电子显微镜观察rhBMP-2和HA对胶质瘤侵袭的影响。结果 稳定转染EGFP基因的C6瘤细胞于体内、外均可发出绿色荧光,在荧光显微镜下易于区分肿瘤与非肿瘤区,并能检测到少量C6瘤细胞的远处侵袭性生长。10μl的5μg／ml rhBMP-2可明显抑制肿瘤体内侵袭;而10μl的100μg／ml HA则具有相反的作用。结论 EGFP标记的C6瘤细胞移植于大鼠脑内,可建成稳定的脑胶质细胞瘤体内侵袭动物模型。rhBMP-2降低了C6瘤细胞的体内侵袭性,而HA则明显促进了其体内侵袭作用。     

人骨形成蛋白2和人骨形成蛋白7成熟肽编码区基因克隆和真核表达载体的构建

目的克隆和构建人骨形成蛋白2(BMP-2)和人骨形成蛋白7(BMP-7)成熟肽真核表达载体。方法采用Trizol法从人骨肉瘤细胞中提取制备总RNA,利用RT-PCR、PCR转录、扩增BMP-2和BMP-7获得成熟肽基因,与真核表达载体pcDNA3.1(+)连接,构建真核表达重组子pcDNA3.1(+)/BMP-2MP和pcDNA3.1(+)/BMP-7MP。结果总RNA提取液电泳可见在28S、18S和5S处出现明显的条带,PCR和酶切可在439bp和364bp出现条带,阳性克隆测序结果与Genebank中登录的序列一致。结论成功克隆出人BMP-2MP和BMP-7MP基因,成熟肽基因已与pcDNA3.1(+)连接,成功构建其真核表达重组子pcDNA3.1/BMP-2MP和pcDNA3.1/BMP-7MP,为进一步研究BMP-2、BMP-7的功能及其成熟肽基因在骨髓间充质细胞(hMSCs)中表达以及在骨组织工程中的应用研究奠定了基础。     

重组人骨形成蛋白-2促进兔下颌牵张成骨的实验研究

目的：研究重组人骨形成蛋白-2（recombinant human bone morphogenetic protein-2,rhBMP-2）对兔下颌牵张成骨的作用。方法：建立兔下颌双侧牵张成骨动物模型．于下颌右侧骨断端间植入含有rhBMP-2的可吸收胶原海绵（absorbable collagen sponge,ACS）,左侧单纯应用ACS作为对照。分别于固定期第3、5周末处死动物。取标本行X线及组织学观察。结果：应用rhBMP-2侧新骨形成的速度以及骨小梁的密度均高于对照。结论：局部应用rhBMP-2能够提高牵张区新骨形成的速度和质量．对下颌牵张成骨具有促进作用。     

Inhibitory effects and mechanism of rhBMP-2 on the proliferation of SHG44 human glioma cells

Bone morphogenetic protein (BMP) has been denominated by its artivity of inducing bone formation. Re-cently, it was found to be a multifunctional factor andhave a key role in the regulation of elnbmpis andembryo deVelopment, hssue and cell ~ation andPndiferation. BMP could also inhibit many kinds of tumorcell growth and induce their apoptOSisL',']. the of BMPgenes were successop cloned and ~ssed in aam,such as BMP-2, BMP4 and BMP-7. The bone ~C Pmtein-2 is a htllnan P~ exPansed in vi…     

西瑞香素对人肝癌HepG2细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响

目的 探讨西瑞香素对人肝癌HepG2细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响.方法 用不同浓度的西瑞香素作用于体外培养的HepG2细胞,采用四甲基偶氮唑蓝法（MTT）检测西瑞香素对HepG2细胞增殖抑制能力;采用AnnexinV/PI双染流式细胞术测定西瑞香素对HepG2细胞凋亡的影响;采用PI单染流式细胞术检测西瑞香素对HepG2细胞周期的影响.结果 西瑞香素可抑制HepG2细胞的增殖,且存在明显的浓度和时间依赖关系;流式细胞术检测显示西瑞香素作用48 h后,实验组细胞未出现明显的早期凋亡细胞群.但实验组处于S期的细胞数较对照组明显减少（P＜0.05）,G0/G1期的细胞较对照组明显增多（P＜0.05）.结论 西瑞香素对人肝癌HepG2细胞的体外增殖具有抑制作用,可能与阻滞细胞周期有关.     

环孢素对体外培养人系膜细胞增殖、凋亡及细胞周期影响的研究

目的 观察环孢素A对系膜细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响.方法 对体外培养的人肾小球系膜细胞分别加入0.01,0.1,1,2,5 μmol/L的环孢素A,药物作用24 h,48 h,72 h后用MTT法检测细胞增殖,药物作用48 h后采用流式细胞仪检测细胞周期及凋亡,同时每种方法均设立对照组(不加药物干预组).结果 ①环孢素A能时间、剂量依赖性地抑制系膜细胞增殖,以72 h抑制作用最为明显;不同药物浓度在作用24 h,48 h,72 h后,系膜细胞增殖与对照相比差异均具有统计学意义(P<0.05);②环孢素A可阻滞细胞周期,使G0/G1期细胞增多,S期细胞减少,且随着药物浓度的增加,G0/G1期所占百分比逐渐增高,S期所占百分比逐渐降低,且其差异与对照相比具有统计学意义(P<0.05);③高浓度环孢素A可促进系膜细胞的凋亡.结论 环孢素A可显著抑制系膜细胞增殖,使系膜细胞阻滞于G0/G1期;并且环孢素A有诱导系膜细胞凋亡的作用.     

模拟CO2气腹对人胃癌MKN-45细胞增殖和细胞周期的影响

目的 通过建立体外模拟CO2气腹环境,研究CO2气腹对人胃癌MKN-45细胞增殖和细胞周期的影响。方法 建立体外模拟CO2的气腹环境,在全自动气腹机作用下维持密闭培养箱内压力为12mmHg,作用时间4h。处理后用MTT法检测细胞增殖情况;通过流式细胞仪观察细胞周期变化。结果 MTT法检测细胞增殖结果显示,气腹组人胃癌MKN-45细胞的增殖速度与对照组比较无显著性差异（P〉0．05）;流式细胞仪检测人胃癌MKN-45细胞周期,CO2气腹组增殖指数与对照组比较无显著性差异（P〉0．05）。结论 体外模拟持续12mmHg CO2气腹环境,连续对人胃癌MNK-45细胞作用4h,不会促进胃癌细胞的增殖和生长。     

Genistein抑制Livin基因对恶性黑色素瘤LiBr细胞凋亡、周期及增殖的影响

目的观察genistein抑制Livin基因对恶性黑色素瘤LiBr细胞凋亡、周期及增殖的影响。方法应用RT-PCR检测不同浓度genistein作用LiBr细胞48 h后Livin的表达变化;取最适浓度的genistein作用LiBr细胞后应用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测其对细胞凋亡的影响,应用PI单染流式细胞术分析对细胞周期的改变,应用Western blot检测其对凋亡效应蛋白Ccaspase-3表达的影响及应用MTT比色法检测其对细胞增殖的作用。结果 Genistein可增加LiBr细胞早、晚期凋亡率[分别为(27.87±5.38)%和(11.87±3.86)%],诱导LiBr细胞凋亡(P<0.01);引起细胞G0/G1期阻滞[G0/G1=(72.11±5.89)%、S=(14.53±3.47)%、G2/M=(12.36±2.64)%];下调caspase-3蛋白表达及抑制细胞增殖(P<0.01)。结论 Genistein可诱导LiBr细胞凋亡、使细胞增殖周期进展受阻、抑制细胞增殖。     

三氧化二砷对人脑胶质瘤SHG44细胞放射增敏作用的研究

目的研究三氧化二砷(As2O3)对人脑胶质瘤SHG44细胞的放射增敏作用。方法以SHG44细胞为实验对象,3 H-TdR掺入法检测SHG44细胞DNA的合成率;流式细胞法检测细胞的周期分布。结果 As2O3与照射联合作用于SHG44细胞,表现为剂量-生存曲线左移,2Gy剂量照射下的存活分数(SF2)下降,平均致死剂量(D0)减低,准阈剂量(Dq)变小,细胞的放射敏感性明显增强;As2O3影响细胞周期再分布,对射线敏感的G2/M期细胞比例增加,对射线抗拒的S期细胞比例减少。结论 As2O3能增加SHG44细胞的放射敏感性,其机制可能与诱导细胞凋亡、影响细胞周期再分布有关。     

人疱疹病毒6B感染对Molt3细胞增殖和细胞周期的影响

目的 :研究人疱疹病毒(human herpesvirus,HHV)6B感染T淋巴细胞系Molt3后对其细胞增殖和周期的影响。方法 :HHV-6B感染Molt3细胞后,倒置显微镜观察细胞形态变化,PCR鉴定Molt3细胞中HHV-6 U22基因,间接免疫荧光及Western blot检测HHV-6蛋白表达;MTT检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期变化,荧光定量PCR检测细胞周期相关蛋白m RNA水平变化。结果:HHV-6B感染48 h后,Molt3细胞出现典型细胞病变。PCR检测到感染组细胞中含有HHV-6 U22基因,间接免疫荧光及Western blot均检测到HHV-6蛋白表达。MTT显示HHV-6B能明显抑制Molt3细胞的增殖。HHV-6B感染后Molt3细胞周期发生改变,与对照组相比,感染组细胞G1期增多,S期和G2期减少。实时荧光定量PCR表明HHV-6B感染后cyclin E1m RNA水平降低,p53 m RNA水平升高。结论:HHV-6B能够有效感染Molt3细胞引起典型的细胞病变效应,HHV-6B感染使细胞周期阻滞在G1期从而抑制细胞增殖。     

腺苷对人肺腺癌细胞A549增殖和细胞周期的影响

目的：探讨腺苷对人肺腺癌细胞株A549增殖和细胞周期的影响。方法：体外培养肺腺癌细胞株A549,采用RT-PCR方法检测腺苷受体mRNA在A549细胞中的表达情况。以0、1、10、100和1 000μmol/L的腺苷分别作用A549细胞24、48和72 h后,采用MTT方法检测细胞光密度值,分析不同时间、不同浓度的腺苷对A549细胞存活率的影响。以100μmol/L的腺苷作用A549细胞24 h,采用流式细胞术检测其细胞周期。对上述所得数据进行单因素方差分析和独立样本t检验。结果：四种腺苷受体A1、A2A、A2B和A3在A549细胞中均有表达。MTT结果显示,作用时间24 h,各腺苷处理组（1、10、100和1 000μmol/L）细胞存活率分别为91%、84%、80%、73%;作用时间48 h,各腺苷处理组细胞存活率分别为82%、69%、58%、55%;作用时间72 h,各腺苷处理组细胞存活率分别为86%、56%、52%、38%,表明腺苷对A549细胞具有生长抑制效应,抑制率随着腺苷浓度升高而增强。与对照组相比,100μmol/L腺苷作用于A549细胞24 h后,能增加G1期细胞比例（对照组：59.07±0.70;100μmol/L：65.05±0.62,t=-11.04,P〈0.01）,并减少G2期细胞比例（对照组：6.67±0.95;100μmol/L：1.29±0.43,t=8.89,P〈0.01）。结论：腺苷能够抑制人肺腺癌细胞A549的生长,并改变其细胞周期分布。     

党参皂苷D对HepG-2细胞增殖时间效应和细胞周期的影响

目的：观察党参皂苷D对HepG-2细胞增殖时间效应和细胞周期的影响,探讨轮叶党参抗癌活性成分及作用机制。方法：不同浓度（5、10、15、20和25 mg/L）党参皂苷D作用于体外培养的人肝癌HepG-2细胞,同时设空白对照组;采用 MTT法检测党参皂苷D对HepG-2细胞增殖抑制情况,流式细胞术检测细胞周期变化。结果：25 mg/L党参皂苷D作用12、24、48
和72 h后,HepG-2细胞增殖抑制率均明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。党参皂苷D作用48、72、96及120 h后,各组细胞总数明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);党参皂苷D 5、15、20及25 mg/L组间比较,差异有统计学意义(P<0.05),且随着党参皂苷D浓度增加,HepG-2细胞增殖速度缓慢。细胞周期检测结果表明,党参皂苷D浓度为10、15、20和25 mg/L时,G0/G1期细胞所占百分比分别为55.97%±0.42%、57.16%±0.13%、57.48%±0.15%及60.39%±0.32%,与空白对照组（53.22%±0.28%）比较,差异均有统计学意义（P<0.05）;此浓度范围内S期细胞所占百分比分别为27.47%±1.42%、26.15%±2.71%、26.34%±0.67%及24.81%±0.46%,与空白对照组（33.47%±0.25%）比较,差异均有统计学意义（P<0.05）。党参皂苷D组的细胞周期发生了G0/G1期阻滞。结论：党参皂苷D在体外明显抑制HepG-2细胞生长,并能引起癌细胞DNA合成代谢紊乱。