分泌抗斯氏肺吸虫代谢抗原单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

<正> 本文用斯氏肺吸虫代谢抗原免疫的BALB/c小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,首次成功地获得了2株分泌抗斯氏肺吸虫代谢抗原单克隆抗体的杂交瘤细胞B_1-3B_4和C_2-3C。 在培养皿中收集斯氏肺吸虫代谢产物,经透析、     

分泌抗蛇毒磷酸二酯酶单克隆抗体的杂交瘤细胞株的建立

<正> 从本校蛇园饲养的浙江产蝮蛇中挤压毒腺采毒,经冰冻真空干燥,然后经离子交换,凝胶过滤收集磷酸二酯酶活性峰的中央部份,经浓缩,冰冻干燥成纯化的蝮蛇毒磷酸二酯酶,再经盘状聚丙烯酰胺凝胶电泳检查抗原的纯度,结果表现出一条十分明显的蛋白区带,而未经提纯的抗原有11条区带,用     

分泌型抗体和免疫球蛋白的计算

现已证实大多数分泌物中含有较多的分泌型IgA抗体。但近年来研究结果表明,变态个体的鼻粘膜能将IgE分泌到鼻的分泌物和血流中。另外还发现免疫治疗后鼻粘膜能产生IgG和IgA抗体,而且目前用各种花粉抽取物进行鼻内免疫疗法的研究,使人们对鼻分泌物中IgG和IgA封闭型抗体的准确定量增强了兴趣。除测定鼻粘膜分泌到鼻分泌物中的各类抗体外,应对目前用于收集鼻分泌物的不完善方法加以改进以纠正收集效率的不稳定性。现存方法的审定     

分泌抗斯氏肺吸虫代谢抗原单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

<正> 本文用斯氏肺吸虫代谢抗原免疫的BALB/c小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,首次成功地获得了2株分泌抗斯氏肺吸虫代谢抗原单克隆抗体的杂交瘤细胞D_1—3B_4和G_2—3C_4。 在培养皿中收集斯氏肺吸虫代谢产物,经透析、浓缩,测蛋白含量为2.4mg/ml。用此抗原(0.1ml)与等量福氏完全佐剂经腹腔及皮下免疫BALB/c小鼠,每隔3周一次,共三次。末次免疫后10天用单纯代谢抗原0.1ml注入尾静脉一次,融合前3天再从尾静脉加强免疫一次。取对数生长期的SP2/0小鼠骨髓瘤细胞和免疫小鼠脾细胞以1:5比例混合,用     

登革病毒感染对人血管内皮细胞PGIS表达及PGI2分泌的影响

目的：研究登革病毒感染对人血管内皮细胞分泌血管活性物质前列环素（PGI2）的影响,以了解登革出血热/登革休克综合征（DHF/DSS）的发病机制。方法：用登革病毒Ⅱ型感染人脐静脉内皮细胞（HUVEC）,于感染后6、12、24、48、72、96h,分别收集病毒感染的HUVEC,用RT-PCR检测细胞内前列环素合酶（PGIS） mRNA的水平;分别收集病毒感染的上清液,用放射免疫检测法测定PGI2的含量。结果：登革病毒感染可使PGIS mRNA的水平增高,导致HUVEC分泌PGI2的量明显升高。在病毒感染后48、72、96h,与对照组比较HUVEC表达PGISmRNA的水平和HUVEC分泌PGI2的量明显升高（P〈0.05）。结论：DV2感染可显著上调HUVEC中PGIS mRNA转录及PGI2的分泌,导致登革病毒所致血管内皮细胞的功能障碍,可能与DHF/DSS的发病机制有关。     

宫颈癌细胞通过分泌TSLP促进自身细胞活力

目的:探讨胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)对宫颈癌细胞活力的自分泌调节作用。方法:体外培养宫颈癌细胞株HeLa和CasKi,分别收集培养24、48和72小时的培养上清,ELISA法检测培养上清中TSLP的分泌水平;流式细胞术分析HeLa和CasKi细胞表面TSLP受体(TSLPR)的表达水平;再用MTT法分别检测HeLa和CasKi细胞经人重组细胞因子TSLP(1、10和100 ng/ml)处理24、48和72小时后细胞活力的水平变化。结果:HeLa和CasKi细胞均呈时间依赖性分泌TSLP(P<0.01),且HeLa细胞在24和48小时分泌TSLP的水平高于CasKi细胞(P<0.01或P<0.05);HeLa和CasKi细胞TSLPR阳性表达率分别为23.61±1.30和27.07±2.13,前者低于后者(P<0.05);此外,10或100 ng/ml TSLP作用HeLa和CasKi细胞48小时或72小时均能上调其细胞活力(P<0.05)。结论:宫颈癌细胞可能通过TSLP自分泌作用促进自身的活力,进而利于宫颈癌细胞的生长,因而参与宫颈癌的发病和进展。     

TNF刺激肥大细胞IL-6分泌的信号转导通路

目的:检测TNF对肥大细胞IL-6、IL-10分泌和组胺释放的影响并探讨其可能的信号转导途径。方法:用不同浓度TNF激发肥大细胞系P815后收集细胞和上清,细胞用细胞激发信号ELISA(CASE)方法检测信号转导通路蛋白ERK、p38、和STAT3磷酸化水平,上清用ELISA检测组胺、IL-6和IL-10的水平。结果:ELISA结果显示TNF促进P815肥大细胞IL-6分泌(P<0.05),但对IL-10分泌和组胺释放无明显影响。ERK信号转导通路抑制剂PD98059和U0126抑制TNF引起的P815肥大细胞IL-6分泌(P<0.05),而p38信号转导通路抑制剂SB203580和STAT3信号转导通路抑制剂AG490不能抑制TNF引起的P815肥大细胞IL-6分泌。CASE结果显示ERK信号转导通路抑制剂PD98059,U0126抑制TNF引起的P815肥大细胞内ERK蛋白磷酸化(P<0.05)而p38信号转导通路抑制剂SB203580和STAT3信号转导通路抑制剂AG490不能抑制TNF引起的P815肥大细胞内p38和STAT3蛋白磷酸化。结论:TNF刺激小鼠肥大细胞P815分泌IL-6可能与ERK信号转导通路的激活有关的。     

垂体ACTH分泌瘤分泌调节的体外研究

本文对来源于柯兴氏病病人2例单纯垂体人CTH瘤用单层细胞培养的方法,以N-POMC作为ACTH分泌的指标,详细研亢了癌细胞ACTH分泌的调节。结果丧明cRH和AVP均能兴奋N-POMC分泌,并有协同作用;皮质醇对ACTH瘸细胞N-POMC分泌不抑制反使其分泌反常增加,表明皮质醇对AcTH分泌的负反馈调节消失;β-内啡肽对ACTH瘤细胞有直接兴奋N-POMC允泌的作用,这种作用可被纳洛酮阻断;GHRH_(1-44)、SRIF、AT_Ⅱ和VIP对N-POMC分泌无明显影响。     

机械牵张对大鼠心室肌蛋白激酶B磷酸化及心钠素分泌的影响

目的:研究机械牵张对大鼠心肌蛋白激酶B(Akt)活化和心钠素(ANF)分泌的影响。方法:采用Langendorff方法灌流大鼠心脏,膨胀球囊持续牵张左心室,从左心室游离心肌,提取胞浆蛋白,用Western blot检测磷酸化Akt、总Akt水平;收集冠脉流出液,用放射免疫分析法检测冠脉流出液中ANF含量。结果:持续牵张不影响灌流心脏的心率和冠脉流出量。但经过20min持续牵张,牵张组心脏灌流液中ANF含量(209.89±65.45pg/ml)较对照组(108.84±25.18pg/ml)明显增高(P<0.01);牵张组大鼠左心室心肌组织磷酸化Akt水平(0.76±0.03)明显高于对照组(0.32±0.02),而总Akt水平与对照组相比无显著性差异。结论:机械牵张可引起心脏心钠素的分泌增加,其机制可能与胞内Akt信号通路的激活有关。     

分泌旋毛虫McAb杂交瘤细胞株的建立

<正> 用旋毛虫肌幼虫可溶性抗原免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与骨髓瘤细胞NS-1系融合,用50％的PEG(MW4,000)作融合剂,融合率达B2.8％。用ELISA间接法和环蚴沉淀试验检测培养上清,共获得抗体     

NIV毒素和硒对软骨细胞IL-1β、TNF-α分泌的影响

目的:通过测定NIV毒素和硒作用下软骨细胞IL-1β、TNF-α含量的变化,从细胞因子角度探讨大骨节病发病机制。方法:在体外单层和立体培养的人胚软骨细胞中加入NIV毒素和硒,构建软骨损伤模型,收集软骨组织、细胞和细胞培养液,用光学显微镜观察体外构建组织的形态;用分光光度法测定软骨细胞DNA含量;用酶联免疫吸附方法(ELISA)检测细胞培养液中IL-1β、TNF-α的水平。结果:形态学观察发现NIV毒素能抑制软骨细胞生长,局部出现点片状坏死;毒素加硒后,上述损伤变化减弱。NIV毒素作用下软骨细胞DNA的合成受到抑制,但培养液中IL-1β、TNF-α含量显著升高,毒素加硒与毒素组变化趋势一致,但数值略下降。结论:NIV毒素能诱导软骨细胞IL-1β与TNF-α的分泌,这可能是造成软骨细胞损伤的原因之一。     

夹闭大鼠双侧颈总动脉对胃酸分泌的影响

用动脉夹夹闭麻醉大鼠双侧颈总动脉致脑供血不足,观察了脑供血不足后胃酸分泌量的变化。经食道插管向胃内输入生理盐水(37℃,pH=7.0),由幽门插管收集灌流液,每15min收集1个样品,用5mmol/LNaOH滴定灌流液中的H 分泌量。比较夹闭双侧颈总动脉前45min、夹闭45min期间以及恢复脑供血45min胃酸分泌量的变化。结果表明:夹闭双侧颈总动脉期间胃酸分泌量显著增多(由夹闭前的6.06μmol/15min,增加到夹闭期间的7.59μmol/15min,P<0.01);恢复供血后与夹闭前相比胃酸分泌量无显著变化(夹闭前6.06μmol/15min,恢复供血后5.67μmol/15min,P>0.05)。这些结果说明:夹闭双侧颈总动脉造成脑供血不足可增加胃酸的分泌。     

中性粒细胞分泌MMP-2和MMP-9发挥促肿瘤作用

目的肿瘤相关中性粒细胞(tumor-associated neutrophils,TANs)分为抗肿瘤的N1型和促肿瘤的N2型,N2型TANs的作用机制尚不清楚。本研究探讨以胃癌细胞培养上清模拟胃癌微环境或用干扰素β抗体抑制细胞干扰素β,能否诱导正常人中性粒细胞分泌基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase 9,MMP-9)和基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP-2),影响肿瘤的发生发展。方法收集51例正常人外周血,用中性粒细胞分离液分离中性粒细胞,分别用胃癌MGC-803细胞培养上清干预正常人中性粒细胞;用抗干扰素β(interferon beta,IFN-β)抗体干预正常人中性粒细胞。用Real-time PCR法检测2种干预前后中性粒细胞MMP-9和MMP-2 m RNA的变化,以ELISA法检测2种干预前后中性粒细胞分泌MMP-9和MMP-2的情况,明胶酶谱法检测2种干预前后中性粒细胞分泌的MMP-9和MMP-2的酶活性。结果中性粒细胞在MGC-803上清诱导下,MMP-9和MMP-2 m RNA水平、酶含量和酶活性均增加(P<0.01);中性粒细胞经抗IFN-β抗体干预后,MMP-9和MMP-2 m RNA水平、酶含量和酶活性亦显著高于对照组(P<0.01)。结论胃癌微环境或抑制干扰素β均可使中性粒细胞MMP-9和MMP-2分泌量和酶活性增加,促进肿瘤发展,发挥N2型TANs的作用。     

雌二醇通过调节上皮细胞系的旁分泌促进前列腺间质细胞增殖和分化

目的： 研究雌二醇通过调节上皮细胞的旁分泌对前列腺间质细胞增殖、分化和胞外基质蓄积的作用。方法： 雌二醇处理前列腺增生上皮细胞系BPH-1，用收集的条件培养液（CM）培养人前列腺间质细胞，MTT法检测细胞的增殖；用实时定量RT-PCR检测细胞中smoothelin、纤维黏连蛋白、Ⅳ型胶原和转化生长因子-β₁（TGF-β₁）mRNA的表达水平；用Western blotting检测细胞平滑肌肌球蛋白重链（SM-MHC）的表达；用放射性免疫法和ELISA分别检测Ⅳ型胶原、纤维黏连蛋白和TGF-β₁的蛋白水平。结果： 雌二醇能够上调BPH-1细胞中TGF-β₁的表达和分泌；经雌二醇刺激的BPH-1 CM能促进间质细胞的增殖；雌二醇刺激的BPH-1 CM对平滑肌细胞特异蛋白（smoothelin和SM-MHC）表达的促进作用较未经雌二醇刺激者更加明显；TGF-β₁中和抗体可以抑制BPH-1 CM对间质细胞中Ⅳ型胶原和SM-MHC的促表达作用。结论： BPH-1 可通过分泌TGF-β₁促进间质细胞的分化和胞外基质的蓄积；雌二醇可通过上调BPH-1 TGF-β₁的分泌进一步促进间质细胞的分化；雌二醇还可通过调节BPH-1分泌的某种活性因子促进间质细胞的增殖。     

Tubacin对β细胞葡萄糖刺激胰岛素分泌的影响

目的：观察去乙酰化酶HDAC6特异性抑制剂Tubacin对MIN6细胞胰岛素分泌的影响,并探讨其可能机制。方法：用RT－PCR检测去乙酰化酶家族成员在MIN6细胞的表达,用免疫荧光技术观察HDAC6在小鼠胰岛和MIN6细胞内的定位;分别在5．6mmol／L和25mmol／L葡萄糖的DMEM中加和不加10μmol／LTubacin,用其处理MIN6细胞24h,收集上清,ELISA检测胰岛素浓度。同时用MTT法检测Tubacin对MIN6细胞活力的影响,RT－PCR检测上述处理条件下Insulin基因的表达情况。以Westernblot和免疫荧光技术检测Tubacin对MIN6细胞骨架蛋白α－tubulin乙酰化水平的影响。结果：MIN6细胞中各乙酰化酶家族成员mRNA的表达水平相差较大,其中HDAC6表达相对较高。HDAC6主要表达于小鼠胰岛B细胞及MIN6细胞胞浆中。在5．6imnol／L和25mmol／L葡萄糖条件下,Tubaein处理24h可以显著抑制胰岛素分泌,但不影响MIN6细胞活力。同时,在5．6mmol／L葡萄糖存在条件下Tubacin不影响胰岛素基因表达,在25mmol／L葡萄糖存在条件下Tubacin可轻度上调胰岛素基因表达。Westernblot和免疫荧光结果发现,Tubacin抑制胰岛素分泌的同时伴有α—tubulin乙酰化水平增加。结论：HDAC6抑制剂Tubacin可能通过增加MIN6细胞d．tubulin乙酰化水平,改变细胞骨架的活动度而抑制胰岛素分泌。     

小梁细胞转移生长因子β_1 mRNA的表达和分泌

作者取猪眼球,在显微镜下分离虹膜、睫状体、小梁细胞,部分小梁组织培养。各组织块通过匀浆、离心得到mRNA。培养的小梁组织用磷酸缓冲液冲洗。细胞在avzian myelblastosis病毒逆转录酶作用下合成cDAN,PCR扩增,30bp的寡核苷酸探针行Southein blot。收集小梁细胞培养液,无血清培养8h,3次;再培养24h,3次。离心后用~(125)I-TGFβ_1测定。 结果发现,猪的小梁细胞含有TGF_1β_1 mRNA,能分泌和产生TGFβ_1。在磷酸缓冲液冲洗,无血清反复培养后培养液中测得的TGFβ_1不是血清携带的,而是小梁细胞自身分泌所致。     

~(60)钴-γ线照射对大鼠胃酸分泌的影响

电离辐射可以抑制胃分泌功能,特别是大剂量照射对胃酸分泌的抑制更为明显。本研究观察大鼠受不同剂量全身照射后不同时间胃酸基础分泌及组织胺刺激后胃酸分泌量的变化。 麻醉后大鼠用手术分别将多聚乙烯套管经口腔插入到胃内,经十二指肠幽门端插入胃内,用150mMNaCl溶液以2.2ml/15分钟速度灌注入胃,每隔15分钟收集流出液,用0.01NNaOH滴定到PH_7。结果表明,大鼠受1000,1500,5000拉德照后第二天胃酸分泌即开始下降。1000,1500拉德照后第     

分泌抗HCG单克隆抗体的杂交瘤细胞系

<正> 人绒毛膜促性腺激素(HCG)的免疫测定在妊娠诊断上有极其重要的作用。本工作目的是决定能否用单克隆抗体取代传统抗血清进行该项测定,为此我们进行了用杂交瘤技术制备抗HCG单克隆抗体的研究。 近交的BALB/c小鼠,以孕妇小便中提纯的HCG免疫,3天后,取脾细胞,与无分泌性的小鼠骨髓瘤细胞SP_2融合。聚乙二醇4,000为促触剂,融合率达100％。融合后10天,用HCG交联的胶乳作凝集试验,测定细胞培养上清液,阳性率为6％。取细胞生长好,阳性强的杂交瘤细胞克隆化四次以上,最后获得10个杂交     

脑脊液细胞中结核早期分泌性靶抗原6的检测及其早期诊断价值

目的探讨免疫荧光染色法检测脑脊液细胞中结核早期分泌性靶抗原6(ESAT-6)对结核性脑膜炎诊断的价值。方法收集36例确诊结核性脑膜炎患者的脑脊液为病例组,45例非结核性脑膜炎患者脑脊液为对照组。用双盲法对2组脑脊液细胞进行ESAT-6免疫荧光染色,统计分析灵敏度和特异度等。结果病例组ESAT-6存在于中性粒细胞、单核细胞及淋巴细胞中,对照组脑脊液细胞中无ESAT-6表达。灵敏度为88.89%、特异度为93.33%;阳性预测值为91.43%、阴性预测值为91.30%;阳性似然比为13.33、阴性似然比为0.12;Youden指数为82.22%,ROC曲线下面积为0.94。结论免疫荧光染色检测脑脊液细胞中ESAT-6的灵敏度及特异度均较高,是结核性脑膜炎诊断的有效方法。     

外源性人aFGF在内皮祖细胞中的分泌

目的:观察外源重组分泌型人酸性成纤维细胞生长因子(sp-aFGF)在内皮祖细胞(EPC)中的分泌。方法:以腺相关病毒为载体,将sp-aFGF基因和绿色荧光蛋白基因(GFP)分别导入内皮祖细胞中。收集转基因EPC和未转基因EPC培养液,用ELISA方法检测其中的aFGF蛋白,并比较3组细胞分泌的aFGF的量。结果:在感染细胞的第4天,转基因EPC出现绿色荧光。sp-aFGF-EPC组分泌的aFGF量显著高于GFP-EPC和EPC组[(862±49)ng/Lvs(115±16)ng/L,P<0.05;(862±49)ng/Lvs(98±10)ng/L,P<0.05)]。结论:在EPC中导入外源性sp-aFGF基因能增强人aFGF的分泌。