体外凝集和新鲜、液态保存及冷冻保存人类血小板血栓素A2产生之间的联系，激活剂、pH值、血浆和盐水重悬浮的影响

背景 检测新鲜以及保存的血小板的质量的方法已有不少，包括血小板的数量、形态学、血小板介质的pH值，低渗反应，以及激活剂引起的凝集。本研究的目的在于评估在体外受激活剂刺激后，产生凝集反应和血栓素A2，以评估新鲜的和保存后的血小板的功能。设计和方法经单采制备的血小板于22℃保存5天，然后于6％的二甲基亚砜冷冻保存于-80℃，经解冻、清洗、在保存介质中重新悬浮。测定激活剂、pH值和介质成分对血小板的凝集，以及对刺激后的血小板产生血栓素A2的影响。     

新鲜液体保存和低温保存的血小板:粘附性表面受体和膜促凝集活性

背景 一项人体研究表明,心肺旁路术前输注了冰冻血小板的患者术后血小板存活虽然减少,但其止血功能好于22℃液体保存3—4天的血小板。研究设计方法 此项研究对新鲜、3—4天液体保存和低温保存的人血小板的直接抗P-选择素单克隆抗体、糖蛋白(GP)Ib,活性GPⅡb/Ⅲa以及三色流式细胞计数法测定凝血因子Ⅴ进行了检测。结果 新鲜和液体保存的血小板,GPIb表面水平正常,而低温保存的血小板中含有明显不     

流式细胞术联合测定保存血小板表达的磷脂酰丝氨酸和CD62p

人类血小板通过不同的技术进行离体保存后，其特性改变差异较大。建立适用于各种保存血小板特性分析的流式细胞术（FCM）对保存血小板的质量监测和新保存方法研究有重要意义。本研究通过对FCM分析方法主要条件的优化评估，建立了联合测定血小板膜表面包括磷脂酰丝氨酸在内的多参数FCM定量分析方法。在标本制作中，血小板不需要洗涤即可直接进行标记，减少了血小板离心洗涤过程中的激活。除了FCM常用的同型对照外，中还将新鲜富含血小板血浆（FPRP）、凝血酶激活FPRP和液氮处理FPRP作为血小板标准阴性、阳性对照，直接应用于FCM分析，且效果良好。该方法中Gly-Pro-Arg-Pro乙酸盐（GPRP）的选择应用，既防上了血小板聚集和纤维蛋白的形成，同时可稳定血小板，减少制备过程中人为激活，克服了在血小板、Ca^2 和血浆共存条件下FCM定量分析血小板的困难，尤其是为深低温处理血小板包括PS在内的多参数分析提供了良好的方法基础。研究表明该方法标本处理简单，结果分析简便、准确，重复性好。作还通过低温、低渗或激活剂的方法制备了几种膜表面分子标记显不同的血小板应用于FCM分析，不仅证实了所建立的FCM分析方法在各种不同膜表面分子标记的血小板分析中的实用性，又表明了中制备的4种不同膜表面分子标记的血小板在FCM分析保存血小板方法学中的实用价值。     

改良血小板添加液低温(10℃)保存血小板的动物实验研究

目的对添加海藻糖的血小板添加液替代70%血浆冷藏的血小板进行动物体内输注效果评价。方法采集兔心脏血,按常规方法制备浓缩血小板,将浓缩血小板分3组保存。血浆常温组:添加100%血浆,22℃保存;添加液低温组:添加70%PAS-ⅢM/30%血浆,10℃保存;冰冻保存组:添加100%血浆,-85℃保存。以新鲜血小板为对照,常温血浆保存组在d 3,添加液低温保存组在d 3、7、9,冰冻保存组在d 20复苏后分别检测血小板缺乏兔模型的血小板24 h回收率和生存率。结果除保存9 d的添加液低温组血小板存活率明显低于新鲜血小板存活率(P<0.05)外,血浆常温组、添加液低温组以及新鲜血小板的24 h回收率和存活率相互比较差异均无显著统计学意义(P>0.05)。冰冻保存组血小板24 h回收率和存活率均低于其他各组(P<0.05)。结论改良的PAS-ⅢM能够替代血浆在低温条件下用于血小板的保存,能维持血小板的体内功能。     

保存前与保存后过滤减少WBC后的混合浓缩血小板的质量

背景 因白细胞对输血者有不良作用而一般都应用少白细胞浓缩血小板,但保存前与保存后去除白细胞对血小板制剂质量的影响尚不明确。研究设计和方法 使用白细胞滤器(PXL-8,Pall Corp)对保存前、后5天的混合浓缩血小板的进行过滤去除白细胞。从过滤前、后第1、第5天和保存第9天的浓缩血小板中取样,测定细胞计数、生化值、血小板糖蛋白表达,凝血酶生成和IL-6、IL-8、INF-α、转化生长因子-β1(TGF-β1)以及过敏毒素C3a和CAa浓度。结果 新鲜和保存5天的浓缩血     

以尿苷二磷酸半乳糖为添加剂冷藏兔血小板的研究

本研究探讨以尿苷二磷酸半乳糖(UDP-Gal)为添加剂的血小板冷藏保存方法。采集兔心脏血,按常规方法制备浓缩血小板悬液(PC),在悬液中添加UDP-Gal,放4℃冰箱储存10天。尔后观察血小板(Plt)数量?血小板平均体积(MPV)、血小板体积分布宽度(PDW)?血小板聚集功能(PagT)?血小板促凝活性实验(PF3aT和APCT)和血小板凋亡(apoptosis)的变化。将冷藏兔血小板用Cr51标记后,检测输入兔体内后的血小板生存时间。结果表明加入UDP-Gal冷藏保存10天后的PC的Plt、MPV、PDW、血小板促凝血活性与新鲜PC相比均无显著性变化(P(0.05);而冷藏对照PC的Plt明显减少,MPV、PDW显著增大,血小板促凝血活性减低,与新鲜PC相比差异有显著性(P>0.01);加入UDP-Gal的PC冷藏保存10天后的血小板凋亡率与新鲜PC相比有所增高(P(0.05),但明显低于冷藏对照组(P(0.01),其血小板聚集率(诱聚剂为阳离子没食子酸丙酯,C-PG)减低,但仍能保持在新鲜血小板的50%以上。添加UDP-Gal时冷藏保存10天的血小板与新鲜的血小板在体内的生存时间相近(P(0.05),输注兔体内72小时时的血小板存活率在新鲜对照组、UDP-Gal冷藏保存组和冷藏对照组分别为57.5%±7.2%、50.3%±6.3%和0.1%±0.5%。结论尿苷二磷酸半乳糖对冷藏保存的兔血小板有保护作用,并能延长冷藏兔血小板在体内的生存时间。     

去血浆血小板和保存前去白细胞血小板的急性反应率的一项随机对照研究

背景 输血前去除血小板血浆层可有效预防细胞因子引起的急性输血反应。保存前去白细胞血小板中由于去除了白细胞以及细胞因子未积聚在成分中,预防输血反应的效果更好。本研究评估了去血浆以及两种保存前去白细胞预防急性血小板输血反应方法的效果。研究设计和方法 输注血小板的患者为恶性血液病的成人,随机输注以下3种血小板之一:去除血浆层加入血小板保存液的血小板;全血制备的保存前用滤器去除白细胞     

冻干再水化人类血小板调节细胞内pH值

背景血小板在干燥状态下长期储存可大大改善血小板的保存期。本研究目的在于评估海藻糖-冻干及再水化过程是否调节血小板内pH值(pHi)。研究设计与方法先前的研究表明,人类血小板可在海藻糖存在条件下成功保存,用pH染料BCECF-AM标记海藻糖-冻干再水化血小板和新鲜对照血小板。测     

人和狒狒的新鲜及冻干复苏血小板的体外实验

背景人类新鲜的、以液态保存的和冰冻血小板表面的吸附受体、血小板膜促凝活性、血小板聚集和凝血恶烷产生已有研究,冻干保存血小板的方法已建立。本文报道研究人和狒狒的新鲜及冻干复苏血小板的测定方法。研究设计与方法人和     

白细胞过滤对冰冻保存浓缩血小板制剂细胞因子和血小板功能的影响

目的探讨白细胞过滤对浓缩血小板悬液(platelet concentrate suspend,PCs)在冰冻保存前后的一些细胞因子及血小板体外功能的影响。方法取25份浓缩血小板样品(40ml/份),将每份样品再等分为4份,其中2份白细胞过滤(过滤组),另2份不过滤(未过滤组);将过滤组和未过滤组的分别常规保存和冰冻保存。常规保存0、1、3d和冰冻保存3个月解冻后0、1、3d的所有样品均采用ELISA法测定IL-2、IL-6、INFγ-、TNF-α、IL-10的含量;对冰冻保存复溶后当天的样品和新鲜样品分别作血小板聚集功能、粘附功能及血小板第Ⅲ因子活性检测;采用配对t检验作统计分析。结果未过滤组PCs冰冻保存后复溶0d与常规保存0d的PCs细胞因子的水平无明显升高,两种条件保存后1、3d细胞因子的水平均显著升高;过滤组PCs在冰冻保存和常规保存时细胞因子均无显著变化。过滤组和未过滤组PCs经冰冻保存后的血小板体外功能活性均无明显变化。结论PCs中的细胞因子在常规保存及冰冻保存复溶后随时间延长呈显著性增加趋势,白细胞过滤可明显减轻这种效应。白细胞过滤对冰冻保存的血小板体外功能活性无明显影响。     

25Gy γ射线辐照对手工富集人血小板CD62p表达的影响

本研究观察25Gyγ射线照射对22℃保存条件下的手工富集血小板悬液不同保存期CD62p、血小板计数及平均血小板体积(MPV)的影响。将富浆法分离的16袋血小板,每袋平均分为两份,其中1袋经25Gy137铯γ射线辐照,另1份不辐照,然后按美国血库协会(AABB)标准保存72小时。经辐照的血小板作为观察组,未辐照的血小板作为对照组。流式细胞术检测两组血小板辐照前及保存24和72小时后P选择蛋白的表达水平;同时用血细胞计数仪检测血小板数和平均血小板体积(MPV)。结果表明:辐照组与对照组血小板表达CD62p百分率均随保存时间的延长而增高;保存24小时与新鲜血小板比较有显著性差异(p(0.05),保存72小时与保存24小时比较有非常显著性差异(p(0.01)。在保存24、72小时后,两组血小板CD62p表达率、血小板计数无显著差异(p0.05);但两组血小板在保存72小时后MPV与新鲜血小板比较有显著性差异(p(0.05)。结论:γ射线照射不影响血小板的数量和质量,但手工血小板液态储存时间应尽可能缩短。     

血小板4℃冷藏保存方法的实验研究

目的探讨以尿嘧啶二磷酸半乳糖为添加剂的血小板冷藏保存方法。方法采集兔心脏血,按常规方法制备浓缩血小板悬液(PCs),在悬液中添加5g/L的尿嘧啶二磷酸半乳糖(UDP-Gal),于37℃孵育2h后,放4℃冰箱储存10d。而后观察血小板(PLT)数量、血小板平均体积(MPV)、血小板体积分布宽度(PDW)、血小板聚集功能(PagF)、血小板促凝活性(APCT)和血小板膜AnnexinV结合率的变化;将添加UDP-Gal冷藏保存的兔血小板输入兔血小板减少症模型体内,检测输注后1h和24h兔耳出血时间和血小板回收率(PPR)。结果添加UDP-Gal冷藏保存10d的PCs中PLT数量、MPV、PDW、APCT与新鲜PCs相比,差异均无显著性(P>0.05);其血小板凋亡率与新鲜PCs相比有所增高,但显著低于冷藏对照组(P<0.01),血小板聚集率(诱聚剂为阳离子没食子酸丙酯,C-PG)减低,但仍能保持在新鲜血小板的50%以上;而冷藏对照PCs的PLT数量显著减少,MPV、PDW显著增大,且血小板促凝血活性减低,血小板PagF丧失。UDP-Gal冷藏保存的兔血小板可明显缩短兔耳出血时间(P<0.01),而冷藏对照PCs输注前后兔耳出血时间的变化无显著性(P>0.05);新鲜血小板组、UDP-Gal+冷藏血小板组、冷藏血小板对照组输入兔血小板减少症模型体内1h和24h的PPR分别是66.1%±0.5%、47.8%±0.6%,60.9%±0.3%、41.6%±0.4%、47.7%±0.5%、9.4%±0.5%,UDP-Gal+冷藏兔血小板组与新鲜兔血小板相比,其PPR的差异无显著性(P>0.05),UDP-Gal+冷藏兔血小板组和新鲜兔血小板组的PPR均显著高于冷藏血小板组(P<0.01)。结论添加尿嘧啶二磷酸半乳糖的兔血小板冷藏保存后的体内外功能良好。     

血小板冷冻保存的实验研究

本研究研制新型的血小板冷冻保存液,观察血小板在不同保存液冻存前、后的形态改变,以及体外受凝血酶作用下的活化状态,同时比较添加UDP-Gal对保存液保存效果的影响。在以往单一应用较高浓度的DMSO为血小板低温保存液的基础上,自行研制新型保存液：2%DMSO＋thrombosol＋UDP-Gal,在不同时间分别观察血小板形态及测定血小板膜表面糖蛋白CD62P的表达。结果显示,在圆形、树突形、不规则形态的百分比方面冷冻保存对血小板形态有显著影响,2%DMSO＋thrombosol组和2%DMSO＋thrombosol＋UDP-Gal组保护作用优于5%DM-SO组;与新鲜血小板相比,冻存后血小板表达CD62P明显下降,保存1月与3月时CD62P表达无明显差异,3种保存液组之间CD62P表达无明显差异。结论：3种冷冻保存液中2%DMSO＋thrombosol和2%DMSO＋thrombosol＋UDP-Gal对血小板形态的保持效果相似,均优于5%DMSO组。冷冻保存后血小板对凝血酶的反应下降,3种保存液组之间无明显差异。在保存液中添加UDP-Gal对保存效果没有明显影响。     

TEG用于新鲜血小板和冰冻血小板的功能分析

目的通过血栓弹力图(thrombelastography,TEG)技术探讨新鲜血小板、冰冻血小板及两者混合后的功能差异,为制定血小板输血模式提供参考依据。方法选择2012年5月-2015年1月于日照市中心血站无偿捐献单采血小板为研究对象,随机选择20袋5%二甲基亚砜(DMSO)制备,-80℃保存冰冻血小板,20袋采集后72 h内新鲜血小板。临床输注血小板前取样,配制成4组标本:A组新鲜血小板标本,B组新鲜与冰冻(2∶1)混合血小板标本,C组新鲜与冰冻(1∶1)混合血小板标本,D组冰冻血小板标本,分别检测TEG参数,包括反应时间(R)、凝血时间(K)、ɑ角(Ang)和最大振幅(MA),血小板计数(Plt),平均血小板体积(MPV),血小板分布宽度(PDW),P选择素(CD62p),综合评价血小板功能情况。结果 1)新鲜与冰冻(1∶1)混合血小板标本R值最短,与新鲜血小板、冰冻血小板、新鲜与冰冻(2∶1)混合标本比较差异均有统计学意义(均为P0.05);2)2种比例混合血小板标本的K值、α角和MA值差异均无统计学意义(均为P0.05),但与未混合血小板比较差异均有统计学意义(均为P0.05);30冰冻血小板与新鲜血小板比较,Plt、MPV、PDW和CD62p差异均有统计学意义(均为P0.05);4)2种比例混合血小板的Plt和PDW差异有统计学意义(P0.05),MPV和CD62p差异无统计学意义(P0.05)。结论新鲜血小板和冰冻血小板按1∶1配合输注可以明显缩短血液凝固时间,对血块凝集强度影响不大,是一种理想的输血模式。     

糖基化修饰后人血小板形态、超微结构及功能的研究

经糖基化修饰可使4℃保存的血小板在输入体内后延长其存活。本研究探讨尿苷二磷酸半乳糖（UDP—Gal）糖基化修饰对血小板形态、结构、功能以及其膜糖蛋白的影响。实验分为室温对照组、冷藏对照组和修饰组。用荧光标记的特异凝集素（FITC—RCA I）检测膜糖蛋白糖残基变化，用扫描、透射电镜观察修饰后血小板形态和超微结构的变化，用比浊法测定血小板聚集率，用流式细胞术检测血小板膜蛋白CD42b、膜表面标志CD62P以及血小板凋亡标志annexinV结合率。结果表明，UDP—Gal修饰组RCAI结合率显著高于室温对照组和冷藏对照组（P〈0．01）；与新鲜血小板相比，UDP—Gal处理后的血小板超微结构无明显变化，而冷藏对照组则有伪足延伸等形态学改变；修饰后最大聚集率可达新鲜血小板的50％以上；血小板膜蛋白CD42b、膜表面标志C1362P及annexinV结合率与室温对照组相比均无明显差异。结论：UDP—Gal可使β-半乳糖有效地结合于链聚糖末端，糖基化血小板仍然具有较强的聚集活性和相对完整的超微结构，功能基本正常。     

深低温保存增强血小板促凝血功能的研究

为了探索血小板冰冻保存后膜表面促凝血活性相关分子变化与冰冻血小板体内即刻止凝血功能增强之间的可能联系，用流式细胞术检测了新鲜血小板冰冻保存前后V因子结合能力、血小板膜表面GPIb—Ⅸ-V分子（CD42a）密度，用血凝仪测定激活血小板诱导血浆凝固时间（aPACT）变化，用血细胞计数仪测定血小板计数、NIPV和PDW。研究结果表明，与新鲜血小板比较，深低温保存后血小板激活血小板诱导血浆凝固时间缩短43．9％；结合V因子的荧光强度平均增加117％；结合膜表面GPIb—Ⅸ—V分子的荧光强度增加32％。结论：冰冻血小板体内即可止凝血功能增强，可能与血小板冰冻保存后膜表面促凝血活性分子表达增加或功能增强，促凝血功能明显增强，发挥快速止血功能有关。     

新鲜与保存羊膜移植与小梁切除后的瘢痕组织增生

背景:目前新鲜羊膜在眼表疾病方面得到了广泛应用,并且取得了抗纤维组织增生、抑制新生血管形成及减轻炎症反映等方面的满意疗效,但在青光眼方面的应用还未见报道.目的:观察新鲜羊膜移植对小梁切除术后瘢痕组织的抑制作用,并与保存羊膜对比.方法:将36只新西兰大白兔按随机数字表法分为3组,新鲜羊膜组和保存羊膜组分别进行新鲜羊膜移植、保存羊膜移植联合小梁切除术,空白组行单纯小粱切除术.分别于移植后1,2,3,4周检查滤过泡的形态和功能,用链酶亲和素免疫组织化学法检测滤过泡周围组织中血小板衍生生长因子的含量.结果与结论:新鲜羊膜组和保存羊膜组移植后滤过泡轻微隆起,有较好的滤过功能:观察病理组织切片表明滤过道内成纤维细胞增生较少,瘢痕组织也比较疏松.空白组滤过道破增生的纤维组织代替,成纤维细胞比较多.免疫组化结果显示,新鲜羊膜组和保存羊膜组的血小板衍生生长因子的表达少于空白组,新鲜羊膜组的表达少于保存羊膜组.提示新鲜羊膜和保存羊膜能改善滤过泡功能,减少搬痕形成,维持滤过道的通畅,并且新鲜羊膜的作用效果优于保存羊膜.     

用AGN保存浓缩血小板悬液的效果观察

本文观察了用一种新的血小板保存添加剂——酸化葡萄糖营养液(AGN)于22℃水平振摇条件下,在国产PVC塑料袋内保存从ACD全血制备的浓缩血小板血浆悬液(PC)的保存效果。结果表明,保存5天的PC其血小板计数、pH值、血小板聚集率及血小板低渗休克反应等指标皆优于对照组(未加AGN的ACD-PC),用新鲜血浆孵育2小时后,其聚集率和低渗休克反应有较明显的恢复。透射电镜显示,在保存过程中,血小板的形态完整、无伪足出现。用上述方法保存120小时的PC,其保存效果与国外一些实验室用第二代血小板保存袋保存的CPD-PC的效果相似。     

-80℃保存机采浓缩血小板的研究

目的:探讨–80℃冰冻保存机采浓缩血小板的功能及止血效果。方法:随机抽取冰冻保存3个月之内、3～6个月之间、6～9个月之间的冰冻血小板样品于42℃解冻后进行相关实验,比较不同保存时期冰冻血小板的功能及回收率;分血液病组和非血液病组观察患者输注冰冻血小板24h后出血症状的控制及校正血小板增高指数CCI值。结果:冻存3个月内、3～6个月的两组冰冻血小板的黏附功能、聚集功能与新鲜机采血小板相比差异均无显著性(P>0.05),而冻存6～9个月的冰冻血小板的黏附功能与新鲜机采血小板相比则差异有高度显著性(P<0.01)。3组冰冻血小板的第Ⅲ因子活性测定与新鲜血小板相比,均在正常范围,平均回收率为85.2%。两组患者在输注冰冻血小板24h后能有效控制出血症状的比率平均为93.3%;而CCI值≥10000/μL的比率,非血液病组显著高于血液病组。结论:5%二甲基亚砜-80℃冰冻保存半年以内的机采浓缩血小板具有良好的止血功能。     

血小板活化对单采血小板制剂中VEGF、TGF-β_1和PDGF含量的影响

目的了解血管内皮细胞生长因子(VEGF)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、血小板源性生长因子(PDGF)在单采血小板制剂中血小板活化过程中的含量变化。方法选取10名单采(双份)血小板献血者,分别留取血浆(3ml/人,作为对照组)、新鲜单采血小板(采集当日的血小板,5ml/人,作为实验1组)和常规保存单采血小板(22℃振荡箱中保存5d的血小板,5ml/人,作为实验2组);用血细胞分析仪分别测定各组血小板计数(Plt),用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定这3组样本中VEGF、TGF-β1、PDGF的含量,用流式细胞术测定2个实验组的CD62p表达,并比较分析检测结果。结果新鲜单采血小板中的VEGF、TGF-β1、PDGF含量[分别为(410.95±95.07)pg/ml、(91.15±19.50)ng/ml和(12.60±2.06)ng/ml]明显高于新鲜血浆中相对应的各生长因子水平[分别为(149.09±28.11)pg/ml、(37.38±10.73)和(3.28±0.79)ng/ml],差异具统计学意义(P<0.01);常规保存血小板中VEGF、TGF-β1和PDGF含量[分别为(495.16±63.49)pg/ml、(110.33±19.06)和(16.96±2.71)ng/ml]又高于新鲜单采血小板中相应的各生长因子水平,差异也有统计学意义(P<0.05)。Plt与VEGF、TGF-β1、PDGF呈一定程度的正相关,Plt及其活化均影响生长因子含量。结论单采血小板中VEGF、TGF-β1和PDGF水平呈高表达,血小板活化可促进这些因子的产生和释放。