靶向COX-2的siRNA抑制三种不同分化程度胃癌细胞生长及作用机制

目的:利用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术在体外抑制COX-2表达,研究其抑制三种不同分化程度的胃癌细胞(MKN-28,SGC-7901,BGC-823)的可能性,探讨RNAi抑制胃癌生长与胃癌细胞分化程度的相关性. 方法:设计靶向COX-2基因的siRNA,构建重组表达质粒pTZU6 1-siRNA-COX-2并导入胃癌细胞株,体外诱导RNAi,采用逆转录PCR(RT-PCR)和Western blotting检测COX-2基因表达变化,MTT法检测细胞活力,原位末端标记(TUNEL)及透射电镜检测细胞凋亡,Western blotting检测凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的改变. 结果:pTZU6 1-siRNA-COX-2质粒导入细胞后,SGC-7901和BGC-823中COX-2表达明显下调,细胞生长被抑制,并出现特征性的细胞凋亡,同时有Bax蛋白上调和Bcl-2蛋白下调. 对照组则无明显变化. 结论:RNAi显著抑制胃癌细胞生长,可能与下调COX-2基因表达和诱导细胞凋亡有关,其对中分化胃癌细胞的抑制作用最为显著,提示RNAi的作用可能依赖于胃癌细胞的分化程度.     

PHA对小鼠H_(22)腹水癌细胞DNA和RNA合成以及体外生长的影响

PHA对小鼠H_(22)腹水癌细胞DNA和RNA合成以及体外生长均有显著的抑制效应,且具有时间和剂量相关性。在任一时间和剂量下,PHA对癌细胞的抑制均强于正常细胞。PHA对癌细胞的凝集作用比正常细胞强32倍。     

血清抑癌活性的研究

本文研究了正常和患癌小鼠血清在体外对癌细胞及骨髓细胞的抑制作用。结果表明,无论是正常小鼠血清或患癌小鼠血清对癌细胞的DNA生物合成的抑制作用最强,对RNA生物合成的抑制较弱,而对蛋白质的生物合成的抑制最小。上述二种血清对癌细胞DNA生物合成的抑制作用较大,而对骨髓细胞DNA生物合成几无抑制作用。此外,还观察到正常小鼠血清对骨髓RNA生物合成也无明显抑制作用。由此可见,血清的这种抑制作用在代谢上以对DNA的生物合成为最显著,在细胞种类上以对癌细胞为最强烈。 Boland R.P.等报道,正常人血清对小鼠肿瘤细胞有细胞毒性作用。Nobel E.P.等也报道过正常人血清能抑制肿瘤的活性。最近Edwin V.G.等报告,正常成人血清能抑制体外培养初代乳腺癌上皮细胞,但对非恶性乳腺组织,如纤维腺瘤等,并无抑制其生长的作用。现有实验证明,正常小鼠血清及患癌小鼠血清对艾氏腹水癌细胞的DNA生物合成有显著的抑制作用。血清中这种具有抑制癌细胞生长的活性物质,除能抑制癌细胞的DNA生物合成外,在代谢上还有哪些作用?是否对癌细胞的RNA和蛋白质的生物合成也有影响?对正常细胞是否也有影响?为此,本文用氚—胸腺嘧啶核苷(~3H-TdR)、氚—尿嘧啶核苷(~3H-UR)及氚—亮氨酸(~3H-Leu)分别进行有关实验,以观察其对艾氏腹水癌细胞抑制的主要代谢途径,并选用小鼠骨髓细胞作为正常细胞的代表,以观察其对不同细胞是否具有相对的选择性。     

异常代谢对癌细胞增殖和分化的影响

癌细胞的代谢模式与正常细胞不同。最近的研究表明,癌症可以被看作是一种代谢性疾病。癌细胞独特的代谢模式为其存活提供了基础。这就迫使我们去探究支持癌细胞生长背后的代谢机制。控制细胞增殖和分化信号通路同时也控制着细胞的代谢。细胞的代谢状态同时也会影响细胞的增殖和分化。细胞代谢与增殖分化二者之间联系紧密。因此从细胞代谢的角度理解癌细胞的增殖和分化可能为癌症治疗提供新的方法。在此,对最近的一些有关于肿瘤代谢与增殖分化的研究结果进行总结与讨论。     

三氧化二砷对人鼻咽癌小鼠移植瘤生长抑制和诱导分化的初步研究

目的：研究三氧化二砷(As203)对人鼻咽低分化鳞癌可移植瘤在SCID小鼠体内生长的抑制作用，并初步研究其对细胞分化的影响。方法：以人鼻咽低分化鳞癌细胞株CSNE-l为研究对象，观察腹腔注射As203(5mg/kg)对人鼻咽癌在SCID小鼠体内生长情况。用光学显微镜和电子显微镜观察形态结构变化、免疫组化方法检测增殖细胞核抗原(PCNA)的表达情况。结果：腹腔注射As203后，鼻咽癌SCID小鼠移植瘤生长抑制，抑瘤率75．4％。同时，瘤组织中癌细胞密度减少，细胞皱缩，脑浆红染，瘤组织分化渐成熟，出现角化细胞和角化珠；间质结缔组织增多。透射电镜下肿瘤细胞均出现成熟分化，核浆比例减少，脑浆中细胞器增多，出现大量张力原纤维并围绕核周，可见细胞明显角质化，细胞表面微小突起增多，桥粒增多，细胞之间以桥粒互相连接。癌细胞PCNA在阴性对照组呈高表达，阳性细胞指数(PI)达95％，As203组的细胞PC—NA表达明显减少，PI55％(P＝0．001)。结论：As203抑制SCID小鼠体内人鼻咽低分化鳞癌的生长，这种抑制作用可能与其能够诱导癌细胞向成熟方向分化有关。     

RNA干扰HBx基因对肝癌细胞化疗效果的影响

目的：探讨RNA干扰技术和传统的化疗方法联合应用对肝癌细胞生长抑制作用的影响,并选择高效的治疗组合,研究其凋亡机制。方法：鉴定3组肝癌细胞——MHCC97-H(原肝癌细胞株),HK3细胞（转染空质粒的MHCC97-H细胞）和21543细胞（转染含HBx-shRNA质粒的MHCC97-H细胞）;RT-PCR检测RNA干扰对HBx mRNA沉寂作用,CCK8和TUNEL分别检测RNA干扰HBx后化疗药物对MHCC97-H肿瘤细胞生长的抑制及诱导细胞凋亡情况。结果：RT-PCR结果显示,与MHCC97-H细胞组比较,21543细胞的HBx mRNA水平下降约91%,HK3细胞HBx mRNA水平下降不明显;RNA靶向干扰HBx基因后的肝癌细胞（21543细胞）较原肝癌细胞（MHCC97-H细胞）和HK3细胞增殖明显减慢,而后两种细胞差别无统计学意义;3种不同细胞加用3种不同浓度的氟尿嘧啶(0~120 mg/L)、顺铂(0~32 mg/L)后细胞生长明显减慢并呈浓度依赖性,以RNA靶向干扰HBx基因后的21543细胞生长抑制最明显;相同浓度的氟尿嘧啶对3组不同肝癌细胞均可引起细胞凋亡,以21543细胞凋亡最明显。结论：RNA干扰HBx可明显抑制肝癌细胞的增殖,并增加肝癌细胞对化疗药物的敏感性;RNA干扰HBx基因和化疗药物联合应用使肝癌细胞凋亡更明显,细胞增殖速度明显减慢。     

反义核酸对胃癌细胞端粒酶活性与细胞生长的抑制

目的阐述反义核酸对端粒酶活性抑制作用的浓度依赖性和序列特异性,表明端粒酶活性表达对胃癌细胞分化的不依赖性. 方法运用改良的端粒酶活性定量检测法,测定三种胃癌细胞(MKN-28、SGC-7901、MKN-45)的端粒酶活性;用台盼蓝染色法,观察胃癌细胞的活力.结果三种不同分化程度的胃癌细胞均有端粒酶活性的表达,但其活性的高低与其分化程度没有显著关系.在指定的浓度下,端粒酶反义核酸作用于胃癌细胞后,MKN-45和SGC-7901胃癌细胞出现明显的端粒酶活性和细胞生长的抑制,但在同样浓度条件下,MKN-28胃癌细胞只出现端粒酶活性的抑制.错义序列对照组则无明显变化.结论端粒酶活性与胃癌细胞的分化没有显著相关性.端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸能抑制胃癌细胞的生长和端粒酶活性,其抑制作用有浓度依赖性和序列特异性,其作用机制是通过抑制端粒酶活性,端粒酶活性的抑制并不总是同细胞生长的抑制平行的.     

反义核酸对胃癌细胞端粒酶活性与细胞生长的抑制

目的：阐述反义核酸对端粒酶活性抑制作用的浓度依赖性和序列特异性，表明端粒酶活性表达对胃癌细胞分化的不依赖性。方法运用改良的端粒酶活性定量检测法，测定三种胃癌细胞(MKN-28、SGC-7901、MKN-45)的端粒酶活性；用台盼蓝染色法，观察胃癌细胞的活力。结果：三种不同分化程度的胃癌细胞均有端粒酶活性的表达，但其活性的高低与其分化程度没有显著关系。在指定的浓度下，端粒酶反义核酸作用于胃癌细胞后，MKN-45和SGC-7901胃癌细胞出现明显的端粒酶活性和细胞生长的抑制，但在同样浓度条件下，MKN-28胃癌细胞只出现端粒酶活性的抑制。错义序列对照组则无明显变化。结论：端粒酶活性与胃癌细胞的分化没有显著相关性。端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸能抑制胃癌细胞的生长和端粒酶活性，其抑制作用有浓度依赖性和序列特异性，其作用机制是通过抑制端粒酶活性，端粒酶活性的抑制并不总是同细胞生长的抑制平行的。     

红景天素抗肿瘤作用的研究

本研究通过体外培养５种人癌细胞（肝癌、胃癌、肺癌、Ｈｅｌａ细胞和咽癌）和小鼠移植性肿瘤实验，证明了红景天素可明显抑制３种癌细胞的生长增殖，可提高荷瘤小鼠的存活率，延长其生存期，抑瘤率在５０％以上，结果提示红景天素对体外培养３种癌细胞和小鼠Ｓ１８０细胞均有一定的抑制作用。     

RNA干扰INK4位点反义非编码RNA抑制人肺癌细胞系生长的分子机制

目的探讨INK4位点反义非编码RNA(ANRIL)下调对CDKN2B-CDKN2A-ARF基因簇的调控及对人肺癌细胞生长的影响。方法通过RNA干扰下调人肺鳞状细胞癌细胞系H520中ANRIL的表达,实时荧光定量聚合酶链反应检测RNA干扰前后细胞中ANRIL mRNA的表达变化,绘制细胞生长曲线;实时荧光定量聚合酶链反应和蛋白质印迹法检测RNA干扰前后细胞中细胞同期蛋白依赖性激酶抑制剂2B(CDKN2B)、CDKN2A、ARF mRNA和蛋白的表达变化。结果 RNA干扰可显著下调ANRIL mRNA的表达(P<0.05),ANRIL下调能抑制人肺鳞状细胞癌细胞系H520的生长(P<0.05),引起CDKN2B、CDKN2A、ARF mRNA和蛋白的表达升高(P<0.05)。结论 RNA干扰AN-RIL能抑制人肺鳞状细胞癌细胞的生长,ANRIL可能通过调控CDKN2B-CDKN2A-ARF基因簇起作用。     

红景天素抗肿瘤作用的研究

本研究通过体外培养５种人癌细胞（肝癌、胃癌、肺癌、Ｈｅｌａ细胞和咽癌）和小鼠移植性肿瘤实验，证明了红景天素可明显抑制３种癌细胞的生长增殖，可提高荷瘤小鼠的存活率，延长其生存期，抑瘤率在５０％以上。结果提示红景天素对体外培养３种癌细胞和小鼠Ｓ１８０。细胞均有一定的抑制作用。     

Adiponectin真核表达质粒的构建与表达研究

目的构建重组鼠adiponectin真核表达质粒,为进一步研究adiponectin的功能提供实验基础。方法提取鼠脂肪组织总RNA,运用RT-PCR方法扩增鼠adiponectincDNA完全编码区,将扩增产物连接至pCDNA3.1( )载体,对重组质粒进行测序验证,并检测其体外表达和对小鼠乳腺癌细胞4T1的增殖抑制作用。结果重组真核表达质粒经PCR扩增后获得一744bp片段,并经测序证实,Western-blot检测到其体外表达。在体外的细胞学实验中,将重组质粒转染入小鼠乳腺癌细胞4T148h后,与对照组相比,可以观察到明显的细胞形态学改变,细胞体积变小皱缩,4T1细胞生长明显抑制。流式细胞术检测到该组细胞中凋亡细胞所占比例明显高于对照组。结论成功构建了鼠重组adiponectin真核表达质粒,该质粒对小鼠乳腺癌细胞4T1的增殖有明显的抑制作用。     

抑制miR-21表达对乳腺癌细胞株MDA-MB-231生存和凋亡的影响

microRNA(miRNA)是一种广泛存在的非编码小分子RNA,在重要生命过程如细胞生长、发育、代谢中等扮演着重要角色,其表达异常与肿瘤的发生发展关系密切,可能发挥促进或抑制癌细胞生长的重要作用。miR-21是一种较早在人体中发现、并且存在相对广泛的miRNA,在多种肿瘤细     

Axl受体酪氨酸激酶对肝癌细胞生长的影响及其机制的研究

目的 研究受体酪氨酸激酶Axl对肝癌细胞生长的影响及其相关的作用机制.方法 体外培养肝癌细胞(hepatom a carcinoma cell,HepG2),用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)干扰HepG2细胞的Axl表达,生长曲线法检测干扰前后HepG2细胞生长情况;Wester...     

RNA干扰阻断COX-2基因表达对食管鳞状上皮癌EC109细胞株增生和凋亡的影响

目的研究COX-2基因与食管鳞癌细胞EC109增生和凋亡的关系,观察阿司匹林对食管鳞癌细胞EC109增生和凋亡的影响,探索基因治疗和药物抑制肿瘤的机制。方法采用RNA干扰的方法,用荧光显微镜观察RNA干扰的转染效率,用Westernblot方法分析RNA干扰的效果,用噻唑兰法定量检测RNA干扰和阿司匹林对食管鳞癌细胞增生的影响,用流式细胞仪检测RNA干扰和阿司匹林对食管鳞癌细胞凋亡的影响。结果Westernblot方法证实,RNA干扰后EC109细胞COX-2表达下降至对照组的40%。MTT法检测结果显示,用COX-2基因干扰后,EC109细胞生长抑制作用增强,COX-2基因干扰和阿司匹林联合作用后,肿瘤细胞的生长抑制作用进一步增强。流式细胞仪检测结果显示,母本细胞组和RNA干扰的阴性对照组凋亡率较低,COX-2基因干扰后,促凋亡作用增加。COX-2基因干扰后再给予阿司匹林,促凋亡作用进一步增加。结论RNA干扰特异性抑制细胞COX-2蛋白的表达后,抑制食管鳞癌细胞株EC109的生长增生,增强凋亡作用,阿司匹林和RNA干扰对肿瘤细胞的增生和凋亡可产生协同效果。     

人肝癌细胞在不同免疫缺陷小鼠中的生长特点

为探讨人类肝癌细胞9724在不同免疫缺陷小鼠的生长特点,将体外培养人类肝癌细胞9724接咱不同免疫力小鼠（B细胞缺陷的CBA/N,T细胞缺陷的BALB/c-nu,T、B细胞缺陷的SICD小鼠及免疫重建的SCID小鼠,免疫正常的BALB/c小鼠作为对照组）皮下、肝内、腹腔,观察其生长特性。结果是BALB/c小鼠和用BALB/c小鼠外周淋巴细胞免疫重建的SCID（B-PBL-SCID)小鼠不成瘤;CBA/N小鼠随种数量和途径不同而有不同的表现;裸小鼠、SCID小鼠和用CBA/N小鼠外周淋巴细胞重建的SCID（C-PBL-SCID）小鼠100%成瘤。提示SCID小鼠是建立肝癌模型的最佳小鼠,也是进行肿瘤免疫研究的最佳模型动物;T细胞在异种瘤移植排斥中起主要作用。     

甘露糖抗肿瘤作用的研究进展

<正>甘露糖是一种六碳单糖,在癌症生物学中的作用逐渐受到重视。甘露糖可作为细胞能量的供给来源,参与细胞表面糖蛋白的合成和修饰^[1],但其在癌细胞中的代谢路径与正常细胞不同,可影响癌细胞的生长和存活^[2]。甘露糖可通过调节宿主免疫应答来影响肿瘤微环境,进而影响癌症的发展;同时还能通过特定的敏感性途径影响细胞内信号转导,调节细胞的生长、分化和凋亡^[3],因此通过添加甘露糖来干扰癌细胞的代谢,可作为一种治疗癌症的策略。     

芦笋提取物的抗肿瘤作用——Ⅱ 芦笋提取物对S_(180)小鼠肉瘤细胞DNA和RNA合成的影响

文采用~3H-TdR和~3H-UR掺入S_(180)小鼠肉瘤细胞DNA和RNA的方法,观察了芦笋提取物对癌细胞DNA和RNA生物合成的影响。发现芦笋尖提取液、芦笋茎提取液及芦笋尖乙醇提取液均对癌细胞DNA和RNA的生物合成有显著抑制作用,且抑制作用随着药物浓度的升高而增强。     

RNA干扰肝癌细胞HBX基因表达及细胞增殖的实验研究

目的 探讨RNA干扰技术对肝癌细胞乙型肝炎病毒X基因(HBX)表达和细胞增殖的影响.方法 鉴定转染无关的对照序列(HK3细胞)和针对HBX基因shRNA的稳定肝癌细胞株(21543细胞);RT-PCR检测RNA干扰对HBX基因mRNA沉寂作用,利用流式细胞仪检测细胞周期变化.结果 复苏后细胞形态差别不大;RT-PCR显示相对于MHCC-97H细胞,21543细胞的HBX mRNA水平的下降约91%,HK3细胞的HBX mRNA水平下降不明显;靶向HBX的RNA干扰后的肝癌细胞(21543细胞)较原肝癌细胞(MHCC-97H细胞)和对照细胞(HK3细胞)增殖明显减慢,而后两种细胞差别不显著;21543细胞周期显示RNA干扰后细胞延缓进入S期,增殖活性明显减低.结论 RNA干扰可降低肝癌细胞HBX表达水平,并可明显抑制肝癌细胞的增殖,改变细胞生长周期.     

维甲酸和维胺酸对小鼠艾氏腹水癌的治疗作用及其对癌细胞生物大分子合成的抑制作用

腹腔给RA和RII使小鼠腹水中瘤细胞数明显减少;荷瘤鼠存活期延长;部分小鼠腹水消退。RA和RII可抑制体外培养的癌细胞DNA、RNA和蛋白质合成,细胞内RNA和蛋白质含量降低;RII的作用比RA强。