剪切力对血管内皮细胞骨架的影响及其机理

哺乳动物血管系统中最里面的一层是内皮细胞层。这层细胞在整个生命过程中将始终受到血管中血液的流体力学作用。流体对内皮细胞单位面积作用的力称为应力。主要包括平行作用于细胞表面的切应力和垂直作用于内皮细胞表面的压应力，切应力即我们常说的剪切力。细胞骨架是内皮细胞中重要的组成成分，其三种结构基础：微丝、微管、中间丝各成系统，分别与细胞质膜上的蛋白质脂质分子相互连接而成为细胞运动、细胞形态和跨膜信息传递的结构基础［‘］。对剪切力主要起响应的结构是微丝，是由双股Ｆ－ａｃｔｉｎ螺旋式组成的。剪切力对血管内皮细…     

低密度脂蛋白对血管内皮细胞骨架及粘附能力的影响

目的研究低密度脂蛋白(LDL)诱导的血管内皮细胞脂质及细胞骨架的改变及其对内皮细胞粘附的影响。方法不同浓度LDL(0mg/L,50mg/L,100mg/L,150mg/L)孵育内皮细胞24h。采用高效液相色谱法检测细胞内胆固醇酯;油红O检测细胞内脂质;FITC标记的鬼笔环肽进行F-actin纤维荧光标记;流室系统检测生理剪切流场下(1.5Pa)内皮细胞的粘附。结果不同浓度LDL(50mg/L,100mg/L,150mg/L)均导致细胞内胆固醇酯含量增加,其结果分别为(80.3±1.5)μg/g,(115.5±2.2)μg/g和(160.6±3.2)μg/g,与对照组(61.3±1.6)μg/g相比P<0.05;油红O染色内皮细胞内脂质含量明显增加。荧光染色发现,对照组内皮细胞的F-actin纤维主要富集在相邻细胞膜的周边,细胞质中未见密集的F-actin纤维;随着LDL浓度的增加,内皮细胞内F-actin纤维形态和分布发生明显的改变,出现应力纤维;在高浓度LDL下,大部分细胞周边的F-actin纤维消失,胞质中出现密集的应力纤维。在生理剪切流场下,高浓度LDL降低内皮细胞的粘附与保留,150mg/L组内皮细胞的粘附与保留仅50%±10%,对照组为93%±5%。结论LDL增加内皮细胞中脂质含量,损伤细胞骨架,降低内皮细胞的顺应性,降低内皮细胞的粘附。     

肿瘤坏死因子对培养的人脐静脉内皮细胞骨架的影响

目的：用肿瘤坏死因子（TNF－α）处理培养的人脐静脉内皮细胞研究不同作用浓度和不同作用时间的TNF－α的刺激对内皮细胞的形态和骨架的影响。结果：2000U的TNF－α处理内皮细胞8小时,细胞形态发生改变,细胞间的紧密接触变的松攻,间隙增宽,骨架失去原有的网状形态,呈块状收缩,24小时后骨架结构开始恢复。细胞形态似成纤维细胞,1000U的TNF－α对内皮细胞影响比较明显,8小时后细胞变圆,细胞间的接触消失,骨架浓缩,网状结构消失,24小时后出现特征性“鸟喙”样改变,72小时后不完全恢复,不同浓度的TNF－α刺激内皮不同时间,均可使内皮细胞内游离钙比对照组明显增加。结论：TNF－α可改变内皮细胞的形态结构。影响其屏障机能,并可能与胞内游离钙浓度相关。     

外用中药有效成分对血管内皮细胞增殖作用的影响

目的 :观察常用外用中药有效成分对血管内皮细胞增殖作用的影响 ,初步探讨其促进皮肤创伤愈合的机制。方法 :采用MTT比色法观察中药人参皂苷Rg1、Rh1、黄芪多糖、鹿茸多肽、麝香酮和桂皮醛、乳香水提物对人脐静脉内皮细胞 (HUVEC ,从健康产妇脐带中分离 )增殖的影响。结果 :在 2 4 4mg/L - 0 5g/L浓度范围内黄芪多糖对HUVEC未表现出增殖促进作用 ;在1 94mg/L - 0 5g/L浓度范围内人参皂苷Rh1促进HUVEC的增殖 (P <0 0 5或P <0 0 1) ,与对照组相比增殖率为 33 33% -111 11% ;在 1 94mg/L - 0 5g/L浓度范围内人参皂苷Rg1都有…     

人体内皮细胞系细胞株ECV304细胞低氧模型的制备

目的 研究人体内皮细胞系细胞株(ECV304)细胞低氧模型的建立条件及其形态学特点.方法 培养ECV304细胞,将培养箱内通入5%CO:-95%N2混合气体(氧分压为18.3 mmHg)并培养ECV304细胞12h、24h,使用MTT法、酸脱氢酶试剂盒(LDH)活力测定及细胞骨架染色对低氧细胞模型鉴定.结果 与正常对照...     

松弛素保护心肌微血管内皮细胞缺氧复氧损伤的机制

背景：研究报道松弛素可显著改善病理因素导致的心肾功能障碍,抑制心肌肥厚、抗纤维化以及改善缺血再灌注损伤等,但其对内皮细胞缺氧复氧损伤的保护机制尚不明确。目的：探讨松弛素保护心肌微血管内皮细胞缺氧复氧损伤的机制。方法：取生长状态良好的小鼠心肌微血管内皮细胞系(H5V),分3组处理：对照组常规培养33 h,模型组常规培养24 h后给予6 h缺氧+3 h复氧模拟心肌缺氧再灌注损伤,松弛素组常规培养(加180 ng/mL松弛素)24 h后给予6 h缺氧+3 h复氧(加180 ng/mL松弛素)模拟心肌缺氧再灌注损伤。检测细胞通透性与Caspase-3的表达,细胞上清中肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β和白细胞介素6水平,RT-PCR检测细胞中钙黏蛋白、Akt1、GSK-3β mRNA表达;Western blot检测细胞中钙黏蛋白、Akt、GSK-3β蛋白表达。结果与结论：(1)与对照组比较,模型组细胞通透性增强(P <0.05),细胞内Caspase-3表达升高(P <0.05);与模型组比较,松弛素组细胞通透性降低(P <0.05),细胞内Caspase-3表达降低(P &l...     

阪崎杆菌侵袭人脑微血管内皮细胞对细胞骨架的影响

目的观察阪崎杆菌侵袭人脑血管内皮细胞后,细胞骨架中微丝和微管的变化。方法用荧光染色技术观察阪崎杆菌侵袭人脑微血管内皮细胞后,细胞骨架中的微丝和微管的变化,观察微丝和微管的抑制剂对阪崎杆菌侵袭人脑微血管内皮细胞的影响。结果阪崎杆菌侵袭人脑微血管内皮细胞后,细胞骨架结构发生明显的改变,微丝和微管部分断裂,模糊,散在分布,微丝抑制剂(细胞松弛素D)和微管抑制剂(秋水仙素)可以抑制阪崎杆菌侵袭人脑微血管内皮细胞。结论阪崎杆菌侵袭人脑血管内皮细胞破坏细胞骨架结构,微丝和微管抑制剂抑制阪崎杆菌侵袭。     

细胞松弛素D对稳定层流诱导的VASP改变的作用

探讨细胞松弛素D对稳态层流诱导的actin与VASP分布改变的影响.试验采用人脐静脉内皮细胞(HUVECs)暴露于稳定层流.荧光标记VASP和actin,Western blot检测VASP表达及磷酸化水平.结果表明细胞松弛素D预处理细胞暴露于10 dyn/cm2剪切力1 h后,actin不能沿顺流场方向产生重排,VASP表达减弱;VASP总体表达水平不仅无增加,且无磷酸化VASP出现.以上提示VASP通过反复磷酸/脱磷酸化介导剪切力引起的细胞骨架重排,进而细胞形态改变,这种调节作用的发挥有赖于细胞骨架的完整.     

电磁脉冲对血管内皮细胞骨架微丝聚合肽肌动蛋白表达的影响

目的研究不同脉冲次数电磁脉冲（electromagnetic pulse,EMP）作用对人脐血管内皮细胞（ECV-304）骨架聚合态肌动蛋白（F-actin）表达的影响。方法EMP采用0、100、200、400次脉冲数各辐照ECV-304细胞,用异硫氰酸荧光素-鬼笔环肽染色F-actin和PI染色胞核的双标染色法,观察受辐照血管内皮细胞内微丝形态学的变化,记录并测定细胞F-actin的平均荧光强度。结果对照组细胞中的大部分荧光样物质呈弥漫状态,胞膜荧光较弱,胞浆内可见少量肌动蛋白纤维丝,方向不规则。与对照组相比,各暴露组细胞均可见其胞浆中微丝F-actin明显粗大、变长,其间的荧光样物质大多为较长的粗大应力丝,沿细胞纵轴排列较多,细胞内数量和荧光强度明显增加（P〈0.01）,细胞膜结构完整且荧光增强。随着EMP脉冲次数的增加而微丝F-actin表达显著增多,以400次脉冲组最为明显（P〈0.01）。结论EMP可引起血管内皮细胞的骨架F-actin表达增高且存在着一定的量效关系。     

血管内皮细胞迁移及相关影响因素研究进展

内皮细胞迁移功能在血管新生、伤口愈合、内皮损伤的愈合等过程中起着重要的作用。此外,在部分心血管疾病中尤其在动脉粥样硬化发生的某些阶段中,内皮细胞的迁移特性也起着重要的作用。因此了解内皮细胞迁移特性及相关的影响因素对于掌握内皮细胞在这些生理和病理过程中的作用有着重要的意义。重点就目前内皮细胞迁移的诱导、抑制因素以及血流、细胞骨架和胞外基质对内皮细胞迁移的影响的研究进展做了较为详细的介绍,并着重讨论了在动脉粥样硬化的发展过程中,血管内皮细胞脱落区的修复、动脉粥样硬化斑块内的血管新生等与内皮细胞迁移特性之间的紧密联系。     

稳定层流剪应力对内皮细胞骨架调节蛋白VASP表达的影响

为探讨生理强度的稳定层流剪应力对内皮细胞骨架actin相关蛋白VASP特征影响规律，我们采用胰蛋白酶消化法分离人脐静脉内皮细胞(HUVECs)，模拟体内流动环境，建立平行板流动腔模型。利用细胞图像分析系统和ALEXA488—若丹明一次毒蕈环肽双标记法，观察内皮细胞在稳态层流下形态、actin排列变化与VASP分布变化之间的规律。采用Western blot定量动态检测细胞内VASP表达及磷酸化的水平。结果表明，内皮细胞在10dyn／cm^2剪切作用后，随时间细胞逐渐延长，长轴趋于剪应力作用方向排列，细胞与静息态的细胞相比，细胞内骨架沿剪应力方向重组，与此同时VASP表达增强，沿着actin纤维呈点状分布，尤其集中在细胞膜下actin末端区域；Western blot检测显示在剪切后，细胞内VASP出现快速磷酸化，VASP总体表达量增加，2h达高峰后逐渐恢复，8h后再次逐渐升高。以上结果提示血流动力学特性中剪应力引起了细胞胞质内骨架蛋白分子重组，血管内皮细胞形态改变，在此过程中，VASP发挥骨架调节蛋白的作用。     

Porphyromonas gingivalis Gingipains-Mediated Degradation of Plasminogen Activator Inhibitor-1 Leads to Delayed Wound Healing Responses in Human Endothelial Cells

Plasminogen activator inhibitor-1 (PAI-1), a serine protease inhibitor, is constitutively produced by endothelial cells and plays a vital role in maintaining vascular homeostasis. Chronic periodontitis is an inflammatory disease characterized by bleeding of periodontal tissues that support the tooth. In this study, we aimed to determine the role of PAI-1 produced by endothelial cells in response to infections caused by the primary periodontal pathogen Porphyromonas gingivalis. We demonstrated that P. gingivalis infection resulted in significantly reduced PAI-1 levels in human endothelial cells. This reduction in PAI-1 levels could be attributed to the proteolysis of PAI-1 by P. gingivalis proteinases, especially lysine-specific gingipain-K (Kgp). We demonstrated the roles of these degradative enzymes in the endothelial cells using a Kgp-specific inhibitor and P. gingivalis gingipain-null mutants, in which the lack of the proteinases resulted in the absence of PAI-1 degradation. The degradation of PAI-1 by P. gingivalis induced a delayed wound healing response in endothelial cell layers via the low-density lipoprotein receptor-related protein. Our results collectively suggested that the proteolysis of PAI-1 in endothelial cells by gingipains of P. gingivalis might lead to the deregulation of endothelial homeostasis, thereby contributing to the permeabilization and dysfunction of the vascular endothelial barrier.     

Rho/Rho激酶信号通路与血管内皮通透性的研究

Rho/Rho激酶信号通路是体内普遍存在的一条信号通路,它通过调节细胞内肌动蛋白骨架的聚合状态而扮演着"分子开关"的角色,参与细胞形态维持、细胞粘附与迁移、细胞增殖与凋亡、基因转录、平滑肌收缩等多种生物学行为.Rho/Rho激酶信号通路在血管内皮通透性的病理生理过程中发挥了重要作用,抑制Rho/Rho激酶信号通路取得了显著的内皮保护作用.     

开博通与左旋精氨酸对自发性高血压大鼠血管内皮细胞功能的影响

观察开博通(CPT)和左旋精氨酸(L-Arg)对自发性高血压大鼠(SHR)血管内皮细胞功能影响 ,探索两者联合使用的降压机制。方法Wastar大鼠10只作正常对照组。另38只SHR随机分为SHR对照组(n=10),L_Arg治疗组(n=10),CPT治疗组(n=9),L_Arg和CPT联合治疗组(n=9)。同时测各组用药前后的血压 ,一氧化氮(NO)和内皮素(ET)。结果SHR组的NO低于正常对照组而ET则高于对照组(P<0.05) ,L_Arg和/或CPT两治疗组的NO和ET各有不同程度升高和降低 ,(与SHR组比较均P<0.05) ,其中以L—Arg CPT联合治疗组最明显。3个治疗组用药后血压较用药前均有不同程度的下降(均P<0.001) ,而又以L—Arg CPT联合组降压效果最佳。结论CPT和L_Arg均可有效增加SHR的NO合成释放 ,加强CPT降压效应     

脑血栓形成病人自体血浆对红细胞与内皮细胞粘附的影响

本文采用流室系统，定量地研究了脑血栓形成病人和健康人自体血浆对红细胞与内皮细胞粘附特性影响的差异，并深入探讨了脑血栓形成病人自体血浆纤维蛋白原和自体血小板对红细胞与内皮细胞粘附的影响。通过显微观察和计数，结果表明：１）血浆能增强红细胞与内皮细胞的粘附，这在脑血栓形成病人表现得尤为明显；２）脑血栓形成病人自体血浆纤维蛋白原促进了红细胞与内皮细胞的粘附，自体血小板的作用有待进一步研究。     

Heterogeneity of myofibroblast phenotypic features: an example of fibroblastic cell plasticity

Granulation tissue fibroblasts (myofibroblasts) develop several ultrastructural and biochemical features of smooth muscle (SM) cells, including the presence of microfilament bundles and the expression of -SM actin, the actin isoform present in SM cells and myoepithelial cells and particularly abundant in vascular SM cells. Myofibroblasts have been suggested to play a role in wound contraction and in retractile phenomena observed during fibrotic diseases. When contraction stops and the wound is fully epithelialized, myofibroblasts containing -SM actin disappear, probably as a result of apoptosis, and the scar classically becomes less cellular and composed of typical fibroblasts with well-developed rough endoplasmic reticulum but with no more microfilaments. In contrast, -SM actin expressing myofibroblasts persist in hypertrophic scars and in fibrotic lesions of many organs, including stroma reaction to epithelial tumours, where they are allegedly involved in retractile phenomena as well as in extracellular matrix accumulation. The mechanisms leading to the development of myofibroblastic features remain to be investigated. In vivo and in vitro investigations have shown that -interferon exerts an antifibrotic activity at least in part by decreasing -SM actin expression whereas heparin increases the proportion of -SM actin positive cells. Recently, we have observed that the subcutaneous administration of transforming growth factor-1 to rats results in the formation of a granulation tissue in which -SM actin expressing myofibroblasts are particularly abundant. Other cytokines and growth factors, such as platelet-derived growth factor, basic fibroblast growth factor and tumour necrosis factor-, despite their profibrotic activity, do not induce -SM actin in myofibroblasts. In conclusion, fibroblastic cells are relatively undifferentiated and can assume a particular phenotype according to the physiological needs and/or the microenvironmental stimuli. Further studies on fibroblast adaptation phenomena appear to be useful for the understanding of the mechanisms of development and regression of pathological processes such as wound healing and fibrocontractive diseases.     

剪切力对血管内皮细胞表达IL-8的影响

本文利用改进的流室装置, 通过精密蠕动泵提供剪切力, 选择5dyne/cm2、10dyne/cm2、15dyne/cm2三种剪切力, 施加于体外培养的血管内皮细胞, 作用不同时间, 用RIA的方法检测流体动力学对血管内皮细胞表达IL-8的影响.结果表示, 不同剪切力作用内皮细胞后, IL-8的表达量与剪切力大小及作用时间有关, 为时间依赖性增长, 在5dyne/cm2组和10dyne/cm2组中, IL-8表达量明显高于空白对照组, 而15dyne/cm2组与对照组相比有下降趋势, 提示高剪切力有可能抑制IL-8的分泌.通过观察不同大小剪切力对血管内皮细胞表达IL-8的影响, 为探讨剪切力对动脉粥样硬化的影响提供一些数据.     

体外人脐静脉内皮细胞分泌IL—6的研究

内皮细胞是一个非造血细胞 ,却表达和 /或产生大多数已知的造血受体和细胞因子。这些因子和受体的生物学作用仍不十分清楚。目的 :本研究旨在探求内皮细胞自然产生 IL- 6及其生物学功能。试图阐明 IL- 6在造血调控中的作用。在建立人脐静脉内皮细胞体外培养模型的基础上 ,收集原代培养内皮细胞 1 - 9天培养上清液 ,离心 ,- 2 0℃保存备用。采用双抗夹心 ELISA法对上清液中 IL- 6进行定性和定量测定。结果 :在未加任何刺激因素的条件下 ,从培养的人脐静脉内皮细胞培养上清液中可测及 IL- 6(735.380 1± 883.53pg/ ml)。随着内皮细胞培养天数的增加 ,IL- 6的释放量也随之增加。在第 6天时接近释放峰值 IL- 6(2 80 8.61 pg/ ml)。结论 :体外培养的人脐静脉内皮细胞具有自然分泌 IL- 6的功能。 IL- 6对各系造血祖细胞的增殖均起促进作用。本研究为内皮细胞支持各系造血干 /祖细胞的增殖和分化提供了理论依据。     

内毒素和过氧化氢对肺血管内皮细胞的损伤作用

观察内毒素、中性粒细胞弹性蛋白酶、中性粒细胞组织蛋白酶Ｇ和过氧化氢对肺血管内皮细胞释放５１Ｃｒ的影响，结果表明，体外培养的肺动脉内皮细胞经５１Ｃｒ标记后，内毒素和Ｈ２Ｏ２可使内皮细胞释放５１Ｃｒ明显增多；中性粒细胞弹性蛋白酶和组织蛋白酶的作用不明显。内毒素和Ｈ２Ｏ２增加内皮细胞内之５１Ｃｒ的释放，表明内皮细胞受到了损伤。     

右旋糖酐40、70对红细胞与内皮细胞粘附的影响

采用流室显微观察系统，定量研究右旋糖酐４０（ＤＸ４０）和右旋糖酐７０（ＤＸ７０）对红细胞与内皮细胞动态粘附特性的影响。统计分析处理数据，得到反映切应力与细胞间动态粘附数关系的经验公式及粘附特征常数ａ，ｂ值。ａ值反映红细胞的初始粘附数，ｂ值反映随切应力增大，粘附数减小的速率。ＤＸ７０实验组的ａ值大于ＤＸ４０组的，而ｂ值的情况相反。故结果显示切应力越大，粘附的红细胞越少；ＤＸ４０使红细胞的粘附明显减少；ＤＸ７０使红细胞粘附显著增加。由此提示不同长度的细胞桥接分子对红细胞的粘附影响不同，且临床上选用ＤＸ４０作血浆扩容剂较ＤＸ７０优越得多