FHIT mRNA在结直肠癌中的表达及其与细胞凋亡的相关性

目的研究脆性组氨酸三联体基因(FHIT mRNA)在结直肠癌组织中的表达以及与结直肠癌细胞凋亡的相关性。方法应用组织芯片技术制作正常直肠痔组织、腺瘤组织标本各16例及结直肠癌80例石蜡标本,采用原位分子杂交检测FHIT mRNA,脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记技术(TUNEL)检测结直肠癌细胞的凋亡指数。结果(1)正常直肠组织平均FHIT mRNA阳性细胞率为45.67%±9.39%,腺瘤组织平均阳性细胞率为23.45%±5.06%,结直肠癌组织平均阳性细胞率为15.1%±4.11%,三者比较,差异有统计学意义(P<0.01),结直肠癌患者不同年龄、性别、肿瘤部位、大小、血清CEA水平、组织学类型的FHIT mRNA阳性细胞率无统计学差异(P>0.05);不同分化程度、病理分期、淋巴转移的FHIT mRNA阳性细胞率有统计学差异(P<0.05);(2)FHIT mRNA表达程度不同的结直肠癌细胞凋亡指数(apoptosis index,AI)间存在显著性差异(P<0.01);(3)FHIT mRNA阳性细胞率高患者平均生存期为42.7个月,阳性细胞率低患者为29.8个月,前者的年累计生存率(88.10%,37/42)显著低于阳性细胞率低者(74.19%,23/31)(P<0.01)。结论FHIT基因可能参与结直肠癌细胞凋亡的调节,FHIT基因表达下降可能与结直肠癌的发生密切相关。     

Survivin mRNA 及 BCL-2、VEGF蛋白在直肠癌组织中的表达及意义

目的研究survivinmRNA及Bcl-2、VEGF蛋白在结直肠癌组织中的表达及意义。方法应用组织芯片技术制作正常直肠、腺瘤组织标本各16例及结直肠癌80例石蜡标本,采用原位分子杂交检测survivinmRNA,免疫组织化学SP法检测Bcl-2、VEGF蛋白,脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记技术(TUNEL)检测结直肠癌细胞的凋亡指数。结果(1)正常直肠组织平均survivinmRNA阳性细胞率为8.29%±3.75%,腺瘤组织平均阳性细胞率为20.30%±5.50%,结直肠癌组织平均阳性细胞率为38.07%±8.71%,三者比较,差异有显著性(P<0.01),结直肠癌患者不同年龄、性别、肿瘤部位、大小、血清CEA水平、组织学类型的survivinmRNA阳性细胞率无统计学差异(P>0.05);不同分化程度、病理分期、淋巴转移的survivinmRNA阳性细胞率有统计学差异(P<0.05);(2)结直肠癌组织Bcl-2、VEGF蛋白表达水平明显高于正常直肠组织和腺瘤(P<0.01),结直肠癌组织survivinmRNA阳性细胞率升高与Bcl-2、VEGF蛋白高表达显著相关(P<0.01);(3)结直肠癌survivinmRNA表达程度不同的结直肠癌细胞凋亡指数(apoptosisindex,AI)间存在显著性差异(P<0.01);(4)survivinmRNA阳性细胞率高患者平均生存期为31.6个月,阳性细胞率低患者为45.2个月,前者的年累计生存率(71.43%,20/28)显著低于阳性细胞率低性者(88.89%,40/45)(P<0.05)。结论结肠直肠腺癌中survivin及Bcl-2、VEGF的过表达共同参与了肿瘤的发生,发展,浸润,转移,联合检测上述标志物有一定的临床意义。     

异丙酚联合缺血预处理对大鼠肺缺血再灌注损伤时细胞凋亡的影响

目的 探讨异丙酚联合缺血预处理对大鼠肺缺血苒灌注损伤时细胞凋亡的影响.方法 雄性SD大鼠50只,200～250 g,随机分为5组(n=10):假手术组(S组)、缺血再灌注组(IR组)、异丙酚组(P组)、缺血预处理组(IP组)和异丙酚+缺血预处理组(P+IP组).阻断右肺门1 h后再灌注2 h制备大鼠单肺原位热缺血再灌注模型,P组夹闭右肺门前30 min持续静脉输注异丙酚30 mg·kg-1·h-1;IP组夹闭右肺门前先进行夹闭5 min,再灌注5 min,反复3次的缺血预处理;P+IP组夹闭肺门前30 min静脉输注异丙酚30 mg·kg-1·h-1和缺血预处理.于再灌注2 h时处死大鼠,取右肺下叶肺组织,光镜下观察肺组织病理学结果 ,计算肺损伤定量评价指标(IQA);检测肺凋亡细胞,计算肺细胞凋亡指数(AI);采用免疫组化法检测Bcl-2、Bax蛋白表达;IQA、Bcl-2/Bax蛋白比值与AI作直线相关分析.结果 与S组比较,IR组、P组、IP组和P+IP组再灌注后IQA、AI均明显升高,IR组Bcl-2、Bax蛋白表达上调,Bcl-2/Bax蛋白比值降低(P<0.01);与IR组比较,P组、IP组和P+IP组IQA、AI均明显降低,Bcl-2蛋白表达水平、Bcl-2/Bax蛋白比值升高,IP组、P+IP组Bax蛋白表达下调(P<0.01),P组差异无统计学意义(P>0.05);与P组和IP组比较,P+IP组IQA及AI降低,Bcl-2/Bax蛋白比值升高(P<0.05);IQA与AI呈正相关(r=0.951,P<0.01);AI与Bcl-2/Bax蛋白比值呈负相关(r=-0.851,P<0.01).结论 异丙酚联合缺血预处理可通过调节Bcl-2和Bax蛋白的表达抑制细胞凋亡,减轻肺缺血再灌注损伤.     

Bcl-2与VEGF在膀胱移行细胞癌的表达及其意义

目的:探讨凋亡抑制基因Bcl-2与血管内皮生长因子(VEGF)蛋白在膀胱移行细胞癌(TCC)组织的表达,以及二者表达与TCC生物学行为的相关性.方法:分别对45例TCC组织、34例相应的癌旁组织和10例正常膀胱组织,采用免疫组织化学法检测Bcl-2的表达,免疫蛋白印迹(Western Blotting)法检测VEGF蛋白的表达,并采用DNA原位末端标记(TUNEL)法检测细胞凋亡指数(AI).结果:Bcl-2和VEGF蛋白在45例TCC组织中的阳性表达率分别为51.1%和62.2%,均显著高于癌旁组织(7.9%和5.9%)(P<0.05);而在正常膀胱组织二者均无表达.同时,Bcl-2在VEGF表达阳性的TCC组织中呈高度表达,Bcl-2和VEGF的表达密切相关(x2=5.148,P<0.05).结论:提示Bcl-2可能参与TCC的发生和发展;Bcl-2可能通过上调VEGF的表达而促进TCC的转移,同时VEGF也可能通过诱导Bcl-2的表达而抑制肿瘤细胞的凋亡.     

精索静脉曲张大鼠睾丸自噬对生精细胞的影响

目的:研究精索静脉曲张(VC)大鼠模型中睾丸不同水平自噬对生精细胞凋亡的影响。方法:雄性SD大鼠54只随机分为6组:空白对照组、雷帕霉素对照组、氯喹对照组各6只,VC组、VC+雷帕霉素组、VC+氯喹组各12只。采用HE染色观察睾丸、附睾组织形态学变化,并对睾丸及附睾中精子形成情况进行评分,TUNEL染色检测生精细胞凋亡指数(AI),Western印迹检测LC3、p62、Bax、Bcl-2的表达。结果:空白对照组、雷帕霉素对照组、氯喹对照组大鼠睾丸及附睾组织均未发生明显形态学变化,精子形成情况评分及AI亦无显著差异(P>0.05);VC组大鼠睾丸及附睾组织发生明显病理损伤,精子形成情况评分显著降低(P<0.01),AI显著升高(P<0.01),但VC+雷帕霉素组较VC组明显改善,而VC+氯喹组较VC组轻度加重。此外,与空白对照组比较,VC组自噬相关蛋白LC3(包括LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值)和促凋亡蛋白Bax表达显著增加(P<0.01),抑凋亡蛋白Bcl-2表达则显著降低(P<0.01);且VC+雷帕霉素组LC3与Bcl-2表达显著高于VC组(P<0.01),p62和Bax表达则显著低于VC组(P<0.01);而VC+氯喹组LC3与Bcl-2表达显著低于VC组(P<0.01),p62和Bax的表达则显著高于VC组(P<0.01)。结论:VC可诱导大鼠睾丸自噬和生精细胞凋亡,上调自噬可抑制生精细胞凋亡,阻滞自噬则可促进生精细胞凋亡。     

转录因子激活蛋白-4在结直肠癌中的表达及与细胞凋亡的相关性

目的 观察转录因子激活蛋白(AP)-4在正常直肠、腺瘤和结直肠癌组织中的表达,探讨其表达与临床病理、转移相关基因血管内皮生长因子(VEGF)和基质金属蛋白酶(MMP)-9的表达、细胞凋亡间的关系.方法 利用组织芯片和免疫组织化学技术,检测正常直肠、腺瘤组织标本各16例及结直肠癌80例中AP-4蛋白的表达,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测各组VEGF、MMP-9 mRNA的转录水平,以缺口末端标记技术(TUNEL)检测结直肠癌细胞的凋亡指数.结果 (1)正常直肠组织、直肠良性腺瘤、结直肠癌组织AP-4的阳性表达率分别为12.50%(2/16),25.00%(4/16),56.25%(45/80),其中良性直肠组织18.75%(6/32),良性直肠组织AP-4的阳性表达率与结直肠癌组织比较,两者差异有显著的统计学意义(x2=12.96,P<0.01);结直肠癌患者不同年龄、性别、肿瘤部位、大小、血清CEA水平、组织学类型的AP-4表达程度比较,差异无统计学意义(P>0.05);不同分化程度、病理分期、淋巴转移、5年生存率的AP-4表达程度比较,差异有统计学意义(P<0.05);(2)结直肠癌组织VEGF和MMP-9转录水平显著高于正常直肠组织和腺瘤(P<0.05),结直肠癌组织AP-4结合活性增强与VEGF和MMP-9高表达显著相关(P<0.01);(3)结直肠癌AP-4基因表达程度不同的结直肠癌细胞凋亡指数(AI)间的差异有统计学意义(F=58.76,P<0.01).结论 AP-4基因表达升高可能与结直肠癌的发生密切相关,AP-4可能参与了结直肠癌的发生、发展和侵袭转移.     

左-卡尼汀心脏停搏液对心脏瓣膜置换术患者心肌细胞凋亡的影响

目的研究左-卡尼汀心停搏液对心脏瓣膜置术患者心肌细胞凋亡的影响。方法24 例体外循环(CPB)下拟行心脏瓣膜置换术患者,随机分为2组:治疗组和对照组,每组12例,治疗组于4℃ST.ThomasⅡ停搏液中按6g/L 加入左-卡尼汀作为心脏停搏液,对照组给予等量生理盐水。升主动脉阻断期间每30 min灌注停搏液一次,每次15 ml/kg,末次灌注氯化钾浓度减为半量。术前1 d和术后7 d作心脏彩超,测定心脏指数(CI)和左心室射血分数(LNEF);记录开放升主动脉后心脏自动复跳情况。CPB转流前和停机后即刻取心房心肌组织一块,用原位末端脱氧核糖核苷酸转移酶标记法检测心肌凋亡细胞;免疫组化法测定心肌细胞Bax和Bcl-2蛋白表达,计算Bcl-2蛋白与Bax蛋白的比值(Bcl-2/Bax)。结果与对照组比较,治疗组开放升主动脉后心脏自动复跳率升高,术后7 d CI和LVEF 升高,停机后心肌细胞凋亡指数降低(P<0.05或0.01);与转流前比较,两组停机后Bax蛋白表达增强,对照组Bcl-2蛋白表达减弱(P<0.05或0.01);与对照组比较,治疗组停机后Bax蛋白表达减弱, Bcl-2蛋白表达增强,Bcl-2/Bax升高(P<0.05或0.01)。结论左-卡尼汀通过调整Bcl-2与Bax蛋白表达的平衡,从而减少了CPB诱导的心肌细胞凋亡,对心肌起到一定程度的保护作用。     

膀胱移行细胞癌组织survivin和bcl-2的表达及其相关性

目的研究凋亡抑制基因survivin和bcl-2在膀胱移行细胞癌(BTCC)组织中的表达、对肿瘤细胞凋亡的影响及其二者的相关性,探讨survivin在BTCC发生、发展和细胞凋亡调控中的作用。方法分别采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组织化学法检测45例BTCC组织中survivinmRNA和bcl-2蛋白的表达,并采用DNA原位末端标记(TUNEL)法检测细胞凋亡指数(AI)。结果SurvivinmRNA和bcl-2蛋白在BTCC组织中的阳性表达率分别为71.11%和51.11%。Survivin的高表达与BTCC的淋巴转移密切相关(P<0.05),与病理分级有一定关系;而与患者性别、年龄、临床分期、肿瘤直径和肿瘤发生情况等均无相关性。bcl-2的表达与临床病理特征等均无相关。Survivin和bcl-2表达阳性的AI分别为(4.23±0.68)%和(4.29±0.67)%,均显著低于阴性表达(8.79±1.10)%和(8.85±1.15)%,即与细胞的AI呈负相关。相关性检验表明survivin与bcl-2表达密切相关(χ2=9.338,P<0.05)。结论Survivin在BTCC组织中的高表达提示其可能参与BTCC的发生和发展,可作为判断其预后的重要参考指标。Survivin可能与bcl-2在BTCC细胞凋亡的调控方面起着协同作用。     

远隔肢体缺血预处理对兔单肺缺血-再灌注损伤细胞凋亡的影响

目的 从细胞凋亡的角度探讨远隔肢体缺血预处理影响兔肺缺血-再灌注(I-R)损伤的可能机制.方法 18只日本大耳白兔随机均分为三组:缺血-再灌注组(I-R组)、肢体缺血预处理组(R组)、假手术组(S组).建立兔在体左肺缺血-再灌注(I-R)损伤模型.通过采用脱氧核苷酸末端转移酶介导的DNA原位末端缺口标记技术(TUNEL)检测再灌注3 h时凋亡指数(AI)的变化,予Westernblotting检测肺组织中Bcl-2、Bax蛋白的表达情况.结果 与S组比较,I-R组肺组织细胞凋亡指数和Bax蛋白显著增高(P＜0.01),而Bcl-2蛋白含量显著降低(P＜0.01),Bcl-2/Bax比值降低(P＜0.05).R组细胞凋亡指数和Bcl-2蛋白表达明显高于I-R组(P＜0.01),而Bax蛋白的含量明显低于I-R组(P＜0.05),Bcl-2/Bax比值增高(P＜0.05).结论 远隔肢体缺血预处理可上调肺组织Bcl-2蛋白,下调Bax蛋白表达,增加Bcl-2/Bax比值,抑制肺组织细胞凋亡,从而对肺缺血-再灌注损伤起到保护作用.     

基质交联分子1对前列腺癌PC-3细胞凋亡相关蛋白表达的影响

目的:观察抑制基质交联分子1(STIM1)对前列腺癌PC-3细胞凋亡相关蛋白表达的影响。方法:将携带STIM1基因的小干扰RNA(shRNA)慢病毒载体STIM1-pGCSIL-GFP转染人激素非依赖性前列腺癌PC-3细胞,3d后荧光倒置显微镜观察转染效率;1周后RT-PCR及Western印迹验证STIM1抑制表达有效性,并采用Western印迹检测PC-3细胞中凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax,survivin、激活型Caspase-3的表达水平。结果:倒置显微镜观察发现PC-3细胞病毒转染效率80%。转染1周后,RT-PCR及Western印迹显示STIM1被有效抑制。抑制STIM1表达后,对照组Bcl-2/Bax比率为1.24,干扰组PC-3细胞Bcl-2/Bax比率为0.31,比率显著下降;干扰组PC-3细胞survivin表达明显降低,相对表达量为对照组的0.14倍;Caspase-3裂解激活相对表达量为对照组的1.52倍(P0.05)。结论:STIM1在前列腺癌PC-3细胞中可视为致癌基因,抑制其表达可通过下调Bcl-2/Bax比率,降低survivin表达,激活Caspase-3级联通路,诱导细胞凋亡。     

Survivin的表达与直肠癌细胞凋亡、血管形成及预后的关系

目的:探讨直肠癌凋亡抑制基因Survivin的表达、细胞凋亡及血管形成的关系及临床意义.方法:用末端脱氧核糖核酸转移酶介导的TUNEL法和免疫组织化学技术检测50例直肠癌细胞凋亡指数(AI)、Survivin的表达及微血管密度(MVD).结果:50例直肠癌组织中Survivin阳性表达率56%(28/50),其表达与AI及MVD相关,Survivin阴性表达组的5年生存率(81.3%)显著优于阳性表达组(50%;P＜0.05);Cox模型多因素分析表明,Survivin及AI指数可作为临床预后判断的指标.结论:凋亡抑制基因Survivin的异常表达与直肠癌细胞凋亡抑制、血管形成及不良预后密切有关.     

p14ARF、p53及脆性组氨酸三联体蛋白在甲状腺肿瘤中的表达

目的探讨p14ARF、p53及脆性组氨酸三联体(FHIT)蛋白在甲状腺肿瘤组织中的表达及其意义。方法采用免疫组织化学法检测20例甲状腺腺瘤和28例甲状腺癌组织(其中包括11例甲状腺滤泡癌(FTC)、12例乳头状癌(PTC)、4例髓样癌(MTC)以及1例未分化癌(UDTC)中p14ARF、p53及FHIT蛋白的表达。结果p14ARF、p53及FHIT蛋白在甲状腺腺瘤和甲状腺癌中阳性率分别为90%、36%;15%、75%;90%、7%,这3种蛋白在甲状腺腺瘤及甲状腺癌的表达差异均有统计学意义(P<0.05)。p14ARF、p53及FHIT蛋白的表达在FTC与腺瘤之间,PTC与腺瘤之间有统计学意义(P<0.05),p53及FHIT的表达在MTC与腺瘤间差异有统计学意义(P<0.05)。p14ARF、p53及FHIT蛋白的表达与甲状腺肿瘤的恶性进程有关,与患者年龄、性别以及淋巴结转移无关。另外p14ARF与FHIT蛋白的表达正相关,并且它们与p53均负相关。结论肿瘤抑制蛋白p14ARF和FHIT的缺失以及癌蛋白p53的高表达是甲状腺肿瘤发生的重要原因之一;联合检测p14ARF、p53及FHIT蛋白有助于区分甲状腺腺瘤和甲状腺滤泡癌。     

survivin蛋白在前列腺癌中的表达及其与肿瘤细胞凋亡的关系

目的 :探讨新的凋亡基因survivin蛋白在前列腺癌 (PCa)的表达及其与肿瘤细胞凋亡的关系。　方法 :采用免疫组化SP法和DNA原位未端标记TUNEL法分别测定 4 2例PCa组织及 10正常前列腺 (NP)组织中survivin蛋白的表达和细胞凋亡。　结果 :survivin蛋白在PCa中的阳性表达为 80 .5 9% ,与病理分级、临床分期和淋巴结转移密切相关 (P <0 .0 5 ) ,而NP中无阳性表达 ;PCa组织及NP组织中细胞凋亡指数 (AI)分别为 3.0 3± 1.33、1.0 7± 0 .77,其差异有显著意义 (P <0 .0 5 ) ;survivin蛋白的表达与细胞AI呈负相关 (r=- 0 .6 79,P <0 .0 0 1)。　结论 :survivin蛋白的异常表达而引起的细胞凋亡抑制 ,在PCa的发生、发展中起一定的作用 ;联合检测survivin蛋白和AI,有助于对肿瘤细胞的分化程度作出正确评价 ,以指导临床治疗及估计预后     

Survivin基因在原发性胆囊癌中的表达及其与P53,PCNA蛋白表达的关系

目的: 探讨Survivin基因在原发性胆囊癌(PGC)中的表达情况,以及与P53,PCNA蛋白表达的相互关系.方法: 逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测9例PGC新鲜癌组织Survivin mRNA表达,对38例PGC石蜡包埋组织应用免疫组织化学法检测Survivin,P53和PCNA蛋白的表达,并将结果进行相关分析.结果: 9例PGC新鲜癌组织中3例有Survivin mRNA表达.21例(55.2%)PGC Survivin蛋白表达阳性,而12例胆囊腺瘤中有2例表达,20例癌旁正常组织中则无表达.PGC Survivin蛋白表达阳性率显著高于胆囊良性病变和正常胆囊组织(P<0.01).Survivin蛋白在PGC中的表达与PCNA指数相关,与P53蛋白表达、PGC病理分级和Neiv分期无显著相关.结论: Survivin基因在PGC中存在高表达,Survivin基因表达上调通过不同的机制影响PGC细胞的凋亡和增殖,在PGC发生、发展过程中起作用.     

多烯紫杉醇靶向放疗增敏对结肠癌细胞凋亡及相关蛋白表达的影响

目的：探讨免疫脂质化的多烯紫杉醇在LoVo细胞放射增敏过程中， 对其凋亡及凋亡相关蛋白表达的影响。方法：制备偶联癌胚抗原（CEA）抗体的多烯紫杉醇脂质体，作用于LoVo细胞后再经2Gy照射，然后再进行相关检测：DNA末端原位标记染色法(TUNEL) 计算凋亡指数(AI);检测p53和Bax和Bcl-2，Fas，FasL及survivin 的表达。结果：多烯紫杉醇免疫脂质体联合放射组（A组）LoVo的AI为(43.6±5.2)% ，均显著高于多烯紫杉醇脂质体联合放射组（B组） (17.7±3.9)%及单纯放射组（C组） (16.8±3.5)% （P< 0. 01）。而B,C组间差异无统计学意义（P>0. 05）。A组的Bax,Fas和FasL的表达显著高于B组;而A组的survivin的表达显著低于B组（P<0.01）,但两组对p53和Bcl-2表达影响均无明显差异。结论：多烯紫杉醇经多种通路调节细胞凋亡，并能增加肿瘤细胞的放疗敏感性。     

姜黄素抑制肾癌ACHN细胞增殖及促凋亡的实验研究

目的观察姜黄素对人肾癌ACHN细胞株增殖及细胞凋亡的影响,探讨姜黄素诱导ACHN细胞株凋亡的作用机制。方法不同浓度姜黄素作用人肾癌ACHN细胞24 h后,应用MTT比色法检测姜黄素对人肾癌ACHN细胞的增殖抑制率;流式细胞术检测姜黄素诱导细胞的凋亡率;RT-PCR检测姜黄素对ACHN细胞Bcl-2、Bax、NF-κBP65 mRNA表达的影响;Western blot方法检测其对细胞Bcl-2、Bax、NF-κBP65I、κB蛋白表达的影响。结果姜黄素对人肾癌ACHN细胞有明显的抑制作用,可引起细胞凋亡,并且存在剂量和时间依赖;不同浓度姜黄素作用细胞24 h后,Bcl-2、NF-κBP65 mRNA水平下降,Bax mRNA水平升高(P0.05),Bcl-2、NF-κBP65蛋白表达量下降,BaxI、κB蛋白表达量升高(P0.05)。结论姜黄素通过上调IκB,下调NF-κB活性,调控凋亡基因Bcl-2/Bax的表达,抑制人肾癌ACHN细胞的增殖,诱导人肾癌ACHN细胞的凋亡。     

放射治疗对小鼠肾癌细胞凋亡和Bcl-2与Bax蛋白表达的影响

目的:观察放射治疗对BALB/c小鼠肾癌的抑制作用及对Bcl-2和Bax蛋白表达的影响.方法:建立BALB/c小鼠的肾癌细胞移植瘤放射治疗模型;HE染色测定肿瘤细胞死亡面积,采用免疫印迹法(western blot法)检测肿瘤组织的凋亡相关蛋白表达.结果:放疗组小鼠移植瘤生长速度较肿瘤对照组明显减慢.放疗组小鼠肿瘤组织中抗凋亡蛋白Bcl-2表达下调,促凋亡蛋白Bax表达上调.结论:经放射治疗后,小鼠肿瘤生长受到明显抑制,可能与放疗引发肿瘤细胞凋亡相关蛋白表达变化相关.