RNA结合蛋白RBM47通过调节HMGA2抑制K562细胞的增殖

目的:研究RBM47对下游基因HMGA2的调控作用,以及对人慢性髓系白血病细胞株K562增殖的调控作用。方法:使用过表达、敲低RBM47的慢病毒载体感染K562细胞,CCK-8法检测RBM47对K562细胞增殖的影响,流式细胞术检测RBM47对K562细胞周期的影响;通过RNA免疫共沉淀结合方法检测RBM47与HMGA2mRNA的结合情况,逆转录实时定量PCR方法检测RBM47对HMGA2 mRNA稳定性的影响,Western blot检测RBM47对HMGA2蛋白表达的影响。结果:在K562细胞内过表达RBM47可抑制K562细胞的增殖和周期运行,抑制RBM47则可显著促进K562细胞增殖和细胞周期运行; RBM47可通过与HMGA2 mRNA结合促进其降解;过表达RBM47可显著降低K562细胞内HMGA2蛋白的表达。结论:RNA结合蛋白RBM47通过调控HMGA2抑制K562细胞的增殖。     

circ-ZNF609在肿瘤中的表达及作用机制

正环状RNA(circRNA)由前体RNA通过首尾反向剪切形成,具有高度保守性、稳定性和时空特异性等特点,根据来源可分为外显子circRNA、内含子circRNA和外显子-内含子circRNA~([1-2])。与mRNA相比,circRNA缺少5' 帽子和3' 末端多聚核苷酸尾,这种结构使circRNA十分稳定~([3])。circRNA参与机体多种病理生理调控过程,且在诸多恶性肿瘤中异常表达并调控肿瘤恶性生物学行为,成为近年研究热点。     

结合基序蛋白6在结直肠癌组织中的表达及临床意义

目的探讨RNA结合基序蛋白6(RBM6)在结直肠癌(CRC)中表达水平及临床病理学意义。方法应用免疫组织化学方法检测92例配对的CRC及癌旁组织石蜡包埋标本RBM6表达水平,观察其与CRC病人临床病理学参数的关系;再以Western印迹和qRT-PCR检测28例配对冷冻保存的新鲜CRC及癌旁组织中RBM的蛋白和mRNA表达水平。结果免疫组化结果显示:RBM6在92例CRC表达明显高于癌旁组织表达水平(癌组织30.4%,28/92vs癌旁10.9%,10/92;P0.01)。卡方检验显示:RBM6的表达与CRC肿瘤的大小、分化程度、浸润深度及淋巴结转移无明显相关性(P0.05),但与患者TNM分期和远处转移呈正相关(P=0.026,P=0.021)。单因素分析发现:RBM6高表达CRC患者预后更差(P=0.024)。qRT-PCR和Western印迹结果显示:RBM6在CRC中蛋白和mRNA表达均高于配对癌旁组织(P0.01;P=0.009)。结论 RBM6在CRC中呈高表达,并与患者临床分期、远处转移及不良预后相关,可能参与CRC的恶性进展。     

前列腺癌中血管内皮生长因子及其受体和RBM5表达的相关性及临床意义

目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)及其含激酶插入区受体(KDR)和RBM5基因在前列腺癌(PCa)中表达的相关性及临床意义。方法通过免疫组化SABC法检测PCa患者组织标本中VEGF,KDR和RBM5的表达情况,初步分析这三种标志物与肿瘤临床分期和肿瘤细胞分化的关系及VEGF/KDR在瘤细胞中的共表达情况,并就其共表达和RBM5的相关性以及临床意义进行对比。结果 PCa患者中VEGF,KDR和RBM5的阳性表达率分别为69.4%,56.1%和48.0%。同时提示非胞膜浸润和细胞分化好的PCa患者组织标本中VEGF,KDR和RBM5表达水平高于前列腺胞膜浸润和细胞分化差的,两者相比,差异有统计学意义(P0.05),VEGF/KDR间表达存在显著相关性(P0.01),其中共表达率为45.9%(90/196),RBM5与VEGF和KDR阳性表达呈正相关(RBM5vs VEGF,P0.01;RBM5vs KDR,P0.01)。随访结果表明,这三种标志物同时高表达者,术后PSA反弹早,肿瘤原位复发和远处骨转移的风险高。结论 VEGF/KDR共表达说明在PCa细胞中存在VEGF自分泌现象,RBM5与VEGF/KDR表达的相关性提示,RBM5可能参与了肿瘤的新生血管生成。重视三者的相互影响,有助于提高PCa患者分子靶向用药的疗效。另外,对这三种基因异常高表达的患者,提示术后复发风险高和预后不良,应强化治疗并加强随访。     

RBM5、EGFR和KRAS在非小细胞肺癌中的表达及其意义

目的检测非小细胞肺癌组织RBM5、EGFR及KRAS表达水平,并进一步分析上述三种基因表达与非小细胞肺癌患者临床、病理相关性,为肺癌早期诊断及分子靶向治疗提供依据。方法收集2017年8月至2018年8月在吉林大学第二医院接受手术的42例NSCLC患者癌组织及癌旁组织标本,采用Western blot及实时荧光定量PCR(RT-qPCR)方法检测RBM5、EGFR和KRAS蛋白及mRNA相对表达水平,同时采用ELISA方法检测44例患者外周血清中上述基因表达水平,并进一步分析其临床病理相关性。结果在组织学分析中,与癌旁组织比较,肺癌组织中RBM5mRNA表达水平降低(P0.05),降低水平与吸烟史、淋巴结转移等相关;EGFR mRNA表达水平升高(P0.05),其中伴有淋巴结转移组中EGFR相对表达量高于无淋巴结转移组(P0.05);KRAS mRNA表达水平增高与临床分期、淋巴结转移等相关。在血清学ELISA分析中,与健康人比较,肺癌患者血清中RBM5表达水平降低(P0.01),其中伴有淋巴结转移组中RBM5表达量低于无淋巴结转移组(P0.05);EGFR和KRAS表达水平升高(P0.01),表达水平的升高与肺癌患者临床分期及淋巴结转移无显著相关性。结论肿瘤抑制基因RBM5在NSCLC发生发展过程中起到负性调控作用,而EGFR和KRAS起到正性调控作用;血清中RBM5和EGFR可能成为判断肺癌早期诊断及预测转移的新指标,提供肺癌治疗新靶点。     

siRNA靶向沉默HIF-1a和RBM5过表达对前列腺癌PC3细胞生长抑制作用的体外研究

目的 观察采用RNA干扰抑制前列腺癌(PCa)PC3细胞中缺氧诱导因子-1a(HIF-1a)和上调RBM5表达水平对PC3细胞增殖和凋亡的影响。方法 运用PEI/RBM5/HA-HP载体(RBM5组)及siHIF-1a载体(si HIF-1a组)分别或联合(RBM5+siHIF-1a组)转染PC3细胞,以未转染细胞(空白对照组)和空载体细胞(阴性对照组)作为比较。采用噻唑蓝比色(MTT)法检测各组细胞增殖情况;流式细胞仪(FCM)检测各组细胞周期变化;原位末端标记(TUNEL)法检测各组细胞凋亡指数。结果 RBM5组、si HIF-1a组和RBM5+si HIF-1a的联合组均能不同程度的抑制PC3细胞增殖,使细胞周期停滞和促进细胞凋亡,但联合组作用更大,效果更好。联合组细胞增殖率是50.9%,与RBM5组的77.3%和siHIF-1a组的74.8%比较,差异有统计学意义(P0.05),与空白对照组的100%和阴性对照组的98.6%比较,差异有显著统计学意义(P0.01)。联合组对细胞周期和细胞凋亡的影响也明显优于单纯用药的两组,组间差异显著(P0.05),与空白对照组和阴性对照组比较,差异更显著(P0.01)。结论 si RNA靶向沉默癌基因HIF-1a或PEI/RBM5/HA-HP载体增强抑癌基因RBM5表达这两种方法均可抑制前列腺癌PC3细胞生长,但两者联合应用效果更好。     

非经典的剪接位点(IVS1a+5g>a)及His348Gln双杂合突变导致的遗传性凝血因子Ⅶ缺陷症

目的　探讨遗传性凝血因子Ⅶ (FⅦ )缺陷症分子发病机制。方法　检测凝血指标以明确诊断 ;用DNA直接测序法对患者FⅦ基因的全部外显子和其侧翼以及 3′ ,5′非翻译区进行分析 ,寻找基因突变 ,对有突变的序列反向测序证实 ;发生在非经典的剪接位点突变用外周血单个核细胞异位转录的RT PCR方法确定其剪接方式。结果　患者在 8号外显子 10 96 1位发生T→G杂合突变 ,导致 348位His被Gln替代 ;在 1号内含子 5′端的非经典的剪接位点有Ggtgcg >Ggtgca(IVS1a 5g >a)杂合突变 ,RT PCR结果揭示剪接过程中去除了 2号外显子 ,却把 3号内含子包含进去 ,在 3号外显子起始处出现了移码突变 ,编码与原来氨基酸完全不同的 9个氨基酸后出现了终止信号 ,产生了一个只有 30个氨基酸组成的截短型蛋白。结论　患者FⅦ基因中发现了两种杂合突变 (10 96 1位T→G、IVS1a 5g >a) ,其中后一种非经典的剪接位点突变导致的异常剪接方式为国际首次报道。     

胃癌和相应癌旁组织中PTEN基因表达的临床研究

目的研究胃癌组织中抑癌基因第10号染色体缺失性磷酸酶张力蛋白基因(phosphatase and tension homologydeleted on chromosome ten,PTEN)的表达情况及探讨PTEN基因与胃癌临床病理因素的关系。方法应用半定量逆转录聚合酶链反应(semi-quantitative RT-PCR)方法检测45例胃癌组织及相应癌旁组织中PTEN基因1-8、5-85、-9 mRNA的表达情况。结果45例胃癌组织中PTEN mRNA表达水平为:外显子1-8为0.71±0.21;外显子5-8为0.90±0.11;外显子5-9为0.83±0.15;45例相应癌旁组织中PTEN mRNA表达水平为:外显子1-8为1.29±0.18;外显子5-8为1.51±0.27;外显子5-9为1.38±0.22;两者相比差别显著(P<0.05);而45例相应癌旁组织中PTEN mRNA全部阳性表达,与相应胃癌组织相比差别显著(P<0.05)。胃癌组织中PTEN mRNA表达水平无性别、年龄特异性(P>0.05),但随临床分期的增高和组织学分化的降低,其表达水平明显降低(P<0.05)。结论PTEN基因在胃癌中表达降低和缺失与胃癌的发生密切相关,并与临床分期与病理分级的进展密切相关,提示PTEN mRNA的表达有望作为胃癌诊断的一项客观指标。     

降钙素经ERK-MAPK信号通路调控成骨细胞核心结合因子a1mRNA表达

目的研究降钙素对成骨细胞核心结合因子a1(cbfa1)mRNA表达情况以及细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路在这一过程中的作用。方法取24 h内新生SD大鼠颅骨培养成骨细胞,分别加入不同浓度降钙素(0.01、0.1、1 ng/mL)和一定浓度ERK特异性抑制剂U0126进行干预,应用RT-PCR技术检测成骨细胞cbfa1 mRNA的表达情况;应用Western Blot-ting技术检测phos-ERK 1/2蛋白表达情况;采用Independent-Samples检验法分析比较各组间总体均值差异。结果加入0.01、0.1、1 ng/mL的降钙素干预后,成骨细胞表面cbfa1mRNA的表达随降钙素浓度的增加而增强,且中、高浓度组与空白对照组比较差异具有非常显著意义(P<0.01),此外降钙素刺激了phos-ERK1/2蛋白的表达。U0126可阻断以上所有效应。结论降钙素可上调成骨细胞cbfa1mRNA的表达,且ERK-MAPK信号通路参与了此过程。     

替代剪切形成多种形式的RhD mRNA

目的　探讨RHD基因转录后是否存在因替代拼接形成不同形式的mRNA。方法　采用逆转录PCR(RT PCR)技术检测 4名不同Rh表型 (CcDDEe、CCDDee、CcDDee和ccDdee)个体的RhDmRNA ,然后进行cDNA测序分析。结果　不同Rh表型的个体有相同的和复杂的RhDmRNA形式 ,均存在正常形式的RhDmRNA ,以及缺失第 7、第 9、第7和 9、第 7～ 9外显子共 5种形式的RHD转录子 ,这些缺失外显子的转录子的其余序列与正常RhDmRNA完全一致 ,显示 RHD 基因转录后存在替代剪切机制 ,且发生在第 7 8 9外显子或内含子区域。结论　 RHD 基因因为替代剪切第 7、8、9外显子形成复杂的、不同外显子组合的基因转录子 ,因此可能翻译成氨基酸C 端互不相同的多种形式的蛋白质。