温针个案的分子药效学分析

目的　采用基因芯片技术研究温针对肾阳虚证骨关节炎患者基因表达的影响 ,探讨温针治疗肾阳虚证骨关节炎的分子机制。方法　以 4 0项肾阳虚辨证因子量表为评定标准 ,筛选出 8例符合西医骨关节炎诊断标准和中医肾阳虚证诊断标准的典型肾阳虚证患者 ,给予温针治疗 15d ,选取疗效最好的 4例提取mRNA作基因芯片分析 ,本文仅选择其中 1例。结果　治疗后患者疼痛积分由 14分降至 1分 ,骨关节炎病情严重指数由 19分降至 1分 ,肾阳虚积分由 2 0分降至 6分 ,虚寒积分由 2 6分降至 9分。获得表达差异的基因 2 4 6条 ,已知功能的 12 6条 ,分别涉及免疫、代谢、细胞骨架及运动等多种相关基因。结论　温针通过影响多种相关基因的表达而达到治疗的效果。     

骨关节炎肾阳虚证个案的温针疗效及基因表达谱研究

目的　观察温针治疗骨关节炎肾阳虚证患者的临床疗效 ,并以基因芯片研究温针疗效的基因表达谱。方法　筛选出符合西医骨关节炎和中医肾阳虚证诊断标准的患者 1例 ,温针治疗 2周 ,治疗前后取血、提取mRNA ,经标记、杂交、清洗、芯片扫描、图像的采集与数据分析等过程 ,获得差异基因表达谱。结果　温针对此例患者的治疗作用达到显效 ,对基因表达的影响涉及免疫、基础代谢、肌肉运动、生长发育和信息传导等多个方面。结论　温针治疗肾阳虚型骨关节炎疗效确切 ;应用基因芯片技术能够同时半定量地研究数千条基因的表达状态 ,可以从微观基因水平研究针刺的整体机制 ,并从分子水平判定其疗效 ,为探讨针灸的作用机制开辟新途径。     

基因芯片技术研究针灸对肾阳虚证骨关节炎患者免疫相关基因表达的影响

目的:探讨针灸对肾阳虚证骨关节炎患者免疫相关基因表达的影响。方法:用基因芯片技术检测肾阳虚证骨关节炎患者及正常人的基因表达谱,以及针灸治疗显效者的治疗前后基因表达谱的变化。结果:通过基因表达谱芯片筛选出与肾阳虚骨关节炎免疫相关的基因13条,肾阳虚骨关节炎患者与正常人相比表达下调4条,上调5条。经温针治疗显效的4例患者治疗前后的基因芯片比较结果显示:NM000265、NM001838基因普遍上调,NM_001784基因普遍下调,其他基因表达无规律性变化。结论:肾阳虚证骨关节炎的发生涉及免疫相关基因表达的异常,针灸可能通过诱导或阻遏这些基因的表达发挥效应。     

肾阳虚证免疫功能相关基因筛选及其表达分析

目的以基因芯片技术从基因表达角度分析肾阳虚证与免疫功能的关联性。方法筛选出符合中医肾阳虚证诊断标准的患者4例,健康对照4例,提取mRNA,经标记、杂交、清洗、芯片扫描、图像的采集与数据分析等过程,获得基因表达数据,通过SAM芯片数据分析软件筛选肾阳虚证显著表达基因。结果筛选到70条显著表达基因,其中与免疫相关的有18条。结论肾阳虚证患者存在免疫功能异常,免疫功能基因的异常表达是肾阳虚证发生的分子基础之一。     

兄妹肾阳虚证温补作用的系统生物学研究

目的:引入系统生物学的观察方法,研究温补药物治疗肾阳虚证兄妹疗效的分子生物学特征,探索基因芯片在中医诊治学中应用的可能性。方法:用40项肾阳虚证量表和40项寒证量表,调查一对兄妹在治疗前后的症状积分;用18816点阵的基因芯片测试在治疗前后的基因表达水平。结果:评定兄妹温补之后肾阳虚与寒证症状的积分下降1/3～2/3,得到在兄妹治疗前的差异表达治疗后入正常值的84条共同基因,其中38条已知基因功能,包括免疫、生长发育等6类。讨论:肾阳虚与寒证治疗效果可以用38条共同调节的基因表达水平和量表积分来分析,两者之间的相关关系值得深入探讨。从系统生物学的观点,用基因差异表达来评价辨证治疗疗效,为中医证的疗效评价提供了一个新的方法。     

寒热证候类风湿性关节炎患者外周血CD4+T淋巴细胞基因表达谱初步探索

目的:探讨类风湿性关节炎寒热证候的基因表达差异。方法:采集类风湿性关节炎寒热证候患者及正常人空腹静脉血,纯化得到CD4 T淋巴细胞,利用基因芯片检测和分析技术,探索类风湿性关节炎寒热证候患者及正常人CD4 T淋巴细胞基因表达差异点。结果:与正常人相比,类风湿性关节炎患者有149条基因异常表达,主要涉及免疫应答和信号传导;寒热证类风湿性关节炎患者之间有42条基因异常表达,只有2条与上述149条基因重复,主要涉及功能代谢、信号传导;寒热证类风湿性关节炎患者与正常人之间有49条基因异常表达,与上述42条之间有20条基因重复,也主要涉及功能代谢、信号传导;这些差异表达基因涉及多个生物学途径。结论:寒热证候类风湿性关节炎患者的基因表达谱存在差异,这种差异与类风湿性关节炎患者和正常人之间的差异有所不同,提示中医证候分类学具有基因表达谱依据。     

右归丸对围绝经期综合征/肾阳虚证基因表达谱的影响

目的:研究右归丸对围绝经期综合征肾阳虚证基因表达谱治疗前后的异同。方法:以围绝经期综合征肾阳虚证患者为对象,服用右归丸一个月,应用基因芯片技术,分析治疗前后围绝经期综合征肾阳虚证基因表达谱;结合SAM软件对差异表达基因进行筛选并分析。结果:经核酸定量分析仪检测,6例患者RNA的OD260/OD280比值在1.90~1.98,经琼脂糖凝胶电泳检测,28s和18 s条带清晰,28 s条带约是18 s条带的2倍,说明RNA完整性较好;治疗前后基因表达谱存在明显的差异,表达有差异的基因共81条,ratio值≤0.5的基因62条;ratio值≥2的基因19条,下调基因大于70%,获得基因主要是与免疫应答、代谢通路、信号通路、氧化应激、细胞因子相关基因等,差异表达基因的信号值区为治疗前与治疗后两大类,说明与临床治疗结果符合。结论:围绝经期综合征肾阳虚证患者通过右归丸治疗后,下调基因超过70%,且主要与多种代谢途径密切相关。     

右归丸调控老龄肾阳虚免疫相关基因表达水平的研究

目的:研究右归丸对老龄肾阳虚体质干预前后其免疫相关基因定量表达水平的差异,探讨右归丸调控的分子靶向。方法:基于课题组前期获得的老龄肾阳虚证差异基因表达谱,筛选免疫相关差异表达基因28条。纳入老龄肾阳虚体质者,给予右归丸治疗28 d,以肾阳虚半定量诊断标准进行疗效评价,采用RT-PCR技术检测右归丸对老龄肾阳虚干预前后28条免疫相关基因的定量表达水平差异。结果:28条免疫相关基因经右归丸干预前后有7条基因存在表达水平差异。结论:经PCR验证的老龄肾阳虚免疫相关差异表达基因集中反映了肾阳亏虚对免疫系统功能的影响,提示肾阳虚体质与肿瘤发生可能存在某种关联机制。     

老龄冠心病心肾阳虚证的差异表达基因谱分析

目的:采用双通道基因表达谱芯片技术,分析老龄冠心病心肾阳虚证基因表达水平的异常。方法:采用病证结合的诊断标准,筛选老龄冠心病心肾阳虚证患者6名和同龄健康对照者6名,采血,分离白细胞,提取总RNA,做基因芯片检测。结果:经Microsoft excel和Microsoft office Access软件筛选,老龄冠心病心肾阳虚证与健康对照者比较,获得44条差异表达基因,主要涉及脂代谢、免疫、心血管病变的基因。结论:老龄冠心病心肾阳虚证的发生涉及一系列免疫和脂代谢紊乱的复杂的过程,与动脉硬化存在密切关联。     

类风湿关节炎类风湿因子阴性和阳性寒热证候患者外周血CD4+T细胞基因差异表达研究

目的探讨类风湿因子阴性和阳性类风湿关节炎寒热证候患者外周血CD4^＋ T细胞的基因表达差异。方法采集类风湿关节炎寒热证候患者及健康人空腹静脉血,纯化得到CD^4＋T细胞,利用基因芯片检测和分析技术,探索类风湿因子阴性和阳性类风湿关节炎寒热证候患者CD^4＋T细胞基因表达差异点。结果类风湿因子阴性和阳性类风湿关节炎患者之间有55条基因表达存在显著性差异,主要涉及免疫应答和信号传导;类风湿因子阳性类风湿关节炎寒热证候患者之间有71条基因异常表达,主要涉及功能代谢和免疫应答;类风湿因子阴性类风湿关节炎寒热证候患者之间有70条基因异常表达,没有与上述类风湿因子阴性和阳性患者之间55条基因重复,与类风湿因子阳性寒热证候之间的71条基因只有2条基因重复,主要涉及功能代谢。结论类风湿关节炎患者类风湿因子阴性和阳性之间的基因表达谱差异与寒热证候之间的基因表达差异有所不同,提示中医证候分类学具有基因表达谱依据。     

骨关节炎肾阳虚证信号转导差异表达基因分析

目的:以基因芯片技术从差异基因表达角度分析骨关节炎肾阳虚证与信号转导相关差异表达基因。方法:先后筛选出符合西医膝骨关节炎和中医肾阳虚证诊断标准的患者两组,每组8例,与8例正常对照组比较。两组病人均取血、提取mRNA,经标记、杂交、清洗、芯片扫描、图像的采集与数据分析等过程,分别混合与对照组杂交作两张基因芯片,最后对数据进行信息挖掘。结果:两张芯片各获得162和75条差异表达基因,其中与信号转导相关的分别为26条和11条;两张芯片共同差异表达基因6条,与信号相关的有3条,占总数的1/2。提示:信号转导是生命活动的一种最基本和最重要的方式。细胞间信号转导异常可能在肾阳虚证骨关节炎的发生、发展过程中起着重要作用。     

乙醇肝损伤小鼠肝脏的基因表达谱研究

 目的研究乙醇肝损伤小鼠肝组织的基因表达谱,筛选乙醇肝损伤相关基因,并探讨其肝损伤机制。方法①将实验小鼠分为正常对照组与乙醇肝损伤组,分别提取2组小鼠肝脏mRNA,经反转录后分别用Cy3,Cy5荧光标记,获得2组动物来源的cDNA探针;②cDNA探针与联合基因公司BiostarM-141S小鼠基因表达谱芯片杂交,结果由扫描仪扫描并用统计软件进行分析。结果与正常对照组相比,乙醇肝损伤组有117条基因发生差异性表达(0.83%),其中46条基因表达上调,另外71条基因表达下调。结论利用表达谱芯片结合实验动物模型能大规模、高通量地研究乙醇肝损伤相关基因,对进一步阐明乙醇对肝脏的损伤机制具有重要的意义。     

补肾法针刺配合中药治疗膝关节骨性关节炎疗效观察

目的：观察补肾法针刺配合中药治疗膝关节骨性关节炎的疗效。方法：对50例膝关节骨性关节炎患者进行补肾法针刺配合中药治疗,观察其临床疗效,并与50例健康志愿者进行VAS评分、膝关节间隙比值、膝关节穿刺液性状的比较。结果：痊愈2例,显效26例,有效16例,无效6例,总有效率为88.00%;治疗后,患者的VAS评分下降（P〈0.05）,关节间隙比值及穿刺液性状均得到改善（P〈0.05）。结论：补肾法针刺配合中药治疗膝关节骨性关节炎疗效显著,值得临床推广应用。     

追风透骨丸治疗骨关节炎的疗效观察

目的：追风透骨丸治疗骨关节炎（ＯＡ）的临床验证。方法：ＯＡ属中医骨痹范畴,１００例按中医辨证,其中肾虚髓亏证型３２例,肾虚寒凝证型３４例,瘀血阻滞证型３４例。观察疗效采用分级计分法,并进行安全性观察。结果：３个证型疗效接近,均无发现不良反应,较为安全可靠。结论：适宜骨关节炎患者长期服用。     

艾滋病免疫重建不全患者Toll样受体信号转导通路改变及免疫2号方干预的影响

目的:采用基因芯片技术,从Toll样受体信号转导通路的角度,探讨艾滋病免疫重建不全患者的免疫失调机制及中药免疫2号方的干预作用。方法:采集4例艾滋病免疫重建不全患者疗前以及联合中药免疫2号方干预6个月后的外周血单个核细胞(PBMC),另以4例HIV抗体阴性健康献血员做对照,抽提mRNA,通过逆转录后以TLRs信号通路实时定量PCR芯片进行杂交,采用ΔΔCt方法计算RNA表达量,寻找TLR通路上显著表达的差异基因。结果:筛选出与艾滋病免疫重建不全有关的基因显著上调≥2倍的有5个(干扰素-γ、IL-6、IL-8等),下调≥2倍的基因有4个(TLR9、NF-κB等),通路上游以基因下调改变为主(TLR9、TOLLIP、TRIF等),下游则多为上调改变(AP-1、IL-6、IL-8)。联合免疫2号方干预后,相关基因显著上调≥2倍的有7个(IL-2、IL-10、TLR1等),无显著下调基因,对通路上游基因的上调作用最为显著(如TLR1、CD14、TRAF6)。结论:HAART免疫重建不全的艾滋病患者细胞内TLR9较正常人表达低下,IRAK1、NF-κB表达下调,提示TLR9介导的信号转导系统异常是艾滋病患者免疫重建不全发生的可能机制之一;免疫2号方调节机体免疫功能的机制可能主要通过上调TLR1和CD14表达,进而引起下游一系列通路信号分子传递而实现。     

中医药治疗肾虚血瘀型膝骨关节炎研究进展

文章综述近年中医药治疗肾虚血瘀型膝骨关节炎研究文献,认为"肾虚""血瘀"是膝骨关节炎发生发展的关键因素,风、寒、湿邪为其外感诱因.中医药治疗包括内服中药、中药外用、推拿、针灸、针刀和基于"骨正筋柔"理念下的保膝治疗,疗效确切,可显著改善膝关节疼痛和功能活动、软组织张力、延缓软骨退变等,但仍需进一步完善相关基础和临床研究...     

细胞周期相关基因微阵列在中药抑制肝癌细胞增殖作用机理研究中的应用

目的 :设计DNA微阵列并利用其研究中药抗肿瘤的分子机制。方法 :制备了包含有与细胞周期和DNA损伤调控检测相关的 2 4个基因的cDNA微阵列 ,选择了本实验室已证明对肝癌细胞有抑制效果的中药 ,通过流式细胞仪检测其对细胞周期的影响 ,提取药物作用后的RNA ,反转录后标记探针与微阵列杂交 ,检测中药作用细胞后对细胞周期及损伤检测相关基因转录的影响。结果 :4种中药作用SMMC 772 1后 ,细胞周期基因和损伤检测点基因均有不同程度改变 ,表现为部分上调 ,部分下调 ,这些和流式细胞术检测的结果是相符合的。结论 :DNA微阵列技术为中草药治疗癌症的研究提供了可供参考的分子生物学依据。     

丹参功能基因组学研究Ⅱ——丹参毛状根不同时期基因表达谱分析

目的：研究丹参毛状根不同时期的基因表达谱,发掘丹参功能基因。方法：通过比较不同时期丹参毛状根的生长量和次生代谢产物含量确定用于cDNA芯片杂交的材料。采用间接标记法进行探针标记后进行杂交反应,GenePix Pro 4.0软件对芯片图像进行分析,数据用Lowess方法进行归一化处理。采用两倍差异标准结合T检验来确定差异表达基因。Northern点杂交检验4个基因与芯片杂交结果的一致性。差异基因单向测序后经过gap4软件拼接聚类,然后利用BLASTX,BLASTN进行比对分析,利用Gene Ontology和KEGG进一步预测基因的功能。结果：30~45 d为丹参毛状根的快速增殖期,45~60 d为丹参次生代谢产物的快速积累期。将45,60 d丹参毛状根分别与30 d材料进行杂交,得到203个差异基因。4个基因Northern点杂交的结果与芯片杂交结果一致。测序后得到172条EST,拼接聚类后形成114个Unigene,其中功能已知基因62个,功能未定的假想蛋白34个,相似性较低的未鉴定基因9个,无显著相似性的基因9个。 “GO”分类中67个基因得到注释,KEGG分析中74个基因得到注释,26个有详细的代谢途径分析。结论：得到一系列次生代谢相关基因如细胞色素P450、二萜合酶等基因片段,为深入开展丹参功能基因组学研究提供了基础。     

温针灸任脉穴合生化汤治疗药物流产后宫内组织物残留临床观察

目的：观察温针灸任脉穴合生化汤治疗药物流产后宫内组织物残留的临床疗效。方法：符合诊断的86例患者随机分为3组,针药组、西药组及中药组,7天后复查超声检查及观察症状判断疗效。结果：针药组的有效率为77.4%,西药组的有效率为51.9%,中药组的有效率为57.1%。针药组与西药组的疗效比较以及针药组与中药组的疗效比较,差异均有统计学意义（P〈0.05）;而西药组与中药组的疗效比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：温针灸任脉穴合生化汤在治疗一定范围内的药物流产后宫内组织物残留有较好的效果。     

运用膝关节熏洗器中药熏洗治疗膝骨关节炎的临床研究

目的观察运用膝关节熏洗器中药熏洗治疗膝骨关节炎的临床疗效。方法将120例膝骨关节炎患者随机分为治疗组和对照组各60例,对照组采用中药热敷加红外光治疗,治疗组运用膝关节熏洗器进行中药熏洗治疗,2组疗程均为3周。观察2组治疗后VAS疼痛评分和Lequesne指数改善情况、临床疗效、舒适率和不良反应发生情况。结果 2组治疗后VAS疼痛评分、Lequesne功能指数、临床疗效及舒适率比较均有显著性差异,治疗组无明显不良反应。结论运用膝关节熏洗器中药熏洗治疗膝骨关节炎疗效显著,舒适性和安全性好,值得推广应用。