大鼠心肌缺血再灌注损伤与热休克蛋白72的保护作用

目的：观察热休克反应(heat shock response，HSR)后0、24、48、96、192h热休克蛋白72(heat shock protein 72，HSP72)表达水平的变化及再灌注后心肌组织超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)含量、心肌收缩功能变化，探讨HSP72对缺血再灌注心肌保护的可能机制。方法：Wistar大鼠48只．体质量250—300g，雌雄不均，随机分为6组，每组8只。全身高温42℃维持15min制作热休克模型。各组心脏离体逆行灌注．常温下(37℃)缺血25min，再灌注40min。测定缺血前、再灌注后心肌组织SOD含量，心肌收缩功能，观察各组心肌HSP72表达。结果：实验组再灌注后24h和48h心肌组织SOD活性分别为(22．37&;#177;4．75)、(23．39&;#177;4．86)Nu／mg，明显高于对照组。对照组和热预处理后0 h几乎无HSP72表达(面密度)，其表达高峰在热预处理后24，48h。分别为137．89&;#177;25．25，146．09&;#177;28．34，随后逐渐降低，于192h返回基线水平。HSP72表达与再灌注后心肌组织SOD(r=0．9234)，心功能恢复率LVSP(r=0．9012)呈显著正相关(P&;lt;0．05)．结论：热休克蛋白能提高抗氧化酶活性，减轻心肌缺血再灌注损伤。     

大鼠心肌缺血再灌注损伤与热休克蛋白72的保护作用

目的:观察热休克反应(heatshockresponse,HSR)后0、24、48、96、192h热休克蛋白72(heatshockprotein72,HSP72)表达水平的变化及再灌注后心肌组织超氧化物歧化酶(superoxidedismutase,SOD)含量、心肌收缩功能变化,探讨HSP72对缺血再灌注心肌保护的可能机制。方法:Wistar大鼠48只,体质量250～300g,雌雄不均,随机分为6组,每组8只。全身高温42℃维持15min制作热休克模型。各组心脏离体逆行灌注,常温下(37℃)缺血25min,再灌注40min。测定缺血前、再灌注后心肌组织SOD含量,心肌收缩功能,观察各组心肌HSP72表达。结果:实验组再灌注后24h和48h心肌组织SOD活性分别为(22.37±4.75)、(23.39±4.86)Nu/mg,明显高于对照组。对照组和热预处理后0h几乎无HSP72表达(面密度),其表达高峰在热预处理后24,48h,分别为137.89±25.25,146.09±28.34,随后逐渐降低,于192h返回基线水平。HSP72表达与再灌注后心肌组织SOD(r=0.9234),心功能恢复率LVSP(r=0.9012)呈显著正相关(P<0.05).结论:热休克蛋白能提高抗氧化酶活性,减轻心肌缺血再灌注损伤。     

脊髓缺血再灌注损伤中热休克蛋白表达的研究

目的研究脊髓缺血再灌注损伤(SCII)后热休克蛋白(HSP70)表达的变化。方法制作SCII动物模型,采用光镜、激光多普勒超声、免疫组化等技术,研究SCII后HSP70表达的变化。结果(1)缺血30min,血灌流量平均下降85.37%,再灌流即刻血灌流量迅速升高,再灌流10min左右达到最高点。再灌流30min,血灌流量基本恢复到缺血前的基线水平,以后逐渐降低。(2)缺血后部分大鼠再灌注后出现“二次瘫痪”现象。(3)脊髓缺血30min再灌注60min后即有HSP70的表达增强,随着再灌注时间的延长,HSP70表达逐渐增多,在再灌注240min达到高峰。此后,HSP70表达逐渐减少,在再灌注24h基本消失。结论(1)脊髓缺血一定时间后恢复血液供应,可以发生再灌注损伤。(2)脊髓缺血再灌注后HSP70的表达增加。     

脊髓缺血再灌注损伤中热休克蛋白表达的研究

目的：研究脊髓缺血再灌注损伤（SCⅡ）后热休克蛋白（HSP70）表达的变化。方法：制作SCⅡ动物模型，采用光镜，激光多普勒超声，免疫组化等技术，研究SCⅡ后HSP70表达的变化。结果：（1）缺血30min，血灌流量平均下降85．37％，再灌流即刻血灌流量迅速升高，再灌流10min左右达到最高点，再灌流30min，血灌流量基本恢复到缺血前的基线水平，以后逐渐降低。（2）缺血后部分大鼠再灌注后出现“二次瘫痪”现象。（3）脊髓缺血30min再灌注60min后即有HSP70的表达增强，随着再灌注时间的延长，HSP70表达逐渐增多，在再灌注240min达到高峰，此后，HSP70表达逐渐减少，在再灌注24h基本消失，结论：（1）脊髓缺血一定时间后恢复血液供应，可以发生再灌注损伤。（2）脊髓缺血灌注后HSP70的表达增加。     

热休克联合缺血预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤早期的保护作用研究

目的:探讨热休克联合缺血预处理(IPC)对大鼠心肌缺血再灌注损伤(MIRI)早期是否有叠加保护效应。方法:健康成年雄性Wistar大鼠50只,随机分为5组:伪手术组(SO组)、MIRI组、经典IPC组、热休克预处理组(HS组)和热休克联合经典IPC干预组(HS+经典IPC组)。左冠状动脉结扎法建立MIRI模型。各组经预处理后,动态监测左室收缩压(LVSP)、左室内压上升/下降最大速率(±dp/dtmax)、左室舒张末压(LVEDP)等血流动力学指标,检测血浆肌酸激酶同工酶(CK-MB)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平。术毕取心脏,于光镜下观察心肌组织病理变化。结果:与HS组或经典IPC组比较,HS+经典IPC组能明显降低MIRI复灌60min后LVEDP(P<0.05),LVSP、±dp/dtmax亦降低,但差异无显著性(P>0.05),血浆CK-MB漏出量减少,差异有显著性(P<0.05)。HS+经典IPC组可明显降低血浆MDA水平,升高SOD活性,其效应与HS组相近,但优于IPC组,差异有显著性(P﹤0.05)。光镜下,3种预处理均能明显减轻心肌组织病理损害。结论:热休克联合经典IPC干预对MIRI早期可能具有一定的叠加保护作用。     

热休克蛋白与心血管疾病

在应激状态下，各种有机体都有其共同的分子反应。即正常基因表达的抑制和一组特殊基因-熟休克蛋白基因的激活和表达，并导致热休克蛋白(heat shock protein,HSP)的大量产生。近来研究发现。HSP与心血管疾病关系密切，可保护缺血再灌注损伤的心肌细胞；与动脉硬化的发病机制有关；且是血管应激反应的重要分子等。但热休克蛋白的生物学功能是多样的。利弊共存，而他更多的生物学潜在功能需进一步研究。     

银杏叶提取物对大鼠肾脏缺血-再灌注损伤热休克蛋白表达的影响

目的　探讨银杏叶提取物通过诱导热休克蛋白的合成 ,保护大鼠肾脏缺血 再灌注损伤作用与机理。方法　 34只SD大鼠随机分为假手术组 (n =10 )、单纯缺血 再灌注组 (n =12 )、缺血再灌注 +银杏叶提取物处理组 (n=12 )。通过免疫组织化学方法观察诱导型HSP70的表达情况。结果　与假手术组相比 ,单纯缺血 再灌注组肾小管上皮细胞呈明显的缺血性改变 ,HSP70表达明显增强 ,两组差异有显著性(P <0 0 1) ;缺血再灌注 +银杏叶提取物处理组与单纯缺血 再灌注组相比 ,肾小管上皮细胞缺血性改变减轻 ,HSP70表达增强 (P <0 0 5 )。结论　银杏叶提取物诱导大鼠肾缺血 再灌注组织中HSP70表达 ,减轻大鼠肾脏缺血再灌注损伤     

自由基与心肌缺血再灌注损伤

1960年Jennings第一次提出心肌缺血再灌注损伤的概念，证实再灌注会引起心肌超微结构不可逆坏死，并逐渐引起医学界的高度重视。国内外大量实验证明缺血再灌注可加重心、脑、肾、肝、肺、肠等器官损伤，成为影响缺血治疗效果的一个重要因素。自由基、钙超载、心肌纤维能量代谢障碍、血管内皮细胞、中性粒细胞、细胞粘附分子和细胞凋亡等均可能参与缺血再灌注损伤的发病过程．现就自由基与心肌缺血再灌注损伤关系作一综述。     

脊髓缺血再灌注损伤后神经元凋亡与热休克蛋白：全部还是部分影响

目的：诱导抗细胞凋亡的热休克蛋白大量表达，观察其对兔热休克模型脊髓缺血再灌注损伤神经元凋亡的影响。方法：实验于2004-06／09在苏州大学附属第一医院骨科实验室完成。6～8个月新西兰大白兔66只，随机分为3组：①热休克组30只，先制成兔热休克模型，24h后再按脊髓缺血再灌注模型操作。②缺血组30只，单纯制成脊髓缺血再灌注模型。③假手术组6只。除不夹闭腹主动脉外，其余操作同缺血组。④实验过程：于再灌注后8，16，24，48，72h 5个时间点热休克组及缺血组各随机抽取6只兔（假手术组6只于8h取出）后肢运动功能进行评分（0分为全瘫，5分为正常）采用Jacob法。后肢运动功能评分后，处死兔并取L2-5。脊髓组织观察热休克蛋白70的表达量行免疫组织化学染色法，观察脊髓神经元凋亡情况采用原位缺口末端标记法染色法。计算脊髓前角神经元凋亡率[凋亡率=阳性神经元数／（阳性神经元数＋阴性神经元数）&;#215;100％]。结果：66只白兔均进入结果分析。①兔后肢运动功能Jacob评分：24，48，72h热休克组明显优于缺血组（t=2．825-2．953，P〈0．05）。②兔脊髓组织热休克蛋白表达情况：8，16，24，48h热休克组表达量显著高于缺血组（t=8．337～20．470，P〈0．01）。③兔脊髓灰质神经元凋亡结果：8，16，24h热休克组明显少于缺血组[（19．73&;#177;3．71）％比（20．87&;#177;3．33）％，（27．29&;#177;4．20）％比（36．05&;#177;5．20）％，（20．64&;#177;4．34）％比（35．28&;#177;4．27）％，（t=3．884～5．462，P〈0．05）]。结论：热休克蛋白可以明显抑制脊髓缺血再灌注损伤后的神经元凋亡，保护脊髓功能。同时提示热休克蛋白不能全方位地抑制神经元凋亡，部分神经元的凋亡对兔后肢运动不产生显著影响。     

托吡酯促进高血压鼠脑缺血再灌注损伤后热休克蛋白70表达的研究

目的观察托吡酯对高血压大鼠急性脑缺血再灌注损伤后热休克蛋白70(HSP70)表达的影响,探讨其神经保护作用机制。方法Wistar大鼠行双肾动脉狭窄术制成高血压模型,喂养2个月后随机分为3组:托吡酯干预组、缺血再灌注组和假手术对照组。线栓法制做大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,缺血2h,再灌注1d。取脑组织切片经免疫组化染色后,用病理图象分析仪计数HSP70阳性和阴性细胞数并计算阳性细胞比。结果托吡酯干预组大鼠HSP70的表达高于缺血再灌注组(P<0.05),假手术对照组未见HSP70表达。结论托吡酯能促进HSP70的表达,对缺血再灌注损伤的脑组织有保护作用。     

脑缺血再灌注损伤模型大鼠参附注射液干预后热休克蛋白70的表达

背景:参附注射液可通过改善微循环,增加组织血氧含量发挥对缺血再灌注损伤的保护作用。目的:观察参附注射液对大鼠脑缺血再灌注损伤后热休克蛋白70表达的影响。方法:将SD大鼠随机分为3组:假手术组、大脑中动脉闭塞缺血再灌注损伤模型组、参附注射液组。结果与结论:应用参附注射液1d后,改善了缺血再灌注大鼠脑部神经细胞的排列,减轻了胞体肿胀,核固缩等现象,应用3d后改善更为明显,胞体结构已较清晰,核固缩、溶解程度显著减轻,胞体肿胀现象明显改善。参附注射液组治疗后1,3d热休克蛋白70表达明显高于假手术组与模型组。提示参附注射液对脑缺血再灌注具有显著的保护作用,其作用可能是通过促进热休克蛋白70的表达来实现的。     

脑缺血再灌注损伤模型大鼠参附注射液干预后热休克蛋白70的表达

背景：参附注射液可通过改善微循环,增加组织血氧含量发挥对缺血再灌注损伤的保护作用。目的：观察参附注射液对大鼠脑缺血再灌注损伤后热休克蛋白70表达的影响。方法：将SD大鼠随机分为3组：假手术组、大脑中动脉闭塞缺血再灌注损伤模型组、参附注射液组。结果与结论：应用参附注射液1d后,改善了缺血再灌注大鼠脑部神经细胞的排列,减轻了胞体肿胀,核固缩等现象,应用3d后改善更为明显,胞体结构已较清晰,核固缩、溶解程度显著减轻,胞体肿胀现象明显改善。参附注射液组治疗后1,3d热休克蛋白70表达明显高于假手术组与模型组。提示参附注射液对脑缺血再灌注具有显著的保护作用,其作用可能是通过促进热休克蛋白70的表达来实现的。     

Free radicals and myocardial ischemia and reperfusion injury

There is a growing body of evidence for the role of free radicals in mediating myocardial tissue injury during myocardial ischemia and in particular during the phase of myocardial reoxygenation. Associated with myocardial ischemia and reperfusion is the generation of oxygen-derived free radicals from a variety of sources that include the mitochondrial electron transport chain; the biosynthesis of prostaglandins; the enzyme xanthine oxidase; and circulating elements in the blood, with the polymorphonuclear neutrophil assuming a primary focus of attention. Experimental studies have shown that free radical scavengers (e.g., N-[2-mercaptopropionyl]glycine) and enzymes that scavenge or degrade reactive species of oxygen (superoxide dismutase or catalase) can reduce the mass of myocardial tissue that undergoes irreversible injury. Additionally allopurinol, which inhibits the enzyme xanthine oxidase, reduces ultimate infarct size, putatively by reducing the xanthine oxidase generation of superoxide anion. Neutrophils that enter the ischemically injured myocardium under the influence of chemotactic attraction and activation of the complement system generate and release highly reactive and cytotoxic oxygen derivatives that are destructive to the vascular endothelium and to the cardiac myocytes. Studies have documented that neutrophil depletion or suppression of neutrophil function (ibuprofen, nafazatrom, BW 755C, or more recently with prostacyclin or iloprost) results in a significant salvage of myocardial tissue that is subjected to a period of regional ischemia followed by reperfusion. Our current understanding of the events associated with myocardial ischemia suggests that within the ischemic myocardial region or area at risk, there is a population of cells that are reversibly injured and that reperfusion within a specified period (less than 3 hours) of time is capable of restoring the majority of the jeopardized cells to a normal status, but that the act of reperfusion itself will lead to the sudden demise of a fraction of the cells because of the cytotoxic effects of reactive species of oxygen derived from one or more of the sources indicated above. The efforts to minimize the amount of tissue that undergoes cell death as a result of myocardial ischemia demand that early reperfusion be established. However, the reintroduction of molecular oxygen and the circulating elements of the blood will be associated with an "explosive" and self-limited destruction of some of the myocardial cells in the area at risk.(ABSTRACT TRUNCATED AT 400 WORDS)     

大鼠心肌缺血再灌注损伤实验模型研究

目的:改进心肌缺血再灌注模型制备方法,提高造模成功率,以便使其能反复地多次进行心肌缺血再灌注实验和确保心肌缺血预处理实验顺利进行。方法:采用成年SD大鼠制作心肌缺血再灌注损伤模型,剪断肋骨同时结扎肋间动脉,不使用扩胸器,直接用结扎线将肋骨残端用力拉向两侧,充分暴露心脏;结扎冠状动脉操作在胸腔内进行。结果:用改进的方法造模成功率100%;用传统的方法造模的成功率为80%。应用此法造模进行反复多次缺血再灌实验的成功率为90%;而用传统的方法造模进行反复多次缺血再灌实验的成功率仅为10%。结论:改进后的方法简单易行,操作方便,成功率高。此法造模是目前完成心肌缺血再灌注实验比较好的模型,又是保证大鼠心肌缺血预处理实验成功的方法。     

热休克蛋白27介导异氟醚预处理延迟相对缺血/再灌注损伤兔心肌的保护作用研究

目的 探讨热休克蛋白27(HSP27)在异氟醚预处理延迟相对缺血/再灌注(I/R)兔心肌保护中的作用机制.方法 将30只新西兰大白兔随机分成假手术组(C组)、I/R组和体积分数为2%的异氟醚预处理组(S组)3组,每组10只.C组吸入纯氧2 h,24 h后仅行左冠状动脉(冠脉)套线而不阻断血流160 min;I/R组吸入纯氧2 h,24 h后结扎左冠脉前降支阻断血流40 min,再灌注120 min;S组吸入2%的异氟醚和纯氧2 h,24 h后处理同I/R组.再灌注后抽血测定各组丙二醛(MDA)含量;用伊文思蓝和氯化三苯四唑(TTC)染色法测定心肌梗死面积;用蛋白质免疫印迹法(Western blotting)测定各组HSP27和核转录因子-κB(NF-κB)的蛋白表达.结果 异氟醚预处理延迟相可降低I/R损伤心肌梗死面积[(19.7±2.8)%比(37.8±1.75)%],上调HSP27表达[(84.5±4.3)灰度值比(53.1±3.8)灰度值],下调NF-κB表达[(58.6±4.2)灰度值比(119.3±5.6)灰度值],降低MDA含量[(5.24±0.45)kU/L比(9.42±0.83)kU/L],差异均有统计学意义(P均＜0.05).结论 HSP27介导了异氟醚预处理延迟相对I/R心肌的保护作用.     

自噬与缺血再灌注损伤

自噬是存在于真核细胞生物中的一种细胞自我吞噬的现象。在生理状态下,可以维持机体内环境的稳定。在多种疾病的发生过程中,自噬也发挥重要作用。实验证明在缺血再灌注损伤的整个过程中,均有自噬的参与,但在缺血阶段和再灌注阶段,自噬有可能发挥不同的作用。在缺血阶段,自噬发挥保护细胞的作用,而在再灌注阶段,自噬可能会进一步加重细胞损伤甚至导致细胞死亡。     

心肌缺血/再灌注损伤机制研究进展

心肌缺彬再灌注损伤其机制主要有氧自由基生成增多、钙超载、能量代谢障碍、血管内皮细胞功能障碍、心肌细胞凋亡及粒细胞浸润等,本文对此作一综述。     

龙胆苦甙对减轻乳鼠心肌缺血再灌注损伤的细胞研究

目的：观察龙胆苦甙（Gentiopicroside,GPS）后处理对离体心肌细胞缺血/再灌注损伤（ischemia and reperfusion injury,I/R）的拮抗作用及其可能的机制。方法采用SD大鼠乳鼠培养心肌原代细胞,用缺氧复氧模型模拟缺血再灌注（stimulated ischemia reperfusion,SI/R）。实验分为正常对照组（Control＋ScrambleRNA＋Veh）;缺氧复氧组（I/R＋ScrambleRNA＋Veh）;缺氧复氧＋龙胆苦甙后处理组（I/R＋ScrambleRNA＋GPS 组）以及缺氧复氧＋AktSiRNA＋龙胆苦甙后处理组（I/R＋AktSiRNA＋GPS）。采用化学法缺氧复氧模型,缺氧2 h,复氧4 h。复氧前给予GPS药物,检测心肌细胞乳酸脱氢酶（LDH）以及TUNEL染色确定心肌细胞的损伤程度以及抑制Akt表达后GPS的保护作用变化。结果与I/R＋ScrambleRNA＋Veh组相比,I/R＋ScrambleRNA＋GPS组LDH明显降低（P＜0.01）,TUNEL染色阳性率增加减少（P＜0.01）,Akt/Gsk3β信号通路磷酸化程度明显增加（P＜0.01）。与I/R＋ScrambleRNA＋GPS组相比,SI/R＋SiAktRNA＋GPS组,LDH活性显著增加（P＜0.01）,TUNEI染色阳性率增加（P＜0.01）,Gsk3β磷酸化程度减弱（P＜0.01）。结论 GPS后处理对I/R大鼠心肌具有保护作用,其作用机制与AKT/Gsk3β信号通路的活化有关。