结核分枝杆菌耐药分子生物学机制研究进展

摘要：由于近年抗菌药物的滥用、耐药结核菌株基因突变和艾滋病共患结核患者的增多等因素,结核病的发病率呈上升趋势,临床出现大量的耐药结核病患者,结核病的预防和治疗存在巨大困难。因此,全面了解结核菌耐药的分子机制对于预防和监测结核病的发生,建立快速耐药结核株分子检测方法和抗结核新药的研发至关重要。本文就耐药结核分枝杆菌常见基因突变和分子作用机制进行阐述。     

结核分枝杆菌耐药机制及耐药性检测的研究进展

自 2 0世纪 80年代以来 ,结核病疫情重新上升 ,成为严重危害公共卫生的问题之一。据世界卫生组织估计 ,目前全球约有 2 0亿人感染结核分枝杆菌 (结核菌 ) ,其中约有 5 0 0 0万人感染耐药结核菌[1] 。因此对结核菌耐药机制和耐药性检测的研究意义重大。结核菌的耐药性的产生主要是由于不合理用药引起的结核菌内抗结核药物作用靶基因突变所致[2 ] 。目前检测结核菌耐药性的方法有表型检测和基因型检测两大类。一、结核菌的耐药机制染色体基因变异是结核菌产生耐药性的主要机制。结核菌 95 %以上的基因变异是直接由于抗结核药物引起[2 ] 。细菌…     

耐药结核分枝杆菌检测方法的研究进展

传统的结核分枝杆菌耐药性的检测,是依靠培养法进行药敏试验,是体外结核分枝杆菌耐药性的直接证据,但费时、费力。近年来,已建立了一些新的耐药性检测方法。西方不耐药基因突变的检测及耐药表型的检测这两方面作一综述。     

结核分枝杆菌耐药基因与检测方法的研究进展

结核分枝杆菌(MTB)的高耐药问题已成为新世纪结核病控制的三大难题之一[1].近年来,随着分子生物学技术的迅速发展,人们对MTB耐药的分子机制进行了深入研究,并已取得了很大进展.本文就此内容综述于下.     

耐药结核分枝杆菌检测方法的研究进展

传统的结核分枝杆菌耐药性的检测,是依靠培养法进行药敏试验,是体外结核分枝杆菌耐药性的直接证据,但费时、费力。近年来,已建立了一些新的耐药性检测方法。本文就耐药基因突变的检测及耐药表型的检测这两方面作一综述。     

结核分枝杆菌耐药的分子机制及分子生物学检测方法进展

结核分枝杆菌原发性和继发性耐药是世界范围问题,因此进行结核分支杆菌的耐药性机制和检测研究,对有效地防治结核病,尤其是指导临床用药上,具有极其重要的意义。结核分枝杆菌特异性突变位点是其耐药性的分子机制。     

结核分枝杆菌耐药性检测研究进展

自20世纪80年代以来，结核病疫情重新上升，据WHO估计，目前全球约有20亿人感染结核分枝杆菌(TB)，其中约有5000万人感染耐药TB。因此对TB耐药机制和耐药性检测的研究意义重大。分子生物学技术的发展，为研究TB提供了良好技术平台，极大地促进了TB耐药性检测的研究进程。目前临床正在使用和研究的药敏试验方法归纳起来有表型和基因检测2类。     

结核分枝杆菌耐药基因突变的研究

结核病在许多国家出现回升的一个主要原因是细菌耐药性问题 ,随着联合药物治疗的使用 ,又出现了耐多药结核分枝杆菌 (结核菌 ) ,使许多结核病 ,难以治疗 ,增加了死亡率[1] 。目前对于结核菌的耐药机制的研究已有了较大的进展 ,细菌内一些酶的基因突变或缺失是导致耐药的重要原因。随着分子生物学技术的发展 ,通过聚合酶链反应 (PCR)等方法对耐药基因进行快速检测 ,大大缩短了检测时间 (2～3d) ,为耐药结核菌的治疗提供参考。本研究通过PCR -SSCP ,PCR -测序技术检测结核菌临床分离株的katG、rpoB和rpsL基因序列 ,分析济南军区结核菌…     

结核分枝杆菌耐药基因与检测方法的研究进展

结核分枝杆菌(MTB)的高耐药问题已成为新世纪结核病控制的三大难题之一[1]。近年来,随着分子生物学技术的迅速发展,人们对MTB耐药的分子机制进行了深入研究,并已取得了很大进展。本文就此内容综述于下。一、研究内容近年来,国内外研究者主要从遗传学领域研究入手,企图阐明MTB耐药的分子基础,以找出耐药基因序列。并寻找耐一种药物可能存在的多种耐药基因、寻找耐多药菌株的可能耐药机制、寻找耐药基因突变与可能的诱变因素之关系,建立快速检测MTB耐药基因型的分子生物学诊断技术,以便在控制结核病的流行中发挥作用。二、研究进展(一)阐…     

结核分枝杆菌培养及耐药监测

目的调查分析衢州市结核分枝杆菌的耐药情况,为预防及临床治疗提供科学依据。方法结核分枝杆菌培养使用Bact／Alert3 D120全自动培养仪,药敏试验采用WHO推荐的比例法。结果74株结核分枝杆菌的总耐药率为31．1％,原发耐药率为19．6％,获得性耐药率为50．0％,获得性耐多药率为7．1％。结论衢州市结核分枝杆菌原发耐药率、耐多药率及获得性耐药率高于全国平均水平,且本地区结核分枝杆菌耐药以耐链霉素、利福平及异烟肼为主。     

成都市结核分枝杆菌耐药状况分析

目的分析成都市近年一线抗结核药的耐药状况,为耐药结核病预防控制提供依据。方法对成都市2007年1月-2009年12月就诊的结核患者,临床分离株培养鉴定为结核分枝杆菌的菌株采用绝对浓度法进行一线抗结核药：链霉素（SM）、异烟肼（INH）、利福平（RF）、乙胺丁醇（EMB）耐药性检测,分析结核分枝杆菌的耐药情况。结果 1235例结核患者中,总耐药率和总耐多药率分别为28.83%、14.01%,初始耐药率和获得性耐药率分别为12.82%、61.27%。近3年耐多药率有下降趋势,但获得性耐药率呈逐年上升趋势。结论成都市结核耐药状况仍然比较严重,进一步加强耐药结核的监测和控制非常重要。     

结核分支杆菌耐异烟肼分子机制的研究

目的探讨耐异烟肼结核分支杆菌KatG基因突变在结核分支杆菌耐异烟肼耐药性测定中的应用价值。方法采用聚合酶链反应——单链构象多态性(PCR-SSCP)分析72株结核分支杆菌KatG基因突变。其中32株为异烟肼(INH)敏感株,40株为INH耐药株,用PCR-SSCP图谱鉴定扩增产物有无突变,H37RV标准株作对照。结果所有INH敏感株SSCP带谱与对照相同;40株INH耐药株中15株与对照相同,25株有不同程度的差异,INH耐药KatG基因突变或缺失的阳性率为62.5%。结论多数结核分支杆菌耐INH是由于其KatG基因突变所致,用PCR-SSCP筛选突变株可达到快速检测结核分支杆菌INH耐药的目的。     

Xpert MTB/RIF检测痰标本结核分枝杆菌与利福平耐受性的临床应用研究

目的分析Xpert MTB/RIF方法用于临床快速检测结核分枝杆菌(MTB)与利福平耐受性的临床意义。方法收集2015年1-12月在惠州市结核病防治研究所及5个县区医院结核科就诊的肺结核患者痰标本552例,进行涂片镜检、Xpert MTB/RIF核酸检测和改良罗氏培养,并对培养阳性者进行药敏实验。评价各种方法 MTB检测灵敏度与特异度,对比传统药敏方法和Xpert MTB/RIF检测利福平耐药性的结果并分析。结果 Xpert MTB/RIF与改良罗氏培养法对MTB检测结果相比,敏感度95.3%、特异度93.1%;耐药性对比结果中,所有阳性标本中利福平耐药的敏感度82.1%,特异度97.8%;Xpert MTB/RIF检测MTB分级与改良罗氏培养分级一致性分析中,kappa=0.688,提示两者结果具有良好的一致性。结论 Xpert MTB/RIF可用于临床早期快速检测结核分枝杆菌与利福平耐药检测的筛查,有利于临床快速决策。     

HIV合并结核分枝杆菌感染的探索研究

目的 了解该地区HIV合并结核分枝杆菌(TB)感染的发展状况.方法 随机选取2008年1月至2010年12月在该院检查并接受治疗的177例HIV感染者作为调查对象,统计这些病例中感染TB的例数,分析该地区HIV感染者合并TB感染的百分率,并进行TB药敏分析.结果 在177例HIV感染患者中有29例患者合并感染TB,占16.38%,其中男21例,占72.41%(21/29),女8例,占27.59%(8/29),差异有统计学意义(P<0.01).而在29例HIV合并TB感染患者中,TB对利福平、乙胺丁醇、链霉素、异烟肼的敏感性分别为100.00%、100.00%、89.65%、75.86%.结论 HIV合并TB感染是HIV患者死亡的最重要因素,在临床中应加强检测并合理使用抗菌药物和抗病毒药物,以减少HIV感染者的病死率.     

刃天青显色法检测结核分枝杆菌的耐药性

目的用刃天青显色法检测结核分枝杆菌对4种一线抗结核药物的耐药性,并探讨该法的临床应用价值。方法来自河南省3家结核病医院的共240株结核分枝杆菌分别用刃天青显色法检测异烟肼(INH)、利福平(RFP)、乙胺丁醇(EMB)、硫酸链霉素(SM)的耐药性,并与比例法作比较。结果刃天青显色法检测平均时间为8d,与比例法相比结果一致性好,INH、RFP、EMB、SM 4种药物的折点浓度分别为0.25、2.0、4.0、2.0μg/mL。结论刃天青显色法检测结核分枝杆菌的耐药性具有成本低、快捷、操作简便、准确等优点,为结核耐药检测提供了一种较好的方法。     

2010-2012年浙江省衢州市涂阳肺结核患者结核菌株耐药状况分析

目的 分析结核分枝杆菌的耐药情况与耐药谱,为制订结核病控制对策提供依据。 方法 对2010-2012年期间在浙江省衢州市各个结核病定点医院就诊新发和复治涂阳患者进行结核杆菌培养,鉴定为结核分枝杆菌的菌株采用比例法进行6种抗结核药物[异烟肼(H)、利福平(R)、乙胺丁醇(E)、链霉素(S)、左氧氟沙星(OFX)、卡那霉素(KM)]耐药性测试。 结果 入选1169株结核分枝杆菌中,总体耐药率为22.80%,总体耐多药率为5.13%,广泛耐多药率为0.43%;单耐药谱位于前3位的是异烟肼、链霉素、氧氟沙星,多耐药谱位于前3位的是INH+SM、INH+SM+OFX、RFP +OFX;耐多药谱位于前3位的是INH+RFP+S、INH+RFP+SM+OFX和INH+RFP。 结论 耐药结核病已对衢州市结核病控制造成较大威胁,相关部门必须采取针对性的措施控制耐药结核病的流行。     

1860株老年复治肺结核患者结核分枝杆菌耐药性分析

目的：分析老年复治肺结核患者中分离的结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis）的耐药性。方法收集上海市肺科医院2005年1月至2013年12月1860例老年复治肺结核患者（复治组）分离菌株,对其进行耐药性分析。另选300例同期初治肺结核患者作为对照（初治组）。比较两组患者病原菌的耐药情况。结果复治组男性与女性患者中分离的病原菌对链霉素、利福平、乙胺丁醇、阿米卡星、卷曲霉素和氧氟沙星的耐药率比较,差异有统计学意义（均 P＜0．05）。男性耐多药比率为24．0％（357／1489）,广泛耐药比率为9．8％（146／1489）;女性分别为34．2％（127／371）,19．7％（73／371）,差异有统计学意义（ P＜0．05）。复治组耐多药比率为26．0％（484／1860）,广泛耐药比率为11．8％（219／1860）;初治组分别为11．3％（34／300）和7．0％（21／300）,差异有统计学意义（ P＜0．05）。复治组耐单药比率为20．0％（372／1860）,初治组为41．0％（123／300）,差异有统计学意义（P＜0．05）。结论老年复治肺结核患者耐药率高,且女性患者耐药发生率高于男性;提示有必要加强老年复治肺结核耐药性监测。     

痰耐药结核分支杆菌rpsL基因的快速检测及链霉素耐药机制研究

[目的]快速检测痰耐药结核分支杆菌rpsL基因及了解链霉素（SM）耐药的分子机制。[ 方法]用PCR方法直接从耐药肺结核患者痰及临床分离菌株扩增rpsL基因片段,对扩增获得的rpsL基因片段进行序列测定,比较分析全耐、对SM耐药的耐多药、对SM敏感的耐多药、全敏感或标准结核分支杆菌株之间的基因序列差异。[结果]于6h内从耐药肺结核痰中快速检测到rpsL基因。从所有临床分离菌珠均扩增获得267bp片段,序列测定比较发现,全耐菌和对SM耐药的MDR—TB菌株均检测有rpsL基因点突变,突变密码子为CCT突变为CTT,而全敏感株和标准菌株均未检测到基因突变。其中从一株对SM敏感的MDR-TB中也检测到突变。[结果]PCR及序列分析方法可快速、准确检测结核分支杆菌rpsL基因及其突变,结核分支杆菌对EMB的耐药性与rpsL基因点突变有关。     

四川德阳地区结核分枝杆菌耐药基因突变位点的分布特点及基因型耐药的分析

目的探讨四川德阳地区结核分枝杆菌耐药基因突变位点的分布特点及基因型耐药的分析。方法收集在2010年2月-2013年3月检出的257例肺结核病患者结核分枝杆菌DNA阳性的痰液标本,采用聚合酶链式反应（PCR）和反向点杂交（RDB）相结合的基因芯片技术对结核分枝杆菌耐药基因突变位点进行检测和分析。结果 257例肺结核患者中检测出49例存在结核分枝杆菌耐药基因位点突变,其中发生katG 315、rpsL43、embB 306和rpoB 531丝氨酸（S531L）位点突变的分别为30例（11.67%）、18例（7.00%）、11例（4.28%）和10例（3.89%）。234例初治肺结核患者对异烟肼、利福平、乙胺丁醇及链霉素的基因型耐药率分别为9.83%、4.27%、3.42%和5.13%,耐多药率为2.99%;23例复治肺结核患者对上述药物的基因型耐药率分别为52.17%、26.09%、13.04%和43.48%,耐多药率为13.04%。初治患者的基因型耐药率及耐多药率均明显低于复治患者。结论四川德阳地区结核分枝杆菌常见耐药基因突变位点分别为katG 315、rpsL 43、embB 306和rpoB 531丝氨酸（S531L）突变位点;肺结核初治患者的基因型耐药率及耐多药率均明显低于复治患者;该地区肺结核的耐多药率相对较低。     

结核分枝杆菌对氟喹诺酮类药物敏感性的实验研究

目的 获得四种氟喹诺酮（FQ）对结核分枝杆菌的最小抑菌浓度（MIC）,评价PCR探针熔解曲线法（PMAA）检测结核分枝杆菌对氟喹诺酮药物耐药性的临床价值.方法 124例对氧氟沙星敏感的菌株和78例对氧氟沙星耐药的菌株,在96孔细菌培养板中,用Middlebrook 7H9液体培养基将药物进行连续倍比稀释后,加入5×10^-2 mg/ml菌液100 μl,用刃天青显色法测定MIC;并用PCR探针熔解曲线法（PMAA）检测结核分枝杆菌对氟喹诺酮（FQ）药物的耐药突变.结果 氧氟沙星折点浓度为2 μg/ml,加替沙星和莫西沙星对结核分枝杆菌的MIC90比氧氟沙星和左氧氟沙星要低4-8倍,具有比氧氟沙星和左氧氟沙星更好的抗结核分枝杆菌的活性.以罗氏比例法为金标准,PCR-PMAA检测敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值和符合率分别为96.2％,97.6％,96.2％,97.6％和97.0％.结论 利用微量MIC方法较常规药敏方法可以获得更多的耐药信息.用PCR-PMAA法能高效快速的检出耐药突变菌株.两种方法结合应用,对临床肺结核疾病早期用药具有更好的指导价值.