青藤碱对HPV阳性宫颈癌SiHa细胞增殖和侵袭的影响

目的： 探讨青藤碱对HPV阳性宫颈癌SiHa细胞增殖和侵袭的影响。方法： 体外培养SiHa细胞,在细胞培养液中分别加入0.2、0.4和0.8 mmol/L的青藤碱,阴性对照组细胞未加青藤碱,24和48 h后采用CCK-8法检测细胞活力。细胞培养液加入0.2 mmol/L的青藤碱,24 h后采用免疫荧光法检测Ki67阳性细胞数;Transwell实验检测侵袭细胞数;Western blot检测侵袭相关蛋白MMP-2和MMP-9的蛋白表达水平。结果： 与阴性对照组相比,0.2、0.4和0.8 mmol/L青藤碱作用SiHa细胞24和48 h后,SiHa细胞的增殖率均明显降低（P<0.01）;青藤碱处理组SiHa细胞中Ki67阳性细胞数减少（P<0.01）,发生侵袭的SiHa细胞数减少（P<0.05）,侵袭相关蛋白MMP-2和MMP-9蛋白的表达均降低（P<0.01）。结论： 在体外,青藤碱可以抑制体外培养的HPV阳性宫颈癌SiHa细胞的增殖和侵袭。     

5-氟尿嘧啶联合米非司酮对人宫颈癌SiHa细胞增殖的影响及作用机制研究

目的:体外研究5-氟尿嘧啶(5-fluororacil,5-Fu)联合米非司酮(mifepristone,MIF)对人宫颈癌SiHa细胞株的增殖抑制作用及可能的作用机制。方法:体外培养人宫颈鳞癌SiHa细胞株,采用MTT法检测不同浓度MIF、5-Fu单药以及两药联合作用对SiHa细胞增殖率的影响;采用FCM分析两药合用对SiHa细胞凋亡率及细胞周期分布影响;蛋白质印迹法检测药物处理后SiHa细胞中p53、Bax和Bcl-2蛋白表达的变化。结果:不同浓度5-Fu和MIF单药对SiHa细胞增殖均有抑制作用(P<0.05),且呈浓度和时间依赖性。5-Fu联合MIF作用于SiHa细胞可增强5-Fu对SiHa细胞的增殖抑制(P<0.05),且对MIF的作用浓度呈剂量依赖作用;蛋白质印迹法检测结果显示,联合用药组能使p53和Bax蛋白表达上调,Bcl-2蛋白表达下调,呈浓度依赖性。结论:MIF能增强5-Fu对SiHa细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用,其机制可能与上调p53和Bax蛋白,下调Bcl-2蛋白表达有关。     

紫花牡荆素体外抑制人宫颈癌HeLa细胞增殖的研究

背景与目的:紫花牡荆素(Casticin)是一种从蔓荆子中提取的具有广泛药理活性的多甲基黄酮化合物.有研究表明Casticin能诱导多种肿瘤细胞凋亡,但其对人宫颈癌细胞的作用尚缺乏文献资料.本研究旨在探讨Casticin抑制体外培养人宫颈癌HeLa细胞增殖作用及其机制.方法:MTT法检测Casticin对人宫颈癌HeLa细胞活性的抑制作用;平皿集落形成法检测Casticin对HeLa细胞集落形成率的影响;流式细胞术(FCM)检测Casticin对HeLa细胞周期的影响;采用Western blot分析蛋白表达的变化.结果:Casticin对人宫颈癌HeLa细胞增殖活性有较强的抑制作用,呈剂量和时间依赖性,作用48 h的IC50值为2.82 μ g/mL;与对照组比较,细胞集落形成率明显下降(P＜0.05);Casticin作用48 h,以浓度依赖方式阻滞HeLa细胞于G2/M期,同时降低Cyclin B1蛋白表达,增高P21蛋白表达.结论:Casticin抑制HeLa细胞的增殖作用可能与其降低Cyclin B1蛋白表达、活化P21蛋白有关.     

GBX2过表达促进人宫颈癌SiHa细胞增殖、迁移及侵袭

[摘要] 目的：探讨GBX2 基因在人宫颈癌SiHa 细胞增殖和侵袭转移中的作用及其机制。方法：应用质粒转染技术,分别将过表达GBX2 基因重组质粒pCMV6-entry-GBX2（实验组）及空载体质粒pCMV6-entry（阴性对照组）转染到宫颈癌SiHa 细胞中,用WST-1 法、集落形成实验、流式细胞术分别检测转染细胞的增殖、集落形成和细胞周期,用划痕愈合实验、Transwell 实验检测细胞的迁移、侵袭能力,用ELISA 法检测细胞培养上清中IL-6 的表达水平,用WB检测EMT相关蛋白的表达变化并探讨其可能的作用机制。结果：与SiHa/pCMV6 组相比,上调GBX2 表达后：（1）SiHa/GBX2 组细胞的增殖、集落形成、迁移和侵袭能力明显增强（均P<0.01）,G0/G1 期的细胞比例减少、S期与G2/M期的细胞比例增加（均P<0.01）;（2）SiHa/GBX2 组细胞EMT相关蛋白上皮钙黏蛋白表达水平下降,神经钙黏蛋白、波形蛋白和snail 表达水平上调（均P<0.01）;（3）SiHa/GBX2 组细胞培养上清中IL-6 的表达水平明显增高（P<0.01）;（4）SiHa/GBX2 组细胞STAT3 磷酸化水平增强,并能被STAT3 抑制剂S31-201 抑制（P<0.01）。结论：GBX2可能通过IL-6/STAT3 通路诱导宫颈癌SiHa 细胞EMT,从而促进宫颈癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。     

miR-224对宫颈癌SiHa和HeLa细胞增殖、凋亡及迁移的影响

目的:探讨miR-224对宫颈癌SiHa和HeLa细胞增殖、凋亡及迁移的影响。方法:对宫颈癌细胞株SiHa和HeLa中miR-224进行过表达或沉默,采用qRT-PCR法检测miR-224的转染效果,转染成功后采用CCK-8法、FCM检验、Transwell试验检测各组细胞增殖、凋亡及迁移情况。结果:与正常293T细胞相比,宫颈癌细胞SiHa、HeLa中miR-224表达量均升高,差异具有统计学意义（P<0.01）;转染成功后CCK-8法检测SiHa和HeLa细胞增殖情况,与阴性对照组和空白组比较,miR-224 mimic组细胞增殖能力增强,miR-224 inhibitor组细胞增殖能力减弱,差异具有统计学意义（P<0.01）;流式细胞仪检测SiHa和HeLa细胞凋亡情况,miR-224 mimic组细胞凋亡百分比明显低于阴性对照组（P<0.01）,miR-224 inhibitor组细胞凋亡百分比明显高于阴性对照组（P<0.01）;划痕试验检测SiHa和HeLa细胞迁移能力,48 h时miR-224 mimic组细胞愈合速率明显较阴性对照组和空白组快,差异有统计学意义（P<0.01）,miR-224 inhibitor组细胞愈合速率明显较阴性对照组慢,差异有统计学意义（P<0.01）。结论:宫颈癌细胞中miR-224过表达可促进细胞增殖和迁移并抑制凋亡,沉默miR-224可抑制细胞增殖和迁移并促进凋亡。     

白藜芦醇对小鼠移植宫颈癌的抑制作用及机制研究

背景与目的:白藜芦醇(resveratrol,Res)是天然存在于葡萄等植物中的一种多酚类化合物,具有抗癌、抗氧化等作用.体外研究发现Res可抑制宫颈癌细胞的生长,但在体内是否有作用尚未见报道.本研究观察Res对小鼠宫颈癌细胞株U14移植瘤的抑制作用,并初步探讨Res的抗肿瘤作用机制.方法:建立615近交系小鼠U14移植瘤动物模型,并随机分成4组:对照组(0.9％的NaCl溶液)、Res低剂量组(每日剂量2.5 mg/kg)、Res高剂量组(每日剂量10 mg/kg)和顺铂组,每组10只.连续给药20 d,于接种后第26天处死小鼠,检测肿瘤体积及质量,计算抑瘤率,采用RT-PCR和Western blot分析肿瘤组织巨噬细胞移动抑制因子(migration inhibitory factor,MIF)的表达水平,通过免疫组织化学法检测肿瘤组织微血管密度(microvessel density,MVD),并用原位末端标记法(TUNEL)检测肿瘤细胞凋亡指数(apoptosis index,AI).结果:Res高剂量组、顺铂组肿瘤的生长明显受到抑制,肿瘤体积缩小,肿瘤质量明显低于对照组(P＜O.01);Res高剂量组和顺铂组抑瘤率分别为52.94％、56.44％,明显高于Res低剂量组(P＜0.01).Res高剂量组和顺铂组MIF mRNA与蛋白表达水平及MVD明显降低,AI则明显升高,与对照组相比,差异均有统计学意义(P＜O.01),但低剂量Res对MIF表达、MVD及AI无明显影响(P＞0.05).结论:Res可明显抑制小鼠宫颈癌的生长,机制可能与抑制MIF表达、降低MVD和促进细胞凋亡有关.     

lncRNA HEIG对宫颈癌细胞增殖、凋亡和迁移侵袭的影响及其分子机制

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)HEIG在宫颈癌组织和细胞中的表达及其生物学功能。方法:采用实时荧光定量PCR检测患者癌组织和癌旁组织、正常宫颈上皮细胞HCerEpic、宫颈癌细胞Hela和C33A中lncRNA HEIG的表达;敲低Hela细胞中HEIG表达,MTT法和流式细胞术分别检测Hela细胞的增殖、凋亡情况;Transwell小室法检测Hela细胞的迁移侵袭能力;Western blot检测AKT信号通路的变化。结果:lncRNA HEIG在宫颈癌组织和细胞中高表达;敲低HEIG可显著抑制宫颈癌细胞Hela的细胞增殖,促进细胞凋亡,抑制细胞迁移和侵袭能力,同时抑制AKT信号通路的活化。结论:lncRNA HEIG有可能作用于AKT信号通路抑制宫颈癌细胞增殖、促进细胞凋亡、抑制细胞迁移侵袭。     

3，3’-二吲哚甲烷对宫颈癌SiHa细胞增殖抑制的实验研究

目的 研究吲哚-3-甲醇（I3C）的重要衍生物3,3’-二吲哚甲烷（DIM）对宫颈癌SiHa细胞增殖和凋亡的影响。方法 采用CCK-8法检测不同浓度DIM对SiHa细胞体外生长的抑制作用,流式细胞术检测DIM对SiHa细胞凋亡的影响,荧光显微镜观察细胞形态的变化;Western blotting检测不同浓度DIM对SiHa细胞凋亡相关蛋白表达的影响。结果 DIM对SiHa细胞的抑制作用呈时间-剂量依赖性,DIM对SiHa细胞干预48h的半数抑制浓度（IC50）为44.44μmol／L。分别以25、50、100μmol／L 的DIM处理48h后,SiHa细胞的凋亡率分别为（10.09±1.32）％、（21.11±3.36）％和（55.46±6.33）％,阴性对照组为（4.56±0.52）％,组间差异有统计学意义（P＜0.05）。不同浓度DIM处理48h后,荧光显微镜下SiHa细胞呈现皱缩、变圆,并形成明显的凋亡小体。Western blotting显示随着DIM浓度的增加,SiHa细胞中MAPK家族的ERK、p38和p p38蛋白的表达水平受抑制,JNK、p-JNK蛋白的表达水平上调,PI3K家族的Akt、p-Akt、PI3K p110α、PI3K p110β、PI3K class Ⅲ、GSK3 β、p PDK1和p c Raf蛋白的表达也受到抑制。结论 DIM能抑制SiHa细胞的生长并诱导细胞凋亡,其作用机制是通过对MAPK家族和PI3K家族凋亡相关蛋白表达的调控实现的,并将有可能成为一种有效的抗宫颈癌药物。     

延龄草总皂苷抑制宫颈癌细胞Hela增殖的作用及机制研究

目的：观察延龄草总皂苷对宫颈癌细胞Hela增殖与凋亡的影响。方法：培养宫颈癌细胞Hela,加入延龄草总皂苷[（0～100．00）mg／L],采用MTT比色试验法,观察延龄草总皂苷对Hela增殖的影响,应用流式细胞术研究延龄草总皂苷对Hela凋亡的作用;Western blotting法检测给予不同浓度延龄草总皂苷后,Hela细胞中凋亡相关蛋白活化型caspase－3、8、9,Bax和Bcl－2表达的变化。结果：延龄草总皂苷可有效地抑制He-la的增殖,其IC50为（7．67±1．40）mg／L。延龄草总皂苷能诱导Hela细胞的凋亡;延龄草总皂苷可促进Hela细胞活化型caspase－3,9及Bax的表达,降低Bcl－2的表达,且均呈浓度依赖性。结论：延龄草总皂苷可有效地抑制宫颈癌细胞Hela增殖,其可能机制是延龄草总皂苷通过线粒体途径诱导Hela细胞凋亡。     

UBE2C对宫颈癌HeLa细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响

目的:研究泛素结合酶E2C（ubiquitin-conjugating enzyme E2C,UBE2C）在宫颈癌细胞中的表达情况,并明确UBE2C对宫颈癌HeLa细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响。方法:首先查阅GEPIA数据库,了解UBE2C在宫颈癌中的表达;其次通过qRT-PCR和Western blotting 法明确UBE2C在宫颈癌HeLa细胞及正常宫颈上皮细胞End1/E6E7中表达差异,然后分别构建si-UBE2C及si-NC转染宫颈癌HeLa细胞,检测转染后细胞中 UBE2C mRNA和蛋白表达;最后采用CCK-8 实验、细胞划痕实验及Transwell实验检测转染后细胞的增殖、迁移和侵袭能力的变化,并鉴定UBE2C下游靶基因PTEN、P-p53的表达情况。结果:UBE2C在宫颈癌中高表达,能够促进宫颈癌细胞的增殖、迁移及侵袭能力,并下调抑癌基因PTEN、P-p53的表达。结论:UBE2C能够加重宫颈癌细胞恶性表型;UBE2C可能作为宫颈癌诊断及治疗的判定指标之一。     

沉默GRP94抑制宫颈癌细胞的侵袭和迁移

目的:探究GRP94在不同宫颈癌细胞株中的表达情况,及GRP94对细胞侵袭和迁移能力的影响。方法:采用Western blot和qRT-PCR检测不同类型的宫颈癌细胞株中GRP94的表达水平。选择高表达GRP94的细胞株,应用RNA干扰技术下调GRP94的表达,采用划痕实验和Transwell侵袭实验检测细胞侵袭和迁移能力的改变。结果:与正常的宫颈细胞相比,GRP94在不同的宫颈癌细胞株(C33A、CaSki、HeLa、HeLa 229、MS751、ME-180、SiHa和HCC 94)中表达均升高,且GRP94在CaSki和MS751中表达量高,在ME-180、SiHa和HCC 94中表达量中等,在C33A、HeLa和HeLa 229中表达量低。选用GRP94高表达的CaSki细胞,下调GRP94的表达后,划痕实验和Transwell侵袭实验结果显示细胞的侵袭和迁移能力显著下降。结论:GRP94在宫颈癌细胞中高表达,沉默GRP94的表达能抑制宫颈癌细胞的侵袭和迁移能力。     

MYB基因沉默抑制子宫颈癌细胞侵袭、迁移及其作用机制探讨

目的:探究沉默转录因子MYB对子宫颈癌细胞侵袭、迁移的影响以及可能的作用机制。方法:将携带MYB目的片段的siRNA转染入人子宫颈癌HeLa细胞中。实验分为对照组、阴性对照组和siRNA-MYB组。采用荧光定量PCR（qPCR）和蛋白质印迹法（Western Blot）检测转染效果。细胞划痕实验和Transwell法检测细胞的迁移、侵袭能力。Western Blot检测各组细胞中基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、钙黏蛋白E（E-cadherin）、钙黏蛋白N（N-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）水平。结果:与对照组相比,阴性对照组细胞中MYB的表达量、细胞侵袭、迁移均无显著变化,差异不具有统计学意义;siRNA-MYB组细胞中MYB的表达量显著降低（P<0.05）,沉默MYB显著抑制子宫颈癌细胞的侵袭、迁移（P<0.05）,并下调细胞中MMP-2、N-cadherin、Vimentin蛋白的表达量（P<0.05）,上调E-cadherin蛋白的表达量（P<0.05）。结论:沉默宫颈癌细胞中MYB的表达量可通过抑制EMT、下调MMP-2蛋白水平,从而降低细胞的侵袭、迁移能力。     

miR-137 通过靶向Wnt5a 调控宫颈癌细胞的增殖、迁移及侵袭

[摘要] 目的: 探讨miR-137 在宫颈癌组织和细胞中的表达及其对宫颈癌细胞增殖、迁移及侵袭的作用及其机制。方法: 选用2017 年1 月至2018 年3 月东莞市人民医院妇产科32 例手术切除的宫颈癌组织及对应的癌旁组织标本,以及宫颈癌细胞系C33A、HeLa、SiHa 及宫颈上皮永生化细胞株H8,用RT-PCR 法检测宫颈癌组织和细胞系中miR-137 的表达水平。将miR-137mimics、miR-137 NC质粒转染到C33A和HeLa 细胞,用CCK-8 法、Transwell 迁移及侵袭实验观察上调miR-137 表达对C33A和HeLa 细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。用荧光素酶报告基因及WB实验检测miR-137 和Wnt5a 在宫颈癌中的靶向调控关系。构建Wnt5a 过表达载体,观察同时过表达Wnt5a 和miR-137 对宫颈癌细胞系C33A和HeLa增殖、迁移和侵袭的影响。结果: 在宫颈癌组织和细胞系中miR-137 表达水平明显低于癌旁组织和H8 细胞（均P<0.05）。上调miR-137 表达能够显著抑制C33A和HeLa 细胞的增殖、迁移和侵袭能力（均P<0.05）。萤光素酶报告基因实验确定Wnt5a 与miR-137 的靶向关系。过表达Wnt5a 后,可以在一定程度上逆转miR-137 对宫颈癌细胞系C33A和HeLa 的增殖、迁移和侵袭能力。结论: miR-137 通过靶向Wnt5a 抑制宫颈癌细胞的增殖、迁移、侵袭,其可能是宫颈癌治疗的潜在靶点。     

不同剂量叶酸对宫颈癌SiHa细胞自噬小体形成的影响

目的:探讨不同剂量叶酸对宫颈癌SiHa细胞自噬小体形成的影响。方法:选取处于对数生长期的SiHa细胞,将其分为5组,分别应用不同浓度叶酸（0.1 μg/ml、1.0 μg/ml、10 μg/ml、100 μg/ml、1 000 μg/ml）干预72 h,记录干预后各组SiHa细胞自噬小体数量;采用qRT-PCR法测定不同浓度叶酸干预后宫颈癌SiHa细胞自噬蛋白中Beclin1、LC3及p62 mRNA表达情况;采用Western blot法测定不同浓度叶酸干预后宫颈癌SiHa细胞自噬蛋白中Beclin1、LC3和p62蛋白表达情况。结果:不同浓度叶酸干预后自噬小体数量比较,1 000 μg/ml组明显高于其他组（P<0.05）,其中0.1 μg/ml组数量最低,1.0 μg/ml组与10 μg/ml组比较差异无统计学意义（P>0.05）。qRT-PCR法测定结果显示,随干预叶酸浓度升高,宫颈癌SiHa细胞中自噬蛋白Beclin1、LC3的mRNA明显升高（P<0.05）;p62 mRNA表达水平随叶酸浓度升高而降低（P<0.05）。Western blot法测定结果显示,自噬蛋白Beclin1、LC3的蛋白表达水平随叶酸浓度增高而增高（P<0.05）,p62蛋白表达水平随叶酸浓度升高而下降（P<0.05）。结论:不同剂量叶酸对宫颈癌SiHa细胞自噬小体形成的抑制效果不同,剂量越低抑制效果越强,高剂量叶酸还有刺激宫颈癌SiHa细胞自噬小体形成的作用。