栀子苷干预LPS诱导RAW264.7巨噬细胞炎性反应递质的研究

目的:通过比较栀子苷水提液、栀子苷你标准品与栀子苷敲除液对LPS刺激巨噬细胞产生炎性反应的干预,探究栀子主要成分栀子苷的抗炎作用。方法:分别检测栀子苷水提液、栀子苷标准品、50%栀子苷敲除液对巨噬细胞的毒性;设立空白对照组、LPS模型组、栀子苷水提液组、栀子苷标准品组、50%栀子苷敲除液组、50%栀子苷回填组,检测各组对LPS刺激巨噬细胞后释放NO以及分泌IL-6和TNF-α的干预作用比较。结果:LPS刺激巨噬细胞后NO释放增多(P 10~(-4)),而栀子苷水提液、栀子苷标准品、栀子苷敲除液均能降低LPS刺激巨噬细胞后NO的释放,其中栀子水提液、50%栀子苷敲除液以及50%栀子苷回填液的作用最强,且其作用差异无统计学意义(P 10~(-2))。而栀子苷标准品的作用相对较小(P0. 05)。LPS刺激巨噬细胞后,巨噬细胞分泌TNF-α与IL-6较空白对照组增加(P 10~(-4)),栀子水提液干、栀子苷标准品、50%栀子苷敲除液以及含50%栀子苷的栀子水提液干预后,能降低上述细胞因子的分泌(P 0. 05)。结论:栀子中栀子苷与其他成分均具有一定的抗炎作用,各成分之间的抗炎作用各有侧重。     

天山雪莲总酚酸对脂多糖刺激的RAW264.7细胞炎症因子释放的影响及其机制研究

目的:研究天山雪莲总酚酸(PSI)抑制脂多糖(LPS)刺激的RAW264.7细胞炎症因子释放的作用及其作用机制。方法:采用大孔吸附树脂分离PSI,利用超高效液相色谱法(UPLC)对其进行成分分析。建立LPS诱导的RAW264.7细胞炎症模型。采用噻唑蓝法检测细胞活力;Griess法检测一氧化氮(NO)的生成;酶联免疫吸附法(ELISA)检测炎症因子释放水平;蛋白免疫印迹(Western blot)技术检测Toll样受体4(TLR4)信号通路关键蛋白的表达水平;免疫荧光技术检测核转录因子(NF)-κB亚基p65、激活子蛋白1(AP-1)亚基c-Jun和干扰素调节因子3(IRF3)的入核情况。结果:PSI主要含有绿原酸(23.60%),质量浓度为12.50~100.00μg·mL^-1时能显著抑制LPS刺激下炎症因子NO、前列腺素E2(PGE2)、肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-10、IL6、趋化因子单核细胞趋化蛋白(MCP)-1、巨噬细胞炎症蛋白(MIP)-1α和调节激活正常T细胞表达分泌因子(Rantes)的释放,并能剂量依赖性地降低TLR4信号通路关键蛋白κB抑制因子(IκB)α、IκB激酶(IKK)α/β、p65、TANK结合激酶1(TBK1)、IRF3、p38、胞外信号调节激酶(ERK)1/2及c-Jun的磷酸化水平,同时抑制LPS诱导的p65、c-Jun和IRF3的入核。结论:PSI能抑制LPS刺激下RAW264.7细胞炎症因子的产生,其作用机制可能与抑制TLR4信号通路有关。     

银杏叶提取物对H2O2诱导的巨噬细胞凋亡的抑制作用

 目的研究银杏叶提取物(EGb761)对H₂O₂所致RAW264.7巨噬细胞凋亡的保护作用。方法以H₂O₂诱导RAW264.7巨噬细胞凋亡为实验模型,用噻唑蓝(MTT)实验、流式细胞术、蛋白质印迹分析、琼脂糖凝胶电泳和荧光分析分别检测细胞存活率、线粒体膜电位、细胞色素C的释放和Bax,bcl-2蛋白水平、DNA的降解、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3(caspase-3)活性。结果EGb761能明显降低H₂O₂对RAW264.7细胞的氧化损伤,提高细胞的存活率；维持线粒体膜的完整性,抑制跨膜电位的耗散和细胞色素C的释放；抑制caspase-3的活化和DNA的降解。结论EGb761具有清除活性氧,减轻H₂O₂所致RAW264.7细胞的氧化损伤,在对H₂O₂诱导的细胞凋亡中发挥重要的抗凋亡作用。     

Heme oxygenase-1 mediates the anti-inflammatory effect of mushroom Phellinus linteus in LPS-stimulated RAW264.7 macrophages

This work aimed to elucidate the anti-inflammatory mechanism of the n-BuOH subfraction (PL) prepared from fruiting bodies of Phellinus linteus. PL induced heme oxygenase-1 (HO-1) of the RAW264.7 macrophages in concentration- and time-dependent manner. It suppressed induction of inducible nitric oxide synthase (iNOS) and subsequent production of nitric oxide (NO) through down-regulation of iNOS promoter activity in lipopolysaccharide (LPS)-stimulated macrophages. Zn(II) protoporphyrin IX (ZnPP), a specific inhibitor of HO-1, partly blocked suppression by PL on iNOS promoter activity and NO production, which were elevated in LPS-stimulated macrophages. LPS was able to enhance NO production via reactive oxygen species (ROS) generation, c-Jun NH(2)-terminal kinase (JNK) and c-Jun induction. ZnPP prevented PL from down-regulating ROS generation and JNK activation in LPS-stimulated macrophages. Taken together, PL shows its anti-inflammatory activity via mediation of HO-1 in an in vitro inflammation model.     

芦荟及其复方提取物对RAW264.7细胞炎症因子的影响

目的:观察芦荟及其复方提取物对小鼠巨噬细胞炎症因子的影响.方法:RAW264.7细胞按2×105/mL稀释,100μL/孔接种入96孔板,药物质量浓度为250,125,62.5 g?L-1下采用噻唑蓝比色法(MTT法)作用4h,检测芦荟及其复方提取物对小鼠巨噬细胞的毒性作用;药物质量浓度为50,25,12.5 g?L-1下采用硝酸还原酶法作用24 h,测定小鼠巨噬细胞一氧化氮(N0)含量,并用酶联免疫吸附法(ELISA法)测定其在单纯药物及脂多糖(LPS)1 mg?L-1诱导情况下小鼠巨噬细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-10(IL-10)的含量.结果:芦荟及其复方提取物具有促进巨噬细胞释放NO的作用,并与药物浓度成正相关(P＜0.01);芦荟有促进TNF-α分泌(P＜0.01)和抑制IL-10分泌(P＜0.05)的作用,其复方在LPS诱导下则对TNF-α和IL-10都有抑制作用(P＜0.01).结论:芦荟在250～7.8 g?L-1下对臣噬细胞无细胞毒性,其复方则有一定毒性;芦荟及其复方对小鼠巨噬细胞炎症因子的释放有一定影响.     

银杏叶提取物诱导大鼠主动脉平滑肌细胞中血红素氧合酶-1表达的实验研究

目的 探讨银杏叶提取物(EGb)诱导大鼠主动脉平滑肌细胞(SMC)中血红素氧合酶-1(HO-1)表达的量效关系,并初步探讨EGb诱导HO-1表达的分子机制.方法 复苏并传代培养大鼠主动脉SMC,分组实验,分别采用0,50,100,200,400 μg/ml 5个不同浓度的EGb以及200 μg/ml EGb加放线菌素D(ActD)孵育SMC 8 h,Western blot法检测HO-1蛋白,以HO-1条带灰度值代表HO-1的表达量.结果 不加EGb的对照组中HO-1蛋白仅有微量基础表达,加用EGb各组中HO-1蛋白的表达随EGb浓度的增加而增加(P＜0.05),在EGb浓度为200 μg/ml时达到峰值,随后则有所下降.加用ActD能显著抑制EGb所诱导的HO-1蛋白表达(P＜0.05).结论 EGb能够诱导大鼠主动脉SMC中HO-1表达,且这种表达在一定范围内具有量效关系;EGb诱导HO-1表达有赖于基因重新转录.