由疫苗重组脊髓灰质炎病毒引起的聚集性急性弛缓性麻痹病例分析

20 0 2年 6月中旬 ,在四川省攀枝花市和泸州市 ,从 3例急性弛缓性麻痹 (AFP)病例及其 3名密切接触者中 ,共分离到 6株脊髓灰质炎 (脊灰 )病毒。这 6人中有 5人是口服脊灰疫苗“零”剂次免疫 ,1名免疫史不详。用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)分析病毒的VP1和 3D基因编码区发现 ,所有病毒均为疫苗重组脊灰病毒 (VRPV) ,其中 2株为Ⅱ型和Ⅰ型的重组 ,其余为Ⅱ型和Ⅲ型的重组。经序列分析发现 ,从AFP病例中分离到的毒株 ,在VP1编码区与标准参考株SabinⅡ型有 3个同样的核苷酸发生了变异 ,而从密切接触者中分离到的毒株有 4个核苷酸发生了变异。 6株病毒来源相同 ,并已在免疫覆盖率低的地方引起儿童患病及播散。     

1例疫苗相关麻痹型脊髓灰质炎的免疫缺陷患者持续排出疫苗衍生脊髓灰质炎病毒

目的研究中国首例疫苗相关麻痹型脊髓灰质炎(VAPP)的免疫缺陷患者持续排出的免疫缺陷疫苗衍生脊髓灰质炎(脊灰)病毒(iVDPV)的分子生物学特征,并分析持续排毒对中国维持无脊灰状态的影响。方法对分离于该患儿12份粪便标本的12株Ⅱ型iVDPV和5株Ⅲ型iVDPV毒株使用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增VP1区基因片段,然后对扩增产物进行核苷酸序列测定与分析,并使用生物信息学的方法分析了毒株核苷酸序列之间的同源关系以及相关性。结果在间隔145d的时间里采集了6次双份粪便标本,除了第1次采集的双份粪便标本中未分离到Ⅲ型脊灰病毒外,Ⅱ型和Ⅲ型iVDPVs连续在粪便标本中分离到。12株Ⅱ型脊灰病毒主序列中的变异位点基本是随机分布在VP1基因上的,与SabinⅡ型相比,变异率为0.86%~2.55%;诸多核苷酸位点的变异大多是同义突变,主序列编码的氨基酸与SabinⅡ型相比共引起8个氨基酸位点突变,其中第103位和143位是12条主序列的共同变异位点,显示它们的主序列是相关的,并且都是来源于SabinⅡ型疫苗株的。尤其是nt 2 909位点(U→C)变异,导致Ile143突变为Thr143,是一个已知的与神经毒力回复野生型相关的位点。与标准SabinⅢ型相比,5株Ⅲ型脊灰病毒序列同源性非常高,并且核苷酸突变几乎是均匀地分布在整个VP1基因上的,变异率为2.56%~2.78%,毒株序列都是来源于SabinⅢ型疫苗株,氨基酸共出现10个突变位点,其中9个为它们所共享,显示了非常高的相关性。结论Ⅱ型iVDPV以居群的形式存在,主序列之间有相关性,Ⅲ型iVDPV序列有高度的相关性,但与Ⅱ型的居群形式不一样,可以看出Ⅲ型疫苗株病毒适应人体肠道进行复制并获得较高传播性的能力比Ⅱ型要差。中国首例iVDPV在分子病毒学上与已知循环的疫苗衍生脊灰病毒(cVDPVs)无本质上的差别,存在着iVDPVs与cVDPVs相互转变的潜在可能性。维持较高的口服脊灰减毒活疫苗(OPV)免疫覆盖率,是阻止脊灰野病毒输入和防止VDPVs发生人际间传播的关键。另外,保持急性弛缓性麻痹病例监测系统和脊灰实验室网络具有较高的敏感性,重新评估现在的OPV免疫策略,在全球证实消灭脊灰野病毒后适时制订停止OPV免疫的策略,都是降低这种潜在危险的重要手段。     

山西省2006年4例聚集性高危急性弛缓性麻痹病例分析

目的对山西省2006年报告的4例聚集性高危急性弛缓性麻痹(Acute Flaccid Paralysis,AFP)病例进行流行病学分析,并对采集的粪便标本中分离到的4株Ⅲ型脊髓灰质炎(脊灰)病毒(Poliovirus,PV)进行VP1编码区基因特征分析,以判断这起事件的性质。方法按照世界卫生组织《脊灰实验室手册》进行病毒分离与血清学定型,用逆转录-聚合酶链反应扩增VP1编码区基因片段,并进行核苷酸序列测定和分析,构建基因亲缘关系树。结果4例高危AFP病例中的3例为疑似疫苗相关麻痹型脊灰(Vaccine Associated Paralysis Poliomyelitis,VAPP),在发病时间上接近。4株Ⅲ型PV与疫苗参考株BJOPVⅢ相比,VP1编码区核苷酸同源性分别为99.7%、99.9%、99.4%、99.9%,均鉴定为疫苗相关株。基于VP1编码区核苷酸序列建立的进化树表明,4株PV之间无相关性,从3例VAPP中分离到的3株Ⅲ型PV在VP1编码区共享第2637位胞嘧啶核苷酸(C)→尿嘧啶核苷酸(U)突变位点,该位点变异导致氨基酸由缬氨酸(Val)突变为丙氨酸(Ala)。结论加强聚集性高危AFP病例和VAPP的实验室监测,早期发现PV循环并及时阻断。     

中国口服脊髓灰质炎减毒活疫苗安全性评估

目的研究北京生物制品研究所(北京所)和中国医学科学院医学生物学研究所(昆明所)生产的口服脊髓灰质炎(脊灰)减毒活疫苗(OPV)减毒位点的基因特征,对比Sabin标准株,从基因序列的基础上研究OPV是否安全有效,从而为中国维持无脊灰状态OPV的使用和免疫策略提供科学依据。方法随机选取生产的不同批次OPV,先进行病毒分离和扩增,用中和试验定型,分出Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型脊灰疫苗病毒,然后用聚合酶链反应(PCR)得到各型脊灰疫苗病毒的5′非编码区(5′NTR区)和VP1蛋白编码区基因核苷酸片段,测序后,与各型脊灰Sabin标准株进行比较分析。结果两个所生产的OPV各型疫苗病毒的5′NTR区核苷酸序列与标准Sabin株各型别5′NTR区无差别,同源性为100%;VP1区核苷酸序列比较,北京所与昆明所OPVⅠ型VP1区与SabinⅠ型VP1区核苷酸序列同源性为100%;北京所OPVⅡ型VP1区与SabinⅡ型VP1区比较,有5个碱基变化,同源性为99.45%,昆明所OPVⅡ型VP1区与SabinⅡ型VP1区比较,有6个碱基变化,同源性为99.34%;北京所与昆明所OPVⅢ型VP1区与SabinⅢ型VP1区比较,都有2个碱基变化,同源性为99.78%。北京所与昆明所生产的OPV,3个型别的5′NTR区和VP1蛋白编码区基因核苷酸序列与标准Sabin株比较,所有神经毒力位点未发生变化,未发生毒力回复突变。结论中国北京所和昆明所生产的OPV是安全有效的,应对如何停止使用OPV,如何用脊灰灭活疫苗取代OPV进行前期研究工作。     

川 渝 黔地区不同的脊髓灰质炎Ⅱ型疫苗重组病毒的分析

2000年,四川省(川)、重庆市(渝)及贵州省(黔)从急性弛缓性麻痹(AFP)病例粪便标本中分离到6株脊髓灰质炎(脊灰)Ⅱ型病毒,经中国疾病预防控制中心国家脊灰实验室用RT-PCR-RFLP法进行型内鉴定,并对病毒基因VP1区及3D区核苷酸进行序列测定,结果显示6株病毒均为脊灰Ⅱ型(VP1区)与Ⅰ型(3D区)的重组株,但是重组方式呈三种表现.按患儿粪便标本采集地点的不同,将6株病毒分为3个组A组的2例重组株,3D区为典型Ⅰ型序列,分布于贵州省仁怀市和水城县;B组的2例重组株重组位点发生在3D区第6 226～6 243位,在其前面为Ⅱ型序列,以后的核苷酸序列为Ⅰ型序列,分布于重庆市及四川省广安市;C组的2例重组株重组位点发生在3D区第6 270～6 306位,其前面为Ⅱ型序列,以后为Ⅰ型序列,在四川省马尔康县及简阳市发现.全部6株病毒VP1区的903个核苷酸与SabinⅡ株相比,同源性各自为99.8%,3D区则呈现有不同方式的重组,重组位点不同,且其分布地区各异,显示重组株的普遍性及多样性,其重组株的来源是多源性的,并已呈局部地区内有限的循环.     

四川省2009年Ⅱ型疫苗高变异脊髓灰质炎病毒潜在流行的病毒学分析

目的分析四川省2009年Ⅱ型(Type 2)疫苗高变异脊髓灰质炎(脊灰)病毒[Vaccine High-mutant Poliovirus(PV),VHMPVⅡ]的病毒学特征。方法对2009年5~6月从四川省泸州和成都市的2例急性弛缓性麻痹(Acute Flaccid Paralysis,AFP)病例中分离到的2株PVⅡ进行全基因组序列测定。结果全基因组序列测定结果显示,2株VHMPVⅡ全长7439个碱基(base pair,bp),共编码2207个氨基酸。与赛宾(Sabin)Ⅱ型疫苗株病毒相比,2株VHMPVⅡ不存在bp的插入和缺失,VP1编码区核苷酸(nucleotide,nt)变异数分别为5个和7个,均属于VHMPVⅡ。2株病毒在VP1编码区共享5个nt变异,全长共享13个nt变异,提示已经发生了潜在流行。2株VHMPVⅡ均未发生型内或型间重组,在已知的2个减毒位点5'非编码区nt481和VP1衣壳蛋白编码区nt2909位点上均发生回复突变。VP1编码区基因进化树分析表明,2株VHMPVⅡ处于同一传播链,该传播链病毒的进化独立于国内外至今发现的循环的Ⅱ型疫苗衍生脊灰病毒(Circulating Vaccine-derived)PV(c VDPVⅡ),按照PV已知的基因进化速率估算该传播链已在人群中流行约260天。结论本研究结果表明,与VDPV类似,VHMPV同样可以在人群中发生流行,同时再次证明中国脊灰实验室网络监测具有高度的敏感性,能够及时发现VHMPV的传播,防止其衍变为cVDPV。     

吉林省2000~2012年急性弛缓性麻痹病例中脊髓灰质炎病毒的鉴定

目的分析吉林省2000~2012年从急性弛缓性麻痹(Acute Flaccid Paralysis,AFP)病例粪便标本中分离的脊髓灰质炎(脊灰)病毒(Poliovirus,PV)的血清分型以及型内鉴别结果。方法原始粪便标本来自吉林省2000~2012年﹤15岁儿童AFP病例,使用转人PV受体的小鼠肺细胞系和人横纹肌肉瘤细胞进行病毒分离,阳性标本进行中和试验鉴定血清型,中和试验鉴定为阳性的PV株送中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所国家脊灰实验室进行型内鉴别,型内鉴别方法采用聚合酶链反应-限制性酶切片段长度多态性分析和酶联免疫吸附试验或VP_1编码区核苷酸序列分析法。结果吉林省2000~2012年共采集804例AFP病例粪便标本,通过细胞培养的方法共有25例分离到PV,均为疫苗相关(Vaccine-associated)PV(VAPV),其中2008年1例AFP病例分离到Ⅱ型和Ⅲ型VAPV,其中的Ⅲ型PV为VP1编码区Ⅲ型和Ⅱ型疫苗重组PV。结论吉林省2000~2012年未发现脊灰野病毒或疫苗衍生脊灰病毒引起的AFP病例,为吉林省维持无脊灰提供了实验室依据。     

辽宁省首株Ⅱ型疫苗衍生脊髓灰质炎病毒的鉴定及对中国维持无脊髓灰质炎的挑战

目的对辽宁省2015年首次分离到的疫苗衍生脊髓灰质炎(脊灰)病毒(VDPV)进行病原学分析。方法采集所涉1例急性弛缓性麻痹(AFP)患者血清标本进行脊灰中和抗体检测;采集患者粪便标本,用L20B和RD细胞进行脊灰病毒分离;对脊灰病毒阳性分离物进行型内鉴定;对病毒VP1区进行基因测序和进化树分析。结果该例AFP患者血清脊灰Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型中和抗体滴度分别为1:4、1:4、1:8;患者的9份粪便标本中,2份标本的脊灰病毒分离阳性;阳性分离物的型内鉴定为PVⅡ-SL-Discordant;与Ⅱ型脊灰疫苗株(Sabin株)相比,两毒株VP1区序列核酸变异数分别为21个(2.3%)和22个(2.4%),鉴定为Ⅱ型VDPV。结论该AFP病例未持续排毒,其Ⅱ型VDPV分离株未引起循环。灭活脊灰病毒疫苗纳入免疫规划后,需加强脊灰病原学监测。     

脊髓灰质炎疫苗重组株病毒在我国的循环及其致病性

我国自1994年10月以后已无脊髓灰质炎(脊灰)本土野病毒引起的病例.现在从急性弛缓性麻痹病例粪便标本中分离到的脊灰病毒都是3个血清型的疫苗衍生株,并以Ⅱ型为主.近几年每年Ⅱ型分离株的数量均多于同年I型株加Ⅲ型株之和.1997～1999年从贵州、云南省分离到的Ⅱ型疫苗株中,除了疫苗变异株外,还发现了不同血清型间的重组株,如VP1片段来自SabinⅡ,而3D片段分别来自SabinⅢ(S2×S3)和SabinI(S2×S1),它们的基因序列与脊灰疫苗株SabinⅡ型有差异.能从未服苗儿童的粪便标本中分离到这类毒株,表明在外环境中有这类毒株在循环.这些毒株可以致病,其致病性与该儿童是否接受了疫苗全程免疫有很大的相关性.重组株的发现提示我们,它们在自然环境中已有循环.从贵州省Ⅱ型病例发生时间和区域上看,病例有聚集分布的趋势,但目前尚处于小范围的循环中,其原因与对策有待进一步研究.     

1例重组脊灰病毒引起的AFP病例调查

目的对贵港市2006年7月报告的1例疫苗重组脊髓灰质炎(脊灰)病毒引起的急性弛缓性麻痹(AFP)病例进行流行病学调查,为维持无脊灰状态提供依据。方法按照卫生部下发的《高危和聚集性AFP病例调查指南》进行。结果AFP病例粪便标本分离出脊灰Ⅲ型病毒,国家脊灰实验室型内鉴定为“VP1区4个核苷酸变异”,属疫苗重组脊灰病毒(VRPV),患儿发病60天后残留麻痹,“零剂次”免疫,患儿所在村屯0~11岁儿童免疫水平较低,5名密切接触儿童的粪便标本未分离出脊灰病毒。结论本例为VRPV引起的脊灰临床符合病例,未引起地区流行或循环。虽VRPV差异<1%,但毒力有所增强,仍可在“零剂次”免疫儿童中引起AFP,出现脊灰症状。提高OPV接种率是保护儿童免受脊灰野病毒、疫苗衍生脊灰病毒、VRPV的侵袭,阻止其流行或循环的有效措施。     

中国脊髓灰质炎疫苗株病毒VP1区基因突变热点分析

目的研究中国(未包括香港、澳门特别行政区和台湾地区)急性弛缓性麻痹(AFP)病例监测系统中分离到的脊髓灰质炎(脊灰)疫苗株病毒VP1区基因核苷酸突变热点及其分子生物学特征。方法对从中国1996~2002年AFP病例中分离的693株单血清型脊灰病毒进行VP1区核苷酸序列测定和分析,并对序列结果进行比对分析和统计学分析。结果VP1区核苷酸序列测定和分析结果,未检出脊灰野病毒,全部为脊灰疫苗株病毒。在所有疫苗株病毒中,发现了一些VP1区基因核苷酸突变热点,例如Ⅰ型病毒的nt2 747位点和nt2 795位点、Ⅱ型病毒的nt2 909位点、Ⅲ型病毒的nt2 636位点,突变发生率分别为34.8%、47.3%、84.8%、53.3%。4个突变热点共有8种核苷酸变异形式,其中3种核苷酸变异形式为转换(Ⅰ型A2795G、Ⅱ型U2909C、Ⅲ型G2636A),另外5种为颠换(Ⅰ型A2747U、A2747C、A2795U和Ⅱ型U2909A、U2909G)。4个突变热点全部导致了编码氨基酸的突变。在编码氨基酸的突变中,除Ⅰ型A2747U、A2 747C、A2 795U导致相似性质的氨基酸之间发生替代外,其余都发生了极性氨基酸和疏水性氨基酸的替换。某些导致不同性质编码氨基酸替换的突变热点同时也是已知的神经毒力决定位点。结论因为有突变热点的存在,说明在VP1区基因中突变的核苷酸并不是完全随机分布的;由于脊灰病毒的VP1区基因突变热点可能与它的生物学特性(如神经毒力)有一定的关联性,因此对VP1区基因突变热点的检测,可作为中国脊灰病毒学监测中的一个重要方法。     

2022年宁夏回族自治区1株Ⅰ型疫苗衍生脊髓灰质炎病毒分离株的调查处置

目的 对宁夏回族自治区1株疫苗衍生脊髓灰质炎(脊灰)病毒(Vaccine derived poliovirus, VDPV)进行鉴定和应急处置。方法 对宁夏某区2022年9月1例急性弛缓性麻痹(Acute flaccid paralysis, AFP)病例和其同居住区的健康儿童开展流行病学调查，采集粪便标本分离脊灰病毒，对分离株进行核苷酸序列分析和鉴定；开展AFP病例主动搜索和脊灰疫苗接种率评估。结果 从1名健康儿童粪便标本中分离到1株Ⅰ型脊灰病毒，该分离株与Ⅰ型Sabin疫苗株相比VP1区发生13个核苷酸变异(1.43%),鉴定为VDPV。2021-2022年该区适龄儿童脊灰疫苗基础和加强免疫报告接种率均为100%。未发现该分离株在当地循环。结论 研究地区脊灰病毒分离株为健康携带者VDPV,未造成循环。宁夏需继续保持适龄儿童高水平脊灰疫苗接种率和高灵敏性的脊灰病原学监测。     

江西省Ⅰ型脊髓灰质炎病毒的基因特征分析

目的了解江西省2009年-2014年AFP病例中脊髓灰质炎病毒的分离情况,并分析Ⅰ型脊髓灰质炎病毒疫苗相关株的基因特点。方法利用分子生物学技术,通过real-time PCR对病毒分离株进行型内鉴定,并且对毒株进行VP1编码区全基因的序列测定和分析。结果 2009年-2014年,从江西省各地送检的粪便标本中,共检出9例Ⅰ型脊髓灰质炎病毒。其有相似的核苷酸序列,其核苷酸序列长度均为906 bp,编码302个氨基酸,同源性为98.6%~99.9%,与SabinⅠ序列相比,共有15个核苷酸突变位点,每株毒株的突变率为0.11%~0.99%。结论 9株均为疫苗相关株,VP1全基因编码区发现有1株Ⅰ型毒株在突变率最高的位点2 795位发生突变,可能引起其毒力回复,应加强对其进一步监测。     

2016年河南省急性弛缓性麻痹病例中脊髓灰质炎病毒监测结果分析

目的鉴定分析河南省15岁以下儿童疑似急性弛缓性麻痹(acute flaccid paralysis,AFP)病例中实验室确诊感染脊髓灰质炎(脊灰)病毒(Poliovirus,PV)的型别,为河南省制定更完善的脊灰防控策略及维持"无脊灰野病毒状态"提供科学依据。方法依据《WHO脊髓灰质炎实验室手册第4版》操作规程,使用RD和L20B两种细胞对河南省2016年AFP标本进行病毒分离,采用荧光定量PCR法及逆转录PCR法进行病毒序列鉴定和分析。结果共检测453例疑似AFP病例,其中有7例(1.55%)病例分离出10株脊灰病毒,其中Ⅰ型、Ⅲ型和Ⅰ+Ⅲ型分别为5株,3株和2株。分离到脊灰毒株与Sabin株相比,核苷酸VP1区发生0、1、2、4和6个变异的数量分别为3、1、3、2和1株。结论 2016年河南省分离出脊灰病毒均为脊灰疫苗株,毒株型别以Ⅰ型为主,VP1区核苷酸以低变异为主,未发现疫苗衍生脊灰病毒(Vaccine-derived poliovirus,VDPV)及脊灰野病毒(Wild poliovirus,WPV)。     

中国急性弛缓性麻痹病例中脊髓灰质炎病毒分离优势型别株的性状分析

中国自 1994年 10月以后 ,成功地阻断了脊髓灰质炎 (脊灰 )野病毒在自然环境中的传播 ,虽然云南、青海两省发现过由境外输入的脊灰野病毒病例或输入的脊灰野病毒引起的病例 ,但并未出现由此引发的第二代病例。与此同时 ,全国对每年 5 0 0 0多例急性弛缓性麻痹 (AFP)病例的病毒学监测发现 ,脊灰Ⅱ型疫苗病毒株的分离数逐年增加 ,1994年Ⅱ型株第一次超过了Ⅰ型或Ⅲ型株 ,1997年以来 (除 2 0 0 0年外 )Ⅱ型株多于Ⅰ型加Ⅲ型株之和。同时在病毒基因编码区VP1和 3D区的分析表明 ,中国Ⅱ型病毒株有接近半数均为在 3D基因编码区与不同型别的疫苗重组脊灰病毒 (VRPV)。VRPV ,特别是Ⅱ型VRPV ,除个别北方省份外 ,在全国大部分地区均有发现。序列分析表明 ,除在江苏、贵州、云南省发现过疫苗衍生脊灰病毒 (VDPV)外 ,大部分病毒在基因序列VP1段与脊灰疫苗参考株的差异率均 <1% ,表明VDPV虽然在中国有过局限性的循环 ,但并非优势型别株。占优势的是Ⅱ型VR PV ,这一类病毒是否能引起脊灰流行是共同关切的问题。该文就中国Ⅱ型VRPV的性状做了分析 ,并探讨了其发展趋势。     

酶联免疫吸附试验在脊髓灰质炎病毒型内鉴别中的应用

从 2 0 0 1年 10月开始 ,中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所国家脊髓灰质炎 (脊灰 )实验室 ,增加使用酶联免疫吸附试验 (ELISA)对从急性弛缓性麻痹 (AFP)病例粪便标本中分离到的脊灰病毒进行型内鉴别。 2 0 0 2年6 0 7株单型脊灰病毒的ELISA试验结果是 :5 73株为疫苗相似株 (SL) ,3株为非疫苗相似株 (NSL) ,2 9株为双反应株 (DRV) ,2株为阴性反应株 (NRV)。将ELISA试验结果与逆转录 聚合酶链反应 限制性内切酶片段长度多态性分析 (RT PCR RFLP)结果进行比较 ,发现仅 2株ELISA试验结果为DRV的脊灰病毒 ,PCR结果为变异株。同样 ,在 33株PCR结果为变异株的脊灰病毒中 ,仅有 2株ELISA试验结果为DRV。由于两种方法的原理不同 ,它们得出的结论并无很高的一致性。将ELISA试验结果为NSL和DRV、PCR结果为变异株的毒株进行了脊灰病毒全VP1区核苷酸序列分析 ,在ELISA试验结果为DRV和NSL的脊灰病毒的全VP1区氨基酸序列分析结果中 ,仅有Ⅰ型脊灰病毒的氨基酸变异位点在已知的SabinⅠ型抗原决定簇位点 1(site 1)内 ,Ⅱ型和Ⅲ型的变异位点均不在其中 ,这一矛盾的结果说明 ,可能在VP1区以外其它编码区的抗原决定簇起到主要作用 ,或者试剂盒本身的检测系统存在某些需要改进的地方。在ELISA试验过程中 ,发现Ⅲ型试剂     

湖南省急性弛缓性麻痹病例分离株的性状分析

1997～2001年,湖南省疾病预防控制中心从急性弛缓性麻痹(AFP)病例粪便标本中共分离到单型脊髓灰质炎(脊灰)毒株85株,经中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所国家脊灰实验室用逆转录-聚合酶链反应-限制性酶切片长度多态性分析(RT-PCR-RFLP)方法进行型内鉴定,全部为疫苗相关株.对其中从"零"剂次免疫患儿、有残留麻痹患儿和一些其他相关的患儿粪便标本中分离到的脊灰病毒进行了VP1区和3D区的核苷酸序列测定.结果显示在脊灰Ⅱ型毒株中,绝大多数毒株在VP1区的核苷酸中第2909位位点发生突变,导致第143位氨基酸由Ile变为Asn或Thr.在脊灰Ⅱ型毒株中,广泛存在着型间重组现象.在重组病毒中,以Ⅱ型与Ⅲ型病毒的重组为主,占90%.从AFP病例及健康儿童中,从有残留麻痹患儿及无残留麻痹患儿的粪便标本中,都能分离到重组株,说明重组的发生具有普遍性,重组发生的位点在核苷酸的不同位置,重组的形式又具有多样性.通过对湖南省毒株的碱基突变和重组的研究表明,在湖南省1997～2001年的分离株不支持隔年传播,只在局部地区某一年内可能发生有限的循环.通过加强口服脊灰疫苗的免疫,提高免疫覆盖率,可以阻止疫苗相关病毒局限的循环.     

潍坊市9例重症与轻症手足口病患者肠道病毒71型5′非编码区、VP1基因特征分析

目的 探讨重症手足口病肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)5′非编码区(untranslated region, UTR)、VP1区是否存在潜在的毒力位点。 方法 分离培养不同临床症状手足口病患者粪便标本中EV71,提取病毒总RNA,逆转录PCR扩增5′-UTR、VP1区后测定基因序列,对两个区域核苷酸序列及VP1区编码氨基酸序列进行比对和同源性分析,构建VP1区及不同临床症状EV71病毒5′- UTR基因进化树。 结果 本实验共获得9株EV71毒株(5株来源于重症病例,4株来源于轻症),5′-UTR、VP1区核苷酸同源性均为94.5%~ 99.7%,VP1区氨基酸同源性为97.3%~99.9%。9株EV71毒株5′-UTR共有67个核苷酸突变位点,与4株轻症EV71毒株相比,5株重症EV71毒株VP1区编码氨基酸有2处发生替换(S283T、A289T),5′-UTR共有37个核苷酸位点发生突变。VP1区基因进化树显示9个EV71毒株均属于C4a基因亚型,并且两组不同临床症状毒株处于同一较小分支中。5′-UTR核苷酸序列的系统进化树显示临床表现不同的EV71株呈交错分布,相同临床表现不单独聚类。 结论 9株EV71毒株均属于C4a基因亚型,5′-UTR核苷酸突变和VP1区氨基酸替换可能影响病毒毒力,对EV71病毒的全基因组序列特征分析及与宿主之间的相互作用机制进行研究非常必要。